日本血吸虫22.6 kDa重组抗原的高效融合表达及特性鉴定

目的： 大量获得纯化的日本血吸虫２２６ ｋ Ｄａ 重组抗原。方法： 用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法将其编码基因序列经改造后亚克隆入载体质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ １λ Ｔ 进行表达。结果： 得到了融合表达的蛋白抗原。此融合蛋白表达量大, 用凝血酶酶切后易大量制备纯化的重组２２６ ｋ Ｄａ 抗原。结论： 以此融合蛋白免疫的小鼠抗血清进行免疫印迹试验, 表明 Ｓｊ２２６／ Ｓｊ２６ Ｇ Ｓ Ｔ 融合重组蛋白具有与 Ｓｊ２２６ 蛋白一样的免疫学活性。     

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组,免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫;佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后,每兔逐周取耳静脉血,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高,且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后,特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高,且至少能维持 １ 年。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定，了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性；将ｒＳｊ２２．６注射家兔，制备特异抗血清；以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染，初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应，并刺激家兔产生特异性抗体应答，抗体滴度为１１２８０。攻击感染中，免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性，在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原 Sj22.6kDa 的免疫学活性鉴定

目的：对重组Ｓｊ２２．６ｋＤａ抗原（ｒＳｊ２２．６）进行免疫学活性鉴定,了解其作为疫苗候选抗原的潜力。方法：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应确定ｒＳｊ２２．６的抗原性;将ｒＳｊ２２．６注射家兔,制备特异抗血清;以血吸虫尾蚴对Ｃ５７小鼠进行攻击感染,初步鉴定其免疫保护力。结果：ｒＳｊ２２．６可与特异性抗体发生反应,并刺激家兔产生特异性抗体应答,抗体滴度为１１２８０。攻击感染中,免疫组小鼠的减虫率达７７．２％。结论：ｒＳｊ２２．６具有良好的免疫学活性,在诱导抗日本血吸虫感染方面具有一定的潜力。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

日本血吸虫中国大陆株基因重组抗原Sj 22.6kDa的核苷酸序列分析

目的：对ｐＧＳｊ２４克隆化基因进行核苷酸序列分析，了解其编码蛋白的属性。方法：常规制备ｐＧＳｊ２４克隆化基因并重组入测序载体Ｍ１３ｍｐ１９，以ＤＹＥＰＲＩＭＥＲ荧光测序试剂盒进行核苷酸序列测定。分别以ＤＮＡＳＩＳ和ＧＯＬＤＫＥＹ软件对序列资料进行分析。结果：ｐＧＳｊ２４克隆化基因长８４０ｂｐ，含一开放阅读框，可编码一分子量为２２．６ｋＤａ的蛋白质。开读框上游和下游均有终止密码子。该基因与已发表的日本血吸虫２２．６ｋＤａ蛋白的编码基因同源性达９５％，编码区同源性达９９．７％。在该基因内有一段典型的ＥＦ－Ｈａｎｄ钙结合区序列，并有内质网导肽、微体导向信号等功能位点。预测该蛋白质内可能的抗原决定簇位置为第２９－３２、６３－６８和８７－１０１等氨基酸片段。结论：ｐＧＳｊ２４克隆化基因为日本血吸虫２２．６ｋＤａ抗原编码基因。     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa抗原编码基因的核酸疫苗研究

为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ 抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,将ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６基因重组质粒经肌肉注射免疫了一批ＢＡＬＢ／ｃ小鼠并进行攻击感染试验,结果表明此重组质粒能在小鼠体内持续存在、稳定表达并诱导小鼠产生特异性的抗Ｓｊ２２．６ 抗体,但未能诱导有效的保护力     

日本血吸虫未成熟虫卵26／28kDa抗原诱导抗雌虫生…

目的：探讨日本血吸虫未成熟虫的２６／２８ｋＤａ抗原（ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ）诱导小鼠产生抗雌虫生殖免疫的效果。方法：采用纯化的ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原以及ＳＩＥＡ－Ｉ抗原，分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于攻击感染后４６ｄ进行粪卵，组织内虫卵定量。结果：证明ＳＩＥＡ２６／２８ｋＤａ抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。与对照组比较，ＳＩＥ２６／２８ｋＤａ抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内总卵数、     

日本血吸虫（中国大陆株）22.6kDa抗原编码基因在C2C12细胞内的 …

目的 为探索日本血吸虫（中国大陆株）２２．６ｋＤａ抗原（Ｓｊ２２．６）编码基因用作核酸疫苗的可行性,方法以ＰＣＲ法对此编码基因改造后将其亚克隆入真核表达载体质粒ｐＣＭＶ－β并转化入大肠杆菌ＪＭ１０９进行大量扩增,将提纯的ｐＣＭＶ／Ｓｊ２２．６的基因重组持粒在体外转化Ｃ２Ｃ１２真核细胞,结果 免疫组化试验证明,该重组质粒能够在体外培养的Ｃ２Ｃ１２细胞中表达Ｓｊ２２．６抗原,结论 表明该重组质粒有用作     

问号赖型钩端螺旋体23kDa蛋白的免疫原性研究

目的 探讨ｐＤＬ１２１的１．０ｋｂ０１７株问号赖型钩端螺旋体ＤＮＡ片段可否作为钩体重组疫苗广谱保护性抗原的侯选。方法 采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备２３ｋＤａ蛋白,免疫日本大耳兔制备抗２３ｋＤａ抗血清,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ鉴定其免疫原性。结果 ２３ｋＤａ重组抗原兔抗血清可识别ｐＤＬ１２１体外表达２３ｋＤａ抗原产物和问号赖型钩端螺旋体０１７株超声抗原成份;用Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ鉴定抗血清效价,其抗体     

日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶基因和产毒大肠杆菌纤毛抗原基因的联合表达

目的：编码日本血吸虫２６ｋＤａＧＳＴ和产毒大肠杆菌纤毛抗原Ｋ９９基因的联合表达。方法：ＰＣＲ扩增的Ｋ９９基因克隆入ｐＵＣ１８载体,再将限制性酶切获得的ＧＳＴ基因克隆入ｐＵＣ１８－Ｋ９９重组质粒。限制性酶切和琼脂糖凝胶电泳选择连接方向正确的重组质粒用于重组蛋白的表达。共表达产物采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ、反向ＩＨＡ、ＥＬＩＳＡ和透视电镜观察进行分析鉴定。结果：共表达产物的分子量约５０ｋＤａ,存在于宿主菌体表面的纤毛中,ＧＳＴ抗血清和Ｋ９９抗血清均可识别共表达产物,提示共表达产物既有ＧＳＴ表位,又有Ｋ９９抗原表位。结论：日本血吸虫２６ｋＤａＧＳＴ和产毒大肠杆菌Ｋ９９基因共表达获得成功。     

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究

抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的研究是血吸虫疫苗研究的重要策略之一。本研究探讨了未成熟卵等不同抗原免疫诱导宿主生产抗日本血吸虫生殖及卵胚发育免疫的效果。研究证明ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ抗原能诱导小鼠产生抑制雌虫生殖和卵胚发育成熟的免疫力。与对照组比较，ＳＩＥＡ２６－２８ｋＤａ抗原免疫鼠减虫虽不明显，但肝组织内每雌产卵数、成熟卵数和粪卵数（ＥＰＧ）分别减少４８．１％、８３．６％、８７．３％，死亡卵数     

日本血吸虫虫体抗原导致的保护性免疫及其免疫特征的分析

本实验分别将日本血吸虫（大陆株）雌、雄、合抱虫体可溶性抗原制剂，佐以卡介苗，一次性皮内免疫小鼠。结果，免疫后的小鼠对血吸虫的攻击产生相当的保护作用（保护率分别为４２．３％、４２．６％和４４．５％）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ对虫体可溶性抗原进行分析，免疫血清为１：３００时，仅有一条蛋白带出现强而明显的反应，其反应蛋白带的分子量为９４／９０ｋＤ。     

日本血吸虫疫苗候选分子的基因克隆,表达及特性鉴定

本研究用日本血吸虫（Ｓｊ）成虫原抗原免疫的兔血清从日本血清吸虫中国大陆株成虫ｃＤＮＡ库筛选出Ｓｊ２２．６基因克隆；用根据曼氏血吸虫２３ｋＤａ膜抗原（Ｓｍ２３（的编码基因设计的引物，以ＰＣＲ法从日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ库扩增出Ｓｊ２３基因；用根据日本血吸虫菲律宾株的磷酸丙糖异构酶（ＳｊＴＰＩ）基因设计的引物，以ＲＴ－ＰＣＲ从日本血吸虫中国大陆株成虫ｍＲＮＡ扩增出ＳｊＴＰＩ基因；并测得了上述３个基因的核     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

日本血吸虫与华支睾吸虫和姜片虫之间的交叉抗原及其血清学反应性

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离ＡＷＡ、ＣＳＡ和ＦＳＡ三种抗原的组分蛋白后，再以酶联免疫印迹技术（ＥＬＩＢ）进一步鉴定其组分蛋白的特异性蛋白带，分别显示１２条、１９条和２１条，其分子量（ＭＷ）范围分别为１３～６４ｋＤｅ、１６～１９８．５ｋＤａ和１４～１５０ｋＤａ。ＡＷＡ组分蛋白与兔抗ＳＥＡ免疫血清出现３条交叉反应带．ＭＷ为１７ｋＤａ、１４ｋＤａ和１３ｋＤａ，与抗ＣＳＡ的兔血清及华支睾吸虫病人血清显示３条（３８ｋＤａ、１７．５ｋＤａ及１７ｋＤｅ）交叉反应带．与抗ＦＳＡ的兔血清及姜片虫病人血清呈现５条（６４ｋＤａ、５９ｋＤｅ、５３ｋＤｅ、１７．５ｋＤａ和１７ｋＤａ）交叉反应带。实验结果表明，日本血吸虫成虫不仅与其虫卵之间存有交叉抗原，而且与华支睾吸虫和姜片虫成虫之间也存有交叉抗原及血清学交叉反应性。本研究为今后制备特异的血吸虫病血清学诊断抗原，提供了科学依据。     

日本血吸虫(中国大陆株)22.6kDa重组抗原对小鼠免疫保护性的初步研究

目的：为研究日本血吸虫（中国大陆株）22．6kDa抗原的免疫保护性。方法：将其编码cDNA经PCR扩增后亚克隆入载体质粒PGEX—1λt进行表达，并用重组抗原免疫了一批昆明鼠。结果：与对照组相比，重组抗原免疫小鼠获得了38．93％的减虫率。结论：证明重组的日本血吸虫22．6kDa抗原可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。     

重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶蛋白质表达、纯化及特性分析

磷酸丙糖异构酶（ＴＰＩ）是已被公认的血吸虫病疫苗候选分子之一,本研究将日本血吸虫中国大陆株ＴＰＩ分子基因ＤＮＡ片段定向克隆到表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３（编码２６ｋＤａ的ＧＳＴ蛋白）中,构建重组表达质粒,然后转化大肠杆菌ＢＬ２１感受态细胞,阳性克隆用ＩＰＴＧ诱导,阳性菌株可表达分子量约５５ｋＤａ的融合蛋白（ＧＳＴ－ＴＰＩ）,此融合蛋白可与ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ结合成复合物,用凝血酶切割融合蛋白复合物,获得分子量约２８ｋＤａ的重组表达ＴＰＩ分子。重组ＴＰＩ分子具有磷酸丙糖异构酶活性,并能被日本血吸虫重感染兔血清,血吸虫病人血清所识别。重组ＴＰＩ免疫家兔产生抗体的效价最高可达１∶２５６００,该血清抗体能识别日本血吸虫中国大陆株成虫抗原中分子量约２８ｋＤａ的蛋白条带。     

日本血吸虫菲律宾株26kDa抗原的表达,纯化与应用

利用亲和层析和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等分子生物学技术，表达，纯化，鉴定了重组日本血吸虫菲律宾株２６ｋＤａ，抗原（ｒＳｊｐ２６ＧＳＴ），并比较了其与日本血吸虫大陆株２６ｋＤａ抗原（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）基因ｃＤＮＡ序列的异同，分析了其应用前景。分别以质粒ｐＧＥＸ和血吸虫大陆株总ＲＮＡ为模板，经ＰＣＲ或逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出的Ｓｊｐ２６ＧＳＴ和Ｓｊｃ２６ＧＳＴｃＤＮＡ其片段长度均为６５４ｂ     

日本血吸虫（大陆株）基因工程重组抗原混合疫苗的研究

３年来的主要进展为：完成了重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）免疫兔、牛的免疫持效观察。在国内外首先进行ＧＳＴ基因和Ｋ９９基因共表达成功。表达产物分子量５０ｋＤａ，以纤毛形成存在于细菌表面，并分别濉有ＧＳＴ和Ｋ９９抗原活性，为重组ＧＳＴ抗原与幼畜腹泻疫苗在血吸虫病疫区联合应用打下基础。此外，还首次证明日本血吸虫ＧＳＴ与肝片吸虫（Ｆｈ）、猪蛔虫（Ａｓ）有明显交叉保护性免疫力，并完成ＦｈＧＳＴ和ＡｓＧＳ