白头翁醇提物抑制血管生成的体外实验研究

目的 探讨白头翁醇提物对体外血管生成的抑制作用及其可能机制。方法 采用MTT法观察白头翁醇提物对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响;通过Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察白头翁醇提物对HUVEC迁移、形成血管能力的影响;采用流式细胞仪检测白头翁醇提物对HUVEC的凋亡率及细胞周期的影响。结果 2～8μg／ml的白头翁醇提物作用48h对HUVEC的增殖抑制率为21.6％～72.0％,对LoVo细胞的增殖抑制率为13.2％～22.9％;体外小管形成实验发现,2～8μg／ml白头翁醇提物作用24h,HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0001）。经2～8μg／ml白头翁醇提物处理12h,HUVEC迁移数明显少于对照组（P＜0001）。2、4、8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞48h后,其凋亡率分别为952％、1864％和2007％,对照组为6.25％。8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞24h后,细胞周期停滞在G2／M期。结论 白头翁醇提物在体外能有效抑制血管生成,其机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,抑制HUVEC有丝分裂有关。     

白头翁联合恩度体外抗血管生成作用

目的：探讨白头翁醇提物联合恩度体外对血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成的作用。方法：以人结肠癌Lovo细胞为对照,采用MTT法观察中药白头翁联合恩度对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）体外增殖的影响;利用transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察中药白头翁联合恩度对HUVEC体外迁移、成血管能力的影响。结果：白头翁醇提物2-8μg/ml在体外具有抑制HUVEC增殖的作用,联合恩度10μg/ml时具有协同作用（细胞存活率在37.6%-22.5%）,与浓度呈负相关（r=-0.850,P=0.032）,此浓度范围内对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显差异细胞毒作用（P=0.000）。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用12h后具有抑制HUVEC迁移的作用,与浓度呈负相关（r=-0.919,P=0.000）。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用24h后内皮细胞小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,与浓度呈负相关（r=-0.908,P=0.000）。结论：小剂量白头翁在体外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。     

中药独活及其单体蛇床子素体外抗血管生成的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素对体外血管生成的抑制作用及其可能的机制.方法：采用MTT法观察中药独活醇提物及蛇床子素对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell.HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响,Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验以及流式细胞术,观察并比较独活醇提物及蛇床子素对HUVEC迁移、小管形成、凋亡及周期的影响.结果：3.75-30μg/ml的独活醇提物及蛇床子素作用48h时对HUVEC的细胞增殖抑制率分别在5.16％-10.15％和22.64％-65.56％之间,对LoVo细胞增殖抑制率分别在2.86％-7.29％和5.15％-24.39％之间.体外小管及小管迁移实验显示,3.75-30μg/ml的蛇床子素作用24h时HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素处理12h对HUVEC迁移抑制率分别在-2.16％至8.00％和13.70％至63.04％之间.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素诱导HUVEC细胞凋亡率分别在6.1％-14.4％和18.8％-89.5％之间.独活醇提物和蛇床子素作用HUVEC 24h后,使内皮细胞周期主要阻滞在G0-G1期,蛇床子素对细胞周期影响强于独活醇提物.结论：蛇床子素在体外抑制血管生成作用强于独活醇提物,说明蛇床子素可能是独活醇提物中发挥抗血管生成作用的主要成分,其作用机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,阻滞HUVEC细胞周期有关.     

白头翁联合恩度体外抗血管生成作用

目的:探讨白头翁醇提物联合恩度体外对血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成的作用。方法:以人结肠癌Lovo细胞为对照,采用MTT法观察中药白头翁联合恩度对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响;利用transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察中药白头翁联合恩度对HUVEC体外迁移、成血管能力的影响。结果:白头翁醇提物2-8μg/ml在体外具有抑制HUVEC增殖的作用,联合恩度10μg/ml时具有协同作用(细胞存活率在37.6%-22.5%),与浓度呈负相关(r=-0.850,P=0.032),此浓度范围内对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显差异细胞毒作用(P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用12h后具有抑制HUVEC迁移的作用,与浓度呈负相关(r=-0.919,P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用24h后内皮细胞小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,与浓度呈负相关(r=-0.908,P=0.000)。结论:小剂量白头翁在体外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。     

参麦注射液联合羟基喜树碱抑制血管生成作用的实验研究

背景与目的：某些小剂量中药和小剂量化疗药物可选择性地抑制血管内皮细胞的功能。因此本文探讨参麦注射液联合应用羟基喜树碱对体内外血管生成的抑制作用。方法：以人肝癌细胞HepGⅡ作为对照，采用MTT法和三维血管模型观察参麦注射液联合羟基喜树碱对体外人微血管内皮细胞（HMVEC）增殖和迁移的影响；利用鸡胚尿囊膜（CAM）模型观察参麦注射液联合羟基喜树碱对体内鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果：40μl／ml参麦注射液和20ng／ml羟基喜树碱对血管内皮细胞增殖的抑制率分别为18％、31．7％，联合应用后的抑制率为43．6％；40μl／ml参麦注射液和20ng／ml羟基喜树碱对HepGⅡ细胞的抑制率分别为1．2％、0．9％，联合应用后的抑制率为19．4％；40μl／ml参麦注射液和20ng／ml羟基喜树碱对血管内皮细胞有抑制出芽的作用，联合应用具有显著的协同效应，且与作用时间呈正相关（r=0．988，P=0．007）；40μl／ml参麦注射液和20ng／ml羟基喜树碱对鸡胚尿囊膜新生血管抑制率分别为30％、40％，联合应用后的抑制率为60％。结论：①小剂量参麦注射液（40μl／m1）、羟基喜树碱（20ng／m1）在体内外具有抑制血管生成作用，而对肝癌细胞无明显抑制作用，显示出明显差异性细胞毒作用；②小剂量参麦注射液（40μl／m1）联合羟基喜树碱（20ng／m1）在体外具有抑制HMVEC增殖和迁移协同作用，体内具有抑制血管生成协同作用。     

磷酸二脂酶(PDE2、PDFA)抑制剂抗肿瘤血管生成作用的实验研

目的：研究确定磷酸二脂酶（phosphodiesterase，PDE）抑制剂对内皮细胞增殖、迁移以及在体内血管生成中的作用。方法：分别以人静脉内皮细胞（HUVEC）及C57BL／N6纯系小鼠为体外、体内研究对象，通过酶联免疫方法检测PDE2（ENHA）、PDE4（RP705）抑制剂对HUVEC中cAMP的含量的影响，及其与细胞增殖和迁移的关系。ENHA和RP705联合应用在C57BL／N6小鼠中的抑瘤作用。结果：PDE2选择性抑制剂EHNA（25μmol／L）和PDE4选择性抑制RP705（15μmol／L）均能够抑制由VEGF剌激的HUVEC增殖和迁移，并能增加HUVEC内cAMP含量，实验结果还显示PDE2和PDFA抑制剂的联合应用能够抑制体内血管生成，对C57BL／6N小鼠的抑瘤率达45．50％。结论：上述结果充分提示在病理性血管生成中PDE2和PDE4可能是新的潜在性的治疗靶点。     

独活醇提物及其单体蛇床子素体外抗肿瘤活性的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素在体外对人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO生长的影响.方法：将不同浓度中药独活醇提物及其单体蛇床子素作用于人胃癌细胞株MKN-45、BGC-823、人肺腺癌细胞株A549、人乳腺癌细胞株MCF-7及人结肠癌细胞株LOVO,倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法测定独活醇提物及其单体蛇床子素对5株肿瘤细胞的增殖抑制率.结果：蛇床子素浓度在3.75μg/ml-120 μg/ml之间对MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7及LOVO均有明显的抑制作用,且呈剂量-效应关系,IC50值分别为43.299μg/ml、56.790μg/ml、37.444 μg/ml、38.397μg/ml、36.231 μg/ml;相同条件下,独活醇提物对5株肿瘤细胞的抑制作用都较弱.结论：蛇床子素在体外能够抑制MKN-45、BGC-823、A549、MCF-7和LOVO的增殖,且LOVO细胞对蛇床子素最敏感,蛇床子素对5株肿瘤细胞的抑制作用均强于独活醇提物,说明蛇床子素有可能是独活醇提物中抗肿瘤作用的主要成分.     

奥沙利铂联合热疗对血管生成的抑制作用

目的探讨奥沙利铂(L-OHP)联合热疗在体内外对血管生成的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTY)法观察L-OHP联合热疗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人结肠癌LOVO细胞增殖的影响;采用transwell实验观察L-OHP联合热疗对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察L-OHP对CAM新生血管的抑制作用。结果0.5～16μs/ml L-OHP均具有抑制HUVEC增殖的作用,细胞存活率为80.1%～42.5%,其增殖速度与L-OHP浓度呈负相关(r=-0.943, P=0.005);在此浓度范围内,L-OHP对LOVO细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制。0.5、1和16μg/ml L-OHP与热疗对HUVEC增殖的抑制具有协同作用,2、4和8μg/ml L-OHP与热疗具有相加作用。0.25～2μg/ml L-OHP具有抑制HUVEC迁移的作用,细胞迁移抑制率为18.7%～53.0%。1、4μg/ml L-OHP对CAM新生血管具有明显的抑制作用,抑制率分别为70.0%和100.0%。结论小剂量L-OHP在体内外具有抑制血管生成的作用,联合热疗对抑制HUVEC增殖具有协同或相加效应。     

石见穿有效部位对血管内皮细胞生物学行为的影响

目的:探讨石见穿氯仿及乙酸乙酯部位在体外对血管内皮细胞生物学行为的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)至3-6代,采用MTT实验、Transwell小室迁移实验、体外小管形成实验观察石见穿氯仿及乙酸乙酯部位对HUVECs体外增殖、迁移、小管形成能力的影响。结果:3.125-25μg/ml的石见穿氯仿部位及乙酸乙酯部位作用于HUVEC 48h,增殖抑制率分别为17.36%-53.08%、9.53%-31.36%,而作用于人肺癌细胞A549增殖抑制率分别为7.10%-31.18%、2.24%-21.69%,两者相比有明显差异细胞毒作用(P=0.001)。3.125-25μg/ml的石见穿氯仿及乙酸乙酯部位作用HUVECs 12h后,迁移抑制率分别为5.39%-57.38%、1.92%-37.37%。3.75-25μg/ml石见穿氯仿部位作用24h时HUVEC小管形成数目减少且管腔不完整,相同浓度石见穿乙酸乙酯部位抑制作用较弱。结论:石见穿氯仿部位抑制内皮细胞增殖、迁移和小管形成作用明显优于乙酸乙酯部位,为石见穿发挥抗血管生成的主要作用部位。     

重组人血管内皮抑制素对鼻咽癌HNE-1细胞株体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究重组人血管内皮抑制素（rh-Endostatin，Endostar，恩度）对人鼻咽低分化鳞癌HNE-1细胞的增殖、迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度恩度（0～50μg／m1）处理HNE-1细胞，MTT法检测HNE-1细胞增殖活性的变化；创伤修复实验检测细胞迁移能力的变化。在Matrigel上接种HNE-1细胞，观察HNE-1细胞能否形成血管网状结构及其特点；体外管状形成抑制试验检测恩度对HNE-1细胞管道形成能力的影响。结果：恩度（1-50μg／m1）组的OD值与对照组比较无明显统计学差异（P〉0．05），但可以显著降低HNE-1细胞的迁移速度（P〈0．01），且与浓度呈负相关（r=-0．983，P〈0．01）。HNE-1细胞在Matrigel上培养能形成血管网状样结构，并能与内皮细胞连接共同构成马赛克样血管网状结构；恩度能抑制HNE。1细胞体外管道形成（P〈0．01），其管状结构数量与恩度浓度呈负相关（r=-0．978，P〈0．01）。结论：HNE-1细胞具有血管生成拟态及与内皮细胞共同形成马赛克血管的能力，恩度能够抑制HNE-1细胞的迁移和体外血管生成拟态形成。