钙拮抗剂——治疗原发性高血压的一个新观念

细胞内钙是决定血管平滑肌细胞产生张力的重要因素.游离钙是调节血管平滑肌张力的所有神经体液因素产生作用的必须环节.在自发性高血压的大鼠观察到细胞内钙浓度增高,在原发性高血压患者的脂肪组织中也有类似发现.近来 Erne 等采用细胞内固定荧光染料 Quin-2,观察到临界和确诊的高血压患者血小板中游离钙浓度较血压正常者增     

细胞内游离钙离子在神经肽Y刺激血管平滑肌细胞增殖中的作用

为探讨细胞内游离钙离子在神经肽Ｙ刺激血管平滑肌细胞增殖过程中的变化，以体外培养的血管平滑肌细胞模型为研究对象，运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术，定量和动态观察了神经肽Ｙ对血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度与血管平滑肌细胞增殖间的相互关系。结果发现，神经肽Ｙ组中血管平滑肌细胞的增殖活度（ＭＴＴ法）和增殖细胞核抗原的表达较对照组明显增强；与此同时，神经肽Ｙ作用下体外培养的血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度也逐渐升高。此结果提示，神经肽Ｙ刺激血管平滑肌细胞增殖的细胞内信号传导机制与神经肽Ｙ提高细胞内游离钙离子浓度有关。     

异搏定、尼卡地平对原发性高血压患者离体血管平滑肌细胞内钙的干预研究

作者采用原发性高血压患者的离体动脉血管 ,并分离、培养动脉平滑肌细胞 ,观察了异搏定、尼卡地平对人动脉平滑肌细胞内钙的影响。由于原发性高血压患者动脉血管平滑肌细胞内钙的跨膜流动和细胞内释放机制尚不清楚 ,作者试图得到异搏定、尼卡地平对人离体动脉平滑肌细胞内钙释放和转运的直接证据。结果如下 :(1)原发性高血压患者动脉平滑肌细胞内总钙比正常血压组高 ,并与细胞内游离钙明显相关 ;(2 )两个钙通道拮抗剂均能显著减少两组的细胞内钙。异搏定显著减少4 5Ca2 的跨膜内流 ,尼卡地平主要是阻止细胞内钙的释放     

雌激素对血管平滑肌细胞内游离钙的调节作用

目的：动态观察雌二醇（Ｅ２）对单个血管平滑肌细胞内游离钙离子浓度及血管紧张素Ⅱ引致的细胞内钙离子浓度变化的影响，以探讨雌激素对平滑肌细胞内储存钙释放的调节作用。方法：体外培养健康雌性兔胸主动脉中层平滑肌，细胞接种在５７０型粘附式细胞仪专用的培养皿中，加入１０－５、１０－７、１０－９ｍｏｌ／Ｌ３种不同浓度的Ｅ２处理。另用３种不同浓度的Ｅ２预处理细胞１小时后，加入血管紧张素Ⅱ。实验分单纯血管紧张素Ⅱ处理组和血管紧张素Ⅱ＋不同浓度Ｅ２预处理组，用ｆｕｒａ－３法测定细胞内钙离子浓度。结果：３种浓度Ｅ２对平滑肌细胞内游离钙离子浓度的基础水平无影响，但１０－５、１０－７ｍｏｌ／Ｌ的Ｅ２预处理细胞后血管紧张素Ⅱ未能激发细胞内游离钙离子浓度升高。结论：雌激素可能参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的调节     

一氧化氮/环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶对血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型表达及细胞内游离钙的调节

目的证明一氧化氮，环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶对血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达以及细胞内游离钙水平的调节。方法比色法测定血管平滑肌细胞增殖，激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度，逆转录聚合酶链反应以及免疫印迹法测定三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达水平。结果一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶选择性环磷酸鸟苷类似物Sp8-pCPT-cGMP抑制血管平滑肌细胞增殖，但环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶拮抗剂Rp-8-pCPT-cGMP促进血管平滑肌细胞增殖。且S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMPS可以进一步抑制经维拉帕米预处理后的血管平滑肌细胞增殖。维拉帕米抑制苯肾上腺素刺激的细胞内游离钙离子浓度升高，这一抑制作用能够被S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP进一步加强，但可被Rp-8-pCPT-cGMP减轻。三磷酸肌醇受体Ⅰ型mRNA转录与蛋白质表达被S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP降低，但被Rp-8-pCPT-cGMP增加。结论一氧化氮，环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶在转录水平和翻译水平抑制血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达，进而参与对细胞内游离钙离子浓度的调节。     

依那普利对高血压大鼠血管平滑肌细胞内游离钙及蛋白激酶C活性的影响

目的观察依那普利抑制培养的血管平滑肌细胞增殖的机制。方法以组织贴块法行自发性高血压大鼠(spontaneouslyhypertensiverats,SHR)主动脉血管平滑肌细胞的分离培养,并以倒置显微镜α-SM肌动蛋白免疫组化法鉴定;分别采用甲基噻唑基四唑(MTT)法、氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、荧光染料(FURA-2/AM)标记法。酶底物反应法观察依那普利含药血清对血管平滑肌增殖、细胞内游离钙、蛋白激酶C活性的影响。结果与模型组比较,依那普利含药血清对血管平滑肌增殖、脱氧核糖核酸(DNA)合成、细胞内游离钙、蛋白激酶C活性均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论依那普利可能通过降低细胞内游离钙水平及抑制蛋白激酶C活性而发挥抑制血管平滑肌增殖和高血压血管重构的作用。     

钙通道阻滞剂对内分泌系统的影响

钙在内分泌系统中甚为重要,激素的合成、释放以及对靶组织的作用依赖于细胞内钙浓度的改变。许多体外实验已证实,当腺细胞内钙浓度下降时,激素的分泌将减少或增加。静息状态时细胞内游离钙的浓度为10~(-8)～10~(-7)M,兴奋时可增加10～100倍。细胞内游离钙浓度的增加部分来自细胞外,即通过一种“钙通道”将钙从细胞外转运入     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞内游离钙的作用机制

本研究用５７０型粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ－５７０）动态观察了血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对单个平滑肌细胞（ＳＭＣ）内游离钙的影响，探讨了ＡｎｇⅡ调节ＳＭＣ内游离钙的改变的机制。分离兔主动脉中层平滑肌，用含１０％小牛血清的ＤＭＥＭ培养，第３～５代细胞用于实验，并于实验前两天去除血清使细胞处于静止期。结果发现：ＡｎｇⅡ可引起细胞内一个快的、短暂的、剂量依赖性的游离钙升高，ＡｎｇⅡ的拮抗剂沙拉斯（ｓａｒａｌａｓｉｎ）可抑制这种作用，而钙离子通道阻滞剂硝苯地平或维拉帕米则没有影响。提示：ＡｎｇⅡ调节ＳＭＣ内游离钙升高的机制主要是通过促进细胞内贮存钙的释放。     

血管紧张素Ⅱ对模拟缺血心室肌细胞内游离钙的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对模拟缺血心室肌细胞内游离钙离子浓度的作用。方法 用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞，经Fluo-3／AM负载染色后，用激光共聚焦扫描，测定荧光强度，反映细胞内游离钙离子浓度；采用低氧、无糖、高乳酸和酸中毒综合方式模拟缺血液灌流，造成细胞的模拟缺血，并在缺血的基础上观察AngⅡ对模拟缺血心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响。结果模拟缺血可缓慢增加心室肌细胞内游离钙浓度；AngⅡ能使模拟缺血细胞内游离钙浓度增高，并呈脉冲式变化。结论 AngⅡ能增加模拟缺血心肌细胞静息钙水平，导致钙超载。     

阿魏酸钠对血小板源生长因子和内皮素1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

为探讨阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响 ,采用组织块外生法体外培养血管平滑肌细胞 ,采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验 ,荧光染料Fura 2 /AM法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现 ,血小板源生长因子二聚体和内皮素 1均可诱导血管平滑肌细胞迁移 ,作用峰值浓度分别为 10 μg/L和 10 - 7mol/L。阿魏酸钠 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移 ,10 - 3mol/L阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的细胞迁移的抑制率分别为 85 .0 4 %和 81.92 %。血小板源生长因子二聚体和内皮素 1促进细胞内游离钙离子浓度升高 (P <0 .0 5 ) ,作用峰值浓度分别为 10μg/L和 10 - 8mol/L。阿魏酸钠明显抑制该作用 ,峰抑制率分别为 80 .14 %和 76 .6 9%。以上提示 ,阿魏酸钠可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度的升高来抑制上述物质诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

钙拮抗剂的降压机理、特征及用法

钙拮抗剂研制的原因是用来治疗心绞痛和心律失常的,但后来发现有显著的降压作用而被首先用于重症高血压和高血压急症。最近,本类药作为有效降压药而被广泛地应用在需要长期控制血压(包括轻度高血压)的患者。钙拮抗剂的降压机理钙拮抗剂列实验性高血压和高血压患者之所以呈现降压效果,这主要是由于减少末梢血管阻抗的原因。作者认为,由于抑制钙离子向血管平滑肌细胞内流入缓和血管的紧张度,并且使去甲肾上腺素和血管紧张素Ⅱ等反应性减弱,从而起到降压效果。血管平滑肌的收缩依赖于细胞质中游离钙的浓度。血管递质作用也是由于肌收缩使细胞内游离钙浓度发生变化而表现的。但     

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨基质相互作用分子1(STIM1)基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用.方法 原代培养血管平滑肌细胞,用构建好的大鼠STIM1干扰腺病毒载体(Ad-si/rsTIM1)和人重组STIM1腺病毒载体(Ad-hSTIM1)进行转染,Western blot检测细胞STIM1表达,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定细胞增殖,激光共聚焦检测细胞内钙变化.结果 Ad-si/rSTIM1转染后48 h后细胞STIM1表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低(P<0.05),细胞内钙浓度也明显下降(P<0.05),细胞增殖被显著抑制(P<0.05);Ad-hSTIM1共转染后48 h细胞STIM1表达恢复到正常水平;细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平.结论 STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度,并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控.     

血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移及机构

为探讨血小反源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移和细胞内信号传递机制。以体外培养的平滑肌细胞为对象，用血小板源生长因子ＢＢ二聚体作诱导刺激物，采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Ｆｕｒａ－２法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现，血小板源生长因子ＢＢ二聚体能明显诱导体外培养的平滑肌细胞迁移，使细胞内游离钙离子浓度［Ｃａ＾２＋］ｉ明显升高（Ｐ〈０．０１），峰值浓度位于５μｇ／Ｌ。１     

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的探讨基质相互作用分子1(STIM1)基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用。方法原代培养血管平滑肌细胞,用构建好的大鼠 STIM1干扰腺病毒载体(Ad-si/rSTIM1)和人重组 ST1M1腺病毒载体(Ad-hSTIM1)进行转染,Western blot 检测细胞 STIM1表达,~3H 胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法和细胞计数测定细胞增殖,激光共聚焦检测细胞内钙变化。结果 Ad-si/rSTIM1转染后48h 后细胞 STIMl表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低(P<0.05),细胞内钙浓度也明显下降(P<0.05),细胞增殖被显著抑制(P<0.05);Ad-hSTIM1共转染后48 h 细胞 STIM1表达恢复到正常水平;细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平。结论 STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度,并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。     

高糖对血管平滑肌细胞CD36表达的诱导作用

目的探讨高糖对人血管平滑肌细胞清道夫受体CD36表达的影响及对肌源性泡沫细胞产生的作用。方法体外用不同浓度的葡萄糖(5、11、20及30 mmol/L)干预人脐血管平滑肌细胞1~7天,实时定量聚合酶链反应及Western blot检测血管平滑肌细胞CD36 mRNA和蛋白的表达,油红O染色测定血管平滑肌细胞内脂质含量。结果正常状态下血管平滑肌细胞存在微弱的CD36表达。与5 mmol/L葡萄糖组比较,血管平滑肌细胞CD36 mRNA和蛋白水平的表达随着葡萄糖浓度的增加和干预时间的延长而增加(P<0.05)。同时,细胞内脂质含量随着CD36表达增加而逐渐增加。结论高糖能促进血管平滑肌细胞CD36的表达,并促进血管平滑肌细胞内脂质聚集,有助于肌源性泡沫细胞形成。     

槲皮素对家兔主动脉血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的: 探讨槲皮素(Que)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响.方法:采用新一代钙荧光探剂Fluo-3/AM检测Que对培养的兔主动脉血管平滑肌细胞(ASMC) [Ca2+]i 在高K+、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激作用下的改变,并与Verapamil进行对照研究.结果:Que(10-6、 10-5、10-4mol/l)呈剂量依赖性抑制高K+去极化引起的[Ca2+]i 升高,与Verapamil作用相似,但弱于Verapa mil;Que (10-6～10- 4mol/L)对NE,AngⅡ通过受体介导引起的[Ca2+]i 增高也具有明显的抑制作用.但Que对静息状态的ASM C[Ca2+]i 无明显影响.结论:Que通过对血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体操纵性钙通道双重抑制作用,降低细胞内游离钙水平,这可能是其舒血管降压机制之一.     

血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移及机构

为探讨血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞迁移和细胞内信号传递机制。以体外培养的平滑肌细胞为对象，用血小板源生长因子ＢＢ二聚体作诱导刺激物，采用改良的Ｂｏｙｄｅｎ微孔膜双槽法进行细胞迁移实验，荧光染料Ｆｕｒａ－２法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现，血小板源生长因子ＢＢ二聚体能明显诱导体外培养的平滑肌细胞迁移，使细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）明显升高（Ｐ＜０．０１），峰值浓度位于５ｇ／Ｌ。１００ｍｏｌ／Ｌ钙离子螯合剂ＢＡＰＴＡ和酪氨酸激酶抑制剂５０ｍｏｌ／Ｌ　Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ既能抑制血小板源生长因子－ＢＢ诱发的升高，也能抑制血小板源生长因子对平滑肌细胞的诱导趋化迁移作用。实验结果提示，血小板源生长因子是诱导平滑肌细胞迁移的趋化物；升高是平滑肌细胞对血小板源生长因子反应的早期细胞内信号传递通路之一；血小板源生长因子诱发的平滑肌细胞迁移既依赖于升高，又依赖于酪氨酸蛋白激酶活性。     

阿霉素中毒心肌细胞钙离子调节功能的变化

本文采用Fura-2/AM荧光标记同位素~(45)Ca~(2+)负载示踪法测定了心肌细胞内钙浓度及肌浆网摄钙功能,探讨了阿霉素对心肌细胞内钙调节功能的影响,同时还观察了维拉帕米预处理10min后,阿霉素对心肌细胞内钙浓度及钙调节功能的影响.结果显示,阿霉素作用早期(10min)能够增加心肌细胞外钙的快相内流,使心肌细胞内游离钙浓度增高,肌浆网摄钙量也有轻度增加,阿霉素作用60min后,与对照组相比细胞内~(45)Ca~(2+)总量增加,而肌浆网对~(45)Ca~(2+)的摄取明显减低,细胞浆内游离钙浓度明显升高.维拉帕米预处理组,维拉帕米部分阻断了阿霉素对细胞内钙的调节作用.结果提示,阿霉素通过增加心肌细胞钙内流速度和抑制肌浆网摄钙量,导致心肌细胞钙过负荷,进而影响心肌细胞的收缩舒张功能.     

外环境低钙对培养心肌细胞损伤的研究

目的 研究细胞外环境低钙对培养心肌细胞损伤的影响机制。方法 观察细胞外钙离子浓度为１．０ｍｍｏｌ／、０．８ｍｍｏｌ／Ｌ、０．６ｍｍｏｌ／Ｌ、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ时对原代培养心肌细胞膜流动性、细胞内游离钙和肌酸磷酸激酶（ＣＫ）的影响。结果 钙离子浓度为０．６ｍｍｏｌ／Ｌ以下能明显引起膜流动性降低,细胞内游离钙增加,呈明显的量效关系。低钙能引起ＣＫ量增加,呈明显的量效关系。结论 细胞外环境钙离子浓度降低     

枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内钙离子浓度、钙调蛋白表达的影响

目的:观察单味中药枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内Ca2+、钙调蛋白表达的影响.方法:按照血清药理学通法制备大鼠枳实含药血清,将血清分为枳实组(10%、20%、50%枳实含药血清)、空白血清对照组,酶解法提取胃窦平滑肌细胞并进行培养,倒置显微镜下观察各组对胃窦平滑肌细胞收缩效应,激光共聚焦显微镜技术检测各组加药前后胃窦平滑肌细胞内Ca2+浓度变化,免疫组织化学方法观察各组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白的表达.结果:10%、20%、50%枳实含药血清对胃窦平滑肌细胞收缩及细胞内Ca2+荧光强度的影响呈药物剂量依赖关系,细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度随药物浓度的增高而增强(P<0.05),20%、50%枳实含药血清与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞收缩、细胞内Ca2+荧光强度差异有统计学意义(P<0.05),50%枳实组与空白血清对照组对胃窦平滑肌细胞内钙调蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05).结论:枳实含药血清可以促进胃窦平滑肌细胞收缩,其机制可能与增加细胞内Ca2+浓度、调节钙调蛋白的表达有关.