溶血性链球菌菌体制剂肿瘤细胞疫苗对荷瘤小鼠B细胞免疫效应研究

<正>肿瘤的发生发展与机体的免疫系统息息相关,当肿瘤发生以后,机体可针对肿瘤抗原产生特异性的免疫应答,但随着肿瘤的发生发展,机体的免疫功能就受到抑制。本实验试图探究溶血性链球菌菌体制剂(OK-432)肿瘤疫苗对DBA/2荷瘤小鼠B细胞免疫效应,探讨OK-432肿瘤疫苗可能的作用机制。1材料与方法1.1瘤株和实验动物:KLN-205细胞株(DBA/2小鼠来源的肺癌细胞)购自上海爱丁堡生物科技发展有限公司。KLN-205     

OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响

目的利用DBA/2小鼠移植舌癌荷瘤模型,探讨OK-432肿瘤疫苗对DBA/2小鼠脾脏细胞中Th1细胞因子以及TNF-α分泌的影响。方法 ELISA定量检测脾脏淋巴细胞所产生的IFN-γ,IL-2,TNF-α等细胞因子的分泌水平。结果 OK-432肿瘤疫苗组中IFN-γ、IL-2以及TNF-α的含量明显高于实验对照组(P<0.05)。结论 OK-432肿瘤疫苗可刺激荷瘤小鼠脾脏细胞Th1细胞及TNF-α的分泌,增强DBA/2小鼠的抗肿瘤免疫功能。     

OK-432肿瘤细胞疫苗对DBA/2荷瘤小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞免疫效应研究

目的探讨OK-432肿瘤细胞疫苗对DBA/2小鼠CD4+CD25+Treg细胞免疫效应。方法本研究利用7,12-二甲基苯蒽(DMBA)/巴豆油二阶段诱癌法建立DBA/2小鼠皮肤癌荷瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为3组,分别为OK-432疫苗组,OK-432组和空白对照组,各组小鼠于左侧腹腔分别注射浓度为5×105个/100μl的OK-432肿瘤细胞疫苗100μl,0.7 KE/100μl的OK-432 100μl磷酸盐缓冲液(PBS)液100μl,每周注射1次,连续注射3周,比较和分析不同实验组皮肤癌荷瘤小鼠的免疫应答。结果药物末次干预后第1、3、7、14天,OK-432疫苗组和空白对照组相比CD4+CD25+Treg细胞明显降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论本实验证实OK-432肿瘤疫苗能减少CD4+CD25+Treg细胞的含量,可以降低机体免疫抑制功能。     

溶血性链球菌制剂OK-432对二甲基苯丙蒽/巴豆油诱导小鼠皮肤乳头状瘤的预防作用

目的构建二甲基苯丙蒽(DMBA)/巴豆油小鼠皮肤乳头状瘤模型,应用其研究溶血性链球菌制剂OK-432对化学致癌剂的对抗作用。方法雌性DBA/2小鼠40只,随机分为模型组和OK-432组。设计经典的DMBA/巴豆油诱导小鼠皮肤乳头状瘤模型,从肿瘤发生率、每鼠荷瘤数、抑瘤率、肿瘤体积变化和皮肤组织病理切片5方面对2组小鼠进行药效评价,探讨OK-432对皮肤乳头状瘤生成的抑制作用。结果 OK-432组比模型组肿瘤发生时间推迟近2.5周,肿瘤诱生率和每鼠荷瘤数减小,抑瘤率为65.6%,皮肤组织病理切片也有显著差异。结论 OK-432能在一定程度上推迟乳头状瘤的发生时间,减少肿瘤的发生,OK-432有一定的癌症化学预防作用。     

沙培林联合吡柔吡星膀胱灌注与单独灌注预防膀胱癌术后复发疗效对比观察

目的本研究旨在评价联合应用沙培林（OK-432）和吡柔吡星（THP）膀胱腔内灌注及单独应用预防膀胱癌复发的疗效。方法120例膀胱乳头状移行细胞癌患者行经尿道电切术和膀胱部分切除术后,随机分为3组：联合治疗组36例,OK-432组40例,THP组44例。膀胱癌切除术后开始灌注,每周1次,共8周;以后每月1次,随访18个月。每3个月复查1次膀胱镜和尿细胞学检查。结果联合应用组无复发,OK-432组3例复发,复发率7.50%（3/40）,THP组4例复发、复发率9.09%（4/44）。各组间比较：OK-432组与THP组间差异无显著意义（P〉0.05）;但二者与联合组比较,组间差异有统计学意义（P〈0.05）。三组均无严重不良反应和并发症。结论联合应用OK-432、吡柔吡星疗效优于单独应用,预防复发疗效好,不良反应不明显,有较高临床应用价值。     

OK-432活化的巨噬细胞对小鼠MM2肿瘤细胞系的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性

链球菌制剂OK-432是抗肿瘤的免疫佐剂,Ishii和Hojo等曾先后报道OK-432激活的大鼠巨噬细胞介导的细胞毒性在体内、外均能抑制肿瘤生长.本文介绍了OK-432在接种MM2乳癌细胞的小鼠中所诱生的腹腔渗出细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用.作者用7～9周龄雌性C3H/He小鼠腹腔注射OK-432 4天以后获得腹腔渗出细胞,然后加入经OK-432处理存活60天以上、并能耐受MM2乳癌细胞再攻击的无肿瘤C3H/He小鼠的抗血清,最后再加2×10~5细胞/ml的~(51)Cr标记的MM2乳癌细胞,共同培养于37℃     

线形程序性坏死在不同肿瘤局部微环境中分布的初步观察

目的:观察肿瘤局部微环境对肿瘤细胞发生线形程序性坏死(LPPCN)的影响.方法:C57BL小鼠9只,结扎小鼠左后肢股动脉,注射B16单细胞悬液于左后肢(缺血组)和右后肢(对照组),构建B16F10小鼠黑色素瘤后肢缺血模型;C57BL小鼠10只,注射B16单细胞悬液于小鼠腹腔(腹腔组)和左后肢(后肢组),构建小鼠黑色素瘤生物力学模型;HE切片观察不同组间LPPCN分布的差别;免疫组织化学染色检测肿瘤组织基质金属蛋门酶(MMP)-2、MMP-9的表达.结果:LPPCN细胞百分率比较,缺血组高于对照组,后肢组高于腹腔组,差异均有统计学意义(均P＜0.01);MMP-2、MMP-9阳性细胞百分率比较,缺血组高于对照组,后肢组高于腹腔组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论:肿瘤局部缺氧和压力变化可以上调MMP-2、MMP-9的表达并诱导肿瘤细胞发生LPPCN.     

刀豆素A增强肿瘤疫苗的免疫原性及放大细胞的产生

目前,已建立许多实验室方法(包括化学及酶改变肿瘤细胞表面或肿瘤细胞与蛋白载体结合)提高肿瘤细胞的免疫原性,以期获得实验或临床用肿瘤疫苗。本文作者采用不同的方法处理带瘤(L1210)DBA/2Cr小鼠腹水细胞,制备肿瘤疫苗(L1210疫苗),并以BALB/c×DBA/2Cr杂交第一代成年雄性小鼠为对象,观察不同方法制备的L1210疫苗免疫原性。     

重组CEA和IL-2抗肿瘤基因疫苗的构建及其抗肿瘤作用研究

目的成功构建重细CEA、CEA／IL-2抗肿瘤基因疫苗,并检测其激活的淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。方法将CEA、CEA／IL-2基因导入真核表达质粒pcDNA3．1,并转染入DC细胞,通过转染DC细胞活化淋巴细胞,将活化的淋巴细胞与人CEA＋肝癌细胞共培养,检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。结果重组CEA、CEA／IL-2组均检测出较强的抗肿瘤效应,且重组CEA／IL-2组与重组CEA组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论联合CEA／IL-2基因疫苗具有抗肿瘤作用,且其抗肿瘤作用明显优于单基因CEA基因疫苗,证实了重组肿瘤基因疫苗对肿瘤细胞的杀伤作用。     

IL-18对胶质瘤大鼠肿瘤组织中CD80、CD86及MHCⅠ类分子、Ⅱ类分子的影响

目的 观察转染IL-18基因的大鼠胶质瘤细胞疫苗9L/IL-18对大鼠胶质瘤肿瘤组织中CD80、CD86及MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子的影响,探讨IL-18在胶质瘤中的抗肿瘤作用.方法 F344大鼠随机分为3组,每组7只,分别接种9L/IL-18、9L/LXSN和9L细胞,流式细胞术检测CD80、CD86、MHCⅠ类分子、MHCⅡ类分子在肿瘤组织中的表达.结果 CD80、CD86、MHCⅠ类分子在接种9L/IL-18细胞组大鼠的肿瘤组织中的表达均明显高于接种9L/LXSN细胞组和接种9L细胞组大鼠的肿瘤组织中的表达,差异均有统计学意义(P<0殚.05);CD80、CD86、MHCⅠ类分子在接种9L/LXSN细胞组和接种9L细胞组大鼠的肿瘤组织中的表达,差异无统计学意义(P>0.05);MHCⅡ类分子在3组中的表达,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-18通过促进肿瘤细胞表面CD80、CD86、MHCⅠ类分子的表达,促进树突状细胞分化成熟,进而激活T细胞,增强肿瘤细胞的抗原活性,提高免疫系统的监视功能,发挥抗肿瘤作用.     

Activation of macrophage function by intraperitoneal administration of the streptococcal antitumor agent OK-432

Motility, adhesiveness, IL1 production, and inhibition of tumor cell growth in vitro were examined in murine peritoneal macrophages obtained after intraperitoneal injection of a streptococcal preparation OK-432, heat-inactivated OK-432 (HI-OK-432), and thioglycollate medium (TG). By varying the interval between intraperitoneal injection of OK-432 and the harvest of peritoneal macrophages, it was found that OK-432 induced a time-dependent multi-step alteration of these properties: step I increased motility on day 1: step II increased adhesiveness on day 2; and step II increased inhibition of tumor cell growth and IL1 production. During step III, the peritoneal macrophage population, including Ia-bearing cells, increased dramatically in the peritoneal cavities of OK-432-treated mice. In contrast, injection of either HI-OK-432 or TG, which lack antitumor activity in vivo, initiated steps I and II, but not step III. The Ia-bearing macrophages induced by OK-432 showed high ability of IL1 production, but low growth inhibitory activity against tumor cells. Based on these results, OK-432 seems to be performing a dual function: eliciting a new population of macrophages to the site of injection (heat stable function), and inducing two different populations of antitumor macrophages and Ia-bearing macrophages (heat unstable function).     

OK-432联合IL-2对C57BL/6小鼠Lewis肺癌抑制的实验研究

目的 研究ＯＫ－４３２与ＩＬ－２联用,抑制近交系小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｌｅｗｉｓ肺癌的作用。方法 Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌为模型,观察ＯＫ－４３２联合ＩＬ－２对肿瘤发生、生长、转移的影响,及体内对肿瘤细胞的作用。结果 二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强（Ｐ〈０．０１）,增强抑瘤率（Ｐ〈０．０５）,肺转移灶的数目明显减少。光镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞;肿瘤组织电镜观察,瘤细胞核染色     

白藜芦醇对小鼠移植宫颈癌生长及HIF-1α、VEGF表达的影响

目的 探讨白藜芦醇（Res）对小鼠宫颈癌细胞株U14移植瘤的抑制作用及其相关机制.方法 构建615近交系小鼠U14移植瘤动物模型,并随机分为对照组、Res组、顺铂组,每组10只,给予相应药物干预,接种后第26天处死全部小鼠,检测肿瘤体积及重量,计算抑瘤率,通过免疫组织化学染色法检测肿瘤组织微血管密度（MVD）,采用荧光实时定量PCR和Western blotting分析肿瘤组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA及蛋白表达水平.结果 Res组和顺铂组抑瘤率分别为50.46％、57.19％; Res组和顺铂组肿瘤体积、肿瘤质量较对照组显著降低（P＜0.01）;与对照组比较,Res组和顺铂组HIF-1α、VEGF mRNA与蛋白表达水平及MVD明显降低,差异有统计学意义（P＜O.01）,但Res组与顺铂组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 Res通过下调HIF-1α、VEGF表达抑制小鼠宫颈癌的生长.     

Involvement of nitric oxide in anti-tumor effects of OK-432, a streptococcal anti-tumor immunotherapeutic agent

We examined the role of nitric oxide (NO) induced by OK-432, a streptococcal immunotherapeutic agent, in anti-tumor effects of the OK-432 by in vitro and in vivo experiments using an NO synthase inhibitor, N-monomethyl-l-arginine acetate (NMA). The in vitro treatment of mouse splenocytes with OK-432 increased the expression of inducible NO synthase (iNOS) gene and NO production in a dose-dependent manner. Although it is well known that OK-432 induces cytokines such as interferon (IFN)-gamma and tumor necrosis factor (TNF)-alpha, both of which are known to be potent NO inducers, we observed only a partial reduction of OK-432-induced NO production with the addition of anti-IFN-gamma and/or anti-TNF-alpha neutralizing antibodies. The cytotoxicity of the splenocytes increased by in vitro OK-432 stimulation was almost completely inhibited by the treatment with NMA. OK-432 administration resulted in a marked prolongation of survival and a significant inhibition of tumor growth in syngeneic tumor-bearing mice, whereas NMA significantly inhibited the anti-tumor effects of OK-432. Although the increased cytotoxicity of adherent splenocytes derived from OK-432-treated tumor-bearing mice was almost completely inhibited by NMA, only partial inhibition by NMA was observed in the cytotoxicity of the nonadherent splenocytes. These findings strongly suggest that the iNOS/NO induced by OK-432 is intimately involved in the anti-tumor effects of OK-432.     

血管生成抑制剂联合分化诱导剂治疗结肠癌的实验研究

目的通过建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,研究血管生成抑制剂（TNP-470）联合分化诱导剂（RA）抗结肠癌生长的效应,二者是否具有协同效果。方法建立人LOVO细胞结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,模型建立后分组治疗,按治疗方式分为对照组、TNP-470组、RA组和联合组（TNP-470＋RA）至治疗结束时处死裸鼠,测量皮下移植瘤重量,计算抑瘤率;检测肿瘤组织结肠癌细胞凋亡指数（AI）。结果裸鼠皮下移植瘤瘤重、抑瘤率,联合组和对照组及TNP-470组、RA组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,且TNP-470组、RA组和对照组之间差异亦有统计学意义（P〈0.05）。治疗组与对照组癌细胞AI比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;且联合组与RA组和TNP-470组癌细胞的AI比较,差异也有统计学意义（P〈0.05）。结论血管生成抑制剂TNP-470与分化诱导剂RA联合治疗结肠癌裸鼠皮下移植瘤比TNP-470或RA单药治疗具有更强的抑瘤作用,TNP-470通过抑制肿瘤血管生成,切断肿瘤细胞的血供和营养供给,抑制结肠癌裸鼠皮下移植瘤的生长;而RA通过诱导肿瘤细胞凋亡,降低VEGF的表达抑制肿瘤的生长,二者联和应用,抗肿瘤效应明显增强。     

马钱子碱对裸鼠乳腺癌骨转移的抑制作用

目的观察马钱子碱对裸鼠乳腺癌骨转移的抑制作用。方法复制乳腺癌MDA-MB-231骨转移裸鼠模型,20只荷瘤裸鼠随机分为4组：马钱子碱高剂量组（A）、中剂量组（B）、低剂量组（C）和对照组（D）,分别予6.90、3.45、1.73 mg.kg-1和生理盐水,腹腔注射。观察各组裸鼠生存状态和肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,评价抑瘤率;病理切片观察肿瘤细胞形态和骨转移情况。结果马钱子碱处理组（A、B、C）与对照组（D）相比,裸鼠生存状态良好,肿瘤生长受到抑制,各组的抑瘤率分别为A组61.4%、B组50.5%、C组17.5%（P〈0.05）。结论马钱子碱对乳腺癌骨转移的生长有抑制作用,值得进一步研究其作用机制。     

抗人CD147单克隆抗体对人肝癌细胞MHCC97-H裸鼠肝脏原位移植瘤生长抑制的实验研究

目的：研究抗人CD147单克隆抗体（mAb）对荷人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。方法：建立BALB/c裸鼠肝脏原位移植MHCC97-H人高转移肝癌模型,随机分为4组,每组8只,于裸鼠尾静脉注射给药。抗CD147mAb组：给药量每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日。AMD组：每千克体重20 mg,每日1次,第1、8日。抗CD147mAb＋AMD组：抗CD147mAb每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日;AMD每千克体重20 mg,第1日给药。对照组：给予0.2 mL 0.9%的氯化钠注射液,连续给药8日,每日1次。第30日处死裸鼠,测量原位移植瘤体积;做常规病理切片观察、免疫组织化学染色以及凋亡指数检测。结果：CD147mAb组对肝脏原位荷瘤生长具有抑制作用,抑瘤率达34.1%。对照组与CD147mAb组（P=0.001 1）、AMD组（P〈0.000 1）、CD147mAb＋AMD（P〈0.000 1）间存在明显差异。CD147mAb组癌细胞凋亡指数与对照组相比有显著性差异（P=0.004 2,P〈0.01）。CD147mAb组、AMD组及CD147mAb＋AMD组的PCNA阳性细胞数及反应强度均较对照组减弱。结论：抗人CD147 mAb对肝癌生长的抑制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡、抑制癌细胞增殖实现的。     

血管内皮生长因子受体-1抗体对人喉鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)抗体对人喉鳞癌细胞(Hep-2)裸鼠移植瘤模型的影响。方法利用Hep-2细胞建立裸鼠喉癌模型。20只裸鼠成瘤后分别皮下注射VEGFR-1抗体和生理盐水0.2ml,用药15d后观察肿瘤体积及质量,计算抑瘤率;光镜观察移植瘤的形态学变化;进行肿瘤微血管计数;流式细胞仪检测瘤细胞凋亡情况。结果治疗组与生理盐水组移植瘤体积和质量差异有统计学意义(t体积=-5.058,P<0.001;t′重量=-3.4,P=0.003)。VEGFR-1抗体抑瘤率为49.88%,微血管密度(MVD)治疗组为6±4,对照组为13±8(t=2.486,P=0.023)。治疗组与对照组瘤细胞凋亡率分别为(23±4)%,(10±4)%。两组比较差异有统计学意义(t=8.222,P<0.001)。结论VEGFR-1抗体可以导致肿瘤血管生成减少,并抑制裸鼠Hep-2移植瘤的生长,其作用机制可能与VEGFR-1作用位点的封闭和瘤细胞的凋亡增加有关。