Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中甲基化的研究

目的:检测Oct-4在小鼠精原干细胞(Spermatogonial Stem Cells,SSCs)诱导分化前后的表达及甲基化状态。方法:体外分离培养小鼠SSCs,用干细胞因子(stem cell factor,SCF)诱导其向精母细胞方向分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测Oct-4在小鼠SSCs诱导分化前后的表达;运用甲基化特异性PCR检测Oct-4在小鼠SSCs诱导分化前和分化后2d的甲基化状态。结果:间接免疫荧光染色和RT-PCR显示,Oct-4在小鼠SSCs诱导前有表达,诱导2d后表达下降;甲基化特异性PCR显示,Oct-4在小鼠SSCs诱导前未发生甲基化改变,诱导2d后检测到其甲基化状态。结论:Oct-4基因在小鼠SSCs定向诱导分化中的表达下调可能是其启动子区CpG岛甲基化的缘故。     

新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细胞

目的 探讨小鼠精原干细胞体外诱导分化精子样细胞的可行性.方法 以7～8日龄小鼠睾丸为材料,采用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层,应用维甲酸诱导、成年小鼠睾丸组织液诱导以及低温诱导精原干细胞分化,应用流式细胞仪分析诱导精子样细胞的染色体倍性.采用显微注射法将精子样细胞注射到卵母细胞和去核卵母细胞,观察受精卵的发育状况.结果 三种方法诱导精子样细胞比例分别为5.9%、1.6%、0.35%;流式细胞仪分析维甲酸诱导单倍体比率为19.3%;诱导精子样细胞能激活卵母细胞,囊胚发育率20.36%.结论 新生小鼠精原干细胞体外可以诱导分化为精子样细胞,并具有激活卵母细胞的能力.     

Oct-4在骨髓基质细胞定向诱导分化中表观遗传学研究

目的检测Oct-4基因在BMSCs定向诱导分化中表观遗传学变化(即甲基化变化)。方法体外分离培养小鼠BMSCs,用成骨诱导剂(地塞米松,维生素C和β-甘油磷酸钠)诱导其向成骨细胞分化,通过间接免疫荧光染色和RT-PCR,检测OCT-4在小鼠BMSCs诱导分化前后的表达;运用甲基化特异性PCR检测Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前和分化后10 d的甲基化变化。结果 Oct-4在小鼠BM-SCs诱导前有表达,诱导10 d后表达下降;Oct-4在小鼠BMSCs诱导前未发生甲基化改变,诱导10 d后检测到其甲基化状态。结论 Oct-4在小鼠BMSCs诱导分化前后有甲基化状态的改变,且甲基化水平与表达呈负相关,提示Oct-4基因在小鼠BMSCs定向诱导分化中的表达下调可能是由于其启动子区高度甲基化的缘故。     

肺癌干细胞基因Oct-4表达的临床意义

目的研究肺癌干细胞的基因表达与临床特征、病理特征、预后间的关系。方法应用流式细胞仪分选出肺癌干细胞,并应用RT^2 Profiler TMPCR仪检测肺癌干细胞与非肺癌干细胞问的差异性基因表达。应用免疫组化分析十细胞基凶Octamer-4（Oct-4）的表达与临床病理特征之间的关系。应用Western—blot检测肺癌干细胞中Oct-4蛋白的表达情况。结果肺癌干细胞与非肺癌干细胞间显著差异性表达的基因共7种,包括干细胞分化相关因子（CD44、Oct-4和nestin）、细胞周期调节因子（APC和CDC2）以及生长因子（HGF和TGF）。其中,Oct-4蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P=0．001）。经过生存分析,Oct-4蛋白高表达病例的术后无病生存期明显短于Oct-4低表达或无表达的病例（P=0．001）。在Cox回归模型中,肿瘤大小、淋巴结转移和Oct-4的表达为独立预后网子（分别为P=0．031、0．002和0．003）。结论Oct-4在肺癌干细胞中高表达,并可作为肺癌发生、进展及分化的潜在生物标志。     

精原干细胞体外非分化扩增的初步研究

目的探讨精原干细胞体外非分化性扩增的影响因素。方法采用昆明系小白鼠骨髓基质细胞原代培养,待细胞长成单层后经丝裂霉素C处理,作为精原干细胞培养的饲养层,细胞在37℃环境下培养。结果接种后2～4d,精原干细胞数明显增加,细胞单个、成双或成群,非精原干细胞开始出现崩解死亡;接种4～8d,精原干细胞增殖不明显,处于相对静止期;接种10d后,又开始出现明显的分裂增殖,15d已具有精原干细胞特征,继续培养25d,细胞形态未见明显改变,胞质桥仍明显。结论精原干细胞能在37℃环境温度下,在以骨髓基质饲养层上保持良好非分化性扩增。     

GDNF和SCF促进小鼠精原干细胞增殖与分化的研究

目的 探讨小鼠精原干细胞增殖和分化体外控制的可行性.方法 采取7～8日龄雄性小鼠睾丸,分离纯化精原干细胞接种在添加神经营养因子的培养基内进行增殖培养,7 d后更换添加干细胞生长因子的培养基.结果 SSCs接种于Sertoli细胞饲养层上4 d后,出现了增殖现象,可见增殖产生SSCs克隆,AKP染色阳性,β1整合素免疫细胞化学染色阳性,RT-PCR扩增出长度约为120 bp的Oct-4和280 bp的c-kit条带.结论 小鼠精原干细胞在添加50 ng/mL GDNF的培养基内培养7 d后更换添加10 ng/mL SCF的培养基可以实现小鼠SSCs从增殖到分化的转变.     

FAAH在小鼠精原干细胞中的表达研究

目的:验证脂肪酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase,FAAH)在小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSCs)中的表达?方法:构建稳定的小鼠SSCs培养平台,Western blot法检测FAAH在小鼠各组织脏器和SSCs的表达,免疫荧光法检测FAAH在睾丸组织及SSCs中的定位情况?结果:Western blot结果表明FAAH在睾丸组织高表达?免疫荧光显示FAAH定位于小鼠SSCs的细胞膜并且与已知的分选标记神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)家族受体α1(GDNF family receptor alpha-1,GFRα1)共定位?结论:FAAH可作为一个新的SSCs分选富集的表面分子标记,为进一步研究FAAH在精子发生的作用打下基础?     

Oct-4在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的 分析Oct-4在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达特点及规律,探讨Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的意义及其与肿瘤干细胞的关系.方法 采用免疫组化SP法检测Oct-4蛋白在135例NSCLC组织和20例正常对照肺组织中的表达情况.结果 NSCLC组织中Oct-4表达的阳性率明显高于正常对照肺组织,二者之间的差异具有显著性（P＜0.05）.Oct-4表达的阳性率与NSCLC患者的临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关（P〈0.01）,而与患者的性别、年龄及NSCLC的组织学类型无关（P＞0.05）.结论 Oct-4的表达与NSCLC的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关,提示Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的可能具有一定的意义,表达Oct-4的肿瘤细胞很可能是肿瘤干细胞,推测Oct-4有可能成为分离和鉴定NSCLC肿瘤干细胞的标志物.     

Oct-4和Nestin在肺癌中共表达的临床意义

目的研究Oct-4和Nestin共表达在肺癌中的临床意义。方法收集320例确诊肺癌患者的肿瘤组织标本,采用PCR和免疫组织化学法检测肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中干细胞相关基因的表达差异。结果体外实验显示,与非肿瘤干细胞相比,肿瘤干细胞,尤其是高表达Oct-4和Nestin的肿瘤干细胞致瘤性明显增强。更重要的是,320例中的42例（13.13%）肿瘤组织呈Oct-4和Nestin表达阳性。单因素分析和多因素分析提示,Oct-4和Nestin的表达与起病年龄、淋巴结转移情况密切相关（P〈0.05）。结论 Oct-4和Nestin在肺癌的发展中起到重要的调节作用,Oct-4和Nestin或许可作为判断肺癌预后的重要指标。     

精原干细胞的研究进展

精原干细胞(sperm atogon ial stem cells)是一群具有高度自我更新能力和多向分化潜能的细胞,它能向子代传递遗传信息,是男性成体内唯一可复制的双倍体细胞。精原干细胞在医学、生物工程学、遗传、转基因研究等方面有着广阔的应用前景。现将近年来精原干细胞的研究成果综述如下     

转录因子Oct-4的研究进展

Oct-4是维持干细胞多能性和自我更新的转录因子,它通过结合靶基因调控区,选择性地抑制分化基因表达或促进多能性基因表达。通常只在多能干细胞中表达,在分化细胞中不表达;它最终决定干细胞是保持多能性还是分化,以及向哪个方向分化。此外,Oct-4在生殖细胞肿瘤研究中也发挥重要作用。     

转录因子Oct-4在皮肤鳞状细胞癌、脂溢性角化病的组织表达及其意义

目的检测干细胞转录因子Oct-4皮肤鳞状细胞癌(SCC)、脂溢性角化病(SK)的组织表达,分析其表达差异及与肿瘤干细胞的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Oct-4在35例SCC、21例SK及15例正常对照皮肤组织中的表达。结果 Oct-4在正常皮肤组织表达为阴性,在SCC、SK之间表达有显著性差异(P<0.05),间接反映SCC、SK的恶性程度不同。结论 SCC、SK中表达Oct-4基因的细胞很可能是SCC、SK的干细胞,这将为其最终分离和鉴定人SCC、SK干细胞提供重要基础,将有助于揭示SCC、SK的肿瘤起始细胞,从而对预防和治疗SCC、SK有重大意义。     

Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的研究干细胞相关标志物Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义。方法收集1996年6月-2006年3月胃癌手术石蜡标本63例,免疫组化法检测组织中Oct-4表达,分别以58例癌旁正常组织和10例正常胃黏膜组织标本作为对照。回顾63例患者的临床病理学指标,并分析各项指标与Oct-4表达的关系。对63例中的50例患者进行为期8年的生存随访,Kaplan—Meier法和Log-rank检验分析Oct-4表达与患者生存的关系;构建Cox回归模型,评估Oct-4作为胃癌患者预后的独立影响因素的可能性。结果Oct-4在胃癌组织中阳性表达率为80．95％（51／63）,显著高于癌旁正常组织的5．2％（3／58）和正常胃黏膜组织（0）（P〈0．01）。Oct-4表达的阳性程度与胃癌的临床分期呈正相关（P〈0．01）。Oct-4表达在不同分化程度胃癌组织及不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。Oct-4表达阳性程度高的患者生存时间明显短于Oct-4表达阳性程度低的患者（P〈0．05）。Oct-4表达水平与胃癌患者预后无明显相关性（RR0．554,95％C10．209～1．466）。结论Oct-4在胃癌组织中表达的阳性程度与肿瘤临床分期及患者生存期有关,但不是胃癌患者预后的独立影响因素。     

Molecular Cloning, Expression and Subcellular Localization of Human Oct-4 Protein

Molecular Cloning, Expression and Subcellular Localization of Human Oct-4 Protein     

Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 研究干细胞相关标志物Oct-4在胃癌组织中的表达及临床意义.方法 收集1996年6月～2006年3月胃癌手术石蜡标本63例,免疫组化法检测组织中Oct-4表达,分别以58例癌旁正常组织和10例正常胃黏膜组织标本作为对照.回顾63例患者的临床病理学指标,并分析各项指标与Oct-4表达的关系.对63例中的50例患者进行为期8年的生存随访,Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析Oct-4表达与患者生存的关系;构建Cox回归模型,评估Oct-4作为胃癌患者预后的独立影响因素的可能性.结果 Oct-4在胃癌组织中阳性表达率为80.95%(51/63),显著高于癌旁正常组织的5.2%(3/58)和正常胃黏膜组织(0)(P<0.01).Oct-4表达的阳性程度与胃癌的临床分期呈正相关(P<0.01).Oct-4表达在不同分化程度胃癌组织及不同年龄和性别患者间比较,差异无统计学意义(P>0.05).Oct-4表达阳性程度高的患者生存时间明显短于Oct-4表达阳性程度低的患者(P<0.05).Oct-4表达水平与胃癌患者预后无明显相关性(RR 0.554,95% CI 0.209～1.466).结论 Oct-4在胃癌组织中表达的阳性程度与肿瘤临床分期及患者生存期有关,但不是胃癌患者预后的独立影响因素.     

在大鼠牙髓炎中的八聚体结合转录因子4B免疫组化研究

目的研究内毒素(LPS)诱导大鼠牙髓炎模型中八聚体结合转录因子4B(Oct-4B)在不同时间的表达特点及定位情况,以探讨Oct-4B在牙髓炎症中的可能作用,推测它在牙髓炎发生、发展中的意义.方法通过对LPS诱导的大鼠磨牙牙髓炎进行连续组织切片,同时采用免疫组织化学检测大鼠牙髓炎中Oct-4B的表达情况.结果 1 d组:成牙本质细胞呈中度阳性表达,牙髓成纤维细胞为中度至强阳性表达;3、5、7 d组:成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞阳性表达减弱.2周组:坏死区扩大呈均质弱阳性表达,成牙本质细胞、牙髓成维维细胞及内皮细胞减少,呈阳性,修复牙本质呈弱阳性表达;3周组:大部分坏死牙髓组织呈均质弱阳性表达.结论 Oct-4B在大鼠牙髓炎发生、发展呈动态表达,Oct-4B可能参与调节牙髓炎发生、发展及修复过程.