钙对心肌ATP酶的损害及镁的保护作用

本工作在大鼠心肌肌膜观察到,Mg~(2+)为心肌Na~+-K~+-ATP酶激活所不可缺少的因素,当Mg~(2+)浓度在0～6mM时,Na~+-K~+-ATP酶及Mg~(2+)-ATP酶活性与其密切相关;当超过8 mM时,ATP酶总活性不变,但Na~+-K~+-ATP酶/Mg~(2+)-ATP酶之比值增高。高浓度Ca~(2+)对于Na~+-K~+-ATP酶及Mg~(2+)-ATP酶均具有抑制作用,而提高Mg~(2+)浓度可部分地拮抗高Ca~(2+)的损伤作用。     

内毒素对兔骨骼肌细胞外液容积、钠钾离子及其Na~(+)-K~(+)-ATP酶活性的影响

本实验以氚水和Na_2~(35)SO_4为标记物,观察了内毒素对兔骨骼肌细胞外液容积(ECV)、Na~+、K~+含量以及(Na~+-K~+)-ATP酶活性的影响。实验结果显示,动物静注内毒素(0.5mg/kg)后10小时骨骼肌ECV、Na~+、K~+含量和(Na~+-K~+)-ATP酶活性均无显著变化;但血K~+浓度自内毒素注射后3小时即有显著下降。     

复方中药注射液对小白鼠艾氏腹水癌细胞膜表面的(Na~+-K~+)-ATP酶和微绒毛影响的电镜观察

本实验应用电镜细胞化学和扫描电镜技术,观察到小白鼠艾氏腹水癌细胞在复方中药注射液的连续作用下,膜表面(Na~+-K~+)-ATP酶活性减弱,微绒毛减退等变化,同时观察到该复方中药注射液对癌细胞增殖的抑制作用,抑瘤率可达87%,癌细胞增殖和(Na~+-K~+)-ATP酶活性及微绒毛的多少有平行关系。讨论了该复方中药抑制癌细胞增殖与膜表面(Na~+-K~+)-ATP酶活性和微绒毛变化的关系。     

大鼠肾远端小管Na^＋—K^＋—腺苷三磷酸酶的光镜和电镜技术

Na~+-K~+-腺苷三磷酸酶(Na~+-K~+-ATP酶),在肾重吸收Na~+的过程中起着重要的作用,具有维持细胞内Na~+与细胞外K~+按比例进行交换的作用,它在肾中分布不均,研究该酶在肾小管中分布情况对了解肾Na~+重吸收功能及病理变化有一定的意义.本实验将Mayakara等人的柠檬酸铅法,稍加改变,应用对硝基苯酚磷酸(P--nitrophenylphosphate Na salt P-NPP钠盐)作底物,可获同样效果,灵敏度高,结果可靠.     

生姜透皮帖对运动病大鼠脑内酶学变化的作用

目的:建立运动病模型,观察生姜透皮帖对运动病大鼠脑组织几种生化指标的变化,并探讨其对运动病产生治疗作用的机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分5组,每组8只,每天按实验方法刺激,实验第4天刺激结束后取大脑和小脑皮质、脑干前庭区.采用组织化学定位方法和图像定量分析方法,检测各组大鼠3部位脑组织中碱性磷酸酶(ALP)、 K~+-Na~+-ATP酶及细胞色素氧化酶(CCO)活性.结果:运动病大鼠3部位脑组织中ALP活性显著升高、Na~+-K~+-ATP酶及CCO活性明显减低.使用生姜透皮帖后运动病大鼠3部位脑组织中ALP活性显著减低、Na~+-K~+-ATP酶及CCO活性明显升高.结论:生姜透皮帖可能使脑血管紧张度降低,改善脑血流的分布,增加脑血流,调整脑细胞内CCO、 ALP、 Na~+-K~+-ATP酶的活性,增强脑细胞的兴奋性,从而保持中枢神经系统的兴奋性,起到抗运动病的作用.     

外源性3’,5’环腺苷酸对肝癌-H_(22)腹水型癌细胞Mg~(++),(Na~+-K~+)-ATP酶、磷酸二酯酶影响的观察

本实验通过外源性3′,5′环腺苷酸和茶碱对小白鼠肝癌-H_(22)腹水型癌细胞的连续作用,观察到癌细胞的增殖受到明显抑制,伴随有癌细胞膜表面Mg~(++)-ATP酶、(Na~+-K~+)-ATP酶以及磷酸二酯酶活性明显下降;酶活性变化与膜表面微绒毛的变化,有一定平行关系。     

Na~+-K~+-ATP酶α1亚基DR多肽单克隆抗体的制备和应用

目的制备钠钾ATP酶(Na~+-K~+-ATPase)α1亚基DR区段(897DVEDSYGQQWTYEQR911)的单克隆抗体(mAb)并鉴定其活性。方法以合成的DR-钥孔戚血蓝素(KLH)为免疫原,免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗DR的杂交瘤细胞株,制备Na~+-K~+-ATPaseα1亚基DR mAb。ELISA测定杂交瘤细胞上清中mAb效价,斑点免疫杂交、Western blot法及免疫荧光细胞化学染色法检测单克隆的特异性,采用Senso LyteFDP蛋白磷酸酶定量试剂盒检测Na~+-K~+-ATPase活性,高糖细胞损伤实验检测DR mAb对高糖引起细胞损伤的保护作用。结果成功制备3株稳定分泌抗体的阳性细胞株。选择强阳性DRm217细胞株,制备腹水进一步验证。免疫荧光细胞化学染色、免疫斑点杂交及Western blot法结果显示,DRm217 mAb能够特异性结合在细胞膜表面,识别Na~+-K~+-ATPase的DR多肽。DRm217能够提高Na~+-K~+-ATPase活性,对高糖引起的细胞损伤具有一定的保护作用。结论成功制备了针对Na~+-K~+-ATPase DR多肽的mAb。     

阿利吉仑对氧糖剥夺损伤的SH-SY5Y细胞的保护作用及可能机制

目的:探讨阿利吉仑对氧糖剥夺(OGD)损伤的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的保护作用及可能机制。方法:将SH-SY5Y细胞随机分为对照组、OGD组及阿利吉仑低、中和高剂量(5.0、10.0和20.0μmol/L)组。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测兴奋性氨基酸转运蛋白2(EAAT2/GLT-1)、兴奋性氨基酸转运蛋白3(EAAT3/EAAC1)、兴奋性氨基酸转运蛋白4(EAAT4)、内皮素1(ET-1)和S100钙结合蛋白β亚基(S-100β)的表达;Hoechst 33258染色观察SH-SY5Y细胞形态变化;乳酸(LD)测试盒和超微量Na~+-K~+-ATP酶测试盒检测LD含量和Na~+-K~+-ATPase活性。结果:OGD损伤4 h时,细胞相对活力不足60%,因此4 h可作为后续实验OGD造模时间。与对照组相比,OGD组的GLT-1、EAAC1和EAAT4表达显著下调(P0.05),ET-1和S-100β的表达显著上调(P0.05);与OGD组相比,阿利吉仑组的GLT-1、EAAC1和EAAT4表达呈剂量依赖性上调, ET-1和S-100β表达呈剂量依赖性下调(P0.05)。Hochest 33258染色结果表明,阿利吉仑可明显减少OGD引起的SH-SY5Y细胞凋亡。与对照组相比,OGD组的LD含量显著升高(P0.05),Na~+-K~+-ATPase活性显著降低(P0.05);与OGD组相比,阿利吉仑组的LD含量呈剂量依赖性降低,Na~+-K~+-ATPase活性呈剂量依赖性升高(P0.05)。结论:阿利吉仑对OGD损伤的SH-SY5Y细胞有一定的保护作用,其机制可能与阿利吉仑上调GLT-1、EAAC1和EAAT4的水平,提高Na~+-K~+-ATPase的活性,下调ET-1和S-100β的表达及LD含量有关。     

淫羊藿、虫草菌丝、黄芪防治庆大霉素所致急性肾损害的实验研究

采用腹腔内注射庆大霉素造成大鼠急性肾小管损伤模型,发现中药淫羊藿、虫草菌丝和黄芪均可以减轻庆大霉素所致的大鼠肾小管及肾间质的损伤,并可拮抗庆大霉素对大鼠肾皮质Na~+-K~+-ATP酶的抑制作用。     

PCPA对不同月龄大鼠额叶皮层线粒体超微结构、膜电位和ATP酶的影响

目的探讨对氯苯丙氨酸(PCPA)对不同月龄大鼠额叶皮层线粒体形态和功能的影响。方法取3～9月龄大鼠进行造模,分别观察PCPA腹腔注射3 d后额叶皮层线粒体形态功能的改变;采用超活染色观察线粒体的数目和活性,透射电镜观察线粒体超微结构变化,同时采用荧光探针JC-1检测线粒体膜电位改变和WST-1法测定线粒体ATP酶含量。结果①与正常组相比,各月龄大鼠经连续注射PCPA 3 d后,其额叶皮层线粒体的数量明显减少;同时在各月龄正常大鼠中,其额叶皮层线粒体的数量随大鼠月龄的增加而呈现出先增加后减少的趋势。②各月龄大鼠注射PCPA 3 d后,额叶皮层线粒体出现肿胀、嵴断裂甚至空泡化,其中以6月龄最为明显。③各月龄大鼠造模后额叶皮层线粒体的膜电位与造模前相比均显著下降;各月龄正常组大鼠线粒体膜电位随着月龄的增加出现先增加后下降的趋势,且6月龄正常组大鼠与其他月龄正常组大鼠相比均有统计学意义(P0.05);各月龄模型组大鼠也相应地出现上述变化。④随着月龄的增加,各月龄正常组大鼠和模型组大鼠额叶皮层线粒体Na~+-K~+-ATP和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶含量均出现先增加后减少的趋势,且6月龄与其他月龄相比也具有统计学意义(P0.05)。结论①3～9月龄大鼠连续注射PCPA 3天后其额叶皮层线粒体超微结构、膜电位、Na~+-K~+-ATP和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶含量改变以6月龄为最;②PCPA致大鼠失眠可能与额叶皮层线粒体超微结构改变、膜电位和Na~+-K~+-ATP和Ca~(2+)`-Mg~(2+)-ATP酶含量下降有关。     

地高辛单克隆抗体的研究——Ⅱ.特异性单克隆抗体对地高辛抑制家兔红细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的拮抗作用

为探讨特异性抗体解除洋地黄毒性作用的机制,应用由淋巴细胞杂交瘤技术制备的高亲和力抗地高辛特异性MAb,研究了特异性抗体对地高辛抑制家兔红细胞(RRBC)膜Na~+,K~+-ATP酶活性的拮抗作用。实验结果表明,特异性MAb FD8可高效拮抗地高辛引起的Na~+,K~+-ATP酶活性抑制。10~(4·26)稀释的FD8 MAb腹水在试管内可使4ng/ml地高辛引起的酶活性抑制恢复达50％。给地高辛中毒动物静脉注射FD8 MAb腹水后,RBC膜Na~+,K~+-ATP酶活性抑制迅速恢复,RBC内Na~+、K~+离子浓度异常也得到恢复。本研究从受体水平证实了特异性MAb解除地高辛毒性的作用机制。     

大鼠和豚鼠心脏中不同类型强心甙受体的特性

不同种属动物对强心甙正性肌力作用的敏感性不同,可能是与对细胞膜强心甙受体亲和力以及抑制Na~+K~+-ATP酶的能力相关的。作者定量测定大鼠和豚鼠心脏中的[~3H]哇巴因结合部位以及Na~+K~+-ATP酶的特性。所得资料表明,在大鼠的心脏中有对药物亲和力高和亲和力低不同的结合部位。其离解常数分别为K_D=10~(-7)M,和K_D~'=3×10~(-5)M。但是药物的结合能力是不相同的,高亲和力受体对药物反而     

G6PD缺乏患者红细胞膜ATP酶活性研究

本文采用低渗溶血,高速旋离沉淀法制得人红细胞膜制剂,再利用酶学比色法测定了11例正常人和11例G6PD缺乏者红细胞膜Na~ -K~ ATP酶及Ca~(2 )-Mg~(2 )ATP酶活性。结果发现G6PD缺乏时红胞细膜Ca~(2 )-Mg~(2 ) ATP酶及Na~ -K~ ATP酶活性均有不同程度的降低。哇巴因抑制率下降49.4%。这些异常可能导致患者红细胞膜结构及红细胞的生理功能受损。     

精氨酸加压素对慢性肾衰大鼠心功能及其心肌细胞钠-钾-ATP酶活力的影响

用SD大鼠制作慢性肾衰(CRF)动物模型,观察其血浆与心肌精氨酸加压素(AVP)含量的变化;CRF大鼠静脉分别注射AVP及其抗血清,观察其对平均动脉压、左心室压峰值和心肌细胞钠-钾-ATP酶(Na~+,K~+-ATP酶)活力的影响。结果表明,CRF~+大鼠血浆及心肌AVP含量与血肌酐水平同步增高;静脉注射AVP标准品,可使心肌Na~+,K~+-ATP酶活力明显降低,并加重心功能指标的异常变化;而给予AVP抗血清,则可改善心功能,对心肌有明显的保护作用。提示ATP含量异常增高所引起的Na~+,K~+-ATP酶泵转运动力学损害,可能参与CRF时心功能不全的病理过程。     

Na~ 、K~ -ATP酶的作用特征和影响因素

Na~ 、K~ -ATP酶广泛存在于多种细胞的细胞膜上。现已证明,纯化的Na~ 、K~ -ATP酶,如果重组入含有磷脂的脂质体,有催化ATP水解和运输Na~ 、K~ 的能力。这些重组实验,为Na~ 、K~ -ATP酶就是Na~ 泵提供了直接的证据。Na~ 、K~ -ATP酶催化ATP水解的同时,能对抗细胞膜两侧的电化学梯     

知母皂甙元是Na~ 、K~ -ATP酶的抑制剂

中药知母属清热泻火药,适用于阴虚内热病人,但其作用机理一直未明。近代生化学认为Na~ 、K~ -ATP酶是基础代谢下产生热能的最主要的酶。因此中医的阴虚内热可能是Na~ 、K~ -ATP酶活性过高的一种表现。     

氯离子转运体KCC2/NKCC1参与病理性疼痛的研究进展

正阳离子氯离子联合转运蛋白(cation-Cl-cotransporter,CCC)是一组转运Na~+、K~+、Cl~-进出细胞的膜蛋白。其中,钾氯联合转运蛋白2(K~+-Cl~- cotransporter 2,KCC2)和钠钾氯联合转运蛋白1(Na~+-K~+-Cl~- cotransporter 1,NKCC1)是调节神经系统氯离子稳态的主要CCC,NKCC1将Cl~-转运入胞内,KCC2将Cl~-转运至胞外,两者共同调节氯离子平衡及     

精氨酸加压素对沙土鼠急性缺血性脑水肿的作用

本文探讨了精氨酸加压素(AVP)对急性缺血性脑水肿的作用及其作用机理。结果表明,侧脑室注射AVP后,缺血性皮层水肿显著加重,且这一作用不能被钙通道拮抗剂所阻断。侧脑室注射AVP抗血清、V_2及V_1/V_2型AVP受体拮抗剂均显著减轻缺血性皮层水肿。此外,侧脑室注射AVP后,缺血皮屋Na~+-K~+ATP酶活力显著降低;皮层等脑区cAMP含量显著升高,下丘脑和纹状体cGMP含量亦显著升高。提示AVP可能是通过cAMP、cGMP介导的AVP受体的作用,产生抑制脑细胞膜Na~+-K~+ATP酶活力的效应,从而促进缺血性脑水肿的形成。     

钠离子和洋地黄的心脏作用

多年来,已形成一个系统的假设来解释洋地黄甙如何与Na~ /K~ -ATP转运酶相互作用而增加心肌收缩力。在讨论细胞内Na~ 的增加如何刺激强心甙与Na~ 泵的进一步结合,减少泵的储备能力量,从而增强药物作用时,扩充了这种假设。假设中有缺陷的环节仍是Na~ -Ca~(2 )交换机制的确切作用。阐明这一环节,在发展更安全的强心药物的战略中是重要的。     

家兔红细胞膜的制备及Na~ 、K~ -ATP酶活性测定

近年来发现某些疾病时,Na~ K~ -ATP酶的活性升高或降低。而该酶是细胞膜上一种重要的水解酶,广泛存在于人和哺乳动物各种细胞质膜及内膜上,它在能量转换,离子转运和信息传递等细胞基本功能上有重要作用。为研究其在疾病过程中上述功能的改变,我们首先制备了家兔红细胞膜并测定了Na~ ,K~ -ATP酶活性。