丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166。丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%。结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞。     

ATRA、bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的：体外探讨ATRA和bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞作用。方法：采用Ficoll-paque(1.077g/ml)分离液从骨髓分离出人骨髓间充质干细胞，体外扩增，以bFGF/ATRA为诱导剂，再加入BME、BHA、DMSO，诱导期间观察细胞形态、数目的变化，并通过免疫细胞化学鉴定神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白的表达情况。结果：免疫细胞化学显示在此诱导条件下80％的细胞表达NSE，86％的细胞表达NF-M。结论：ATRA和bFGF能诱导MSCs分化为神经元样细胞，而且具有比其他作者报道的更高的阳性转化率。     

促大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的研究

目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经丝蛋白（NF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经巢蛋白（Nestin）的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）所获得的神经元样细胞诱导率高（49.7%）。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

ATRA、bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的 :体外探讨ATRA和bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞作用。方法 :采用Ficoll paque(1 0 77g/ml)分离液从骨髓分离出人骨髓间充质干细胞 ,体外扩增 ,以bFGF/ATRA为诱导剂 ,再加入BME、BHA、DMSO ,诱导期间观察细胞形态、数目的变化 ,并通过免疫细胞化学鉴定神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白的表达情况。结果 :免疫细胞化学显示在此诱导条件下 80 %的细胞表达NSE ,86 %的细胞表达NF M。结论 :ATRA和bFGF能诱导MSCs分化为神经元样细胞 ,而且具有比其他作者报道的更高的阳性转化率     

鹿茸精诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的:探讨鹿茸精体外定向诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。方法:通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增培养。鹿茸精定向诱导分化为类神经元样细胞。光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增。鹿茸精诱导3小时后大部分骨髓间充质干细胞转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性。结论:鹿茸精可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。     

骨髓基质干细胞分化为神经元样细胞迁移能力变化的研究

目的研究体外定向诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞的方法,探讨其分化后迁移能力变化的分子机制。方法体外培养BMSCs,以β-巯基乙醇(BME)1 mmol·L-1诱导分化,于诱导后12 h、24 h分别观察细胞形态变化,RT-PCR鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(Neurofilament)、胶质纤维酸性蛋白(β-tubulinⅢ)mRNA的变化。Western blot检测CXCR4表达变化,细胞迁移实验检测BMSCs诱导前后迁移能力的变化。结果诱导后,BMSCs胞体收缩,突起伸出;RT-PCR发现诱导出的神经元样细胞的NSE、Neurofilament、β-tubulinⅢmRNA明显增加;Western blot结果表明神经元样细胞表面CXCR4的表达明显增加,细胞迁移实验发现神经元样细胞向SDF-1α的迁移能力明显增加。用CXCR4特异的抑制剂AMD3100处理后细胞迁移被明显抑制。结论在体外骨髓基质干细胞以BME为诱导剂可定向分化为神经元样细胞,且发现其迁移能力明显增加,其机制可能与其表面CXCR4表达上调有关。     

源于骨髓间充质干细胞的神经元存活与c-myc

目的：探讨源于骨髓问充质干细胞的神经元的存活与原癌基因蛋白c-myc的关系。方法：从成年大鼠骨髓分离、扩增rMSCs至6代。给予不同的诱导条件,采用免疫组化方法观察神经分化过程中神经特异抗原和c-myc蛋白的表达,并计算分化率。结果：在不同的分化诱导条件下,MSCs呈现典型的神经元形态。加入MNM组分化率高于对照组。分化后4～36h,可检测到c-myc蛋白的持续表达。结论：c-myc在MSCs向神经元分化过程中有重要作用。     

鼠神经生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的:观察鼠神经生长因子(mNGF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞分化的影响。方法:4周龄健康SD大鼠60只,按随机数字表法分为治疗组(n=30)和正常对照组(n=30)。治疗组在常规培养的基础上加入浓度为0.1μg/mL mNGF作为诱导液。将培养的第3代BMSCs制成单细胞悬液,诱导后3d,观察细胞形态变化,行神经元特异性烯醇酶(NSE)免疫荧光检测,计算阳性率。结果:正常对照组细胞仅有少量NSE的表达,治疗组细胞表达NSE阳性率较对照组细胞显著增加(P<0.01)。结论:mNGF可诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化。     

人骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

目的：研究人骨髓间充质干细胞（hMSCs）在体外分离纯化、培养扩增和向心肌样细胞诱导分化的条件。方法：体外分离培养hMSCs,纯化传代至第三、四代,加入不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）进行不同时间的孵育,用MTT测定细胞的生长活性,确定最佳的浓度和孵育时间。4周后行电镜,免疫组化染色及逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测。结果：诱导后细胞呈心肌样细胞改变,电镜下可见肌丝形成,免疫组化显示部分细胞胞浆α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）、肌钙蛋白-T（troponin-T）阳性。RT-PCR检测显示心肌特异转录因子GATA-4、Nkx2.5有表达。结论：hMSCs是骨髓来源的具有多向分化潜能的干细胞,在5-Aza的诱导下可向心肌样细胞分化,可成为心肌损伤移植治疗的理想细胞材料。     

体外骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

近年来研究结果表明骨髓间充质干细胞（BMSCs）可以分化成神经细胞,以及其来源丰富、取材时组织创伤性较小、低免疫排斥反应、不存在伦理道德以及法律上的限制等优势。BMSCs有望成为神经细胞移植的种子细胞来治疗神经系统疾病。     

骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞的分化及移植后的分布情况

目的:探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分化情况及移植后的分布情况。方法:体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠新生鼠BMSCs,记录BMSCs的增殖情况并进行鉴定;将分离的BM SCs悬液经玻璃体腔注入大鼠视网膜下腔。术后15d处死大鼠,取新鲜眼球,连续冰冻切片,经B rdU单抗、FITC标记二抗和Rhodops in单抗、Cy3标记二抗免疫荧光双重标记后,荧光显微镜下观察。结果:体外培养获得了较纯的BMSCs,荧光显微镜下可见移植后的MSCs主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层。结论:移植15d后BMSCs可在视网膜下腔存活,主要分布于视网膜色素上皮层和视锥、视杆细胞层。     

自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞

目的 探讨自体脑脊液定向诱导骨髓间充质干细胞分化为神经干细胞的可行性.方法 采用自体脑脊液为诱导剂,体外诱导骨髓源性间充质干细胞.从形态学、免疫组化法、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对诱导后细胞进行鉴定.结果 自体脑脊液诱导后的间充质干细胞呈现神经干细胞改变,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并表现相应的特征结构和生物学特性.结论 白体脑脊液能定向诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞转化.     

全反式维甲酸联合细胞因子诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的 探索全反式维甲酸(ATRA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)在诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞过程中的作用.方法 应用Ficoll分离骨髓中单核细胞,贴壁培养,观测形态并用流式细胞仪检测其细胞表面标志;用含ATRA、bFGF、EGF的条件培养基对培养的细胞向神经细胞诱导分化;采用免疫荧光染色法对分化的细胞进行鉴定.结果 分离培养的贴壁细胞具有典型的BMSCs形态和细胞表面标志,诱导后细胞表达神经元和星形胶质细胞标志神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP) .结论 ATRA联合细胞因子具有诱导BMSCs在体外分化为神经元样细胞的能力.     

骨髓间充质干细胞的研究及进展

间充质干细胞(MSCs)是中胚层来源具有多向分化能力的干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，在一定的诱导条件下能分化为成骨细胞、成软骨细胞、神经细胞、骨骼肌细胞及心肌细胞。因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，也称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位(CFU—F)、骨髓基质细胞(MSC)或间充质干细胞或间充质祖细胞(MPC)。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓MSCs。     

骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度变化的研究

目的观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度的变化。方法分离纯化SD大鼠MSCs进行传代培养,传至第5代时,按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,采用免疫组化和Realtime PCR技术检测诱导前后GAP-43、NSE、NF和Nestin的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化。结果诱导后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高(P<0.05),但GAP-43、NSE、NF和Nestin基因表达改变不显著(P>0.05),更换诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min时细胞荧光强度仍高于诱导前。结论 MSCs诱导分化为神经元样细胞后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高,但基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控,游离钙离子可能对诱导分化有促进作用。     

骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死的研究进展

<正>心肌梗死(myocardial infarction,MI)是指心肌的缺血性坏死,已成为当今社会严重威胁人类健康的疾病之一。尽管临床上保守的药物治疗、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)和外科冠状动脉旁路移植手术等治疗方法的不断提高,但都无法逆转梗死期坏的心肌坏死。     

丹参水煎液对BMSCs分化为神经元样细胞的诱导作用研究

目的：研究丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的作用,探索提高MSCs向神经元样细胞分化的诱导条件。方法：全骨髓贴壁法分离大鼠BMSCs,倒置显微镜观察诱导后细胞形态学特征,流式细胞仪进行BMSCs表面抗原鉴定,对诱导后的细胞进行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：培养的细胞经流式细胞仪检测,符合BMSCs表面标志特征。各对照组诱导后阳性细胞率均高于空白组,P〈0．01,其中丹参组Nestin阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P〈0．01,丹参组NSE阳性细胞率高于β-巯基乙醇组,P〈O．05;各诱导组GFAP表达为阴性。结论：丹参水煎液可以诱导BMSCs向神经元样细胞分化。     

丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的最佳剂量研究

目的：研究丹参水煎液诱导BMSCs分化为神经元样细胞的最佳剂量。方法：全骨髓贴壁法分离大鼠MSCs,倒置显微镜观察诱导后细胞形态学特征,流式细胞仪进行MSCs表面抗原鉴定,不同剂量丹参水煎液诱导BMSCs向神经元样细胞分化,对诱导后的细胞进行Nestin、NSE、GFAP免疫细胞化学染色鉴定。结果：培养的细胞经流式细胞仪检测,符合BMSCs表面标志特征。各对照组诱导后阳性细胞率均高于空白组,P〈0.01,丹参诱导组（80ul/ml）Nestin阳性细胞率高于其他诱导组,P〈0.05;各诱导组GFAP表达为均阴性。结论：丹参水煎液诱导BMSCs向神经元样细胞分化的最佳剂量为80ul/ml。     

间充质干细胞分化为心肌细胞的研究进展

心肌梗死等缺血性心脏病严重威胁人类生存和生活质量,组织工程技术为根治心肌梗死等心脏病提供了一种新的方法,近年来,心肌组织工程有了较大的进展,但在种子细胞等方面的难题还远没有解决。本文对关于间充质干细胞分化为心肌细胞的研究作了一下综述,为细胞替代治疗的研究提供一定的参考。     

骨髓间充质干细胞向神经细胞分化及移植研究进展

骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)又称骨髓基质细胞(bonemarrowstromal cells,BMSCs),是干细胞研究的又一新的发现,是目前干细胞研究的热点和前沿。MSCs具有方便获取、易于分离培养和扩增纯化,在体外培养条件下多代扩增后仍保持多向分化潜能的特点,且遗传背景稳定,