针刺对痴呆小鼠大脑神经元超微结构的影响

[目的] 研究三焦针法对痴呆小鼠皮质和海马CA1区神经元线粒体结构的影响。[方法] 选取雄性SAMP8小鼠30只(随机分成模型组、非穴组、穴位组)和10只SAMR1小鼠(正常对照组)。持续治疗30日后,采用电子显微镜对小鼠大脑皮质顶叶和海马CA1区进行观察。[结果] R1组皮质顶叶和海马CA1区超微结构正常;SAMP8模型组小鼠神经元部分线粒体肿大、部分变性、部分脂肪化和坏死;SAMP8三焦针刺组线粒体肿大减少,少数线粒体变性,脂肪化和坏死;非经穴针刺组线粒体少数介于两者之间。[结论] 三焦针法能有效改善SAMP8小鼠大脑皮质和海马CA1区神经原线粒体病理性损伤。     

利用基因芯片研究针刺对快速老化小鼠海马基因表达的影响

[目的]利用基因芯片技术研究“益气调血,扶本培元”针法对快速老化小鼠(SAMP10)海马基因表达的影响。[方法]选取雄性8月龄快速老化小鼠(SAMP10)(分成针刺腧穴组,针刺非穴组,对照组)和同源正常老化小鼠(SAMR1),采用cDNAmicroarray技术,分析伴随快速老化SAMP10海马基因表达谱的变化以及针刺对其的影响。[结果]芯片结果显示,伴快速老化,P10海马共有7类10个基因的表达发生变化,8个基因表达下调,2个基因表达上调,施予“益气调血,扶本培元”针法后,所有与SAMP10快速老化相关基因的表达均被部分或全部的逆转,显示针刺具有特异性。[结论]“益气调血,扶本培元”针法能够良性调节脑老化相关基因的表达,并可能通过该种作用延缓脑衰老。     

细胞周期相关因子P15在痴呆鼠脑不同部位表达及针刺的影响

目的 了解细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15)在老年性痴呆(AD)模型快速老化模型小白鼠(SAMP8)不同脑区中的表达规律及针刺对其表达的影响.方法 15只10月龄快速老化模型小白鼠,随机分为正常组、模型组、针灸组,每组5只.用免疫组化法和病理图像分析技术测定P15在SAMP8皮层、海马、纹状体、嗅球等脑区中的阳性细胞数.结果 P15在正常组和SAMP8组中4个脑区的表达趋势一致,在嗅球区的表达明显高于其他3个脑区;P15在SAMP8的海马区表达增高、在嗅球及纹状体区表达低于正常组,差异有统计学意义.针刺能够下调SAMP8皮质、海马区的表达,且有统计学意义.结论 海马区细胞凋亡、嗅球和纹状体区细胞增殖可能是AD重要的病理改变,针刺可减少皮质、海马区的神经细胞凋亡,为针刺治疗AD的分子机制提供了新的内容.     

针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的影响

[目的] 探讨针刺对快速老化鼠线粒体钙离子浓度和活性氧簇的调节。[方法] 运用快速老化鼠SAMP8和正常老化鼠SAMR1作为实验对象,采用“三焦针法”（原“益气调血,扶本培元”针法）,应用荧光指示剂及荧光探针标记,观察针刺对小鼠皮层、海马线粒体钙离子浓度以及活性氧簇含量的影响。[结果] SAMP8对照组皮层、海马线粒体钙离子浓度和活性氧簇与正常对照组相比,表达上调;针刺组表达下调并趋向正常组;非穴组表达上调,与针刺组有显着差异。[结论] 针刺能明显抑制线粒体内钙离子的蓄积,减少氧自由基的产生。非穴位的针刺在一定程度上会对机体产生不良刺激,加速氧化损伤。     

淀粉样前体蛋白在快速老化痴呆小鼠P8海马中表达的免疫组化学研究

目的:观察淀粉样前体蛋白(APP)在快速老化痴呆小鼠P8(SAMP8)海马中的表达,探讨其与SAMP8小鼠增龄性变化的关系。方法:选用1、4、8、12月龄的SAMP8,用同龄正常老化小鼠R1(SAMR1)作为对照组,每组各8只,用免疫组化方法检测海马区APP的表达。结果:APP主要在SAM鼠海马神经元胞浆内表达,海马不同区域均有表达。定量结果显示对照组SAMR1小鼠海马各区域APP的表达随月龄增加无显著性改变(P>0.05);而SAMP8小鼠APP的表达则随月龄增加而增加,8月龄和12月龄SAMP8小鼠CA1区的表达量显著高于1月龄组(P<0.05),也分别显著高于同月龄对照组(P<0.05),CA3区APP的改变稍晚于CA1区,与同品系1月龄小鼠及同龄对照组比较,12月龄时显示有显著性增加(P<0.05)。结论:SAMP8小鼠海马APP的表达随月龄增加而增加,提示APP表达量的增加与SAMP8小鼠的快速老化相关。     

针刺对阿尔茨海默氏病SAMP8小鼠学习记忆能力及海马区胰岛素受体mRNA表达的影响

目的观察针刺足三里、百会穴对阿尔茨海默氏病（AD）转基因快速老化SAMP8小鼠的学习记忆能力及海马区胰岛素受体（InsR）mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法用Morris水迷宫进行筛选,将符合AD模型标准的SAMP8小鼠随机分为模型组、针刺治疗组（简称为针刺组）,每组10只,并随机选取同源、同龄的10只SAMR1小鼠作为正常对照组。针刺组针刺小鼠足三里、百会穴,留针30 min,每日1次,10 d为1个疗程,疗程之间间隔2 d,连续治疗3个疗程。通过水迷宫隐蔽平台试验、空间探索试验判断小鼠的学习记忆能力,并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测左侧海马区InsR mRNA的相对表达量。结果隐蔽平台试验中,模型组平均逃避潜伏期（PLL）较正常对照组显著延长,有效区停留时间显著缩短（P〈0.05）;针刺组PLL较模型组显著缩短,有效区停留时间显著延长（P〈0.05）;平台停留次数3组间比较差异无统计意义（P〉0.05）。空间探索试验中,模型组原平台象限百分比较正常对照组显著降低（P〈0.01）,跨越次数显著增高（P〈0.05）;针刺组原平台象限百分比较模型组显著升高（P〈0.01）,跨越次数显著减少（P〈0.05）。模型组左侧海马区InsR mRNA相对表达量较正常对照组显著降低（P〈0.05）,针刺组较模型组显著升高（P〈0.05）。结论针刺足三里、百会穴可通过上调海马区InsR mRNA的表达,从而提高AD SAMP8小鼠的学习记忆能力。     

快速老化小鼠SAMP8海马组织中基因表达谱的研究

目的观察快速老化小鼠P8（SAMP8）与同龄正常老化小鼠R1（SAMR1）海马组织中基因表达谱的差异。方法选用1、4、6、8、12月龄的SAMP8小鼠,用SAMR1作为对照组,每组各9只,快速处死后取海马组织提取总RNA, 用纯化后的总RNA合成cDNA并标记荧光染料,与32k小鼠寡核苷酸微阵列芯片杂交,用共聚焦扫描仪LuxScanTM 10KA及LuxScan 3.0软件进行图像采集与数据处理,用SAM软件分析差异表达的基因,用MAS系统对差异基因进行通路（pathway）分析。结果正常老化小鼠SAMR1各月龄间表达谱差异无显著性,快速老化小鼠SAMP8各月龄间差异显著,两种品系小鼠的比较结果显示1月龄、12月龄基因表达差异最为显著,6月龄无显著差异。Pathway分析结果显示MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。结论SAMP8小鼠与SAMR1小鼠海马的基因表达存在明显的差异,以MAPK信号通路的基因表达差异最为显著。     

丰富环境对快速老化小鼠SAMP8情感的影响

目的：探讨丰富环境对快速老化小鼠SAMP8情感的影响．方法：3mo龄SAMP8小鼠和3mo龄SAMR1小鼠随机分为丰富环境组（n=16）和标准环境组（n=10）,饲养3mo后用高架十字迷宫实验评测小鼠的情感改变．用RT—PCR方法检测小鼠海马脑源性神经生长因子（BDNF）的表达．结果：丰富环境组小鼠进入开放臂次数比例（OE％）及在开放臂停留的时间（OT％）比例均明显高于标准环境组（P〈0．01）．丰富环境组海马BDNF mRNA的表达明显高于标准环境组（P〈0．01）．结论：丰富环境能提高SAMP8小鼠海马BDNF mRNA的表达,并对SAMP8小鼠的精神行为具有干预作用,降低SAMP8小鼠的焦虑行为．     

当归芍药散对快速老化模型小鼠海马蛋白表达的影响

目的 研究当归芍药散(powder of Chinese Angelica and Peony,DSS)对快速老化模型小鼠(senescence-accel-crated mouse,SAM)海马蛋白表达的影响.方法 选择12月龄SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1作为研究对象,分为SAMR1组、SAMP8组和SAMP8 DSS组(3.2 g/kg),每组10只,连续给药30 d.应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定,观察DSS对SAMP8海马蛋白表达的影响.结果 与SAMR1组比较,SAMP8组海马中有9个蛋白表达下调,13个蛋白表达上调;SAMP8 DSS组与SAMP8组比较,海马中有14个蛋白表达下调,21个蛋白表达上调.经肽质量指纹谱分析及蛋白数据库检索,表达有明显变化的蛋白根据功能可分为5类:线粒体相关蛋白、能量代谢相关蛋白、突触形成相关蛋白、细胞骨架蛋白、其他蛋白.结论 SAMP8和SAMRI海马蛋白表达存在明显差异,DSS可影响快速老化模型小鼠海马蛋白的表达,其作用是多途径多靶点的.     

Neuroprotective Effects of Electroacupuncture Preventive Treatment in Senescence-Accelerated Mouse Prone 8 Mice

Objective: To investigate the preventive treatment effects of electroacupuncture(EA) on cognitive changes and brain damage in senescence-accelerated mouse prone 8(SAMP8) mice. Methods: The 5-month-old male SAMP8 and age-matched homologous normal aging mice(SAMR1) were adopted in this study. EA stimulation at Baihui(GV 20) and Yintang(EX-HN 3) was performed every other day for 12 weeks, 4 weeks as a course. Morris water maze test and Nissl-stained with cresyl violet were used for cognitive impairments evaluation and brain morphometric analysis. Amyloid-β(Aβ) expression in hippocampus and parietal cortex was detected by immunohistochemistry, and apoptosis was observed by TUNEL staining. Results: After 3 courses of EA preventive treatment, the escape latencies of 8-month-old SAMP8 mice in EA group were significantly shortened than those of un-pretreated SAMP8 mice. Compared with SAMR1 mice, extensive neuronal changes were visualized in the CA1 area of hippocampus in SAMP8 mice, while these pathological changes and attenuate cell loss in hippocampal CA1 area of SAMP8 mice markedly reduced after EA preventive treatment. Furthermore, Aβ expression in hippocampus and parietal cortex of SAMP8 mice decreased significantly after EA treatment, and neuronal apoptosis decreased as well. Conclusion: EA preventive treatment at GV 20 and EX-HN 3 might improve cognitive deficits and neuropathological changes in SAMP8 mice, which might be, at least in part, due to the effects of reducing brain neuronal damage, decreasing neuronal apoptosis and inhibiting Aβ-containing aggregates.     

自愿运动对快速老化小鼠学习记忆能力和海马生长相关蛋白43的影响

目的：观察自愿运动对快速老化小鼠（senescence accelerated mouse prone8, SAMP8）学习记忆能力和海马生长相关蛋白-43（growth associated protein-43, GAP43）表达的影响,探讨运动提高认知能力延缓衰老的机制。方法：40只3月龄雌性SAMP8小鼠随机平均分为跑笼环境组(running cage environment , RCE组)和标准环境组（standard environment, SE组）。饲养3个月后,用Morris水迷宫测试小鼠的寻找平台潜伏期及搜索策略。行为学测试后,各组分别取10只小鼠的鼠脑用RT-PCR观测海马GAP43 mRNA的表达; 另10只取鼠脑用免疫组织化学观察海马GAP43 immunoreactive (GAP43-ir)的表达。 结果：Morris水迷宫实验表明RCE组小鼠寻找平台潜伏期较SE组明显缩短(d1、d2: P<0.01; d3、d4: P<0.05),在第Ⅰ象限游泳时间比SE组明显延长(P<0.01),在第Ⅳ象限游泳时间比SE组明显缩短(P<0.05)。RCE组与SE组比较,海马GAP43 mRNA表达明显增加（P<0.01);海马GAP43-ir阳性表达光密度（optical density, OD）值明显增加(P<0.01 )。结论：自愿运动能提高SAMP8小鼠学习记忆能力,其机制可能与运动能促进海马GAP43表达有关。     

电针三阴交对AD小鼠学习记忆能力及海马区Ach、AchE、ChAT的影响

目的 观察电针"三阴交穴"对SAMP8快速衰老模型小鼠学习记忆能力和脑组织海马区内乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)的影响.方法 将快速老化SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,并设同源SAMR1小鼠作为对照组,每组均为6只.电针组给予三阴交电针干预;对照组,模型组常规抓取,不进行针刺.采用Morris水迷宫法检测小鼠的学习记忆能力;酶联免疫法(ELISA)检测小鼠海马部位的乙酰胆碱含量、乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱转移酶活性.结果 Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验显示:较SAMR1小鼠相比SAMP8小鼠学习记忆能力显著下降(P<0.01),电针治疗后明显改善(P<0.05),差异有统计学意义.指标显示:模型组较对照组海马内AchE、ChAT活性明显降低,Ach含量显著减少(P<0.01),电针治疗后AchE、ChAT活性明显升高,且Ach含量明显增多(P<0.05),差异有统计学意义.结论 电针三阴交穴可以明显改善老年痴呆模型小鼠学习记忆能力并提高海马区乙酰胆碱含量,其作用可能是通过改善脑组织海马区乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱转移酶活性来实现的.     

益智健脑颗粒对SAMP/8快速老化小鼠行为学及神经元凋亡的影响祆

目的：检测益智健脑颗粒浓缩液（YCF）对SAMP／8快速老化小鼠模型行为学、海马神经元凋亡率及凋亡基因Bcl-2和Bax表达的影响,探讨益智健脑颗粒浓缩液改善学习记忆能力的部分作用机制。方法：6月龄SAMP／8快速老化小鼠模型随机分为中药组、西药组、老年对照组,4月龄SAMP／8作为青年对照组,各组给予不同药物干预,8周后水迷宫实验观察行为学改变,应用流式细胞技术、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定海马神经元凋亡率和Bcl-2和Bax mRNA的表达。结果：与老年对照组相比,中药组逃避潜伏期缩短,跨平台象限次数增多,凋亡率显著降低;Bcl-2 mRNA表达上调,Bax mRNA表达下调,Bcl-2 mRNA／BaxmRNA相对表达量比率增高。结论：中药益智健脑颗粒能促进Bcl-2表达,抑制Bax的表达,维持Bcl-2／Bax的平衡,降低凋亡率,这可能是其改善SAMP／8快速老化小鼠学习记忆能力的部分作用机制。     

针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的改善作用

目的探讨针刺对快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8认知功能的影响。方法选取SAMP8小鼠分为SAMP8对照组,针刺组,非穴组,并设SAMR1对照组。针刺组采用“益气调血,扶本培元”针法,针刺膻中、中脘、气海及双侧血海、足三里;非穴组取双侧胁下两个固定非经非穴点。应用Morris水迷宫观测各组小鼠空间参考记忆能力的变化,分析针刺对SAMP8小鼠认知功能的影响。结果与SAMR1对照组比较,SAMP8小鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长(P<0.05)。针刺组第5天的逃避潜伏期为(48.34±13.01)s,与SAMP8对照组比较显著缩短(P<0.05);反向试验中第3天的逃避潜伏期为(55.03±15.49)s,比SAMP8对照组亦显著缩短(P<0.05);探索试验中针刺组原平台象限的停留时间为(20.19±5.85)s,显著多于SAMP8对照组和非穴组(P<0.05),与SAMR1对照组比较无显著差异。结论针刺可以改善快速老化痴呆模型小白鼠SAMP8的认知功能。     

快速老化小鼠的听功能和耳蜗毛细胞的增龄性变化

目的:研究快速老化小鼠听觉功能和耳蜗毛细胞的增龄性变化。方法:选1,3,5,7,9月龄的快速老化小鼠亚系1(Senescence accelerated mouse/prone1,SAMP1)作为实验组,而同龄抗快速老化亚系1(Senescence accelerated mouse/resistance1,SAMR1)作为SAMP系的正常对照组。分别观察其听觉脑干反应阈值以及耳蜗毛细胞损失情况等方面的增龄性变化。结果:听功能改变:第7,9月龄SAMP1小鼠的脑干反应阈值较同龄SAMR1小鼠明显增高(P<0.05);耳蜗形态学改变:耳蜗铺片、毛细胞计数显示第7,9月龄SAMP1小鼠外毛细胞较同龄SAMR1小鼠明显缺失(P<0.05)。结论:SAMP1小鼠随月龄增长耳蜗外毛细胞缺失、听功能减退,7,9月龄SAMP1小鼠出现明显的衰老特征,表现出听功能明显低下,可作为老年聋动物模型用于耳聋的相关研究。     

二苯乙烯苷对SAMP8鼠学习记忆和自由基清除的影响

目的观察二苯乙烯苷（TSG）对老年性痴呆模型SAMP8鼠学习记忆能力和自由基清除的影响。方法选用6月龄SAMP8鼠50只,随机均分为5组,每组10只：SAMP8对照组、阳性药石杉碱甲对照组、TSG低、中、高剂量组,另选用6月龄SAMR1鼠10只作正常对照组。各组分别灌胃相应药物50d后,应用Morris水迷宫检测各组小白鼠学习记忆能力的变化和采用分光光度法测定各组小白鼠脑组织SOD、GSH-Px活性和MDA含量。结果与SAMR1对照组比较,SAMP8鼠在隐蔽平台试验中表现出明显的学习记忆障碍,逃避潜伏期显著延长（P〈0．05）,TSG组从第3天起逃避潜伏期较SAMP8对照组显著缩短（P〈0．05）;探索试验中二苯乙烯苷组原平台象限的停留时间和穿越原平台次数明显多于SAMP8对照组。SAMP8组脑组织SOD、GSH—Px活性明显降低,MDA含量明显升高,而TSG组能明显提高脑组织SOD、GSH．Px活性,降低MDA含量（P〈0．05）。结论二苯乙烯苷能改善SAMP8鼠的学习记忆能力及有效清除脑组织自由基。     

不同针刺法对P15在SAMP8不同脑区星型胶质细胞表达的影响

[目的] 了解细胞周期相关因子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15)在老年性痴呆(AD)模型快速老化模型小白鼠(SAMP8)不同脑区星型胶质细胞中的表达规律及不同针刺组方(醒脑组和补虚组)对其表达的影响。[方法] 用免疫组化双标记法分别标记SAMP8脑组织星型胶质细胞(AS)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P15),用病理图像分析技术测定皮质、海马、纹状体、嗅球4个脑区中同时标记为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和P15阳性细胞数。[结果] 与正常组比较,AD模型组海马区同时表达GFAP和P15的阳性细胞数减少(P<0.05),其他3个脑区的表达差异无统计学意义。"醒脑组"可同时提高其在AD模型海马和嗅球中的表达,而"补髓组"只提高海马区的表达(P<0.05)。[结论] 8月龄SAMP8海马区表达P15的星形胶质细胞减少,可能是AD重要的病理机制;针刺可促进不同脑区星型胶质细胞P15的表达,并有针刺组方特异性。增加海马、嗅球区星形胶质细胞P15的表达,可能是"醒脑开窍"针刺法干预AD的潜在机制。     

二苯乙烯苷对SAMP8鼠脑组织氨基酸类神经递质的影响

目的观察二苯乙烯苷(TSG)对快速老化小白鼠/8(SAMP8)脑组织氨基酸类神经递质含量的影响。方法选用6月龄的SAMP8鼠50只,随机分为5组,每组10只:SAMP8对照组,阳性药(石杉碱甲)对照组,TSG低、中、高剂量组,另选用6月龄SAMR1鼠10只作正常对照组。各组分别灌胃相应药物50天后,采用高效液相色谱法检测各组小鼠脑组织氨基酸类神经递质含量。结果与正常对照组SAMR1组比较,SAMP8对照组脑组织谷氨酸(Glu)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、γ-氨基丁酸(GABA)含量明显升高,差异有显著性(P<0.05或P<0.01),天冬酰胺(Asn)、甘氨酸(Gly)有升高趋势,但差异无显著性(P>0.05);TSG各剂量组能显著降低SAMP8鼠Glu、Asp含量(P<0.05或P<0.01),但对Gly的降低作用不明显(P>0.05)。部分TSG剂量组对降低Gln、Asn和GABA含量作用明显(P均<0.05)。结论 TSG能显著降低SAMP8鼠脑组织Glu、Asp含量,纠正了SAMP8鼠脑区氨基酸类递质代谢的紊乱状态,使兴奋性和抑制性氨基酸神经递质最终趋向平衡。     

三焦针法通过激活SDF-1α/CXCR4通路对快速老化模型小鼠学习和记忆能力的改善作用

探讨三焦针法对快速老化模型（SAMP8）小鼠神经功能和基质细胞衍生因子1α/趋化因子受体4（SDF-1α/CXCR4）通路的改善作用,探讨三焦针法在SAMP8小鼠中的作用机制。     

老龄帕金森病模型小鼠氧化应激相关基因的表达差异

目的：探讨老龄帕金森病( PD)模型小鼠行为学改变及黑质纹状体系统氧化应激相关基因的表达差异。方法10月龄快速老化P8系( SAMP8)小鼠16只,随机均分为对照组和模型组。模型组小鼠背部皮下注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶( MPTP)制成急性损伤模型,对照组小鼠给予同量生理盐水。给药后72 h进行行为学测试,高效液相色谱法检测黑质多巴胺( DA)含量,PCR Array检测其纹状体氧化应激相关基因的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠DA水平下降,行为学成绩下降,差异有统计学意义( P<0．01);环氧化酶-2、可诱导型一氧化氮合酶2、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)氧化酶基因表达上调;而谷胱甘肽过氧化物酶3、6、8等9种基因明显下调(改变倍数>2)。结论老龄PD模型小鼠氧化应激相关的基因发生上调或下调,导致氧化应激反应的发生。