半胱氨酸蛋白酶抑制剂对大鼠脑缺血模型DNA损伤的实验研究

目的研究caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CMK及calpain抑制剂ALLN干预治疗对大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型的神经保护作用。方法经左侧侧脑室注射DEVD或/和ALLN及溶剂二甲基亚砜(DMSO)后,制作大鼠左侧MCA缺血再灌注模型;缺血2h再灌注24h进行TTC染色观察梗死灶的形成情况;并分别于缺血2h再灌注24h或48h检测鼠脑中单、双链DNA断裂情况。结果溶剂DMSO预处理组的各项指标与MCAO模型组无明显差异;DEVD或ALLN治疗后缺血侧脑中Klenow及TUNEL阳性细胞数均明显减少,二者合用作用最强。结论Caspase-3与calpain均在缺血性脑损伤中起重要作用,对此进行治疗干预具有潜在的临床应用价值。     

大鼠大脑中动脉阻塞后DNA单链断裂损伤的实验研究

目的 观察大鼠永久性大脑中动脉阻塞(pMCAO)后，相应区域DNA断裂损伤情况，探讨DNA单链损伤在pMCA0所致脑组织损伤中的意义。方法 采用常规HE组织染色明确大鼠pMCAO模型成功与否及其损伤范围，采用DNA聚合菌—l K1enov片段原位杂交方法检测pMCAO不同时间点DNA单链断裂损伤情况。结果 损伤区域单链DNA断裂的K1enov阳性细胞在pMCA0后6h即有表达(P＜0．01），在24h时达到高16(P＜0．01)，72h时有所下降(P＜0．01)。结论 单链DNA断裂损伤在pMCA0后6h即可出现，并逐渐积累，成为缺血半暗带内细胞损伤发展过程的重要环节，并可能预示半暗带损伤范围的不断扩大。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C早期诊断梗阻性黄疸患者肾功能损伤的临床研究

目的：探讨检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂（cystatin C,Cys C）对早期诊断梗阻性黄疸患者肾功能损害的意义。方法：测定84例梗阻性黄疸患者的24h肌酐清除率（24h CCr）,血清肌酐（SCr）以及血清Cys C水平,并以CCr〈80mL.min-1.1.73m-2作为肾功能损害诊断标准,采用χ2检验、相关性分析和ROC曲线分析Cys C的诊断价值。结果：84例患者中共31例出现CCr下降,其中Cys C水平有26例上升,而仅有18例SCr出现异常。Cys C对CCr的评估效能优于SCr（P〈0.05）,相关性分析提示在梗阻性黄疸患者中,Cys C与SCr和CCr均有显著负相关性（CysC：r=-0.801,P〈0.001;SCr：r=-0.594,P〈0.001）。ROC曲线分析显示Cys C的曲线下面积（AUC）值明显高于SCr（0.841比0.622）。结论：Cys C较SCr能更为准确和迅速地反映梗阻性黄疸患者的肾功能损害;常规监测该类患者的Cys C水平,对有效防治梗阻性黄疸导致的急性肾功能衰竭具有积极意义。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在肿瘤研究中的进展

肿瘤发病机制的研究一直是人们关注的焦点,随着相关研究的不断深入,研究人员发现血清和组织内蛋白酶抑制剂表达量的变化与某些肿瘤细胞向外浸润与转移有着非常密切的关系。半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（cystatin C,Cys C）是一种小分子蛋白质,作为一种蛋白酶抑制剂可以抑制包括半胱氨酸蛋白酶在内的多种蛋白水解酶的活性。由于这些蛋白水解酶对细胞外基质（ECM）的降解,可以使肿瘤细胞能穿透基底膜向远处转移。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在胃肠道肿瘤组织中表达的研究

目的探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（Cystatinc）在胃肠道肿瘤组织中的表达及其在肿瘤发生发展过程中的意义。方法运用免疫组化及Western Blotting的方法分别对肿瘤组织及其癌旁组织中CystatinC的表达进行分析，并运用聚合酶链反应测定（ELISA）方法检测肿瘤组织及其癌旁组织中CystatinC的含量。结果（1）免疫组化结果显示CystatinC主要表达在肿瘤细胞的胞浆内，正常腺体中有微弱表达，且胃肠道肿瘤组织中的阳性百分比（75％）显著高于癌旁组织的阳性百分比（46．88％）∽=6．825，P〈0．01）；（2）Western Blotting的结果证实CystatinC在肿瘤组织中的表达明显高于癌旁组织；（3）ELISA定量测定肿瘤组织中CystatinC的含量高于癌旁组织，[符号秩和检验（Wilcoxon Signed Ranks Test），S=33．00，P〈0．05]；（4）CystatinC在高分化肿瘤中的含量高于低分化肿瘤（Mann-Whitney Test，S=13．00，P〈0．05）。结论CystatinC在胃肠道肿瘤组织中表达增高并与肿瘤的恶性程度存在相关性，提示CystatinC在胃肠道肿瘤的发生发展过程中起重要作用。     

半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注损伤皮质中的动态时空表达

目的：观察半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注不同时间、灶周皮质的动态时空变化。方法：实验于2005—05／08在河北医科大学第二医院神经分子影像医学和神经病学实验室完成。①选择清洁级健康新西兰白兔66只，雄性，兔龄4．5—5个月，体质量（2．6&;#177;0．2）奴，采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型，随机分为假手术组（n=6），模型组（n-60），模型组按再灌注时间又分为6个时间点，即1h、6h、1d、3d、7d、14d，每个时间点10只大白兔，各时间点依方法不同又分为组织学检测组（n=5）和流式细胞术检测组（n=5）。②采用免疫组化SP法检测皮质半胱氨酸蛋白酶3表达：应用Meta Morph显微图像分析系统于400倍光镜下随机观察并测量灶周皮质5个不重复视野神经细胞胞浆半胱氨酸蛋白酶3阳性表达光密度值，计算其平均数。③流式细胞术检测细胞凋亡率和灶周皮质半胱氨酸蛋白酶3的表达：经计算机分析系统，绘制细胞数DNA分布图，以二倍体峰前亚二倍体峰（凋亡峰）判定细胞凋亡，计算DNA断裂的凋亡细胞百分数（细胞凋亡率）。④透射电镜取材和观察：开颅取脑后，立即取梗死灶周1mm&;#215;1mm&;#215;2mm大小的标本，经过一系列处理后，在光镜下进一步确认已切到梗死灶周后，行超薄切片。醋酸铀、枸橼酸铅双重染色后，日立H-9000型透射电镜进行超微结构观察并照相。⑤结果行单因素方差分析。结果：66只大白兔全部进入结果分析。①免疫组化及流式细胞术分析发现，半胱氨酸蛋白酶3在2h缺血再灌注1h迅速增多，并随再灌注时间延长而加剧，3d达高峰，然后逐渐下降，14d仍高于基线水平。②灶周皮质凋亡率和脱氧核苷酰转移酶法计数TUNEL阳性细胞数在再灌注1h也逐渐增多，1-3d达高峰，然后逐渐下降，14d降至基线水平。③超微结构显示假手术组的细胞结构正常。再灌注3d神经元损伤最重，7d时形态有所改善。结论：半胱氨酸蛋白酶3活性表达在再灌注期先于凋亡发生前，并且其表达时程较长，是检测缺血再灌注凋亡的敏感指标，也是溶栓后治疗的靶点。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对急性胰腺炎肾功能损伤的早期诊断价值

目的:探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)检测对急性胰腺炎(AP)患者肾功能损害早期诊断的意义.方法:测定72例急性胰腺炎患者的24 h肌酐清除率(Ccr),血清肌酐(SCr),以及血清Cys C水平,并以CCr<80 mL/(min·1.73 m2)作为肾功能损害诊断标准,采用X2检验,相关性分析和ROC曲线分析了解Cys C的诊断价值.结果:72例患者中共有28例出现CCr下降,在这28例患者中,CysC水平上升的有23例,而SCr出现异常的仅有16例,X2检验分析后提示CysC对CCr的评估效能优于SCr(P<0.05).相关性分析提示AP患者中,Cys C与SCr均和CCr有着显著的负相关性(CysC:r=-0.868,P<0.001;SCr:r=-0.604,P<0.001),而Cys C的相关系数较高.ROC曲线分析显示Cys C的曲线下面积(AUC)值明显高于SCr(0.884vs0.687).结论:Cys C较SCr能更为准确和早期发现AP患者急性肾功能损害,常规监测AP患者的Cys C水平,对有效治疗AP和预防急性肾功能衰竭的发生具有积极意义.     

ELISA测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C

目的建立ELISA方法测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。方法以双抗体夹心ELISA方法测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C。结果该方法的线性范围可达100mg／L。参考值范围为：男,1．81±0．73mg／L。女,1．72±0．69mg／L。回收率为：99．1±3．1％。批内和批间分别为：5．8±0．5％、7．3±O．7％。结论该方法操作简便,快速,准确,适于临床常规应用。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡。 目的：通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况，探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系。 设计：随机对照实验。 单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。 材料：实验于1999-01／04在解放军第三军医大学西南医院完成。选取雄性Wistar大鼠182只，随机分为3组：假手术组14只，脑缺血再灌注组84只，乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛（acetyl-asp-glu-valasp．aldehyde，AC-DEVD-CHO）治疗组84只，后两组均设立缺血再灌注8，24。48，72，120，168h 6个时相点，每个时相点14只大鼠。 方法：脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20min再灌注模型，分别于再灌注后8，24，48，72，120，168h处死取海马组织；假手术组施行麻醉及手术，但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉，术后观察72h后处死取海马组织备检。以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350nm处观察脑海马细胞凋亡情况。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系。 结果：实验纳入182只大鼠，脱落14只，共168只大鼠进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：假手术组术后观察72时为0。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（1．71&;#177;0．03），（1．22&;#177;0．03）；（2．77&;#177;0．09），（1．59&;#177;0．7）；（5．54&;#177;0．51），（2．3&;#177;0．19）；（6．28&;#177;1．71），（3.43&;#177;0．46）；（3．11&;#177;1．21），（1．73&;#177;0．14）nkat／kg；P〈0．05或0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况：每400倍视野下，假手术组术后观察72h为（1．2&;#177;0．4）个。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（6．4&;#177;1．7），（2．8&;#177;0．8）；（11．8&;#177;1．3），（5．8&;#177;1．9）；（19．8&;#177;3．1），（10．0&;#177;1．9）；（31．2&;#177;5．9），（16．4&;#177;2．4）；（19．8&;#177;2．3），（9．0&;#177;2．3）个／400倍视野；P〈均0．011。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系：脑缺血再稽注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析，二者的变化呈显著正相关（r分别为0．9356及0．9800，P均〈0．01）。 结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一，在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C评价肾病早期肾损害的研究

目前对肾脏疾病的检验,常用的。肾小球滤过功能检测指标如血清尿素（Urea）、血清肌酐（SCr）、内生肌酐清除率（Ccr）,血清β2-微球蛋白（B：-MG）等由于测定影响因素较多,操作复杂,表现出各自的局限性。血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）是一个具有准确、可靠、敏感反映肾小球滤过率（GFR）的指标,较SCr、Ccr等有更高的敏感性。我们评价了血清CysC在肾病患者早期肾损害的临床价值,为临床提供简便、准确、可靠、敏感地反映GFR的指标。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对糖尿病患者的应用价值

目的 分析糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)患者血清中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin c,cys-c)的水平变化与糖尿病肾病(Diabetes Nephropathy,DN)的关系.方法 采用投射免疫比浊法测定糖尿病患者血清中的cys-c浓度,同时检测糖尿病患者空腹血糖( Fasting Blood -Glucose,FBG)肌酐(Creatinine,Cr),血尿素(Blood Urea Nitrogen,BUN),以cockroft-Gault公式计算肾小球滤过率(Glomerulus Filtration Rate,GFR)进行比较分析.结果 Cys-c水平增高与糖尿病患者肾脏是否受损及受损程度显著相关.结论 Cys-c水平可作为糖尿病肾病的早期诊断指标,对糖尿病患者的预防.治疗和预后具有重要的临床应用价值.     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测在糖尿病肾病中的临床意义

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)常见而严重的并发症之一,目前尿微量白蛋白检测是诊断早期糖尿病肾病(DN)和分期标准的主要方法,但该法受发热、尿路感染、高血糖等多种因素的影响,因此寻求其他更稳定的诊断指标是临床的迫切     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C评估肾小球滤过率的临床应用

【目的】探讨半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）测定结果通过Hoek’s公式推算的肾小球滤过率（GFR）值与^125I同位素标记造影法测定GFR值的相关性。【方法】选取123例临床肾病科病人,通过同位素法测定GFR值与CysC和肌酐（Cr）测定结果推算GFR值进行比对。【结果】测定病人CysC结果通过Hoek＇s公式计算的GFR值与同位素法测定GFR值,呈现良好的相关性（Y=0．9341X＋5．3931,R^2=0．9865）,同时病人CysC结果与同位素法测定GFR值也密切负相关（Y=-2E-06X3＋0．0007X2—0．08X＋4．0308,R^2=0．993）。【结论】通过CysC测定值用Hoek＇s公式计算GFR值,可以简化GFR测定程序,又可以获得准确的GFR值,帮助临床诊断。     

连续性血液透析滤过对血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C的影响

目的观察血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C,Cyst C)在连续性血液透析滤过(血滤)治疗中的变化,以期寻找血滤过程中监测肾功能的指标。方法对急性肾损伤52例行连续性血滤治疗,记录治疗前后血清肌酐(Cr)及血清Cyst C的数值,并进行比较分析。结果 52例平均血清Cyst C治疗前为(6.87±2.11)μmol/L,治疗后24、48、72 h分别为(6.34±1.89)μmol/L、(6.08±1.40)μmol/L、(5.86±2.37)μmol/L,治疗前后比较差异均无统计学意义(t=-0.364、-0.286、-0.367,P=0.233、0.179、0.154);平均血清Cr水平治疗前为(732.00±59.64)μmol/L,治疗后24、48、72 h分别为(497.00±41.31)μmol/L、(258.00±45.69)μmol/L、(173.00±55.27)μmol/L,治疗前后比较差异均有统计学意义(t=2.143、2.576、2.973,P=0.035、0.021、0.010)。结论连续性血滤治疗对血清Cyst C清除率低,血清Cyst C可作为肾替代治疗过程中监测肾功能的指标。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对肝硬化患者肾功能早期损害的实验评价

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（CysC）对肝硬化患者肾功能早期损害的诊断价值。方法测定67例肝硬化患者和32名健康对照者的血清肌酐（Cr）、尿素（Urea）、肌酐清除率（CCr）和CysC水平，并将患者按性别、Child—Pugh分级或CCr水平进行分组评价。结果肝硬化患者血清CCr和CysC水平与对照组比较差异有显著性（Jp〈0．001），但Cr和Urea差异无显著性。不同性别患者CCr、Cr和CysC水平与对照组比较差异有显著性（P〈0．05—0．001），但Urea无差异。肝硬化患者Child—Pugh分级各亚组CCr、Cr、Urea和CysC水平与健康对照组比较差异有显著性（P〈0．05～0．001）。以CCr70ml／min为界点将患者分为Ⅰ和Ⅱ亚组，并与对照组比较，结果表明仅CysC水平差异有显著性（P〈0．001），CysC水平Ⅰ和Ⅱ2亚组间差异也有显著性（P〈0．001）。受试者工作特征曲线（ROC曲线）显示CysC诊断有效性优于Cr和Urea。结论血清Cr和Urea难以对肝硬化患者。肾功能轻度受损进行诊断，CCr虽能作出早期指示，却过高估计试验结果，而CysC能较准确地作出早期检测，提示其可能是潜在的肝硬化患者肾功能早期损害的指标。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对肝硬化患者肾功能早期损害的实验评价

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)对肝硬化患者肾功能早期损害的诊断价值。方法测定67例肝硬化患者和32名健康对照者的血清肌酐(Cr)、尿素(Urea)、肌酐清除率(Ccr)和Cys C水平,并将患者按性别、Ch ild-Pugh分级或Ccr水平进行分组评价。结果肝硬化患者血清Ccr和Cys C水平与对照组比较差异有显著性(P<0.001),但Cr和Urea差异无显著性。不同性别患者Ccr、Cr和Cys C水平与对照组比较差异有显著性(P<0.05~0.001),但Urea无差异。肝硬化患者Ch ild-Pugh分级各亚组Ccr、Cr、Urea和Cys C水平与健康对照组比较差异有显著性(P<0.05~0.001)。以Ccr 70 m l/m in为界点将患者分为Ⅰ和Ⅱ亚组,并与对照组比较,结果表明仅Cys C水平差异有显著性(P<0.001),Cys C水平Ⅰ和Ⅱ2亚组间差异也有显著性(P<0.001)。受试者工作特征曲线(ROC曲线)显示Cys C诊断有效性优于Cr和Urea。结论血清Cr和Urea难以对肝硬化患者肾功能轻度受损进行诊断,Ccr虽能作出早期指示,却过高估计试验结果,而Cys C能较准确地作出早期检测,提示其可能是潜在的肝硬化患者肾功能早期损害的指标。     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对糖尿病肾病早期诊断的临床意义

目的探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys C)在糖尿病肾病早期诊断中的价值。方法将糖尿病患者按肌酐清除率(Ccr)分成4组:60~80 mL/(min.1.73 m2)为A组(肾功能代偿期),40~59 mL/(min.1.73 m2)为B组(肾功能不全期),20~39 mL/(min.1.73 m2)为C组(肾衰竭期),<20 mL/(min.1.73 m2)为D组(尿毒症期)。测定各组患者血清Cys C、尿素(Urea)、肌酐(SCr)浓度和阳性率,并将结果与健康对照组比较。结果 A组SCr、Urea值均在在正常范围内,Cys C异常率32.6%;B组Cys C异常率77.8%,SCr异常率36.1%,Urea异常率27.8%;C组Cys C异常率93.3%,SCr异常率73.3%,Urea异常率66.7%;D组Cys C、SCr、Urea异常率均为100.0%。结论 Cys C对糖尿病肾病早期诊断较Urea、Scr更有价值。     

孕妇血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C参考范围的研究

目的 建立孕妇妊娠早、中、晚期的血清半胱氨酸蛋白酶抑制物C(Cys C)参考范围。方法 采用免疫浊度法分析测定200例对照组女性(20～35岁),249例正常孕妇(20～35岁)妊娠早、中、晚期血清Cys C水平,并对数据进行统计学分析。结果 对照组、 妊娠早期、中期、晚期四组Cys C参考范围分别为0.46～0.95,0.45～0.85,0.52～0.90和0.75～1.48 mg/L,各组中位水平分别为0.56,0.58,0.62和0.9 mg/L,早期组、中期组与对照组中位水平,差异无统计学显著性意义(q=2.565,2.246,均P>0.05),对照组、早期、中期与晚期差异具有统计学显著性意义(q=5.346,6.070,5.766,均P<0.05)。结论 妊娠晚期血清Cys C水平升高,孕妇血清CysC参考范围应按照妊娠时间划分,有利于提高其临床价值和诊断的正确性。     

成人血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C正常参考范围调查

目的确定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,胱抑素C)的正常参考范围。方法检测310例体检标本,分别测定Cystatin C、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、清蛋白(ALB)、前清蛋白(PA)、肌酐(Cr)和C反应蛋白(CRP)水平,根据非正常标本剔出规则,选取168例健康体检者,按性别、年龄分组,确立本实验室Cystatin C参考范围。结果 Cystation C在不同性别和年龄之间无显著性差异,但50～60岁Cystatin C的含量有降低的趋势。Cystatin C平均值0.88mg/L,标准偏差0.097,95%正常参考范围为0.69～1.07mg/L,99%参考范围0.63～1.13mg/L。结论 Cystatin C正常参考范围与试剂说明书和文献报道一致,可作为本实验室参考范围依据。