用光生物素标记DNA探针鉴定军团菌种

DNA探针过去多用同位索标记．但半衰期短。价格昂贵。且防护和操作困难，故应用受限。近年来非同位素标记探针大量应用．结果十分理想。作用光生物索标记DNA探针的方法，对本室保存的标准军团菌种进行了鉴定。对从环境中分离培养到的形态疑似军团菌的菌落亦进行了鉴定。     

用地高辛配基标记DNA探针进行菌落原位杂交

用地高辛配基标记DNA探针,结合酶联免疫反应检测显示信号。建立了一种简便,快速的菌落原位杂交新方法。结果证明该方法敏感、稳定,完全可取代同位素用于细菌分析和克隆筛选。     

用地高辛配基标记DNA探针进行菌落原位杂交

A simple, rapid method for colony hybridization has been developed. The DNA probes were labelled by digoxigenin. Hybridization signal was detected by enzyme-linked immunoassay reaction. The results showed that this method is sensitive and reproducible, and it can be used for colony hybridization instead of isotopic methods.     

生物素标记HBVDNA探针原位杂交碱性磷酸酶过氧化物酶显色检测肝内HBVDNA

本研究应用国产生物素标记HBVDNA探针,于福尔马林固定,石蜡包埋肝组织切片上,建立了碱性磷酸酶过氧化物酶显色的原位杂交技术,在此过程中发现,蛋白酶的消化是杂交能否成功的关键因素,酸、三乙醇酐、洋地黄的预处理,能促进探针参入,降低非特异背景,减低蛋白酶作用浓度或作用时间,因而提高实验稳定性、特异性。并用这一技术检测了34例肝活检和4例尸检肝组织,结果:尸肝组织均检出了HBV—DNA,其中2例核型见于肝硬化,肝癌旁组织,而2例浆型HBV—DNA见于慢活肝,亚重肝。34例肝活检组织中,只检出12例浆型HBV—DNA,其中CAH—CPH无症状携带者中检出率分别为42.9％,38.8％,33.3％,均明显高于肝硬化组织(16.7％)(P<0.05)。由此可见浆型HBV—DNA分布同病变轻重程度的关系可能并不密切,不同分布型的HBV—DNA可能只反映HBV的复制状态。     

生物素标记DNA探针测定人性别

白细胞或胎儿绒毛组织染色体DNA经限制酶Hae (?)消化后,用光生物素(photo-biotin)标记人Y染色体特异的3.4 kb DNA片段作探针,进行Southern印迹杂交,并以生物素结合蛋白-碱性磷酸酶体系显示生物素探针杂交信号。结果表明,0.1μg男性DNA可显示清晰的信号,而5μg女性DNA则无信号出现;平行试验证明生物素探针测定人性别的结果与32P标记探针完全一致。提示生物素探针可用于X连锁遗传病、性异常,运动员体检,法医学及异性别骨髓移植方面的性别分析。     

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和＾３２Ｐ标记探针进行平行检测对照。结果表明，地高辛探针检测灵敏度为０．１Ｐｇ，已达到＾３２Ｐ标记探针水平。生物素探针为１￣１０Ｐｇ。两种探针与＾３２Ｐ标记探针相比。符合率分别９６．６５％和８９．１３％；敏感性分别为９４．４４％和８３．３３％；特异性分别为９６．４３％和９２．８６％。两种探针在－２０℃     

用生物素标记Y特异DNA探针进行产前性别诊断

Using biotinylated human Y-specific DNA probe PHY2.1 and Cos 84, we carried out Southern and dot hybridization with human DNA from artificially aborted chorionic villi, and with DNA of peripheral lymphocytes from normal male and female. The results show that PHY2.1 may be applied in prenatal sex identification both by Southern and by dot hybridization but with Cos 84, only Southern hybridization could be used.     

生物素标记bcr基因探针的制备

采用乙二胺化学修饰法制备生物素bcr基因探针，探针的检测敏感性达1pg，接近同位素标记探针的敏感性。该标记方法操作方便，标记效果稳定，探针可长期保存，试剂价格较低廉，为bcr基因探针的临床应用开辟了一条新途径。     

光敏生物素标记DNA探针检测海南大劣按蚊

光敏生物素标记ＤＮＡ探针检测海南大劣按蚊刘斌陆晓林刘忠湘（第四军医大学寄生虫学教研室西安７１００３３）关键词大劣按蚊光敏生物素斑点杂交中图号Ｒ３９１．１同位素３２Ｐ标记的质粒ｐＡＤ－３２０是一株特异性、敏感性均较好的海南大劣按蚊探针．但是，由于同位素...     

Aggrecan Northern探针的构建及其在组织工程研究中的应用

目的：构建猪aggrecan探针，用于对组织工程化软骨及软骨细胞中aggrecan mRNA表达水平的Northern检测。方法：取猪软骨细胞，RT—PCR扩增aggrecan球间区域(IGD)片段。将纯化的RT—PCR产物克隆入pUCm—T载体，酶切、测序鉴定。32P标记aggrecan探针，Northern杂交法检测组织工程化软骨和软骨细胞中aggrecan mRNA的表达状况。结果：构建产物经鉴定，证实其包含了猪aggrecan IGD的基因序列。Northern结果显示，该探针可用于对组织和细胞中aggrecan mRNA表达水平的柃测。结论：在组织工程化软骨的研究中，利用Northern杂交法对样品中aggrecan mRNA的水平进行检测，具有良好的灵敏度、可信度和特异性。     

用cDNA:RNA斑点杂交法检测肠道病毒RNA的实验研究

用Biotin标记的Coxsackie B3病毒cDNA为探针,以25种肠道病毒标准毒株为检测病毒,建立了检测肠道病毒基因RNA的斑点杂交方法。该方法的检测敏感性为50～80TCID_(50)斑点,操作较简便,试剂稳定安全、可长期保存。所使用的pCB Ⅲ/35.51对肠道病毒有很广的杂交谱;pCBⅢ/29在严格条件下,仅与Coxsackie B3病毒RNA反应。因此,这些探针所具有的杂交特性很适合作为临床标本中肠道病毒的检测探针。     

生物素标记的核酸分子杂交

用生物素代替同位素标记探针技术、NaAc－NaOH溶液代替Tris－Nacl中和液、脱脂奶粉代替Denhardt溶液和小牛胸腺DNA进行分子杂交。结果表明：经改进后的核酸分子杂交方法具有简便、安全、稳定、成本低的优点。     

小鼠性决定基因SRY探针的制备

目的 研究制备地高辛标记的小鼠性决定基因SRY探针,用于检测小鼠体内SRY基因表达的研究。方法 按已知的雄性小鼠Y染色体上性决定蛋白基因(SRY)的序列,请上海博亚公司合成四条oligoDNA,采用PCR技术连接并扩增,地高辛标记的方法制备基因探针。结果 用细胞原位杂交方法证实这种探针具有较高的敏感性和特异性。结论 小鼠性决定基因SRY探针的制备成功为进一步研究异体雄性小鼠骨髓移植到雌性小鼠体内后的分布和表达提供了实验基础。     

核酸杂交反应中影响因素分析

以光敏生物素标记的R3 cDNA克隆为模型,采用正交设计的方法,对影响核酸杂交反应的主要因素:杂交反应温度,反应时间,探针浓度及甲酰胺浓度作了综合性分析。当探针浓度为800μg/L,甲酰胺浓度为10mol/L,50℃杂交反应6h,可获得最高灵敏度(10pg)。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c－myc，N－ras癌基因的表达

应用生物素标记的ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓｃＤＮＡ探针对２１例肝细胞癌石蜡切片进行原位杂交研究，结果显示，在２１例肝癌组织中９例呈ｃ－ｍｙｃ阳性（４２．９％），４例为Ｎ－ｒａｓ阳性（１９％），而癌旁肝组织中仅有４例呈ｃ－ｍｙｃ弱阳性，１例呈Ｎ－ｒａｓ弱阳性．Ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ多分布于肝癌细胞胞浆中，显微分光光度计检测结果显示，肝癌细胞中ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ阳性信号明显高于癌旁肝细胞．作者认为，ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ癌基因在肝细胞癌中均可呈较高水平表达．二者参与了肝癌的恶性转化过程并在肝癌的发生过程中相互协同以维持肝癌的恶性表型．     

基因探针在大肠杆菌中的扩增及其提纯

本文报道了基因探针在大肠杆菌中的扩增与提纯方法。含基因探针的质粒用氯化钙方法转染大肠杆菌,被转染的细菌与质粒在培养液中同步扩增,然后用碱裂解法抽提扩增后的质粒。结果表明:(1)质粒的转化效率与其浓度有关;(2)经转染、扩增与抽提后,获得了大量的纯化质粒DNA;(3)纯化后的基因探针能满意地用于DNA 标记及分子杂交。     

用生物素标记CVB_3 cDNA制备探针检测病毒核酸

本文报道用含CVB_3 cDNA PstI酶切片段(530bp)的重组质粒pGP_(51)B转化大肠菌;经扩增后提取,纯化重组质粒DNA;用生物素标记制备探针。通过原位杂交技术检测不同的肠道病毒和非肠道病毒感染的HeLa细胞。实验结果表明,该探针只与肠道病毒RNA杂交,而不与非肠道病毒核酸杂交,且可检测出病毒感染后3h,5h(CPE-)的病毒核酸。可见该探针具有良好的特异性和敏感性,且可用于肠道病毒感染引起的心脏疾病的活检标本诊断。