细胞色素氧化酶P450 3A4基因联合环磷酰胺的体外抗肿瘤效应

 目的 克隆细胞色素氧化酶P450 3A4（CYP3A4）基因,构建真核表达质粒并导入K562细胞进行表达,研究CYP3A4联合环磷酰胺（CPA）的体外抗肿瘤效应。方法 利用RT-PCR从人肝细胞中克隆CYP3A4基因,构建重组真核表达载体。脂质体法导入K562细胞,RT-PCR和Western blot检测CYP3A4基因在K562细胞中的表达并筛选稳定转染的细胞克隆。MTT法检测CYP3A4联合CPA对肿瘤细胞的抑制作用。结果 成功克隆CYP3A4基因并构建了真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His A(+)-CYP3A4。RT-PCR和Western blot分别显示转基因组的CYP3A4 mRNA和蛋白质表达水平均显著高于转空载体组和对照组。MTT示转基因组IC₅₀值为1.090 16 mmol/L,明显低于转空载体组和对照组。酶诱导剂和抑制剂分别能够减低和增高转基因组IC₅₀。结论 CYP3A4体外具有联合CPA的抗肿瘤作用,这种作用能够被CYP3A4相应的诱导剂和抑制剂增强或减低。     

细胞色素氧化酶P4503A4的研究进展

细胞色素P450酶(CYP450)是一类重要的混合功能氧化酶系统,参与许多内源性和外源性物质的生物转化过程.在人基冈组中含有57利PCYP基因,其中CYP 3A在CYP中占的比例最大,在肝内占到30%,而在肠内达70%以上.CYP 3A是十分重要的药物代谢酶,临床中大约有60%以上的药物由CYP 3A代谢,而CYP 3A4是其中最重要的一种.     

二甲亚砜对细胞色素P450酶3A4和2C9的影响

目的 研究0.01%、0.05%、0.1%二甲亚砜（DMSO）对细胞色素P450（CYP450）酶系中3A4、2C9两个亚型基因及蛋白表达水平的影响。方法 Chang肝脏细胞经处理后,分为空白对照组（仅含培养液）、DMSO组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO处理）、睾酮组（分别采用1、10、100μmol/L睾酮处理）、利福平组（分别采用1、10、100μmol/L利福平处理）、DMSO＋睾酮组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L睾酮处理）、DMSO＋利福平组（分别采用0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平处理）。利用逆转录定量PCR的方法,测定CYP3A4、CYP2C9基因水平的表达。利用蛋白免疫印迹法,测定CYP3A4、CYP2C9蛋白水平的表达。结果 0.1%DMSO组CYP3A4 m RNA高于空白对照组（P〈0.01）,且0.1%DMSO组CYP3A4蛋白的表达也高于空白对照组。0.01%、0.05%DMSO组CYP3A4 m RNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%DMSO组CYP3A4蛋白的表达高于空白对照组。0.01%、0.05%、0.1%DMSO组CYP2C9 m RNA表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,0.01%、0.05%、0.1%DMSO组CYP2C9蛋白表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。0.01%、0.05%DMSO＋10μmol/L睾酮组CYP3A4 m RNA的表达与空白对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%DMSO＋10μmol/L睾酮组CYP3A4蛋白的表达高于睾酮组。0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平组CYP2C9 m RNA的表达与利福平组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但0.01%、0.05%、0.1%DMSO＋10μmol/L利福平组CYP2C9蛋白的表达高于利福平组。结论0.01%、0.05%、0.1%三个浓度的DMSO在体外肝细胞实验中对CYP3A4的表达有一定的影响,而对CYP2C9的表达影响不明显,当DMSO作为药物溶剂的时候,可能会影响药物单用时的实验结果。     

细胞色素P450 2A13的基因多态性与肺癌易感性

细胞色素P4502A13(CYP2A13)是近年来新发现的具有代谢活化作用的细胞色素P450酶。该酶主要存在于呼吸系统,主要参与多种外源性药物及毒物的代谢。近年来研究发现,CYP2A13具有基因多态现象,这使该酶在不同人群的酶活性大小不同。而这可能与肿瘤发生的易感性大小有关。本文将着重对近年来该酶的多态性研究予以简要阐述。     

细胞色素P450的3A亚家族与肿瘤的个体化治疗

肿瘤患者的化疗疗效和毒副反应存在着极大的个体差异 ,其中涉及的环节很多 ,化疗药的代谢是一个重要原因。药物在体内的代谢是一个复杂的过程 ,联合化疗又增加了更为复杂的药物 药物相互作用的影响。因此 ,寻找造成药物代谢 疗效 毒性个体差异的关键因素及研究药物 药物相互作用的模式和机制 ,将为真正实施个体化治疗提供理论基础。一、细胞色素P45 0 (cytochromeP45 0 ,CYPs)家族药物代谢主要分为Ⅰ、Ⅱ两相 ,Ⅰ相代谢是限速步骤 ,将药物转化为极性更强的化合物再经Ⅱ相代谢排出体外。CYPs是自然界中含量最丰富、分布最广泛、底物谱最…     

细胞色素P450基因突变及其效应的研究进展

细胞色素P450（CYP450）作为一组重要的氧化酶在人体药物代谢中发挥着重要作用,随着基因组学的发展,其基因多态性逐步得到深入研究。近年来,对于CYP450的研究重点也逐渐由基因定位和单纯的突变位点发现,转移到等位基因功能多态性和基因突变导致的酶学改变这些基因与蛋白的效应关系上来。本文综述了CYP450新的单核苷酸多态性的出现及相应功能的研究进展。     

催化褪黑素生物转化的细胞色素氧化酶P450异构酶的确定及其动力学研究

采用人肝微粒体温育实验 ,根据 CYP45 0 1A2特异性抑制法及 HPL C机电化学分析仪检测结果 ,发现 :1催化 MT在肝脏羟化和去甲基反应的 CYP45 0异构酶确证是 CYP45 0 1A2。 2 CYP45 0 1A2催化 MT6位羟化反应的Km 是 (4.48± 1.49) μm ol/ L (x± s) ,Vmax是 (13.83± 2 .5 2 ) pm ol/ (m g protein· min) (x±s)。 3催化 MT5位上 O-去甲基主要是 CYP45 0 1A2 ,还有 2 C19参与 ,其 Km值分别为 0 .0 30 μmol/ L 和 8.796 μmol/ L,Vmax分别是 0 .338pm ol/(mg protein· min)和 3.16 7pm ol/ (mg protein·m in)     

细胞色素P450酶4F2基因多态性对华法林剂量的影响

目的 探讨中国大连地区汉族人群细胞色素P450酶4F2(CYP4F2)rs2108622基因多态性对华法林剂量的影响,为华法林个体化用药及开发基因型检测试剂盒提供理论依据.方法 采用限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术,检测196例服用华法林患者的CYP4F2 rs2108622的基因型,统计分析对华法林剂量的影响.结果 CYP4F2 rs2108622基因多态性检测结果为野生纯合子CC型99例,杂合子CT型84例,突变纯合子TT型13例;等位基因频率C 71.94%,T 28.06%.CC型患者华法林的平均稳定剂量为(3.07±1.21)mg/d,CT型为(3.66±1.33)mg/d,TT型为(3.73±1.55)mg/d,各组间华法林剂量比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大连地区汉族人群中,CYP4F2 rs2108622基因多态性能明显影响华法林的稳定剂量.     

细胞色素P450酶系与药物的代谢

细胞色素P450酶(cytochrome P450，CYP)，又称混合功能氧化酶(mixed function oxidase)和单加氧酶(monooxygenase)，主要存在于肝微粒体中，在外源性化合物(包括药物和海物)的生物转化中起着十分重要的作用，它的活性决定药物的代谢速率，与药物的清除率有着直接关系，是药物代谢的第一相酶,因而又称为药物代谢酶。1958年由Klingberg和Grfinkle鉴定出它在还原状态下与CO结合，在波长450nm处有一最大吸收峰而取名为P450酶。另外，细胞色素P450酶还具有广泛的生物学意义，如与疾病、肿瘤易感性及机体耐药性的产生有着密切关系，因而一直是药物代谢研究中的一个热点。     

HPLC法测定CYP 3A4酶活性的研究

目的建立一种快速、准确的以咪达唑仑作为＂探针药物＂评价或测定细胞色素酶（CYP3A4）酶活性的高效液相色谱（high-performance liquid chromatography,HPLC）-紫外检测（UV detection,VWD）方法。方法采用的色谱柱为依立特C18柱（4.6mm×100mm,5μm）,流速0.8ml/min,紫外检测波长254nm,柱温40℃。咪达唑仑（midazo-lam,MDZ）与大鼠肝微粒体温孵后,加入甲醇在低温下终止反应,再加入定量内标地西泮（diazepam,DZP）,涡旋后高速离心,取上清液50μl进样。结果1′-羟基咪达唑仑（1-hydroxymidazolam,1′-OHMDZ）与内标DZPtR分别为7.02min、10.51min,峰形对称且分离充分（R＆gt;1.5）,线性范围为15.6-780ng.ml-1,最低定量限（lower li mit of quantitation,LLOQ）为15.6ng.ml-1,高中低浓度提取回收率为106.3%、102.5%和102.6%,待测物的日内、日间相对标准偏差（rela-tive standard deviation, RSD）小于10％。肝微粒体Km=15μmol·L^-1,Vmax=0．08159nM·min^-1·mg^-1。结论温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外DZP及其代谢产物1′-羟基咪达唑仑的测定,可用于体外CYP3A酶活性测定或酶动力学研究。     

慢性肝胆疾患P450同工酶CYP3A4表达的改变

目的:研究肝硬化和黄疸患者肝脏中CYP3A4蛋白含量、活性及其mRNA表达,进一步探讨其药理学意义.方法:提取肝炎后肝硬化、阻塞性黄疸及肝血管瘤患者的肝组织标本,以后者为正常肝组织对照;Nash法测定CYP3A4酶活性,ELISA法测定蛋白量,一步法抽提肝组织总RNA,随机引物标记法制备CYP3A4 cDNA探针,Northern杂交比较CYP3A4基因在以上三组中的表达差异.结果:肝炎后肝硬化患者CYP3A4蛋白量、活性及mRNA表达较正常肝显著降低(P<0.01),而阻塞性黄疸患者该酶改变与正常肝相差无显著性.结论:肝硬化患者CYP3A4 mRNA表达显著降低,导致同工酶含量和酶活性下降,肝脏对包括静脉麻醉药物在内的多种药物的代谢能力下降,提示临床麻醉工作中应考虑药酶改变,减低患者的麻醉药剂量.     

环孢素A及其联合用药对人和大鼠肝CYP3A活性的影响

目的：探讨环孢素A(CsA)及其与甲基强的松龙(MP)、氟康唑(Flu)合用时对大鼠和我国正常成人肝脏CYP3A活性的影响。方法：制备大鼠和人肝微粒体，用不同浓度的CsA作用、加或不加MP、Flu，以红霉素为底物，经过NADPH系统孵育后，利用分光光度法测定人和大鼠肝微粒体的红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性。结果：CsA单独作用时，在人肝微粒体中，CsA40、20、40μmol／L剂量组与对照组相比具有显著性差异；在大鼠肝微粒体中，CsA除低剂量组外，各组与对照组相比亦具有显著性差异，总体上，随着CsA浓度增加，CYP3A活性下降。此外，在大鼠肝微粒体中，MP、Flu与CsA联合作用较CsA单独作用相比，CYP3A的活性有显著性降低；但在人肝微粒体中，只在Flu与CsA联合作用时，CYP3A的活性有显著性降低。结论：CsA是CYP3A的一种活性抑制剂；Flu与CsA合用时加强了CsA对CYP3A活性的抑制作用。     

环孢素A与甲基强的松龙联用时对CYP3A活性的影响

目的 探讨甲基强的松龙（MP）与环孢素A（CsA）合用时对肝脏CYP3A活性的影响。方法 在人肝微粒体中单独使用CsA和联用甲基强的松龙，以红霉素为底物，经过NADPH系统孵育后，分别测定肝微粒体的红霉素N-脱甲基酶（ERD）活性。5例肝移植术后患者服用环孢素A抗排斥的同时联用甲基强的松龙，收集其环孢素A血药浓度、肝功能（ALT、AST、GGT）和肾功能（UN、Cr）变化的资料。结果 CsA单独作用时，随着CsA浓度增加，CYP3A活性下降；CsA联合MP后CYP3A的活性显著性降低。临床上，患者联用甲基强的松龙时，环孢素A的血药浓度显著性升高，肝肾功能指标中除ALT、AST外其余指标在联用前后都无显著性变化。结论 CsA是CYP3A的活性抑制剂；MP与CsA联用加强了CsA对人肝微粒体CYP3A活性的抑制作用，在临床上联用MP可升高CsA的血药浓度，MP有提高CsA生物利用度的作用。     

雷公藤甲素对大鼠体内环磷酰胺药代动力学的影响：对细胞色素P3A4可能的抑制作用

Objective:To evaluate the effect of a 10-day course of triptolide(TP) on rat cytochrome(CY)P3A4 activity,and on the pharmacokinetics of cyclophosphamide(CPA).Methods:In the pharmacokinetics experiment,rats were orally given 0.9%NaCI solution(n=5) and TP[1.2(mg/kg·d)]for 10 days and a single dose of CPA was administered intravenously(100 mg/kg) to rats on day 11.Blood samples were collected up to 4 h at predetermined time intervals,the plasma concentration of CPA was determined by high performance liquid chromatography(HPLC) and pharmacokinetic parameters were determined.In the in vitro CYP3A4 activity inhibition research,rat blank liver microsomes were divided into 3 groups:a control group,a TS(5 μ L,200 μmol/L) with TP(5 μL,12.5 μmol/L) group,a TS with ketoconazole(5 μL,1 μmol/L) group.Concentration of 6 β-hydroxylated testosterone(6 β-OHT) in liver microsomes was measured by HPLC and the activity of CYP 3A4 was calculated through the following formula:E_(inhibitor)/E_(control)×100%=C_(inhibitor)/C_(control)× 100%.Results:Compared with the control group,the area under the plasma concentration-time curve(AUC_(0-∞)) of CPA was significantly increased by 229.05%pretreated with TP(P0.01).Peak plasma concentrations(C_(max))of CPA was significantly increased and plasma half-life was correspondingly extended.The CYP3A4 activity was significantly inhibited by ketoconazole 93.5%±0.2%and TP 84.6%±0.3%compared with the control group(P0.01 and P0.05,respectively).Conclusion:Our results strongly suggested that long-term oral intake of TP can distinctly inhibit the CYP3A4 activity and this inhibition evidently decrease the formation of toxic metabolites of CPA.     

宁夏回族人群CYP3A4*6等位基因多态性的研究

目的 了解宁夏回族人CYP3A4第9外显子的分布特点,为宁夏回族患者使用CYP3M底物药物提供参考依据.方法 收集到180例回族人群血样,应用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增人CYP3A4第9外显子基因序列,对其进行测序;同时扩增产物用限制性内切酶HinfⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳后,观察酶切位点的限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.结果 运用PCR-RHLP法分析了150例正常回族人、30例高脂血症回族志愿者基因的突变情况,发现有2例第17776位点有A插入引起移码突变,使2例杂合子CYP3A4基因第9外显子提前出现终止密码子.其中野生型纯合子频率为98.9%,杂合子频率为1.1%,突变型纯合子频率为0,突变等位基因频率为0.005.结论 本研究得到了CYP3A4第9外显子基因多态性在宁夏回族人群中的分布情况,为研究CYP3A4第9外显子基因多态性与临床药物效应的相互关系奠定了基础.     

CYP2C19、CYP3A4基因多态性与十二指肠球部溃疡疗效的关系

目的检测肝脏细胞色素氧化酶CYP2C19、CYP3A4的基因多态性,并观察不同基因多态性患者予奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效,以明确CYP2C19、CYP3A4基因多态性对药物治疗效果的影响。方法65例十二指肠溃疡患者分别检测CYP2C19、CYP3A4基因多态性及幽门螺杆菌（Hp）,予奥美拉唑治疗及根治Hp治疗,观察治疗后腹痛缓解情况,并复查胃镜,观察溃疡缩小情况。结果在65例患者中,CYP2C19t3基因野生型为43例（66．15％）,突变型为12例（18．46％）,杂合型为10例（15．38％）,CYP3A4＊18未见基因多态性。CYP2C19＊3突变型腹痛缓解时间短于野生型及杂合型（P〈0．01）。治疗后2周CYP2C19＊3突变型患者溃疡缩小率大于野生型及杂合型（P〈0.01）,但治疗后4周无明显差异（P〉0．05）。结论在观察病例中可见CYP2C19基因多态性,未见CYP3A4基因多态性,CYP2C19基因多态性影响奥美拉唑治疗十二指肠溃疡的疗效。     

酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用

目的 观察酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4、1A2活性的作用,为临床上安全有效地联合用药提供实验依据.方法 采用健康成人肝细胞微粒体,分为对照组和处理组.酮康唑处理组分别加入不同浓度的酮康唑1 ml,对照组仅加入培养液,孵育15 min后再加入CYP450同工酶3A4和1A2的相应底物(分别为睾酮和非那西丁)再孵育20 min.反应终止后用高效液相色谱仪测量代谢产物(分别为6β-羟基睾酮与对乙酰氨基酚)的生成量,分别代表3A4和1A2的活性.结果 细胞色素P450同工酶3A4的相对活性百分比减小到对照组50%时(IC50)酮康唑的质量浓度为0.16mg/L.而同工酶3A4的相对活性百分比随质量浓度酮康唑增加逐渐减小,各处理组与对照组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).低剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较明显降低(P＜0.05),高剂量细胞色素P450同工酶1A2的相对活性百分比处理组与对照组比较则明显升高(P＜0.05).结论 酮康唑对健康成人肝细胞微粒体细胞色素P450同工酶3A4的活性有抑制作用.然而对细胞色素P450同工酶1A2的活性则是低剂量有抑制作用,衙高剂量有诱导作用.     

CYP3A4和CYP286药物诱导剂体外筛选体系的建立

目的构建CYP酶药物诱导剂的体外筛选技术平台。方法利用双荧光素酶报告基因系统，将包含hPXR蛋白识别和结合调控元件的CYP3A4和286启动子序列插入报告基因上游，将表达载体和报告载体共转染HepG2细胞，用含有利福平或DMSO培养基培养48h后裂解进行双荧光素酶活性检测。结果经利福平处理的细胞裂解物荧光素酶比活性值与阴性对照组和溶剂组差异显著。结论本研究构建的CYP3A4和286体外筛选平台，可以有效地用于体外诱导剂的筛选。