转化生长因子β1和α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化模型中肾组织的表达。方法 36只小鼠平均分为假手术组与模型组,术后3、7、14d处死小鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色、免疫组化与RT-PCR检测。结果与假手术组比,模型组TGF-β1及α-SMA表达呈进行性升高,肾间质纤维化程度明显增高(P<0.O1)。结论 TGF-β1及α-SMA在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。     

血小板衍生生长因子及其受体在梗阻性肾病大鼠肾间质中的表达

目的 研究血小板衍生生长因子(PDGF-BB)及受体(PDGFR-β)在单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质中的表达、分布和意义.方法 用免疫组化方法检测UUO大鼠肾间质中PDGF-BB、PDGFR-β和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、分布状况和相关性分析.结果 与假手术组相比,模型组肾间质中PDGF-BB、PDGFR-β和α-SMA的表达水平明显提高(P＜0.05).α-SMA与PDGF-BB、PDGFR-β的表达呈正相关(r1=0.92,P＜0.01,r2=0.98,P＜0.01).结论 PDGF-BB、PDGFR-β参与肾间质纤维化发生、发展,抑制PDGF及其受体的产生是防治肾间质纤维化的新途径.     

活性维生素D3抑制UUO模型大鼠肾间质纤维化作用的研究及其对TGF-β1,α-SMA表达的影响

目的:探讨活性维生素D3对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾小管间质纤维化的抑制作用,研究该病理过程中转化生长因子β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为三组,活性维生素D3组、假手术组、模型组,每组12只。造模后活性维生素D3组给予罗盖全(骨化三醇)灌胃(3ng/100g),假手术组及UUO模型组给予等量生理盐水灌胃。三组大鼠于给药后第14天,28d分批(n=6)处死,留取造模侧肾脏。用HE染色及Masson染色法观察肾小管间质纤维化程度,用免疫组化法测定TGF-β1,α-SMA在各组大鼠造模侧肾脏的表达情况。结果:免疫组织化学显示:UUO模型组大鼠的肾脏组织中TGF-β1及α-SMA的表达显著高于假手术组(P<0.05),而在活性维生素D3治疗组中,TGF-β1及的α-SMA表达低于UUO模型组(P<0.05),肾脏组织形态学显示:模型组肾间质纤维化程度明显高于假手术组,活性维生素D3组肾间质纤维化程度明显小于模型组(P<0.05)。结论:活性维生素D3能有效抑制UUO大鼠肾间质中TGF-β1及α-SMA的表达,从而减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度。     

骨化三醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的观察幼年大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)肾组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)mRNA的表达,探讨骨化三醇对肾小管上皮细胞转分化(EMT)干预效应及机制。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、UUO模型组(B组)及UUO模型干预组(C组)各18只,灌胃满3、7、14d取肾。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组α-SMA、E-Cad、TGF-β1、BMP-7mRNA表达水平。结果与A组相比,B组E-Cad、BMP-7mRNA表达明显下降(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达显著增高(P<0.01);C组与B组相比,E-Cad、BMP-7mRNA表达明显上调(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论骨化三醇对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞转分化有抑制作用,这种抑制作用可能与下调TGF-β的表达及上调BMP-7的表达有关。     

丹参注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护

目的探讨丹参注射液对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。24只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组和丹参组。术后第10天取术侧肾组织做HE,Masson染色及转化生长因子(TGF)β-1,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学检测。结果丹参组显著改善梗阻侧肾组织病理变化,下调TGFβ-1和α-SMA蛋白表达。结论丹参注射液对梗阻性大鼠肾间质纤维化有保护作用。     

大黄酚对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织CTGF、α-SMA和FN的影响

目的探讨大黄酚对大鼠单侧输尿管梗阻模型(UUO)肾间质纤维化的影响。方法 27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄酚组。用单侧输尿管梗阻术建立肾间质纤维化模型,大黄酚治疗14 d后检测血肌酐、尿素氮水平;采用免疫组织化学方法观察肾组织结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的表达情况。结果与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素氮的水平以及CTGF、α-SMA、FN的表达均显著增高。与模型组相比,大黄酚组血肌酐、尿素氮水平降低,CTGF、α-SMA、FN的阳性表达显著下调。结论大黄酚可能通过抑制UUO大鼠肾组织CTGF、α-SMA、FN的表达,从而缓解肾间质纤维化的发生发展。     

黄芪当归合剂对肾间质纤维化的多靶点抑制作用

目的动态观察复方中药黄芪当归合剂(A&A)对肾间质纤维化大鼠的抗纤维化治疗作用,了解A&A在疾病过程中的起效时间及不同阶段的主要作用环节。方法♂W istar大鼠随机分为对照(Control)、假手术(Sham)、单侧输尿管结扎(UUO)和UUO+A&A治疗组(UAA)。在给药(A&A 12 g.kg-1.d-1)后d 0、3、7、10处死动物,观察肾功能变化,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分。采用免疫组化、ELISA和W estern B lot分别分析肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA),转化生长因子β1(TGF-β1),纤粘连蛋白(FN)表达。结果与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾功能受损、病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、α-SMA、FN表达均增高(P<0.01)。A&A治疗后d 3,可观察到其明显减轻UUO大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化(P<0.05),同时可使肾组织中的TGF-β1表达减少(P<0.05),但此时并不影响α-SMA和FN表达。治疗后d 7,A&A的上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的α-SMA表达减少(P<0.05)、FN表达下降(P<0.05)。治疗10 d后,UAA组肾小管萎缩和肾间质纤维化程度、TGF-β1、α-SMA、FN的表达仍较UUO组分别减轻18.95%,28.7%,39.6%,26%。结论在UUO模型中,A&A的肾保护作用从病变早期开始,主要表现为减少炎症细胞反应和TGF-β1表达分泌,随后可减少肾脏固有细胞转化、分化及细胞外基质成分沉积,其作用的高峰时间是在造模后d 3~7,并持续存在至d10,特征是通过减轻肾间质纤维化而改善肾功能。     

TRB3在肾纤维化中的表达及其与上皮-间叶转化的关系

目的研究TRB3与肾纤维化的关系和作用机制。方法结扎♂性C57BL/6小鼠单侧输尿管,建立肾纤维化模型。利用H&E染色和Masson染色确立纤维化病变。在过表达TRB3条件下,利用免疫印迹检测E-cadherin和α-SMA表达改变。在干扰TRB3条件下,利用细胞划痕实验检测细胞迁移。结果肾纤维化模型组TRB3蛋白表达高于假手术组(P<0.01),且与纤维化严重程度正相关。在大鼠肾小管上皮细胞NRK中过表达TRB3,导致E-cadherin表达降低,而α-SMA表达增高。干扰TRB3降低TGF-β1诱导的HepG2细胞迁移。结论 TRB3在纤维化肾脏组织中表达增高。TRB3可能通过诱导上皮-间叶转化在纤维化的进展中发挥促进作用。     

波形蛋白在肾间质纤维化大鼠肾组织中表达趋势及螺内酯干预的研究

目的探讨幼年大鼠单侧输尿管结扎所致肾间质纤维化模型中,波形蛋白和α-SMA的表达趋势及其与肾间质纤维化的相关性,同时观察螺内酯干预治疗后的效果。方法采用单侧输尿管结扎的方法制备肾间质纤维化大鼠模型(UUO模型),将96只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、螺内酯治疗组。造模成功后分别在7、14、21、28d每组各取8只大鼠处死,左肾组织行Masson染色,动态观察各组肾间质损伤程度,并用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法检测各组Vimentin和α-SMA的表达水平。结果 随着时间的推移,模型组和治疗组肾间质损伤程度逐渐增强,但治疗组损伤较模型组轻微,二者的差异有统计学意义(P<0.01);在模型组中,波形蛋白和α-SMA的表达水平随肾间质损伤程度的加重而逐渐增强,波形蛋白各时间点之间差异有统计学意义(P<0.01),肾间质纤维化程度与波形蛋白和α-SMA的表达水平呈正相关(r=0.647,P<0.01);模型组中波形蛋白和α-SMA的表达水平高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论波形蛋白和α-SMA的异常表达可能参与了肾间质纤维化过程;螺内酯在改善肾间质纤维化的过程中起着一定作用,其机制中可能有波形蛋白和α-SMA的参与。     

1,25-二羟维生素D_3对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化调节性T细胞的作用研究

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化调节性T细胞(Treg)的作用。方法:54只健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、UUO组(B组)、1,25(OH)2D3治疗组(C组)。每组于术后第1天、第3天、第7天分批处死6只,留取肾脏组织。用HE染色观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学染色法测定肾脏人叉头框蛋白P3(FOXP3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与假手术组相比,UUO组FOXP3表达水平显著降低,α-SMA表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与UUO组相比,1,25(OH)2D3治疗组FOXP3表达水平显著升高,α-SMA表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:调节性T细胞可能参与了肾间质纤维化的发生及发展;1,25(OH)2D3作为免疫调节剂可通过上调调节性T细胞减缓肾脏纤维化的进展。     

血小板衍生生长因子与CD68在单侧输尿管结扎大鼠肾间质中的表达及意义

目的研究血小板衍生生长因子（PDGF-BB）及CD68（巨噬细胞标志物）阳性细胞在单侧输尿管结扎（UUO）大鼠肾间质中的表达。方法制作大鼠肾间质纤维化模型,于术后第7、14天用免疫组化方法检测肾间质中PDGF-BB、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达及CD68阳性细胞（巨噬细胞）浸润,并进行相关性分析。结果与假手术组比较,模型组肾间质中PDGF-BB、和α-SMA的表达水平明显升高（P〈0.05）,CD68阳性细胞浸润明显增多（P〈0.05）,模型组CD68阳性细胞在第14天时较第7天时减少。α-SMA与PDGF-BBT CD68的表达呈正相关（r1=0.92,P〈0.01,r2=0.98,P〈0.01）。结论PDGF-BB和巨噬细胞参与肾间质纤维化早期改变。     

阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用的实验研究

目的探讨阿魏酸钠对UUO大鼠肾脏保护作用及其可能的机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、阿魏酸钠治疗组,每组20只。术后14 d处死动物并取梗阻侧肾脏,比较病理改变;采用免疫组化法检测3组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达。处死大鼠同时心脏取血,检测3组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平。结果与假手术组比较,模型组TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著升高(P<0.05)。与模型组比较,治疗组血清肌酐、尿素氮及光抑素C水平明显降低(P<0.05);而肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38、α-SMA的表达显著降低(P<0.05)。结论阿魏酸钠可能通过下调肾小管上皮细胞TGF-β1、p-p38及α-SMA的表达,起到延缓肾间质纤维化进程及保护肾功能的作用。     

阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的研究阿魏酸钠（SF）对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用,探讨其抗纤维化作用的可能机制。方法采用单侧输尿管梗阻（UUO）诱导肾间质纤维化的动物模型,以血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）作为阳性对照,将大鼠随机分为假手术组（SHAM组）、模型组（UUO组）、阿魏酸钠组（SF组）、洛汀新组（ACEI组）。术后第9天处死大鼠,肾组织用Masson染色后进行图像分析以评定各组肾小管间质损害程度,免疫组化半定量法检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、肝细胞生长因子（HGF）的表达。结果在肾小管间质损伤指数、α—SMA及HGF的表达方面,UUO组明显高于SHAM组,SF组、ACEI组均明显低于UUO组,且两治疗组间差异无显著性;肾小管间质损伤指数与肾间质的α—SMA、HGF的表达均呈正相关。HGF的表达在SF组和ACEI组较高,与UUO组比较有显著差异。结论在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中,SF的防治作用与ACEI相似,可能是通过减少肾间质肌成纤维细胞（MyoF）的数量、上调HGF的表达,进而减少细胞外基质合成,从而减轻肾间质纤维化。     

MicroRNA-192在UUO幼年大鼠肾间质的表达及雷公藤多苷的干预研究

目的：研究幼年大鼠单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化模型中,MicroRNA-192（miR-192）、Ⅰ型胶原的表达以及用免疫抑制剂雷公藤多苷（TWP）的干预效果。方法选用4~5周龄幼年SD雄性大鼠54只,按随机数字表法均分为3组,假手术组、UUO模型组及TWP治疗组,分别于治疗满3、7、14 d杀鼠取左肾,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法对各组miR-192及Ⅰ型胶原mRNA进行定量检测。结果假手术组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA仅微量表达,各时间点组内比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与假手术组相比, UUO模型组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA表达增加（P＜0．01）,且随着梗阻时间的延长,两者的表达逐渐增强,各时间点组内比较差异有统计学意义（P＜0．01）;与UUO模型组相比,TWP治疗组可以减低miR-192、Ⅰ型胶原mR-NA的表达（P＜0．01）,但仍高于假手术组（P＜0．01）。结论在幼年大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化模型中, miR-192可能起促进作用;雷公藤多苷可有效抑制miR-192、collagenⅠ的表达,改善肾间质纤维化。     

Preventive effects and mechanisms of rhein on renal interstitial fibrosis in obstructive nephropathy

Renal interstitial fibrosis is a common outcome of a variety of chronic renal diseases. Here we evaluated the therapeutic efficacy of rhein on renal interstitial fibrosis induced by unilateral ureteral obstruction (UUO) and investigated the potential mechanisms. Mice underwent UUO, followed by orally administrated rhein (150 mg/kg/d) or control vehicle. Renal interstitial injury and the degree of fibrosis were evaluated by pathological staining and Western blot. The possible mechanisms were studied by Western blot, indirect immune-fluorescence and enzyme-linked immunosorbent assay. Our results showed that rhein therapy markedly ameliorated renal interstitial fibrotic lesions, reduced α-smooth muscle actin (α-SMA) expression, attenuated deposition of fibronectin (FN). Rhein also suppressed transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and its type I receptor expression in obstructed kidneys. In vitro, rhein abolished the α-SMA and fibronectin expression of rat kidney interstitial fibroblasts cells (NRK-49F) induced by TGF-β1. These observations strongly suggest that rhein is a potent inhibitor of renal interstitial fibrosis, and its therapeutic mechanism is, at least in part, blocking interstitial fibroblasts cells activation.