细胞因子与腰椎间盘髓核细胞凋亡的关系

自1991年,Tompson用细胞培养的方法观察一些细胞因子对椎间盘细胞增殖和对细胞外基质更新的影响,从而把细胞因子的研究扩展到椎间盘领域以来,经过国内外众多学者的多年的努力以及分子生物学的不断进展,现已认识到细胞因子在腰椎间盘髓核细胞凋亡过程中起着重要的作用,为临床进一步指导治疗腰椎间盘突出症提供新的途径。笔者就细胞因子与腰椎间盘髓核细胞凋亡的关系综述如下。1髓核组织的成分及其退变时的变化情况腰椎间盘髓核组织主要由胶原、蛋白多糖、髓核细胞及水分组成。髓核细胞在胚胎期为脊索细胞,成人主要以软骨样细胞为主,髓核细胞…     

糖尿病大鼠膀胱细胞凋亡的改变

目的：研究糖尿病大鼠膀胱细胞凋亡情况及其意义.方法：实验分为正常对照组和糖尿病组.用10周龄SD大鼠腹腔内注射1％链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠的动物模型.12周后取两组大鼠膀胱组织标本,原位细胞检测法检测细胞凋亡;免疫荧光方法检测CD146、PDGF-Rβ、NG-2表达;Western Blotting检测CD146、PDGF-Rβ表达.结果：与正常对照组比较,糖尿病组大鼠血糖升高,体质量减轻,膀胱湿重增加;细胞凋亡主要发生在糖尿病大鼠膀胱的尿路上皮细胞,而正常对照组未见明显尿路上皮细胞凋亡;两组大鼠膀胱组织中未见明显NG-2表达,CD146阳性表达细胞位于膀胱黏膜下层的血管壁及膀胱逼尿肌肌膜,PDGF-Rβ阳性表达细胞位于膀胱逼尿肌之间血管壁细胞及黏膜下血管壁;Western Blotting 检测结果显示,两组大鼠膀胱壁组织CD146、PDGF-Rβ的蛋白表达水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：糖尿病大鼠膀胱上皮细胞早期发即生凋亡改变,而周细胞早期凋亡不明显;上皮细胞的凋亡可能是糖尿病膀胱的治疗靶标之一.     

自发性高血压大鼠视网膜微血管稀少与细胞凋亡

目的：研究自发性高血压大鼠（SHR）视网膜毛细血管细胞凋亡的发生情况,探讨细胞凋亡与高血压视网膜微血管病变之间的关系,为研究高血压视网膜病变发病机制提供形态学依据。方法：10只雄性自发性高血压大鼠（SHR组）和10只雄性正常血压（WKY）大鼠（WKY组）分别在13周龄和18周龄取眼球做视网膜消化铺片,采用核苷酸末端转移酶介导dUTP缺口翻译法（TUNEL法）检测视网膜微血管细胞凋亡变化情况,HE染色及图像分析,动态观察视网膜微血管形态的改变及测定视网膜毛细血管面积及密度的改变。结果：①TUNEL法标记显示SHR各周龄大鼠视网膜微血管均出现阳性反应细胞,且18周龄大鼠阳性细胞与13周龄大鼠比较明显增多;WKY组大鼠视网膜微血管未见TUNEL阳性细胞。②血管铺片HE染色显示SHR组部分毛细血管闭塞,内皮细胞和周细胞丢失,出现无细胞毛细血管,毛细血管密度较WKY组显著降低。结论：在高血压发展过程中,视网膜毛细血管内皮细胞和周细胞均可发生凋亡,同时伴有微血管稀疏,细胞凋亡可能在高血压视网膜病变的过程中扮演重要的角色。     

软骨终板细胞凋亡与颈椎间盘退变关系的研究

目的：探讨脊柱软骨终板细胞凋亡与颈椎间盘退变之间的关系。方法：24只清洁型wista大鼠,随机分为实验组和对照组。实验组沿C1-C7棘突做正中切口,剥离椎旁肌,切除C1-C7的棘上、棘间韧带及两侧关节突关节后外1/2,诱发加速脊柱退变;对照组仅切开皮肤后缝合。分别于第9周、18周、36周对两组动物施行过度麻醉处死,完整取下包含上下椎体的椎间盘。对颈椎标本行矢状位切片,分离软骨终板和椎间盘。颈椎间盘按Thompson椎间盘退变病理分级标准进行分级评定;将软骨终板石蜡包埋,切片。HE染色和Tunnel染色后,计数椎间盘软骨终板凋亡数量,评估软骨终板消失状况。结果：两组软骨终板细胞凋亡随时间进展而加速。与对照组相比,18周实验组软骨终板细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;在9周和27周时,实验组与对照组软骨终板细胞凋亡率无统计学差异。结论：脊柱退变模型显著增加了软骨终板细胞凋亡数量,加速了脊柱退变;随年龄增加,软骨终板凋亡细胞数量逐渐增加,软骨终板破坏程度增加,颈椎间盘退变过程加速;年龄是颈椎间盘退变的重要因素;软骨终板细胞凋亡是椎间盘发生退行性变的重要原因。     

大鼠椎间盘软骨终板退变与细胞凋亡的形态计量学研究

 目的 观察研究增龄和负重对椎间盘软骨终板（cartilage endplate,CEP）形态与细胞凋亡的影响。方法 通过手术截肢及特殊饲养建立双后肢大鼠模型（n=45）,取同龄正常大鼠作为对照组（n=40）。在3、6、9、12月龄时实验组和对照组分别随机选取8只处死观察,取出L4-5椎间盘及相邻上下椎体组织。椎间盘取材后,行苏木精-伊红染色以及TUNEL染色。计数软骨终板区活细胞以及凋亡细胞数目,并且测量软骨终板厚度,计算软骨终板缺损程度。结果凋亡首先显著出现于软骨终板中,随着年龄的增加凋亡逐渐加剧,并直接导致细胞密度的显著降低。实验组软骨终板内软骨细胞的凋亡率在6月龄时较对照组明显增加,实验组6、9月龄组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析显示,软骨终板活细胞数目与椎间盘软骨终板破损程度具有相关性,相关系数为-0.97（P<0.05）,呈高度相关。实验组的软骨终板结构较对照组发生更严重的退变,软骨终板钙化层明显增厚、非钙化层变薄并出现裂隙。结论除增龄因素外,负重是增加细胞凋亡、加重椎间盘软骨终板破损和退变的重要因素。     

溶髓方对颈椎间盘退变大鼠软骨终板细胞凋亡的影响

[目的]观察溶髓方对大鼠颈椎间盘退变中椎间盘组织形态软骨终板细胞凋亡的影响。[方法]选取健康wistar大鼠36只,随机分为空白组、对照组和实验组各12只。实验组和对照组建立wistar大鼠动静力失衡性颈椎间盘退变模型;空白组做假手术,仅切开皮肤后即缝合。术后1周开始灌胃,实验组给予溶髓方汤剂,对照组和空白组分别给予生理盐水,每日1次,持续喂药1个月,分别于术后9周、18周、36周处死两组动物,取下包含上下椎体的椎间盘。颈椎间盘按Thompson椎间盘退变病理分级标准进行分级评定。分离软骨终板和椎间盘,做椎间盘HE染色和软骨终板TUNEL染色,观察病理切片,并通过TUENL检测法计算椎间盘软骨终板细胞凋亡率。[结果]术后18、36周时,对照组和实验组软骨终板凋亡细胞较术后9周明显增加(P0.05),其中对照组较实验组凋亡细胞数量显著增多,两组细胞凋亡率比较有显著性差异(P0.05);HE染色和TUNEL染色结果显示:随着实验时间的延长,实验组和对照组中均出现椎间盘及软骨终板细胞数量减少、细胞形态变化的退变情况,但对照组的退变情况更明显。[结论]终板细胞凋亡是椎间盘发生退变的重要原因。溶髓方可以抑制软骨终板凋亡细胞的增加,减慢软骨终板细胞的凋亡速度,延缓椎间盘退变过程。     

颈椎间盘髓核组织中TRAIL及DR5的表达与髓核细胞凋亡的相关性研究

目的检测颈椎间盘内髓核组织细胞密度、细胞凋亡率以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及死亡受体5（DR5）的表达。方法实验组30个标本来自脊髓型颈椎病患者前路手术所切取的椎间盘组织（C3-C7）,对照组30个标本为颈椎创伤患者前路手术所取得的椎间盘组织。采用HE染色观察髓核组织中凋亡小体和细胞密度,原位DNA片段末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞率,用免疫组织化学法检测TRAIL、DR5的表达。结果实验组髓核组织中的细胞密度均低于对照组,TUNEL阳性细胞率均高于对照组（P〈0.01）;实验组TRAIL、DR5染色阳性细胞率均高于对照组（P〈0.05）。将两组全部60例颈椎间盘标本合并后进行Pearson相关分析,颈椎间盘TUNEL阳性细胞率与细胞密度之间呈负相关（r=-0.969,P〈0.01）;两组髓核内TRAIL、DR5染色阳性细胞率与TUNEL阳性细胞率之间呈正相关r=0.921和0.755,P〈0.01）。结论细胞密度下降参与了颈椎间盘的退变过程,细胞凋亡是椎间盘髓核细胞减少的原因之一,颈椎间盘组织中存在DR5/TRAIL诱导的凋亡途径。     

退变前后兔腰椎间盘细胞凋亡及蛋白多糖的比较

目的:动态观察细胞凋亡及蛋白多糖在兔腰椎间盘退变前后的改变。方法:建立动静力失衡性腰椎间盘退变模型,分别用Tunel法和Bitter法检测造模5月后椎间盘细胞凋亡程度及蛋白多糖量的变化。结果:与对照组比较,模型组细胞凋亡数明显升高(P<0.01)。结论:退变椎间盘细胞凋亡数目增多及蛋白多糖含量的减少可能在椎间盘退变过程中起重要作用。     

人工髓核(PDN)置换术治疗腰椎间盘突出症

目的探讨人工髓核(PDN)置换术治疗腰椎间盘突出症的临床应用效果.方法2002年5月以来应用后路PDN置换术治疗L4-5单一间隙椎间盘突出症3例,术前JOA评分分别为5、6、10分,平均7分.结果随访率100%,截止2002年12月,平均随访6月(4月～8月),术后JOA评分分别为28、28、29分,平均28.3分.结论PDN置换术为腰椎间盘突出症治疗提供了一种新方法,其近期疗效满意,但远期疗效还有待进一步随访观察.     

雌激素在大鼠颈椎间盘退变中的作用

目的:研究雌激素在SD大鼠颈椎间盘退变过程中的作用。方法:30只8月龄雌性SD大鼠随机平分为对照组、模型组、实验组,通过切除双侧卵巢和颈后肌肉创建雌激素缺乏大鼠颈椎动静失衡模型,实验组补充外源性雌激素。造模后3月通过观察颈椎间盘形态、细胞凋亡率及测量蛋白多糖含量来比较3组之间颈椎间盘退变程度。结果:形态学观察比较实验组椎间盘退变程度重于对照组而轻于模型组;椎间盘细胞凋亡率模型组>实验组>对照组,3组之间具有显著差异(P<0.01);蛋白多糖含量模型组<实验组<对照组,3组之间具有显著差异(P<0.01)。结论:雌激素对大鼠颈椎间盘退变具有抑制作用,能够延缓椎间盘的退变进程。     

诱导型一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲在大鼠颈椎间盘退变中的作用

目的:研究诱导型一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea,SMT)在大鼠颈椎间盘退变中的作用。方法:选取8月龄雌性SD大鼠45只,随机分为实验组、实验对照组和正常对照组,实验组和实验对照组分别造颈椎静动力平衡失调模型,实验组腹腔注射SMT。3个月后光镜下观察椎间盘形态,测定蛋白多糖含量及椎间盘细胞凋亡率,并比较。结果:实验对照组的椎间盘细胞凋亡率和蛋白多糖减少量高于实验组和正常对照组,差异显著;实验组凋亡率和蛋白多糖减少量高于正常对照组,差异有显著性。结论:SMT在延缓椎间盘细胞的退变过程中有一定作用。     

椎体终板结构变化在椎间盘退变中的作用机制研究进展

营养供应障碍是椎间盘退变的原因之一。椎体终板是椎间盘营养通路中的重要组成部分,其结构的变化对椎间盘营养通路有重要影响,因此研究椎体终板结构对揭示椎间盘营养供应障碍的原因有重要意义。该文通过对椎体终板与椎间盘营养相关的文献进行综述,希望能够对这方面进一步的研究提供帮助。     

Thymosin Beta-4 Recombinant Adeno-associated Virus Enhances Human Nucleus Pulposus Cell Proliferation and Reduces Cell Apoptosis and Senescence

Background:

Thymosin beta-4 (TB-4) is considered key roles in tissue development, maintenance and pathological processes. The study aimed to prove TB-4 positive biological function on nucleus pulposus (NP) cell apoptosis and slowing the process of cell aging while increasing the cell proliferation.

Methods:

TB-4 recombinant adeno-associated virus (AAV) was constructed and induced to human NP cells. Cell of same group were cultured without gene modification as controlled group. Proliferation capacity and cell apoptosis were observed during 6 passages of the cells. Morphology and expression of the TB-4 gene were documented as parameter of cell activity during cell passage.

Results:

NP cells with TB-4 transfection has normal TB-4 expression and exocytosis. NP cells with TB-4 transfection performed significantly higher cell activity than that at the control group in each generation. TB-4 recombinant AAV-transfected human NP cells also show slower cell aging, lower cell apoptosis and higher cell proliferation than control group.

Conclusions:

TB-4 can prevent NP cell apoptosis, slow NP cell aging and promote NP cell proliferation. AAV transfection technique was able to highly and stably express TB-4 in human NP cells, which may provide a new pathway for innovation in the treatment of intervertebral disc degenerative diseases.     

大鼠颈椎间盘凋亡软骨细胞基因表达谱的研究

目的分析正常和诱导凋亡的大鼠颈椎间盘软骨细胞基因表达水平的变化。方法建立大鼠颈椎间盘软骨细胞培养体系,使用抗Fas抗体诱导凋亡,分别从正常组和诱导凋亡组的大鼠颈椎间盘软骨细胞中抽提mRNA,经反转录后用Cy3、Cy5荧光标记,获得椎间盘软骨细胞cDNA的探针,再与BiostarR-40s的基因表达谱芯片杂交,ScanArray4000激光扫描仪扫描,GenePix Pro3．0图像处理软件进行图像分析、标准化处理、Ratio值分析、聚类分析。结果凋亡细胞与正常细胞比较,共筛选出明显变化的基因231条。在30条表达有差异的已知基因中,20条基因表达量明显下降（Ratio〈0．5）,10条基因表达量明显上升（Ratio〉2）。变化的基因包括蛋白酶类,生长因子类,信号转导通路类等方面。结论初步筛选出大鼠颈椎间盘软骨细胞的凋亡相关基因,为研究颈椎病在基因水平上的病理变化提供了基础。     

椎间盘髓核切吸术联合经皮穿刺臭氧氧化术治疗腰椎间盘突出症

目的：观察椎间盘髓核切吸术联合臭氧氧化术治疗腰椎间盘突出症的临床疗效。方法：选取2010年1月至2013年1月间我院收治的腰间盘突出症患者150例,依据治疗术式不同分为观察组与对照组,观察组患者采用椎间盘髓核切吸术联合臭氧氧化术治疗,对照组采用经皮穿刺臭氧注射术治疗;采用 VAS评分系统评估各组治疗前后腰腿疼痛情况,并观察治疗后两组患者JOA腰腿痛疗效评分改善情况及临床疗效。结果：两组患者治疗前VAS、JOA评分比较无统计学差异（ P＞0．05）,治疗后VAS、JOA评分均较治疗前显著改善（ P＜0．05）;观察组治疗后VAS疼痛评分、JOA评分改善均较对照组更为显著,组间比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论：椎间盘髓核切吸术联合臭氧氧化术治疗腰椎间盘突出症,对缓解患者疼痛症状作用显著,疗效确切。     

糖尿病脑病海马神经元凋亡的实验研究

目的 检测糖尿病大鼠学习与记忆成绩及海马神经元凋亡情况，探讨糖尿病对学习与记忆影响的机制。方法 Wistar大鼠共24只，随机分成2组，对照组12只，糖尿病组12只，糖尿病组用链脲服佐菌素（STZ）制模，满12周后，用Y-迷宫检测大鼠学习与记忆成绩，处死动物取脑，应用TUNEL法、HE染色及图像分析技术对大鼠海马进行观察。结果 糖尿病组大鼠学习成绩降低（P〈0．05），海马神经元数目较正常组减少（P〈0．05），并出现TUNEL法阳性细胞。结论 海马神经元凋亡可能是糖尿病大鼠学习与记忆障碍的机制之一．     

Chymase抑制对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨Chymase抑制对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡的影响机制。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=7)、应用糜酶(Chymase)抑制剂的糖尿病组(DM+Chy-I组,n=10)。采用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)单次腹腔注射方法建立糖尿病大鼠模型。其中DM+Chy-I组给予糜酶抑制剂[Suc-Val-Pro-Phe P-(OPh)2,1mg/(kg·d)],12周后处死,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡指数(AI),Western blot法检测心肌caspase-3蛋白的表达,免疫组化检测心肌组织Chymase蛋白表达,采用黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)测定心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA(thiobarbituric acid)法测定丙二醛(MDA)含量。结果与NC组相比,DM组大鼠心肌细胞AI明显升高;caspase-3蛋白表达明显增加;MDA含量升高,SOD活力降低(P<0.05);与DM组相比,Chymase抑制剂使心肌细胞AI明显降低;caspase-3蛋白表达减少;MDA含量降低,SOD活力升高(P<0.05)。结论 Chymase抑制剂减少了糖尿病心肌病大鼠心肌细胞的凋亡可能是通过抑制caspase-3的表达和氧化应激损伤。