表达肝细胞生长因子的大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

目的:探讨悬滴培养诱导稳定表达人肝细胞生长因子(hHGF)的大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)向肝样细胞分化的效应。方法:体外分离和培养rMSCs,采用流式细胞术检测干细胞表面标志分子CD44、CD90、CD34和CD45的表达率;构建重组逆转录病毒表达载体pLNCX2-hHGF,包装病毒感染rMSCs,获得稳定表达hHGF的细胞株hHGF-rMSCs;分别对rMSCs和hHGF-rMSCs进行悬滴培养,在培养第7、14和21天,通过RT-qPCR和免疫荧光技术检测白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(APF)和角蛋白18(CK-18)在mRNA和蛋白水平上的表达,此外,还利用ELISA的方法检测培养液上清中ALB的分泌。结果:第3代rMSCs高表达CD44和CD90,几乎不表达CD34和CD45;构建表达载体后,成功建立了hHGF-rMSCs细胞株,且经过悬滴培养后,在第7～21天都呈现ALB、AFP和CK-18在mRNA水平上的高表达(P0.01);免疫荧光结果显示,AFP蛋白在第21天出现阳性表达,而ALB和CK-18蛋白在第7天就呈现阳性表达;在第7～21天,ELISA法均检测到hHGF-rMSCs细胞培养上清中ALB的分泌增多(P0.01)。结论:将HGF基因导入rMSCs,经悬滴培养可诱导分化为肝样细胞,可能为临床肝脏疾病的细胞治疗和体外生物人工肝提供新型种子细胞。     

丁酸钠体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为肝细胞

目的:探讨分化刺激剂丁酸钠对体外培养的小鼠胚胎干细胞（ES细胞）分化为肝细胞的影响，并分析其可能机制。 方法:常规培养E14 ES细胞后，继续悬浮培养4 d以形成拟胚体，然后转移拟胚体到铺有明胶的6孔板中并添加3 mmol/L丁酸钠开始诱导分化，分化过程中用倒置相差显微镜观察细胞形态学的改变；免疫荧光染色观察肝细胞特异性标志白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18（CK18）的表达；RT-PCR检测肝细胞特异性标志基因ALB、AFP、甲状腺素运载蛋白(TTR)、α1抗胰蛋白酶(AAT)的mRNA表达；流式细胞技术检测ALB阳性细胞比例；糖原PAS染色和吲哚氰绿（ICG）摄取试验检测肝细胞功能。 结果:诱导分化过程中ES细胞逐渐出现肝细胞样改变；诱导分化第7d仅检测到AFP和TTR在mRNA水平的表达，第14 d检测到ALB、AAT在mRNA水平的表达；分化14 d时免疫荧光检测显示ALB、AFP、CK18均为阳性；流式细胞技术检测ALB阳性细胞比例约为48.6%；糖原PAS染色和ICG摄取试验显示分化18d的肝细胞样细胞具有肝细胞功能。 结论:丁酸钠可以高效诱导小鼠ES细胞分化为肝细胞样细胞，并且分化细胞具有肝细胞功能。     

骨髓源性侧群细胞的体外增殖及定向诱导分化为肝样细胞的实验研究

目的 (1)过观察骨髓源性侧群细胞(BMSP)在体外培养条件下能否保持侧群细胞的特性,以探讨BMSP在体外扩增的可能性。(2)观察在肝细胞生长因子定向诱导下大鼠BMSP转分化情况,初步探讨肝细胞生长因子在大鼠BMSP转分化为肝样细胞中发挥的作用及机制。方法 (1)从大鼠的股骨和胫腓骨分离骨髓细胞并制备骨髓细胞悬液,通过流式细胞仪分选获取BMSP;用低糖DMEM+10%FBS培养基培养BMSP。采用RT-PCR检测细胞中ABCG-2基因表达水平。(2)在体外向BMSP中加入不同浓度的肝细胞生长因子诱导其向肝样细胞分化,并分别于第3、7、14、21天,通过RT-PCR、免疫印迹等技术检测ALB、AFP细胞表面标志物的表达情况。结果 (1)每只SD大鼠的双侧股骨和胫腓骨所制备的骨髓细胞悬液的细胞总数约2~10×108个,经分选可获得5~10×105个BMSP。(2)BMSP在体外培养6小时后开始贴壁生长,细胞形态以长梭形为主。第7天细胞按1∶2传代培养,传代后细胞于24小时内完全贴壁,细胞传至第10代时,细胞增殖能力仍然很强。(3)诱导分化实验表明:一定浓度的肝细胞生长因子具有明显的促进BMSP转分化为肝样细胞。RT-PCR检测显示:培养第3天的BMSP空白组及因子组的未见AFP、ALB mRNA表达;第7天的因子组见AFP mRNA表达、ALB mRNA不表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第14天的因子组见AFP mRNA表达减弱、ALB mRNA表达,空白组AFP、ALB mRNA均未表达;第21天因子组见AFP mRNA不表达、ALB mRNA表达减弱,空白组AFP、ALB mRNA均未表达。结论 (1)通过流式细胞仪分选获得BMSP在一定时间内可以在体外扩增并保持干细胞的特性,且传代的BMSP仍具有很强的自我更新和增殖能力。(2)扩增的BMSP在肝细胞生长因子的诱导下可以逐渐向肝样细胞分化。     

肝纤维化大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为类肝细胞

目的 观察正常、肝纤维化模型组大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）体外诱导分化为类肝细胞的差异。方法 Wistar大鼠随机分为对照组和肝纤维化模型组。用皮下注射CCl4乳剂建立肝纤维化模型。用密度梯度离心法和贴壁法分离大鼠的MSCs,经培养传代获得纯化的MSCs。用肝细胞生长因子（HGF）和成纤维细胞生长因子-4（FGF-4）诱导培养纯化的MSCs。留取15、21和27 d细胞培养液进行白蛋白（Alb）、甲胎蛋白（AFP）检测;于27 d收集细胞爬片,进行糖原染色和免疫细胞化学染色检测MSCs中CK-18、CK-19。结果 于诱导15、21和27 d,2组经诱导培养的MSCs AFP水平均高于未诱导的MSCs（P<0.01）,其中21 d AFP水平最高;而白蛋白水平21和27 d 2组经诱导培养的MSCs均高于未诱导的MSCs（P<0.01）,15 d无差异,27 d最高。27 d 2组经诱导培养的MSCs糖原染色和CK-18、CK-19免疫细胞化学染色均阳性,未诱导的MSCs糖原染色、CK-18、CK-19均阴性。从AFP、白蛋白水平综合比较,正常和肝纤维化模型组大鼠MSCs诱导效果无明显差别。结论 HGF、FGF-4可在体外诱导肝纤维化大鼠的MSCs分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的类肝细胞。     

HGF及G-CSF诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)以及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可否诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)分化为肝样细胞.方法 以贴壁法分离、培养大鼠BM-MSCs,流式细胞术鉴定表面标志.实验分为:对照组(10％ FBS),0.1μmol/L G-CSF干预组,20 ng/mL HGF干预组,HGF联合G-CSF共同干预组(0.1μmol/LG-CSF+ 20 ng/mL HGF),诱导后第7天、14天和21天提取细胞总RNA以及总蛋白后进行RT-PCR和Western blot检测白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录和蛋白水平.结果 20 ng/mL HGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组P3代BM-MSCs诱导后细胞形态似肝样细胞.BM-MSCs表面标志物:CD34-PE 0.3％,CD45-FITC0.1％,CD90-FITC 99.6％,CD105-PE 99.8％.20 ng/mL HGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组检测到白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录水平及蛋白水平表达.在第7、14、21天,随时间增加ALB表达量递增、而AFP表达量递减,且同一时间两组表达量均有差异(P＜0.05).结论 HGF能诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞,G-CSF对HGF诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞有协同作用.     

SDF-1/CXCR4轴通过调控间充质干细胞定向分化修复缺氧缺血性脑损伤

目的:探讨基质细胞衍生因子-1(stromalcell-derivedfactor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXCchemokinereceptor4,CXCR4)轴调控间充质干细胞定向分化、修复缺氧缺血性脑损伤的作用。方法:大鼠间充质干细胞(ratmesenchymalstemcells,rMSCs)经缺氧培养不同时点(0h、6h、12h、24h、48h、72h)或SDF-1α(10μg/L)孵育后,采用RT-PCR、Westernblotting和流式细胞术检测其表面CXCR4表达的变化;建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,运用RT-PCR和Westernblotting检测造模后不同时点(1d、3d、5d、7d、14d、21d)大鼠脑部海马组织中SDF-1αmRNA转录和蛋白表达的改变情况;用AMD3100(CXCR4拮抗剂)拮抗rMSCs表面CXCR4后,免疫细胞化学和Westernblotting检测rMSCs诱导向神经细胞分化中神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等神经细胞特异性标志物的阳性率及表达变化情况。结果:低氧培养6h及12h的rMSCsCXCR4mRNA及蛋白表达水平均较常氧培养组明显增加(P<0.01),10μg/LSDF-1α孵育后rMSCs的CXCR4表达水平明显增加(P<0.01);缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α蛋白表达显著增加(P<0.01);5mg/LAMD3100处理后的rMSCs在向神经细胞诱导分化中NSE和GFAP蛋白的表达明显减少。结论:微小剂量的SDF-1α可诱导低氧培养的rMSCs表面CXCR4的表达,而在缺氧缺血性脑损伤模型的大鼠脑内SDF-1α表达增加,从而使SDF-1/CXCR4轴的生物学效应得以增强;CXCR4拮抗的rMSCs在分化中神经细胞特异性标志物NSE和GFAP的表达降低,表明SDF-1/CXCR4轴在rMSCs定向神经分化修复缺血缺氧脑损伤中具有重要的调控作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞

目的 研究HGF、aFGF及OSM诱导MSCs成为肝细胞的能力及其在分化中的作用。方法 用HGF、 aFGF、OSM诱导分化MSCs后,用化学发光法、RT-PCR法及谷氨酸脱氢酶法检测细胞AFP、ALB及尿素的表达情况。结果 除对照组外其余各组细胞均有AFP表达 (P<0.05);对照组及a+O组无ALB、尿素的表达,其余各组出现ALB及尿素的表达(P<0.05)。结论HGF联合aFGF、OSM及aFGF能够诱导MSCs分化为表达AFP、ALB、尿素的肝细胞;aFGF与OSM在没有HGF存在时不能诱导MSCs向较为成熟的肝细胞的分化。     

人胎盘来源的间充质干细胞向血管内皮细胞分化潜能的研究

目的: 探讨人胎盘来源的间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells,PDMSCs)在体外分化为血管内皮细胞的潜能。方法: 利用组织块种植法体外分离培养PDMSCs,流式细胞术鉴定其表面抗原,应用含50 μg/L VEGF和10 μg/L bFGF的诱导分化液定向诱导PDMSCs向内皮细胞分化。免疫细胞化学检测分化过程中不同时点内皮特异性标志的表达变化。透射电镜和体外血管生成实验分别检测内皮特异性结构和内皮细胞功能。结果: PDMSCs表面抗原 CD105和CD166阳性,CD31、CD34和CD45阴性。诱导分化的内皮细胞形态呈鹅卵石样,早期内皮标志Flk-1/KDR在4 d表达最强;成熟的内皮标志CD31、vWF、CD144/VE-cadherin在内皮细胞分化过程中呈现时间依赖性表达(0 d、4 d、8 d和12 d)。透射电镜下可见内皮特异性结构:Weibel-Palade小体。细胞接种在细胞外基质凝胶中可形成毛细血管样结构。结论: 胎盘中可分离出大量PDMSCs,并且PDMSCs在体外可分化为具有功能特性的内皮细胞,因此胎盘组织可能成为血管组织工程和再生医学的理想种子细胞来源。     

氧化损伤对骨髓源性肝前体细胞恶性转化的影响

目的 探讨活性氧自由基对骨髓源性肝前体细胞恶性转化的影响。 方法 取经过鉴定的3代骨髓间充质干细胞（BMSCs）分为3组：对照组（BMSCs）,生长因子诱导组（BMSCs+HGF+EGF）,过氧化氢刺激组（BMSCs+HGF+EGF+ H₂O₂）。分别在细胞培养的第7天、14天、21天、28天用RT-PCR方法检测各组细胞的白蛋白(ALB)、甲胎蛋白（AFP）、角蛋白18 (CK18) mRNA的表达。用免疫细胞化学方法检测细胞γ-谷氨酰转酞酶(γ-GT)的表达,用Schiff染色方法检测细胞DNA含量,用流式细胞仪检测非整倍体细胞。 结果 生长因子诱导组及过氧化氢刺激组细胞有ALB mRNA、AFP mRNA及CK18 mRNA的表达,过氧化氢刺激组细胞AFP mRNA、CK18 mRNA、γ-GT的表达、DNA含量及非整倍体细胞均高于生长因子诱导组（P<0.05）。 结论 骨髓间充质干细胞在体外诱导成为肝前体细胞,活性氧自由基可促使肝前体细胞过度增殖并恶性转化。     

Mage-H1在PC12细胞分化前后的表达变化及其对细胞周期的影响

目的: 探讨黑色素瘤相关抗原H1(Mage-H1)在细胞增殖和分化调控中的作用。方法: 神经生长因子(nerve growth factor, NGF)诱导PC12细胞分化后用相差显微镜对其形态学进行观察。通过RT-PCR、Western blotting 检测分化前后Mage-H1表达变化情况。流式细胞技术分析PC12细胞瞬时表达Mage-H1对细胞周期的影响。结果: 经NGF诱导8 d后,92%以上PC12细胞属于已分化细胞。分化后的PC12细胞与对照组相比,Mage-H1表达上调。PC12细胞瞬时表达Mage-H1后被明显阻滞在G₀-G₁期。结论: Mage-H1可抑制PC12细胞增殖并促进细胞的分化。     

地塞米松对大鼠胸膜间皮细胞水通道蛋白1表达的调节

 目的：观察胸膜间皮细胞水通道蛋白1（AQP-1）的表达及地塞米松（Dex）对其表达的影响，为进一步研究胸水治疗的机制提供实验依据。方法:体外培养大鼠胸膜间皮细胞，细胞鉴定后，采用免疫细胞化学、RT-PCR方法检测AQP-1表达；应用Western blotting检测以不同浓度Dex（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mmol/L）处理细胞 24 h 及以10^-4 mmol/L Dex处理细胞 6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h后AQP-1表达情况。结果:发现胸膜间皮细胞存在AQP-1表达， 10^-8、10^-7、10^-6、10^-5、10^-4 mmol/ L Dex干预胸膜间皮细胞 24 h 后，AQP-1蛋白表达量(积分吸光度)分别为755.04±19.81、843.72±19.41、862.96±26.53、694.80±32.00、938.08±13.32，分别高于正常对照组（372.90±16.46） 2.02、2.26、2.31、1.86、2.52倍 (P<0.01)，AQP-1表达升高与地塞米松浓度无关；以10-4 mmol/L Dex干预细胞 6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h 后，AQP-1蛋白表达量分别为：554.14±23.57、917.78±38.62、1 587.20±61.22、1 322.09±28.65、918.40±26.62、1 117.60±51.32，分别高于正常对照组（495.91±23.12）1.12、1.85、3.20、2.67、1.85、2.25倍(P<0.01)，AQP-1表达与地塞米松作用时间有关。结论:胸膜间皮细胞存在AQP-1表达，地塞米松对胸膜间皮细胞AQP-1表达有明显的增强性调节作用，具有时间依赖性。     

淤胆血清“病理微环境”诱导胚胎干细胞向肝细胞分化

目的:探讨淤胆血清"病理微环境"培养体系诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的可行性。方法:将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养,使其自发分化为拟胚体,加入FGF-4和HGF初步诱导,然后置于5％淤胆鼠血清"病理微环境"筛选培养液中继续培养2周,然后进行细胞形态学观察,白蛋白和CK8/18免疫组化染色,白蛋白与转甲状腺蛋白RT-PCR检测,细胞糖原染色及尿素合成功能分析。结果: 经初步诱导分化的ESC置于5％淤胆血清"病理微环境"筛选培养液中培养,初期细胞生长受抑制,2周后分化为肝细胞样细胞,细胞呈现良好的均质性;免疫组化染色显示白蛋白和CK8/18表达;RT-PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录;细胞有糖原和尿素合成功能。结论:采用含淤胆血清的病理微环境培养体系从经FGF-4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞,细胞有较好的均质性,为临床肝细胞替代治疗、获取丰富供体细胞来源提供了新思路。     

PAI-1和TIMP-1基因在肾小管间质纤维化中的表达及HGF的干预作用

目的:研究纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)和组织基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)基因表达与梗阻性肾病小管间质纤维化(TIF)进展的关系及肝细胞生长因子(HGF)的干预作用。方法: 60只Wistar大鼠随机分为4组:正常大鼠组、假手术组、单侧输尿管梗阻组和HGF治疗组,分别于模型3 d、7 d、14 d、21 d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测PAI-1和TIMP-1 mRNA表达水平;底物酶谱法检测肾脏MMP2、9活性的变化,测定肾组织羟脯氨酸含量判断纤维化程度。结果:梗阻肾组织PAI-1和TIMP-1 mRNA表达显著高于对照组,并伴有明显的梗阻肾MMP2,MMP9活性低于和羟脯氨酸含量高于对照组,而21 d HGF治疗组PAI-1和TIMP-1 mRNA表达明显下调,MMP2,MMP9活性高于和肾组织羟脯氨酸含量少于对照组。结论: PAI-1、TIMP-1 mRNA表达增高是小管间质ECM降解减少的主要原因之一,也是造成TIF加重的重要因素,而HGF可拮抗这一进程,减轻小管间质纤维化。     

雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞动员作用的体外研究

目的探讨雌激素对孕妇外周血内皮祖细胞（EPC）的动员作用。方法取孕期为10、20、30周的健康、单胎孕妇外周静脉血，采用Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞并进行体外培养。采用免疫荧光细胞化学染色方法进行EPC鉴定，取培养4d的细胞，加入DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）和FITC标记的荆豆凝集素（UEA—I），用激光共聚焦扫描显微镜观察和记录图像。取培养7d的细胞，在相差显微镜下计数不同孕期孕妇外周血EPC集落（≥50个细胞）形成数（CFU）。分别通过跨膜迁移和增殖实验观察雌激素对EPC的动员和促增殖作用，随机选取培养7d的细胞，分别加入浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L的雌二醇（雌二醇作用组），在相差显微镜下分别计数培养24h后EPC的跨膜迁移数和培养48h后EPC的增殖数，以加入PBS作为对照组，实验均重复3次。结果免疫荧光细胞化学染色显示，平均85％以上的细胞摄取DiI-acLDL并结合FITC—UEA—I，可以鉴定为EPC。孕期为10、20、30周孕妇外周血EPC的CFU分别为1．67±0．33、4．83±0．60、7．50±0．67，组间差异均有统计学意义（P〈0．05）。浓度为1×10^-10、1×10^-9、1×10^-8mol／L雌二醇作用组EPC跨膜迁移数（×10 ^3个／膜）分别为1．50±0，09、1．61±0．06、1．90±0．07，均明显高于对照组（1．03±0．06，P〈0．01）：EPC增殖数（×10^5个）分别为1．07±0．05、1．33±0．05、1．19±0．03，均明显高于对照组（1．00±0．03，P〈0．01）。结论孕妇外周血EPC的功能状态可能与雌激素水平有关，雌激素对EPC的动员具有重要作用。     

人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究

目的:研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性,探讨其在自体宫内基因转移/治疗(IUGT)领域的应用前景。方法: 采用L-DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞(MSC);流式细胞仪技术检测细胞表面标记;地塞米松/胰岛素等作为脂肪细胞诱导液,β-甘油磷酸钠/抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性;F344新生大鼠肝内注射MSC,免疫荧光检测6周后不同组织器官中人MSC存在;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)皮下注射MSC,病理切片检测第30 d细胞体内成瘤性。 结果:3 mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC,细胞均一地表达CD29、CD44、CD59、CD105、CD166,不表达CD34、CD45、CD80、CD86、CD42a、HLA-DR分子,体外培养中具有成脂、成骨能力;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达56.32%±3.28%;在新生大鼠体内,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论:人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。     

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的：分离培养人胎盘血间质干细胞（hMSC），为hMSC探寻新来源。方法：采用羟乙基淀粉（HES）方法分离、富集胎盘血有核细胞；DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC；流式细胞仪检测细胞表面标记；地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果：胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下，生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞，阳性获得率29.17%（7/24），该细胞传代培养达6个月以上；流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性，CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性；加入脂肪细胞诱导剂，细胞在形态上向脂肪细胞转化，胞内出现脂滴、脂泡，油红O阳性。结论：人胎盘血可以分离培养出hMSC，是hMSC的重要来源。     

胎肝来源Sca - 1+细胞在体内分化为神经细胞研究

目的:为了了解胎肝干细胞是否具有向神经组织细胞分化的潜能。方法:PCR检测sry基因分析孕145d胚胎鼠性别；采用免疫磁珠法分离雄性胎鼠肝的Sca-1⁺细胞，尾静脉注射Sca-1⁺细胞(2.0×10³个/小鼠)到致死剂量放射线照射的雌性小鼠。移植60、120、180d后采用免疫组化和FISH双染色检测受体小鼠脑组织中供体来源细胞特性。结果:受体雌鼠脑组织内存在大最Y染色体阳性细胞。免疫组化分析显示，部分Y染色体阳性细胞表达神经组织特异标志，如神经元核特异蛋白(NeuN,Neuron-specificnucleiprotein)、部分Y染色体阳性细胞表达星形胶质细胞特异标志，如胶质纤维酸性蛋白(GFAP,Glialfibrillaryacidicprotein)等。结论:移植的胎肝Sca-1⁺细胞，含造血干细胞，能分化成神经细胞和星形胶质细胞。     

Mesenchymal stem cell interaction with a non‐woven hyaluronan‐based scaffold suitable for tissue repair

The fabrication of biodegradable 3‐D scaffolds enriched with multipotent stem cells seems to be a promising strategy for the repair of irreversibly injured tissues. The fine mechanisms of the interaction of rat mesenchymal stem cells (rMSCs) with a hyaluronan‐based scaffold, i.e. HYAFF®11, were investigated to evaluate the potential clinical application of this kind of engineered construct. rMSCs were seeded (2 × 10⁶ cells cm^?2) on the scaffold, cultured up to 21 days and analysed using appropriate techniques. Light (LM), scanning (SEM) and transmission (TEM) electron microscopy of untreated scaffold samples showed that scaffolds have a highly porous structure and are composed of 15‐µm‐thick microfibres having a rough surface. As detected by trypan blue stain, cell adhesion was high at day 1. rMSCs were viable up to 14 days as shown by CFDA assay and proliferated steadily on the scaffold as revealed by MTT assay. LM showed rMSCs in the innermost portions of the scaffold at day 3. SEM revealed a subconfluent cell monolayer covering 40 ± 10% of the scaffold surface at day 21. TEM of early culture showed rMSCs wrapping individual fibres with regularly spaced focal contacts, whereas confocal microscopy showed polarized expression of CD44 hyaluronan receptor; TEM of 14‐day cultures evidenced fibronexus formation. Immunohistochemistry of 21‐day cultures showed that fibronectin was the main matrix protein secreted in the extracellular space; decorin and versican were seen in the cell cytoplasm only and type IV collagen was minimally expressed. The expression of CD90, a marker of mesenchymal stemness, was found unaffected at the end of cell culture. Our results show that HYAFF®11 scaffolds support the adhesion, migration and proliferation of rMSCs, as well as the synthesis and delivery of extracellular matrix components under static culture conditions without any chemical induction. The high retention rate and viability of the seeded cells as well as their fine modality of interaction with the substrate suggest that such scaffolds could be potentially useful when wide tissue defects are to be repaired as in the case of cartilage repair, wound healing and large vessel replacement.     

败血症休克肝细胞线粒体损伤机制的实验研究

目的:探讨败血症休克肝细胞线粒体损伤的机制。方法:30只SD大鼠随机分为3组,假手术组,12h手术组,16h手术组。采用盲肠结扎穿孔术(cecalligationandpuncture)制作败血症休克模型,比较手术前后肝细胞线粒体呼吸功能和氧化磷酸化功能的变化及线粒体膜ATP酶的活性改变与大鼠死亡率和血压变化的关系。结果:12h手术组平均动脉压(9.54±1.26)kPa明显低于假手术组(14.58±1.32)kPa(P<0.05),死亡率明显高于假手术组(P<0.05),12h手术组肝细胞线粒体Ⅲ态(1.28±0.25)、P/O比值(1.67±0.34)、呼吸控制率(1.27±0.25)、线粒体膜Ca²⁺-ATP酶(58.00±2.43)、Na⁺-K⁺-ATP酶(40.80±3.45)、Mg²⁺-ATP酶(78.30±4.16)、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶(2.70±2.25)活性与假手术组相比较,具有显著差异(P<0.05)。术后16h组更低于12h组,与大鼠死亡率增加呈显著正相关。结论:肝细胞线粒体摄氧功能和氧化磷酸化功能减弱,膜流动性降低,能量代谢功能障碍,线粒体内钙镁平衡紊乱是败血症休克肝细胞线粒体损伤的主要机制。     

地塞米松或茶碱对血小板活化因子诱导的嗜酸性粒细胞活化的影响

目的:血小板活化因子(PAF)可诱导嗜酸性粒细胞(EOS)脱颗粒产生低密度嗜酸性粒细胞(HE),本研究旨在探讨地塞米松、茶碱对上述过程产生的影响。方法:分离正常人外周血EOS,观察不同密度EOS的组织学差别,测定地塞米松、茶碱对PAF诱导的EOS脱颗粒和正常密度EOS(NE)向低密度EOS(HE)转化的影响。结果:低密度嗜酸性粒细胞颗粒缩小;10^-5mmol/L地塞米松或10mg/L茶碱可使17.87%±2.16%或14.08%±2.42%的正常密度嗜酸性粒细胞转化为低密度嗜酸性粒细胞,与血小板活化因子组比较差异显著(P<0.05,P<0.01);同样浓度的地塞米松和茶碱分别使PAF诱导的嗜酸性粒细胞过氧化物酶的释放量下降至(101.17±10.32)mg/L、(110.85±4.16)mg/L及(100.53±9.65)mg/L、(106.94±10.11)mg/L(P<0.05,P<0.01)。结论:EOS脱颗粒是HE产生的原因之一;地塞米松、小剂量茶碱可以抑制PAF对EOS的活化,这可能是它们抗炎作用的机制之一。