黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的诱导作用研究

目的探讨黄芪不同提取物对K562细胞向红系分化的影响。方法用超声醇提水提法从黄芪根中获取富含黄芪总苷(AST)的醇溶部分和富含黄芪多糖(APS)的水溶部分并分别作用于K562细胞,联苯胺染色法观察K562细胞向红系分化的情况,MTT法测定细胞活性。以丁酸钠(BA)处理的K562细胞作为阳性对照。结果以不同浓度(1、2、4、8mg/ml)APS作用于K562细胞后显示其有诱导后者向红系分化的作用,以4mg/ml为最适浓度,而AST诱导作用不明显。4mg/ml APS、AST及0.5mmol/L BA作用后K562细胞的联苯胺染色阳性率(BZ%)峰值分别为13.2%、2.9%及17.5%。以4mg/ml APS作用于K562细胞24、48、72h后,其BZ%显著低于同时点BA组(P<0.01),但72、96h的联苯胺染色阳性细胞总数明显高于BA组(P<0.01)。MTT测定结果显示,APS、AST对K562细胞的生长无明显抑制作用,而BA对细胞生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论黄芪可诱导K562细胞向红系分化,其有效成分在富含多糖的水溶部分(APS),以4mg/ml浓度的诱导作用最强。黄芪提取物对K562细胞的生长无明显抑制作用。     

N-ras基因在K562细胞中的表达研究

目的探讨N-ras基因突变及表达水平与慢性粒细胞白血病发病的关系。方法以慢粒细胞株K562细胞为研究对象，采用RT-PCR和直接测序的方法对N-ras的表达水平及突变进行检测。结果RT-PCR结果示N-ras基因在K562细胞中表达升高，直接测序结果表明N-ras基因在K562细胞中不存在突变。结论N-ras基因在K562细胞中高表达，而其高表达机制与突变无关。     

诱导K562细胞向红系分化的中药血清药理学方法探讨

目的对K562细胞向红系分化的中药血清药理学方法进行探讨。方法以K562细胞为体外模型,采用联苯胺定性技术检测细胞内血红蛋白,比较不同条件下的含药血清诱导K562细胞前后的阳性率;测量波长为414的A值。结果10％的含药血清培养诱导K562细胞向红系分化的作用最强;灭活血清对：K562细胞向红系分化的诱导作用强于未灭活血清;大鼠qd连续7d和bid连续3d,2种方法所得血清均以10％的浓度培养K562细胞,二者诱导其向红系分化的作用无明显差异;临床等效剂量ig所得血清比2倍、4倍剂量要好。结论含药血清的制备和含药血清在体外的合理应用对实验结果有很大的影响。     

PUVA诱导K562细胞凋亡时对Fas表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞K562凋亡时对Fas表达的影响。方法以K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas基因表达水平、蛋白表达水平为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果(1)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可诱导K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。(2)电镜下观察经PUVA处理后的K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。(3)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas基因表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。(4)单纯PSO、单纯UVA照射及PUVA均可上调K562细胞Fas蛋白表达水平,PUVA的作用显著强于前两者。结论(1)PUVA可诱导白血病细胞K562发生凋亡,作用强于单纯PSO及单纯UVA照射。(2)PUVA诱导K562凋亡的途径之一为上调K562细胞Fas基因表达水平。     

瑞香狼香水提物小鼠药物血清诱导K562细胞凋亡

目的从细胞凋亡角度探讨瑞香狼毒(SCL)抗肿瘤作用机理.方法用SCL小鼠药物血清处理培养的人白血病K562细胞,MTT比色法观察对细胞生长的抑制作用,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,流式细胞仪观察DNA改变.结果SCL(5～20)g*kg-1小鼠药物血清显著抑制K562细胞增殖,明显诱导K562细胞凋亡的形态学改变和DNA变化.凋亡细胞率与小鼠服用SCL水提物的剂量呈正相关.结论SCL水提物可诱导肿瘤细胞凋亡.     

新的白血病相关基因LRP15真核表达载体构建及在K562细胞中的表达

 目的构建LRP15基因开放阅读框架(ORF)序列的真核表达载体,并观察其在K562细胞中的表达情况.方法采用RT-PCR方法自1例白血病患者中克隆LRP15cDNA片段,将目的基因LRP15克隆入pGEM-T载体中并进行酶切鉴定和DNA序列测定.将鉴定过的DNA片段插入真核质粒pcDNA3.1(+),构建真核表达载体pcDNA-LRP15.脂质体介导法将其转染K562细胞,72 h以RT-PCR方法检测转染细胞中LRP15基因的表达情况.结果酶切鉴定和序列分析证实,重组质粒含有人LRP15基因ORF序列;转染实验表明LR15基因能在K562细胞中表达.结论成功构建LRP15基因真核表达载体,并在K562细胞中获得表达,为进一步研究LRP15基因的功能奠定了基础.     

PB231诱导K562细胞凋亡的初步研究

 目的研究PB231诱导K 562细胞凋亡作用,探讨PB231的抗肿瘤机制.方法采用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法测定PB231对K 562细胞生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA裂解.结果K562细胞经PB31处理后,在倒置光显微镜下可见细胞变形和凋亡小体形成;荧光显微镜下可见染色质凝集.MTT法检测其IC50值为5×10-5M.琼脂糖凝胶电泳呈典型的"DNA Ladder".结论PB231可诱导K562细胞发生凋亡.这可能是其抑制K562细胞生长的作用机理之一.     

丁酸盐诱导人类珠蛋白基因表达的实验研究

目的 :研究丁酸盐对人类珠蛋白基因表达的影响。方法 :选用K5 6 2细胞为体外模型 ,采用联苯胺染色和RT -PCR技术 ,比较丁酸盐诱导前后联苯胺染色阳性率和 7种珠蛋白基因mRNA改变。结果 :丁酸盐诱导后联苯胺染色阳性细胞率 (BZ % )增加 3～ 6倍 ;Gγ -mRNA增加 2 .2 6± 0 .2 2倍 (P <0 .0 5 ) ,α、ζ、ε、δ、Aγ -mRNA均有增加但增加不显著 (P >0 .0 5 ) ;诱导前后K5 6 2细胞均未检测到 β -RNA。结论 :丁酸盐可诱导珠蛋白基因表达并选择性地刺激γ基因转录增加 ,尤其是Gγ ;丁酸盐具有与阳性对照羟基脲相似的诱导珠蛋白基因表达的作用     

OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用

目的研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的作用。方法应用细胞计数的方法研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的生长曲线的影响;用MTT研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞的细胞毒作用;用流式细胞仪技术研究OD-PTD融合蛋白对K562细胞周期的影响。结果OD-PTD融合蛋白能显著抑制细胞的生长(P<0.01);并且对K562细胞具有明显的细胞毒作用(P<0.01)。OD-PTD融合蛋白作用于K562细胞后,细胞周期变化明显,细胞从G0/G1期到S期发生明显阻滞(P<0.05)。结论OD-PTD融合蛋白对K562细胞有明显的抑制作用,为进一步探讨慢性粒细胞白血病新的治疗手段提供了实验依据。     

羧酸富勒烯C3对K562和AHH-1细胞的辐射生物效应研究

目的 探讨羧酸富勒烯C₃(C₃)在辐射防护和辅助放疗方面的应用。方法 以不同浓度C₃与AHH-1、K562细胞共孵育,用CCK-8法、锥虫蓝试验检测C₃对细胞活力和存活率的影响,用Annexin-V/PI染色、流式细胞分析法研究照射后细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 C₃对AHH-1细胞活力几乎无影响(存活率大于95%),但600mg/L的C₃使K562细胞存活率明显降低(82%)。100mg/LC₃用药照射组与单纯照射组相比,4Gy照射后AHH-1细胞的存活率显著升高(71.3%、90.3%),细胞凋亡率明显下降(26.3%、12.6%);而受照射24Gy的K562细胞存活率却呈现下降趋势(69.4%、66.1%),不同剂量照射后细胞凋亡率反而增加。细胞周期分析结果显示,C₃处理组AHH-1细胞12Gy辐射后G₂期阻滞(27.2%)与单纯照射组(40.8%)相比减轻;而K562受照细胞则反而加重。结论 C₃对AHH-1细胞具有较好的辐射防护作用,而对K562细胞则表现为抑制细胞增殖,促进辐射诱导的细胞凋亡并加重G₂期阻滞。     

ALA-PDT杀伤K562白血病细胞和人外周血单形核细胞的实验研究

目的：研究在相同实验条件下ALA-PDT对K562白血病细胞和人外周血单形核细胞（peripheral blood mononuclear cells，PBMC）的杀伤作用及K562白血病细胞的死亡模式。     

Caspase8、3蛋白在PUVA诱导K562细胞凋亡时的变化

目的研究Caspase8、3蛋白在补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病K562细胞凋亡时的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和(或)不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于K562细胞,检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达,用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,后两者上调Caspase8、3蛋白的表达,PUVA的作用显著强于前两者;PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导K562细胞凋亡。     

JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。     

寡聚化结构域融合蛋白对K562细胞的作用研究

BCR/ABL融合癌蛋白可导致慢性粒细胞白血病的发生.寡聚化结构域(OD)是BCR/ABL融合癌蛋白上的一个结构域,能激活BCR/ABL融合癌蛋白的酪氨酸激酶活性.     

应用逆转录病毒载体转染K562细胞株的实验研究

目的:探讨多种细胞因子联合刺激下,逆转录病毒载体对K562细胞的基因转移效率。方法:以PA317-GCGPXSN细胞制备病毒上清,NIH3T3细胞测定病毒滴度后,取经过SCF、IL-3、IL-6预培养刺激后的K562细胞,实施基因转移,流式细胞仪及PCR方法测定基因转移效率。结果:①病毒滴度为1.9×105CFU/m l;②对照组K562细胞测定的荧光强度数值为0.56%,实验组为77.16%,两者差异有统计学意义(P<0.01)。PCR方法扩增到了NeoR基因的特异性片断。结论:细胞因子预刺激后实施基因转移,可有效地将外源基因转移进入K562细胞基因组中。     

SHIP基因真核表达载体的构建、鉴定及对白血病细胞系K562的抑制作用

目的 构建真核表达质粒pCAC-IRESSHIP-GFP,并观察其在K562细胞中的表达. 方法 将SHIP基因的RT-PCR产物克隆入载体pCAG-IRES-GFP,经酶切、鉴定及测序分析,构建pCAG-IRESSHIP-GFP重组真核表达质粒.实验设置3个组:K562组(未转染)、K562/IRES组(转染宅载体pCAG-IRGA-GFP),K562/SHIP)组(转染重组质粒pCAC-IRES-SHIP-GFP).荧光显微镜和流式术榆测重组质粒的转染效率;Western blotting检测各组SHIP蛋白的表达及Akt磷酸化水平变化;MIT法和流式术分析SHIP基凶转染对细胞增殖的影响. 结果 重组质粒pCAG-IRESSHIP-GFP已成功载人SHIP的全长编码基凶,序列测定的结果与预期设计完全一致.荧光显微镜在K562/SHIP组町见绿色荧光,转染效率为4&2%±6.6%.Westem blotting显示K562/SHIP组有明显的SHIP蛋白表达,且p-Akt-308和p-Akt-473的水平(分别为0.182和0.381)较K562/IRES组(0.361和0.716)和K562组(0.365和0.725)明显下降(P＜0.01).流式术分析显示K562/SHIP组细胞生长减慢,G0/G1期细胞增多、G2/M期细胞减少,增殖指数降低. 结论 成功构建了3 585bp的SHIP基因真核表达质粒pCAG-IRES-SHIP-GFP,并在K562细胞中表达.外源性SHIP基因转染能使K562细胞增殖受抑,原因可能与Akt的磷酸化下调有关.     

瑞香狼毒小鼠药物血清增敏化疗药物对K562／VCR耐药细胞的抗癌活性

目的研究瑞香狼毒(SC)小鼠药物血清与细胞毒化疗药物联合应用对K562/VCR多药耐药细胞的协同抗肿瘤效应.方法小鼠口服SC水提物6g*kg-1,2h后采集血清.SC药物血清与长春新碱(VCR)、阿霉素(Dox)或足叶乙甙(VP-16)联合处理K562/VCR多药耐药细胞,检测细胞MTT转化率,克隆形成和DNA合成能力.结果5%SC药物血清显著增加细胞毒化疗药物对K562/VCR耐药细胞的敏感性;VCR、Dox、VP-16对K562/VCR的IC50较单独化疗药物组分别减小6.3、15.0和18.5倍;细胞克隆数分别减少45.1%、66.6%和58.6%;[3H]TdR掺入K562/VCR细胞DNA也显著减少.增敏作用随SC药物血清比例的增高而增强.结论瑞香狼毒可增加化疗药物对多药耐药肿瘤细胞的敏感性.     

As2O3诱导HL-60,K562及NB4细胞的凋亡

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对慢性粒细胞K5 6 2 (CML) ,急性粒细胞白血病细胞株HL - 6 0 (AMLM2 )的作用并与细胞株NB4(APLM3)作比较。方法 :采用形态学和流式细胞术观察不同浓度As2 O3 对HL - 6 0 ,K5 6 2及NB4细胞的作用。结果 :As2 O3不仅能诱导NB4的凋亡 ,提高其浓度至 2 .7μM和 8.1μM ,也能诱导K5 6 2 ,HL - 6 0的凋亡。As2 O3 不能诱导三种细胞分化。结论 :As2 O3 对细胞诱导的凋亡是非选择性的且不能诱导分化。     

黄芪总黄酮对γ射线所致V79细胞DNA链断裂损伤防护作用的实验研究

本文作者用ＤＮＡ解旋的荧光检测（ＦＡＤＵ）方法观察了γ射线对Ｖ７９细胞ＤＮＡ的损伤作用及黄芪总黄酮对其作用的防护效果。结果表明细胞ＤＮＡ链断裂率与γ射线的照射量成正比。黄芪总黄酮浓度为０．６ｍｇ／ｍｌ时即对ＤＮＡ损伤有保护作用，当浓度达１．２ｍｇ／ｍｌ时，对γ射线所致ＤＮＡ链断裂损伤有非常显著的防护效果。