D-氨基葡萄糖衍生物抑制HepG2细胞生长及诱导凋亡的初步研究

目的：研究D-葡萄糖衍生物对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响,进而探讨D-葡萄糖衍生物诱导HepG2细胞凋亡的作用.方法：用不同浓度的D-葡萄糖衍生物处理HepG2,采用MTT法测定其对HepG2细胞生长增殖的抑制作用,通过荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术和DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的形态结构及其对HepG2细胞诱导凋亡的效应.结果：D-氨基葡萄糖衍生物能抑制HepG2细胞的生长增殖,并呈一定的浓度、时间依赖性;D-氨基葡萄糖衍生物能诱导肝癌细胞凋亡;荧光显微镜、透射电镜可见肝癌细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱;流式细胞仪检测出现典型的亚二倍体凋亡峰.结论：D-氨基葡萄糖衍生物在体外可显著抑制人肝癌细胞株生长,其作用机制主要是诱导肿瘤细胞凋亡.     

2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞Eca-109的致凋亡研究

目的探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖是否具有诱导人食管癌细胞Eca-109发生凋亡的作用.方法采用体外细胞培养实验方法,应用MTT法、流式细胞仪检测、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等技术,观察药物对细胞生长的抑制率及细胞的形态学变化,检测凋亡峰及DNA Ladder.结果 MTT法测得细胞抑制率具有显著的时间及浓度依赖性;透射电镜下可见到凋亡典型的形态学变化,流式细胞仪检测显示细胞周期的G1期阻滞及凋亡峰;DNA琼脂糖凝胶电泳显示清晰的DNA梯状电泳.结论 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖能够明显的抑制人食管癌细胞Eca-109的增殖,并诱导其发生凋亡.     

2-（3-羧基-1-丙酰氨基）-2-脱氧-D-葡萄糖对人食管癌细胞Eta-109的致凋亡研究

目的 探讨2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖是否具有诱导人食管癌细胞Eta-109发生凋亡的作用。方法 采用体外细胞培养实验方法，应用MTT法、流式细胞仪检测、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等技术，观察药物对细胞生长的抑制率及细胞的形态学变化，检测凋亡峰及DNALadder。结果 MTT法测得细胞抑制率具有显著的时间及浓度依赖性；透射电镜下可见到凋亡典型的形态学变化，流式细胞仪检测显示细胞周期的G期阻滞及凋亡峰；DNA琼脂糖凝胶电泳显示清晰的DNA梯状电泳。结论 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖能够明显的抑制人食管癌细胞Eca-109的增殖，并诱导其发生凋亡。     

菱角提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

[目的]探讨菱角提取物对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。[方法]采用MTT法检测菱角提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;丫啶橙染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。[结果]菱角提取物能抑制SMMC-7721细胞的增殖,且呈明显的剂量依赖性。荧光显微镜下细胞呈典型的凋亡形态学改变。[结论]菱角提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡。     

法尼基转移酶抑制剂ManumyCin诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制。方法:采用MTT(Methythiazolyltetrazolium)法观察法尼基转移酶抑制剂Manumycin对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用,荧光显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞术等技术检测细胞凋亡,应用Westernblot方法检测bcl-2、p53、bax的蛋白水平变化。结果:法尼基转移酶抑制剂Manumycin能明显抑制HepG2细胞的生长且呈浓度依赖性,其IC50为(17.65±0.58)μmol/L。荧光显微镜检查显示Manumycin处理的HepG2细胞DAPI染色后,细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光,典型细胞可见新月型改变,固缩或片段化的核。DNA凝胶电泳可见典型的DNA梯形带。流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”,细胞凋亡与Manumycin作用的时间和浓度相关。Manumycin能时间依赖性地诱导HepG2细胞发生G2/M期阻滞。Manumycin处理HepG2细胞后,Westernblot检测结果显示p53蛋白表达明显增加,而bcl-2蛋白和bax蛋白表达无明显变化。结论:法尼基转移酶抑制剂Manumycin对人肝癌细胞株HepG2有强烈的细胞毒作用,其分子机制可能是诱导HepG2细胞凋亡。Manumycin诱导HepG2细胞凋亡与bcl-2蛋白和bax蛋白表达水平无关,而p53蛋白表达水平的上调可能在此过程中起了一定     

大黄素对人慢性髓细胞性白血病K562细胞增殖与凋亡及c-myc基因表达的影响

目的:观察中药大黄素对人慢性髓细胞性白血病K562细胞株的增殖与凋亡及c-myc基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞的增殖抑制率,实验组、对照组和药物试验组应用荧光染色法观察不同浓度大黄素作用后细胞形态的改变判定凋亡效果,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞内DNA的损伤程度,流式细胞仪分析细胞周期变化,RT-PCR法检测大黄素作用前后c-myc mRNA表达水平的变化.结果:大黄素对K562细胞具有明显的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.01),其96 h半数抑制浓度(IC50)约为53.28 μmol/L.大黄素作用96 h后,荧光显微镜下可见细胞核不规则,核碎裂呈新月形改变,DNA琼脂糖凝胶电泳显示,基因组DNA显现典型的凋亡细胞的梯状图谱.流式细胞仪检测可见大黄素影响细胞周期,细胞阻滞于G0/G1期.RT-PCR法检测显示c-myc基因表达减弱(P＜0.01),100 μmol/L大黄素作用后表达强度较对照组减少54%.结论:大黄素能有效抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是使细胞受阻于G0/G1期而进入凋亡程序,c-myc表达降低可能是大黄素诱导白血病细胞凋亡重要途径之一.     

艰难梭菌A毒素诱导SMMC7721细胞和Vero细胞凋亡的比较研究

背景与目的:艰难梭菌是假膜性大肠炎及抗生素诱发性腹泻的主要致病菌之一,它产生的毒素具有不同的生物学活性.本实验拟研究艰难梭菌 A毒素诱导人肝癌细胞株( SMMC7721)和非洲绿猴肾细胞( Vero细胞)凋亡的作用. 方法:由脑心浸液对艰难梭菌 VPI 10463菌株培养产毒 , 经甲状腺球蛋白亲合层析和 Q Sephrose层析提纯得到精制 A毒素.对 SMMC7721细胞的研究以 Vero细胞为对照.抑制细胞增殖的检测采用 MTT法;用荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪观察细胞形态和细胞周期的改变;采用琼脂糖凝胶电泳法观测 DNA碎片.结果:不同浓度 A毒素 (0.293～ 4.690 mg@ L- 1)明显抑制了 SMMC7721及 Vero细胞的增殖,并且呈时间和浓度依赖性;两种细胞与 A毒素共同培养 48 h,荧光显微镜和透射电镜都观察到典型的凋亡形态变化; SMMC7721细胞与 A毒素共同培养 48 h后,琼脂糖凝胶电泳显示梯形条带.结论: A毒素明显诱导了两种细胞的凋亡 ; A毒素对 SMMC7721细胞具有更强的诱导凋亡作用.     

塞来昔布抑制NB4细胞增殖并诱导凋亡的体外研究

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用.方法 应用光镜和透射电镜观察细胞形态学改变;MTT法分析塞来昔布对细胞增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析;流式细胞仪检测不同浓度(0、20、40、80、120和160 μmol/L)塞来昔布处理24小时后细胞周期的变化以及凋亡情况.结果 镜下观察细胞出现凋亡形态学表现.MTT示塞来昔布对NB4细胞具有明显的增殖抑制作用,并具有时间和剂量依赖性.琼脂糖凝胶电泳见DNA片段化,形成典型梯状条带.流式细胞仪检测发现塞来昔布处理24小时后,随着作用浓度增加,NB4细胞凋亡率提高;同时细胞周期阻滞于G1/S期.结论 塞来昔布能够抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

体外联合应用NS-398与5-FU抑制肝癌HepG2细胞生长的研究

目的研究体外联合应用选择性COX-2抑制剂NS-398与5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌细胞生长的抑制作用.方法应用MTT法观察NS-398、5-FU及NS-398 5-FU对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;通过荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪研究NS-398、5-FU及NS-398 5-FU对HepG2的凋亡诱导作用.结果NS-398和5-FU对肝癌细胞HepG2的生长有显著抑制作用,NS-398和5-FU联合应用时抑制效应较单一应用更为明显.透射电镜、荧光显微镜观察和流式细胞仪检测显示,HepG2细胞经NS-398、5-FU及NS-398 5-FU处理后出现典型的细胞凋亡形态变化和Sub-G1峰.结论联合应用选择性COX-2抑制剂NS-398有增强5-FU抑制肝癌细胞生长的作用.     

依托泊甙（VP—16）诱导人肺腺癌细胞凋亡

目的探讨ＶＰ－１６对肺腺癌细胞凋亡的诱导作用。方法采用光镜、电镜、流式细胞仪、凝胶电泳和ＴｄＴ原位末端标记法检测ＶＰ－１６诱导人肺腺癌ＡＧＺＹ－８３－α细胞凋亡规律,并观察放线菌酮对凋亡的抑制程度。结果ＶＰ－１６在显著抑制细胞增殖的同时,能够诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于Ｇ２期。放线菌酮对凋亡有显著的抑制作用。结论ＶＰ－１６诱导细胞凋亡,是其杀死肿瘤细胞的重要机制之一。该凋亡具有明显的时间和剂量依赖性。     

INDUCTION OF APOPTOSIS BY SeO_2 IN HUMAN LUNG CARCINOMA CELL LINE GLC-82

Thetraceelementselenium(Se)hasbeenshowntobecytotoxicinvitroinmultiplecellmodelsincludingbreastcancercelllineMCF-7[1],coloniccarcinomacellsHT29[2]andimmortalhumanhepaticcelllineHL-7702[3].Seleniumisanessentialcomponentofanumberofenzymespresentintheaminoacidselenocysteine(Se-Cys)andinhibittumorigenesisinbothanimalmodelsandhumans[3].SupplementingwithSeindietmayreducethehumancancerrisk[3].Clarketal.[4]foundthattheincidentoflungcancerwaslowerinSe-supplementedpatients.Apoptosisinducedbyselenium…     

槐定碱诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的实验研究

目的 探讨槐定碱对人胃癌MGC-803细胞抑制作用及其诱导凋亡机理。方法 用MTT法测定槐定碱对MGC-803细胞的IC50，荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 实验显示0．4～3.2mg／ml的槐定碱对体外培养的MGC-803细胞有明显的抑制作用并可诱导其发生凋亡，凋亡细胞表现为细胞固缩，核染色质聚集或碎裂、胞质空泡化等；DNA电泳可见DNA“梯形”条带；流式细胞仪检测Sub-G1凋亡峰在G1期前出现，S期细胞比例增高。结论 槐定碱对体外培养MGC-803细胞生长有抑制作用，机理与通过阻止细胞周期的进程，诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

热休克蛋白70反义寡核苷酸诱导胶质细胞瘤凋亡的研究

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）反义寡核苷酸阻断胶质瘤细胞的HSP70的表达及对胶质瘤细胞凋亡的影响。方法：用MTT法、流式细胞术、琼脂糖凝胶DNA电泳方法观察HSP70反义寡核苷酸对体外培养的胶质瘤C6细胞株HSP70表达的抑制及其对生长和凋亡的影响。结果：用HSP70反义寡核苷酸处理的胶质瘤细胞表现出明显的生长抑制,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA降解的特征性DNA阶梯图;MTT法测定的生长抑制率和流式细胞术分析的凋亡率与HSP70反义寡核苷酸呈剂量、时间依赖性关系。结论：HSP70反义寡核苷酸通过抑制HSP70表达而诱导胶质瘤C6细胞株凋亡并抑制其生长,可作为基因治疗胶质瘤的新靶向。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究

目的:研究维生素E 琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方法: 以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性, Wright Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flowcytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2 和p53 蛋白表达水平。结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P= 0 .004。光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变。DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带。FCM细胞周期分析显示,G1 期阻滞,亚G1 期细胞比例增高,P=0 .005;Fas蛋白表达明显上调,P=0. 002;Bcl -2蛋白表达下调,P=0. 000;p53蛋白表达无明显变化。结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl 2表达有关。     

B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区甲基化及5-aza-CDR对细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:探讨B淋巴瘤细胞Syk基因启动子区5′CpG甲基化情况及甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-az-a-CDR)对淋巴瘤细胞的作用机制。方法:采用RT-PCR方法检测人B淋巴瘤细胞株Raji和Ramos中Syk mRNA的表达,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Syk基因启动子区甲基化情况;采用MTT法检测5-aza-CDR对细胞增殖作用的影响,应用DNA凝胶电泳、流式细胞技术和电镜分析5-aza-CDR对B淋巴瘤细胞增殖、细胞周期和超微结构的影响。结果:Raji细胞Syk基因呈阳性表达,Ramos细胞未检测出Syk mRNA表达。Raji和Ramos细胞中均未检测到Syk基因启动子区的甲基化状态。5-aza-CDR可明显抑制Raji和Ramos细胞增殖,P<0.05;并存在明显的量效和时效依赖关系。5-aza-CDR可诱导Raji和Ramos细胞凋亡,P<0.05。DNA凝胶电泳检测结果显示明显的"DNAladder",并且有明显的细胞凋亡超微结构变化。然而,5-aza-CDR对Raji和Ramos细胞周期未见明显影响。结论:在Raji和Ramos细胞中,Syk基因沉默可能与甲基化无关;5-aza-CDR能明显抑制B淋巴瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对细胞周期无明显影响。     

硫酸酯化茯苓多糖对胃腺癌细胞MKN-45凋亡的影响

目的 探讨硫酸酯茯苓多糖(S-PCS3-Ⅱ)诱导胃腺癌细胞凋亡的作用。方法 体外培养低分化胃腺癌细胞株MKN-45,加入不同浓度的硫酸酯茯苓多糖作用于MKN-45细胞不同作用时间后,利用细胞形态学、流式细胞术(FCM)、DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙/溴化乙锭双染法、透射电镜等实验方法观察对细胞凋亡的影响。结果 硫酸酯茯苓多糖作用MKN45细胞后,细胞形态学观察见抑制细胞生长,浓度为0.5 g/L的硫酸酯茯苓多糖作用24 h、48 h、72 h后其凋亡率分别为(7.92±0.83)%、(20.68±1.75)%、(37.52±2.47)%,且DNA凝胶电泳出现梯状条带。荧光显微镜和电镜下可见典型的细胞凋亡形态变化。结论 硫酸酯茯苓多糖可诱导胃腺癌细胞凋亡来抑制胃腺癌细胞生长。     

８-溴-７-甲氧基白杨素对人小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的　观察８-溴-７-甲氧基白杨素（ＢｒＭＣｈＲ）对人类小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）细胞株ＮＣＩ Ｈ４４６增殖和凋亡的影响。方法　体外培养ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞,ＭＴＴ比色法测定ＢｒＭＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖的抑制作用,平皿克隆形成法测定ＢｒＭ ＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞集落形成的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳观察ＢｒＭＣｈＲ诱导基因ＤＮＡ梯形条带,流式细胞术（ＦＣＭ）分析ＢｒＭＣｈＲ对ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞周期的影响。结果　ＭＴＴ法显示ＢｒＭＣｈＲ能明显抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖,且呈浓度依赖性;平皿克隆形成法结果显示ＢｒＭＣｈＲ能明显抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞集落的形成;琼脂糖凝胶电泳检测呈现典型“梯形”ＤＮＡ条带;ＦＣＭ结果显示ＢｒＭＣｈＲ将ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞周期阻滞在Ｇ１期。结论　ＢｒＭＣｈＲ具有抑制ＮＣＩ-Ｈ４４６细胞增殖并诱导其凋亡的作用。     

N-磷酰化二肽甲酯诱导K562细胞凋亡

背景与目的：磷被认为是生命代谢过程中的中心元素,许多N-磷酰化氨基酸和N-磷酰化肽具有重要的生物活性和药用价值。本实验研究N-磷酰化二肽甲酯诱导人慢性髓性白血病K562细胞凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑盐还原法[3-（4,5-dimethylthiazo-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT]检测15种N-磷酰化二肽甲酯对K562细胞的增殖抑制作用;用Hoeches33258染色后观察细胞核的形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳,双染法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果：MTT法筛选出细胞增殖抑制活性较好的化合物是（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3,IC50为22.66μmol/L;Hoechst33258染色后细胞核出现明显的凋亡形态学变化;DNA琼脂糖凝胶电泳出现典型的梯状条带;流式细胞仪检测到早期的凋亡细胞。结论：（DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3能够诱导K562细胞凋亡。     

三氧化二砷对神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的：观察三氧化二砷体外对神经母细胞瘤细胞增殖的影响及其作用机制的探讨。方法：（１）ＭＴＴ法观察三氧化二砷对神经母细胞瘤细胞生长的影响;（２）化学染色观察实验和对照组细胞形态学改变;（３）ＰＩ染色后流式细胞仪检测实验和对照组细胞凋亡峰;（４）凝胶电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ的“梯型”条带,结果：（１）三氧化二砷明显抑制神经母细胞瘤细胞株ＳＪ－Ｎ－ＳＨ细胞增殖,抑制作用呈剂量和作用时间依赖性,（２）通过细