抗体捕捉酶联免疫吸附法在流行性乙型脑炎早期诊断上的应用

用MacELISA测定了138份临床疑似乙脑病人的血清标本,并与HI试验进行了比较。MacELLSA能特异、敏感地检出乙脑患者发病第2天的IgM抗体,阳性率为55.56％。第4、5病日,IgM抗体阳性率高达92.86％。10例正常人和10份流行性出血热病毒抗体阳性的血清标本无一份阳性。     

逆转录-聚合酶链反应在乙型脑炎诊断中的建立

目的　运用逆转录 -半套式 -聚合酶链反应技术 (RT -semi-nested -PCR) ,建立一种新的早期快速检测乙型脑炎病毒的方法。方法　收集临床诊断的 37例乙脑和 15例非乙脑病人标本 (包括血清、脑脊液 )分别为 6 3份和 30份 ,同时用RT -semi-nested -PCR、IgM捕获法ELISA(MacELISA)进行检测。 结果　血清和脑脊液中可成功检测出JEVRNA ,经1 5 %凝胶电泳 ,出现特异性条带 ,符合预计值 4 0 0bp。结论　RT -semi-nested -PCR对检测JEV感染 ,从实验设计到实验条件 ,都是合理的 ,有较高的敏感性和特异性。可用于乙脑的早期诊断。     

实时荧光RT-PCR检测凝血块中乙脑病毒RNA

目的探索建立灵敏便捷的乙脑病毒核酸检测方法,为临床疑似乙脑病例提供可靠辅助诊断依据。方法采用基于SYBR Green I染料的实时荧光RT-PCR方法,对一系列乙脑病毒检测引物进行综合评价,并应用于部分临床确诊或疑似乙脑病例血清和凝血块中病毒核酸检测。结果根据9对引物检测连续稀释病毒RNA的扩增曲线和融解曲线,筛选出1对灵敏度和特异性较好的引物。该体系分别检测15份乙脑病毒IgM阳性和15份IgM阴性患者的血清和凝血块中提取的核酸,血清样品全部为阴性,而凝血块样品发现7份核酸阳性。结论从患者凝血块中提取核酸样品,可以用于JEV感染的实验室诊断。在我们建立的乙脑病毒核酸实时荧光PCR检测体系中,首次发现凝血块样品比血清样品灵敏度更高,说明凝血块用于病毒性脑炎实验室诊断具有重要价值。     

Mac ELISA测定乙脑患者血清和脑脊液中特异性IgM的评价

用抗体捕捉ELISA法(Mac ELISA)检测临床疑似流行性乙型脑炎(下称乙脑)病人脑脊液88份,阳性51份,阳性率57.95％;血清91份,阳性56份,阳性率为61.53％,两者无显著性差异(X~2=0.238 P>0.05);包括取自同一患者的脑脊液和血清各72份,阳性率分别为61.11％和68.05％;而分析其中14例IgG呈4倍以上增高,乙脑患者脑脊液IgM阳性13例,而血清IgM阳性却只有8例,提示在疫区流行季节内仅仅血清学IgM阳性有时可能为乙脑隐性感染的同时还伴其它有关病毒感染。     

三种核酸扩增方法检测临床乙脑标本的比较

目的探索三种核酸扩增方法应用于临床乙脑标本检测的敏感性,建立能够适合于临床标本的检测方法,同时比较病毒核酸检测与血清学检测的相关性。方法分别采用普通逆转录PCR、逆转录套式PCR和SyBr Green I实时荧光PCR方法对48份疑似乙脑病例的血清或脑脊液标本进行检测,并比较了三种方法的检出限。结果血清学检测表明,48份标本中有18份标本IgM抗体阳性;3种病毒核酸检测,普通逆转录PCR和SyBr Green I实时荧光PCR方法未能检出阳性标本,而逆转录套式PCR检出15份阳性标本。结论三种核酸检测方法中,逆转录套式PCR最为敏感;单独依赖血清学检测会产生相当一部分假阴性,证明了临床实验室加强乙脑病毒核酸检测对临床诊断具有重要意义。     

感染登革病毒后抗体产生规律及应用于暴发疫情的血清学诊断

目的了解感染登革病毒后特异性抗体产生规律,指导基层实验室应用血清抗体检测方法对暴发疫情的早期病例作出正确诊断,为控制暴发提供实验室依据。方法采集福建省1次暴发登革热疫情中的发热病人和密切接触者血清标本441份,以及恢复期血清22份,用捕获法ELISA检测登革IgG和IgM抗体,并结合病例的流行病学资料进行分析。结果根据本研究规定的病例判定标准,441例中登革热感染者为228例。其中,IgM抗体检出226例,IgG抗体检出119例。226例IgM抗体阳性标本中,IgG抗体同时阳性的为118份;119例IgG阳性标本中,IgM抗体阴性1例;两者均阴性的标本中用RT-PCR方法检测出1例。22份恢复期血清两类抗体检测均为阳性。绝大部分病例集中在10～70岁,病例的职业分布较广,男女比例为1∶1.53。结论登革病毒感染后特异性IgM抗体在发病早期即可检出,并可维持至少一个半月,但个别病例发病早期IgM可能为阴性;IgG抗体随病程的延长,其检出率逐步增高,至发病后50 d,其检出率可达95%左右。本研究结果抗体产生规律同以往研究结果一致,可为基层实验室开展登革热血清学检测和病例诊断提供参考。     

流行性出血热患者唾液中特异性IgM抗体检测

本文报道应用IgM—抗体捕捉ELISA法检测流行性出血热患者唾液中特异性IgM抗体的结果。该法特异、敏感。检测出EHF患者发病第一天的唾液IgM抗体,阳性率92.86％(26/28)。其中21例在第15～20病日同时采集血清和唾液标本,检测结果唾液IgM阳性率80.95％(17/21)、将血清唾液IgM抗体均阳性的标本5例经2—ME试验,加热试验证明了其特异性。唾液标本较血清取材更方便、简单、成本低。     

脑炎

0907 流行性乙型脑炎特异性诊断的研究欧阳宗仁等中华内科杂志20(4):225,1981文章分析北京市第二传染病医院1979年临床诊断为乙脑的39例的五项特异性实验诊断结果。其中以微量免疫荧光法检测乙脑特异 IgM 抗体的阳性率为最高(97％),白细胞粘附抑制试验次之(阳性率为69.4％),用检测血凝抑制(HI)抗体的方法检查乙脑特异 IgM 抗体的阳性率低于上述两法(62.1％),而乙脑补体结合抗体测定以及乙脑血凝抑制抗体测定的阳性率分别为45.8％和32.1％,不     

EVALUATION OF Tb-NT-P-BSA ANTIGEN IN THE SERODIAGNOSIS OF TUBERCULOSIS

用人工合成的结核杆菌酚糖酯三糖抗原Tb-NT-P-BSA作抗原,用ELISA法检测了40例结核患者、52个健康对照的血清标本。结果表明本方法的特异性、敏感性分别是在检测抗Tb-NT-P-BSA IgG抗体时为94.2％和20％;在检测抗Tb-NT-P-BSA IgM抗体时为79.6％和45％。该抗原的特异性、敏感性似不理想,有待于进一步改进。     

抗戊型肝炎病毒E2 IgM诊断急性戊型肝炎的敏感性和特异性

目的评价抗戊型肝炎病毒（HEV）衣壳蛋白重组抗原E2 IgM（抗-E2 IgM）诊断急性散发性戊型肝炎的敏感性和特异性。方法用酶联免疫吸附法检测176份急性散发性戊型肝炎和191份急性散发性非甲～非戊型肝炎患者血清中抗-E2 IgM，与国产传统试剂和新加坡Genelabs试剂检测的IgM（GL—IgM）作比较；对抗-E2 IgM阳性血清检测血清中HEV RNA，采用logistic回归分析检测抗-E2 IgM和HEV RNA的相关因素。结果在176份急性戊型肝炎患者血清中，抗-E2 IgM的检出率为68．75％，国产传统试剂抗-HEV IgM检出率为56．25％，x^2IgM=6．49，P〈0．05。在191份急性非甲～非戊型肝炎血清中有37例（19．37％）抗-E2 IgM阳性，其中11例GL—IgM同时阳性；在158份抗-E2 IgM阳性血清中，有81例HEV RNA阳性（51．27％），其中急性戊型肝炎的阳性率为57．02％，急性非甲～非戊型肝炎的阳性率为32．43％，23例抗-E2 IgM阴性的急性戊型肝炎患者的血清，无一例检测到HEV RNA。Logistic多因素回归分析发现，抗-E2 IgM的检出率与发病至人院时间、年龄、血清胆红素、血清氨基转移酶水平无关，血清丙氨酸氨基转移酶水平与HEV RNA水平呈正相关（P=0．024）。结论抗-E2 IgM是HEV急性期感染敏感性和特异性强的血清学指标；HEV感染仍是部分临床诊断为急性非甲～非戊型肝炎的病因；持续HEV病毒血症可能是影响急性戊型肝炎病情的重要因素。     

胶体金免疫渗滤法快速诊断肾综合征出血热的临床研究

目的 建立一种快速，敏感的检测血清中抗汉坦病毒IgM抗体的方法。方法 将抗人IgM抗体点于硝酸纤维素膜上，以捕获患者血清中特异性IgM抗体，向已包被抗体的硝酸纤维素膜上滴加患者血清后，再选后滴加汉坦病毒抗原和鼠抗汉坦病毒抗体，最后滴加金标抗鼠抗体直接显色，阳性反应为红色，整个操作过程一般不超过10分钟。结果 用该法与IgM抗体捕获法ELISA对比检测51份肾综合征出血热（HFRS）患者血清标本，两法均阳性者49份，均阴性者2份。总符合率为100%，敏感性为96%。结论 胶体金免疫渗滤法操作简便，反应迅速，敏感性较高，适于在基层医疗单位中应用，可用于HFRS的早期诊断。     

酶标SPA用于检测人和某些哺乳动物流行性乙型脑炎抗体的研究

以SPA-HRP作第二抗体进行ELISA,用于乙脑病人及猪等哺乳动物乙脑血清流行病学的检测。本法重复性好,特异性强,敏感性高。用该法对68份乙脑病人血清、80份猪血清及兔、豚鼠等哺乳动物血清进行检测,同时用HI进行对比测定,结果表明:乙脑病人或猪等血清的SPA-ELISA乙脑抗体阳性率都较HI高。发现SPA-ELISA与HI之间有良好的正相关;而与常规ELISA的敏感性、特异性相似。利用SPA-HRP作第二抗体的ELISA技术,对乙脑病人的诊断和疫区猪等哺乳动物乙脑血清流行病学检查都是适用的。     

猪感染乙型脑炎与人乙型脑炎关系的研究

我们用HI试验和温敏试验,检测了320份猪血清中的乙脑抗体,HI和IgM抗体阳性率分别为79.1％(GMT29.8)和40％。HI和IgM抗体阳转率的高峰期分别在7月中旬(100％)和6月上旬(54.3％)。猪乙脑抗体阳转率的高低与人乙脑疫情(96例)具有相应的关系(K=53,P<0.05),可用它来预测和预报人乙脑疫情。     

重组抗原检测戊型肝炎病毒IgM抗体及其意义

用戊型肝炎病毒(HEV)重组抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测肝炎患者和健康供血人群血清中抗戊型肝炎病毒IgM类抗体(抗-HEV IgM)，并评价其检测意义。在与合成肽抗原比较检测的77份急性戊型肝炎患者血清中，有54份(70.1%)由重组抗原捡测抗-HEV IgM阳性。其阳性率明显高于台成酞抗原(21/77,27．3％)。15例戊型肝炎患者双份血清用重组抗原ELISA检铡，急性期血清有11份抗-HEV IgM阳性，恢复期血清仅1份阳性。抗-HEV IgG阳性的健康供血者(8人)和甲、乙、丙型肝炎患者(11例)无1例IgM抗体阳性。结果表明，抗-HEV IgM可以作为戊型肝炎病毒新近感染的标志。HEV重组抗原检铡抗-HEV IgM敏感性高，特异性强，有助于戊型肝炎病毒感染的早期诊断。     

山西省运城地区流行性乙型脑炎的流行病学及临床特点

目的对2006年山西省运城地区流行性乙型脑炎（乙脑）进行流行病学及临床特点分析。方法收集79例确诊为乙脑的住院患者及相关资料，对流行病学特征、临床特点、实验室检查及治疗转归进行综合分析。结果乙脑患者以中、老年居多，占78．5％；发病季节集中于7、8、9月份；农民69例，占87．3％。所有患者均有发热；73例患者有意识障碍，占92．4％；27例有呼吸衰竭，占34．2％；乙脑特异性IgM抗体检测阳性率为85．1％。20例患者出现并发症，占25．3％。出院时完全康复37例，占46．8％；死亡14例，占17．7％；好转和自动出院分别为12和16例。7例（8．9％）留有不同程度的神经功能障碍。结论流行病学特征及临床特点是诊断乙脑的重要依据。     

血清与脑脊液中病原抗体检测对病毒性脑炎的诊断价值

目的研究病毒性脑炎患者血清与脑脊液标本中病毒特异性抗体IgM阳性率的差异,并探讨其诊断意义。方法回顾同期进行了血清与脑脊液检测病毒特异性抗体IgM的89例病毒性脑炎住院患者资料,统计抗体阳性率,比较：（1）两种标本中病毒特异性抗体阳性率的差异;（2）一种标本检测与两种标本同时检测病毒特异性抗体阳性率的差异。结果（1）血清标本病毒特异性抗体的阳性率为53.93%,脑脊液标本病毒特异性抗体的阳性率为34.83%,两者比较有显著统计学差异（P〈0.025）。（2）两种标本同时检测病毒特异性抗体阳性率为71.91%,与任何一种标本检测的阳性率比较,有显著统计学差异（P〈0.02）。结论（1）检测血清中病毒特异性抗体可获得较脑脊液高的阳性率;（2）两种标本同时检测病毒特异性抗体是一种提高病毒性脑炎病原学诊断阳性率的有效方法。     

对现有十三种抗HIV—1/HIV—2酶免疫实验法的研究

本研究采用现有的13种抗HIV—1/HIV—2酶免疫实验法(EIA)对454份血清标本进行了人血清和血浆中抗HIV检测,以了解各种方法的敏感性和特异性。标本情况为:肯定有抗HIV—1的标本为96份,抗HIV—2的26份,低水平抗HIV的44份,HIV—1血清转换期的73份,未进行筛选的献血者80份,出现症状患者的135份。结果表明:所观查到的敏感性为96.9％,(Biochrom UBI和Vironostika)到     

单纯疱疹1型病毒（HSV1）IgG抗体ELISA试剂的研制

目的 建立快速、敏感、特异性强、重复性好的抗单纯疱疹1型病毒(HSV1)IgG检测方法。方法 制备纯化抗原和抗体，对间接ELISA法检测人单纯疱疹1型病毒(HSV1)IaG抗体方法进行优化改良，并对随机选择的331份临床孕妇血清标本进行检测，用德国DIMA HSV1-IgG ELISA试剂与本试剂同时比较。结果 自制试剂盒的敏感性、特异性和诊断指数分别为92．9％，92、2％和185．1％，与德国试剂的符合率为92．3％。结论 本试剂的质量与国外商品试剂相似，具有较好的特异性和敏感性，可广泛应用于临床优生优育检测。     

弓形虫抗体免疫印迹试剂盒的研制

目的 研制敏感、特异的检测弓形虫IgM和IgG抗体免疫印迹试剂盒。 方法 收集人工感染RH株弓形虫速殖子昆明系小鼠的腹腔液，提取弓形虫胞质蛋白，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离弓形虫可溶性抗原，并经电泳转印至硝酸纤维膜，以无毒灵敏的四甲基联苯胺（TMB）为底物分别检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，40份健康人血清。通过比较抗原制备方法和使用剂量、封闭剂、洗涤和稀释剂、工作浓度、作用时间以及反应带出现率，选择最佳实验条件，以敏感性、特异性、Youden指数以及稳定性作为试剂盒评价标准。 结果 用免疫印迹试剂盒检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，敏感性分别为90.0%（27/30）和85.7%（24/28），40份健康对照者血清的弓形虫IgM和IgG抗体均为阴性，特异性均为100%，Youden指数分别为0.9和0.86。试剂盒于4℃ 保存约6个月的检测结果一致。 结论 该免疫印迹试剂盒敏感性和特异性均较高，且操作简便、快速。     

四川省钩端螺旋体病高发县报告病例的准确性调查研究

目的 了解四川省钩端螺旋体病高发地区报告钩体病例准确性,为进一步控制钩体病流行提供科学依据。方法 采集2012年钩体病高发地区报告临床诊断病例血清进行钩体菌培养,血清学诊断,对钩体病检测结果为阴性的标本进行乙脑、出血热和立克次体检测。结果 共采集87例报告病例的血清标本,培养出4株钩体菌,钩体菌培养阳性率为4.6%。采集64份病例急性期和恢复期双份血清进行钩体病检测,其中54例阳性,阳性率为84.4%,采集23份病例单份血清,其中6份钩体菌检测阳性,阳性率为26.1%。对27份钩体检测阴性标本进行乙脑ELISA检测,阳性1例,出血热、立克次体检测结果均为阴性。结论 四川省钩体病高发地区临床诊断钩体病准确性较高,但依然需要加强病例双份血清采集和检测。