检测人血型抗A和抗B单克隆抗体的制备

用人Ａ型及Ｂ型红细胞分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取免疫脾细胞与同系ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，经克隆筛选出８株抗Ａ５和５株抗Ｂ杂交瘤细胞株，用小鼠腹水单克隆抗体分别做凝集试验，亲和力测定，标本检测及ＣＰＶ，ＰＨＡ，ＣｏｎＡ对单克隆抗体效价的影响。结果表明除Ａ４和Ｂ４株外，其余各株凝集效价均在１：１２８０以外，亲合力与抗Ａ，抗Ｂ血清相似，标本检测符合率为１００％，结果提示，用含ＰＨＡ，ＣｏｎＡ，ＣＰＶ的     

人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体的初步鉴定

目的：制备高效价的人红细胞血型糖蛋白A单克隆抗体（GPA McAb),为研制快速全血凝集试剂提供关键的双功能抗体成分。方法：首先用MNGP亚型GPA,经SPDP与小鼠血清白蛋白连接后,常规免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备GPA McAb;用ELISA和血凝方法对克隆进行筛选和鉴定。结果：4次融合共获3个可分泌高效价GPA McAb细胞株（3F6、5C7和5G3）。分泌的单克隆抗体均与GPA发生特异性反应,但均不引起人A、B、AB和O型红细胞凝集,属于人红细胞GPA的特异性非凝集抗体。在3株抗体中,2株为IgG1亚型,1株为IgG2亚型。结论：小分子GPA经与同种动物（免疫用动物）血清白蛋白连接后用作免疫抗原,研制的2株IgG1亚型抗体可用于全血凝集试剂中双功能抗体的制备。     

抗人A血型单克隆抗体的制备及其初步鉴定

分别用A型全血球和提取A型膜抗原免疫8周龄Balb/c鼠,进行细胞融合,建立了10株抗A型血型单克隆抗体。特异性鉴定表明仅与A、AB型血球发生盐水凝集。无冷凝集现象。培养上清和腹水与2％A型血球盐水凝集效价分别在1:32～128和1:512～4096,对200人份献血员血液标本检定,其中6株与标准人血清符合率达100％,A亚型鉴定10株全部属抗A_1亚型。免疫球蛋白亚类测定除A_4株是IgG_3,余均属IgM。     

抗人红细胞血型糖蛋白A非凝集性单克隆抗体的研制及其生物？…

目的 研究优质的抗人红细胞血型糖蛋白Ａ单克隆抗体（ＭＣＡＢ－ＧＰＡ）因为该抗体是研制快速全血凝集试剂中双功能抗体的关键成份,为在我国研制能诊断多种疾病的快速全血系列诊断试剂创造条件,方法 首先用ＭＮ亚型ＧＰＡ（购于美国Ｓｉｇｍａ公司）免疫小鼠,采用常规杂交瘤细胞技术进行融合和克隆,用ＥＩＡ和血凝方法进行生物特性鉴定,结果 建立１２个ＭＣＡＢ－ＧＰＡ株,１２个抗体株与ＧＰＡ发生特异性反应。但对Ａ,Ｂ     

IgA类鼠抗人A血型单抗的研制和临床应用

应用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术，以Ａ血型物质ＭＳＳ１０％２×（Ａ１）为抗原，经ＰＥＧ细胞融合，获得两株分泌ＩｇＡ类鼠抗人Ａ血型单抗杂交瘤细胞，细胞培养上清液效价为１０２４～２０４８，亲和力２～３ｓ。其中２Ｈ１０Ｅ１１杂交瘤细胞经血凝特异性试验、血凝抑制试验、吸收放散试验、红细胞标准谱细胞试验，表明２Ｈ１０Ｅ１１单抗仅对Ａ血型红细胞特异。２Ｈ１０Ｅ１１细胞置液氮中贮存３年，复苏传代后分泌抗体能力不变。单抗置５６℃水浴３０ｍｉｎ，－２０℃和３７℃反复冻融３次，效价不变。临床试用近百万人次，无一例错型，准确率１００％。证明可以替代标准血清，用于临床血型定型。     

分泌抗人精浆ABH血型物质单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

准确判定含有精液的不同混合斑中精液的ＡＢＯ型，是法医物证个人识别的重要研究内容。常彩琴［１］、津田亮一［２］等以相对纯化的人精浆或人精浆中的ＡＢＨ血型糖蛋白作为抗原，免疫获得了相应的多克隆抗体，但存在一定程度的非特异性及经吸收后抗体效价降低等问题。本...     

抗人H血型物质(抗O血型)单抗的研制和临床验证

应用淋巴细胞杂交瘤技术,以H血型物质为抗原,经聚乙二醇(PEG)细胞融合,获得一株分泌IgG类抗人H血型抗原的单克隆抗体杂交瘤2G_6-H_8,细胞培养上清液效价1:128,亲和力10秒。经血凝特异试验、血凝抑制试验、吸收放散试验及临床验证,表明2G_6-H_8,单抗对人H血型抗原特异凝集,主要为抗O血型单抗。杂交瘤细胞置液氮中贮存一年,复苏传代后分泌抗体能力不变。单抗置56℃水浴30分钟,-20℃和37℃反复冻融三次,2~8℃保存半年,血凝特性不变。临床验证2505例,证明可替代传统抗H试剂,用做临床血型定型试剂之一。     

人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及鉴定

目的 :制备抗人心肌肌钙蛋白 I(c Tn I)单克隆抗体 (c Tn I Mc Ab)并进行初步鉴定。 方法 :从健康意外死亡者的心肌中提取、纯化人 c Tn I,以其为抗原 ,免疫 BAL B/ c小鼠后 ,取其脾淋巴细胞与小鼠 Sp2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,反复筛选及克隆 ,得到能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞株。初步鉴定 c Tn I Mc Ab。结果 :经间接 EL l SA法筛选 ,3次克隆化后获得 5株能稳定分泌 c Tn I Mc Ab的杂交瘤细胞 (3A7、3A 11、3D2、3F10和 1H9) ,5株单抗免疫球蛋白亚类鉴定均为 Ig G2 a类。染色体数目 92～ 110条。 5株单克隆抗体腹水按 1∶ 10 0稀释 ,与 L DH、CK、CK- MB、AST和人心肌肌钙蛋白 T(c Tn T)行交叉反应为阴性。 5株 c Tn I Mc Ab腹水效价为 3.2× 10 - 6 ～ 1.6× 10 - 7。c Tn I Mc Ab相加试验表明 ,3D2、3F10与 3A7、3A11、1H9能识别不同的抗原表位。 结论 :本实验成功制备了具有较高活性的 c Tn I Mc Ab,具有良好应用开发价值。     

结核杆菌特异性单克隆抗体研究

目的 :制备结核菌特异性单克隆抗体 ;检测患者胸 (腹 )水、脑脊液中结核菌特异性抗原。方法 :制备特异性单克隆抗体 ,制备兔抗结核菌高效价多克隆抗体血清 ;DOT -ELISA法检测患者胸、腹水或脑脊液中结核菌特异性抗原。结果 :检测结核性胸 (腹 )水、结核性脑膜炎和脑结核球患者的脑脊液、恶性胸水、脑囊虫患者的脑脊液 ,结核菌抗原检查阳性率分别为 75 %、10 0 %、5 8%、0 %和 0 %。结论 :为结核性胸 (腹 )膜炎 ,结核性脑膜炎、脑结核球的诊断和鉴别诊断提供了快速、简便、准确的检查方法     

抗人蛋白酶激活受体3单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定抗人蛋白酶激活受体3(PAR3)单克隆抗体(mAb).方法:以人PAR3为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR3 mAb.采用捕获ELISA法鉴定mAb的Ig亚类;通过ELISA、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术、免疫组织化学染色法、斑点杂交技术鉴定mAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗人PAR3 mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM.斑点杂交技术分析表明,其mAb能与PAR3抗原有效结合.免疫组织化学染色表明,mAb与肺组织中的巨噬细胞、结肠组织中的淋巴细胞及疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织中的淋巴细胞的反应呈阳性.流式细胞仪分析及激光共聚焦显微镜观察显示,2株mAb与人肺腺癌A549细胞胞内及膜上的PAR3均呈阳性反应.结论:成功地制备抗PAR3 mAb,为变态反应性和炎症性疾病的研究提供了有用的试剂.     

HCV核心抗原C33肽单克隆抗体的研制与初步鉴定

用ＨＣＶ核心抗原（Ｃ３３肽）与鼠血清白蛋白交联后免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用杂交瘤技术获得有实用价值的二株ＭｃＡｂ。此二株ＭｃＡｂ除与免疫抗原有较强的抗原－抗体反应外，与ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０也有很好的反应；但与ＨＣＶＮＳ３、ＶＳ５及核心区ＣＰ９抗原无反应性。在竞争ＥＬＩＳＡ中对抗ＨＣＶ－ＩｇＧ阳性血清有较好的抑制作用。     

抗人凋亡相关蛋白TFAR19的单克隆抗体制备及鉴定

目的：研制鼠抗人凋亡相关蛋白ＴＦＡＲ１９的单克隆抗体,以进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的结构与功能。方法：以纯化的重组人ＴＦＡＲ１９蛋白为抗原,免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,将ＴＦＡＲ１９蛋白免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０进行细胞融合,经克隆筛选获得鼠抗人ＴＦＡＲ１９蛋白单抗的杂交瘤细胞株,以间接ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析等方法进行单克隆抗体的鉴定。结果：获得了３株稳定分泌抗人ＴＦＡＲ１９单克隆抗体的杂交瘤细胞株（Ｃ１,Ｃ１０,２Ｃ１２）,其分泌的单抗效价高,特异性好,亲和力不一,免疫球蛋白亚类均为ＩｇＧ１。Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹分析证明ＴＦＡＲ１９蛋白在调亡细胞中高表达。结论：所获单抗能特异识别原核及真核细胞表达的ＴＦＡＲ１９蛋白,为进一步探讨ＴＦＡＲ１９蛋白的生物学效应提供了条件。     

抗人类疱疹病毒６型南京分离株Ｅ５单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备并鉴定人疱疹病毒6型(HHV-6)单克隆抗体.方法:用纯化的HHV,6南京分离株E5免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/O融合,经间接ELISA法筛选,间接免疫荧光法、免疫印迹实验等方法鉴定单抗.并采用套式PCR法和ELISA法,在口腔癌中进行了初步的应用.结果:获得了一株分泌抗HHV-6单克隆抗体的杂交瘤细胞系,命名为JA9.单克隆抗体亚类鉴定表明:其为IgGl亚类,轻链为K.用间接ELISA法检测细胞上清单抗效价为1:500;单抗腹水滴度为1:8.0×104.免疫印迹实验结果表明:JA9单抗腹水与约75 ku HHV-6 E5病毒蛋白结合.口腔癌患者唾液的HHV-6阳性检测率结果分别是:套式PCR法60%.ELISA法40%.结论:成功制备并鉴定一株抗HHV-6南京分离株E5单克隆抗体,为HHV-6进一步的基础研究及临床快速诊断提供可能.     

鼠抗人A1亚型红细胞单克隆抗体研制及其免疫学性质研究

应用杂交瘤技术，以２种抗原分别免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠。从３次细胞融合中，筛选出４株分泌高滴度、高特异性抗Ａ１血型物质单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经多种免疫化学试验证明：其中Ｂ５２３－Ｈ１０、Ｄ２４３Ｈ９２株杂交瘤扩大培养上清液仅凝集Ａ１红细胞，而不凝集Ａ２、Ｂ、Ｏ型红细胞。它们结合部位的结构互这站于：人工接上脂肪链的Ａ－活性三糖。从而表明该２株单抗为首次获得的抗Ａ１亚型红细胞单克隆抗体。不仅为研究Ａ１     

抗人MIF单克隆抗体的制备及其活性的初步鉴定

目的构建人巨噬细胞移动抑制因子(human macrophage migrationinhibitoryfactor,hMIF)原核表达系统并制备其单克隆抗体.方法采用RT-PCR从乳腺癌细胞株MDA-MB453细胞克隆hMIF cDNA,测序后构建pET11b/hMIF重组表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达hMIF;重组hMIF经纯化和鉴定后,作为抗原常规免疫和CpG ODN加强免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体并鉴定活性.结果构建pET11b/hMIF重组表达质粒,表达出预期hMIF蛋白,表达率30%,纯化后纯度达95%.Western blotting鉴定为hMIF,NO释放实验证实具有生物学活性.两种免疫方案共获得9株分泌抗hMIF抗体的杂交瘤细胞株,其中一株经Western blotting和活性鉴定证明具有特异性和生物学活性.结论获得hMIF重组蛋白和抗hMIF单克隆抗体,为其基础性研究和在脓毒症的治疗等临床应用研究奠定基础.     

人垂体提取液免疫建立促甲状腺素单抗杂交瘤细胞株

获取分泌结合力和特异性均好的抗人促甲状腺素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法；用人重体提取液为免疫原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以聚乙二醇为融合剂，亚克隆三次。结果；获得２株分泌与ｈＴＳＨ特异性结合的单克隆抗体杂交瘤细胞株，所分泌的免疫球蛋白为ＩｇＧ１，液相中与ｈＴＳＨ的最大备ｈＴＳＨ单克隆抗体；２．此２株单克隆抗体的获得为建立敏感的ｈＴＳＨ测定方法奠定了基础。     

应用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单克隆抗体

目的：纯化单克隆抗体（ 单抗,ＭｃＡｂ） 。方法：应用Ｐｒｏｔｅｉｎ ＡＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ４Ｂ制备免疫亲和层析柱,纯化载脂蛋白（Ａｐｏ）Ｅ４、ＡｐｏＥ６、抑制素（ｉｎｈｉｂｉｎＩＮＨ）α、βＡ、βＢ５ 种ＭｃＡｂ。结果：ＭｃＡｂ 纯化后电泳呈一条带,并有较好的免疫活性。结论：应用蛋白Ａ亲和层析法可以纯化ＭｃＡｂ。