三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞促凋亡作用的体外实验

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用机制及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 μmol/L)组,通过原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL),流式细胞仪检测细胞周期观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,WESTERN印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用.结果 随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关(观察第7天、浓度为5.0 μmol/L时活细胞数为(4.41±0.10)×105/mL与正常对照组(30.11±0.93)×105/mL相比较差异具有统计学意义(P＜0.05),TUNEL可见凋亡细胞由16.0%±3.1%增至38.7%±2.7%(P＜0.05),流式细胞仪可见4.0 μmol/L三氧化二砷作用HCSMC 48 h后代表细胞凋亡的亚二倍体峰在48 h为最多,WESTERN印迹可见三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P＜0.05).正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 mRNA表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.     

白藜芦醇抑制甲状旁腺激素诱导的人主动脉平滑肌细胞凋亡

目的探讨甲状旁腺激素(PTH)对人主动脉平滑肌细胞凋亡的作用,及白藜芦醇(Resveratrol,RES)在其中的作用。方法实验一:体外培养人主动脉平滑肌细胞,用不同浓度甲状旁腺激素(阴性对照组、10~(-6)mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-10)mol/L)刺激72 h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,寻找可引起细胞凋亡的最适PTH浓度。实验二:用该浓度PTH及不同浓度白藜芦醇(阴性对照组、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)共刺激人主动脉平滑肌细胞72h,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果实验一:相较于对照组,不同浓度PTH刺激下,各组均产生了明显的细胞凋亡,差异具有统计学意义(P 0. 05)。确定10~(-10)mol/L PTH为可诱导细胞凋亡的较低浓度PTH。实验二:用10~(-10)mol/L PTH及不同浓度白藜芦醇(阴性对照组、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)共刺激人主动脉平滑肌细胞72h,发现相较于对照组,各浓度白藜芦醇(10、50、100μmol/L)均可以减少细胞凋亡,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论一定浓度的甲状旁腺激素可以诱导人主动脉平滑肌细胞凋亡,白藜芦醇对其有抑制作用。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞及基质作用的实验研究

目的 研究三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)转录因子E2F-1及基质内皮单核细胞激动肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)的作用,从而揭示该药物促HCASMC凋亡及其抑制HCASMC增殖和迁移的机制.方法 将4.0μmol/L三氧化二砷与HCASMC共育12,24,48 h,设空白对照组,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用,Western blot检测该药物对EMAP-Ⅱ的作用.结果 HCASMC与4.0μmol/L三氧化二砷共育12,24,48 h后细胞凋亡率于48 h最高(P<0.05).RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P<0.05).Western blot可见48 h组EMAP-Ⅱ表达最少,细胞黏附率最低(P<0.05).结论 三氧化二砷能够促进HCASMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 nnqNA表达,减少基质EMAP-Ⅱ的表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.     

短波紫外线照射诱导培养的人气管平滑肌细胞凋亡

气管平滑肌细胞 (ＡＳＭＣｓ)的增殖与临床许多病理过程有关 ,ＡＳＭＣｓ的增殖是引起气道重塑的重要因素。而ＡＳＭＣｓ的凋亡和增殖之间的动态平衡制约着这些疾病的发展。我们用短波紫外线(ＵＶＣ)照射体外传代培养的人ＡＳＭＣｓ ,观察对其凋亡的影响。现报告如下。材料和方法　　意外事故死亡的健康人 ,无菌条件下取出其靠近隆突的气管片。去除上皮、结缔组织、血管、软骨 ,用虹膜剪将气管平滑肌剪成 1～ 2ｍｍ的小块组织置于培养瓶底部 ,呈阵状排列。放入 37℃的ＣＯ2 孵箱。 8～ 12ｈ ,当组织块贴壁后加入含有 10 %胎牛血清 (ＦＢＳ)…     

冬凌草甲素诱导多发性骨髓瘤U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡实验研究

目的 探究冬凌草甲素对多发性骨髓瘤(MM)U266细胞、RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞培养和处理方法,采用0、10、20、30、40、50μmol/L的冬凌草甲素处理MM相关U266细胞、RPMI8226细胞48 h。采用MTT法测定U266细胞、RPMI8226细胞的增殖情况,采用Annexin V-FITC/PI染色试剂盒检测U266细胞、RPMI8226细胞凋亡情况,并采用蛋白质印迹法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的增加,U266细胞、RPMI8226细胞的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理48 h后,随着冬凌草甲素浓度(10～50μmol/L)的升高,促凋亡蛋白Bax表达量逐渐升高,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达量逐渐降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 冬凌草甲素具有抑制MM细胞增殖和诱导细胞凋亡的潜力,其作用机制可能与促进Bax表达,抑制Bcl-2表达,改变细胞Bcl-2/Bax比例,调节细胞凋亡有关。     

雷公藤甲素配伍芍药苷对L-02细胞毒性的影响

目的:研究芍药苷配伍雷公藤甲素对L-02细胞毒性的影响。方法:采用MTT法比较雷公藤甲素单用与雷公藤甲素配伍芍药苷对人肝细胞L-02细胞存活率的影响,以研究芍药苷对雷公藤甲素的减毒作用。结果:雷公藤甲素对L-02细胞的无毒范围在6.250 0 ng/ml以下,芍药苷对L-02细胞的无毒范围在1 000.0μg/ml以下。芍药苷与雷公藤甲素以1 000:1的比例配伍可降低雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,减少雷公藤甲素对L-02细胞损伤,提高细胞存活率。结论:配伍芍药苷可降低雷公藤甲素的细胞毒性,这为后期研究和药物比例选择提供了依据。     

三氧化二砷诱导犬髂动脉平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的；研究三氧化二砷诱导犬髂动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth musclecell，VSMC）凋亡的作用。方法：采用MTT、细胞生长曲线、倒置相差显微镜、细胞爬片HE染色、透射电镜等观察三氧化二砷作用后VSMC的变化。结果：VSMC细胞与三氧化二砷共孵育后出现细胞数目减少，脂肪颗粒增多；电镜等观察到核膜皱缩、核染色质凝结、边集等细胞凋亡现象，并且在一定的范围内此现象随药物浓度的增加而明显。结论：一定浓度的三氧化二砷能抑制VSMC细胞的生长，导致细胞变性，并诱导细胞凋亡。提示三氧化二砷作为涂层支架的药物可以抑制的平滑肌细胞生长，促进平滑肌细胞凋亡。     

上调人1型大麻素受体表达诱导人宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的通过构建基因真核表达载体,探讨人1型大麻素受体(hCB1R)对人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法构建GV230-hCB1R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HeLa细胞,免疫印迹(Western blot)法及免疫荧光细胞化学染色(ECL)联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB1R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hCB1R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果 hCB1R转染HeLa细胞后表达相对分子质量为40 000的hCB1R蛋白,细胞膜和细胞质中均有hCB1R表达;过表达的hCB1R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,流式细胞术检测结果显示HeLa细胞株呈现凋亡,hCB1R对宫颈癌HeLa细胞株的生长表现出明显的抑制作用,促进宫颈癌HeLa细胞凋亡。结论上调HeLa细胞hCB1R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。     

受控凋亡素基因逆转录病毒载体诱导人肝癌细胞凋亡

目的:构建受控重组凋亡素基因逆转录病毒载体,观察受四环素调控的凋亡素基因的表达对人肝癌细胞的影响。方法:构建重组逆转录病毒表达载体pRevTRE—VP3。调节载体pRevTet-Off和表达载体pRevTRE—VP3分别转染PT67包装细胞后,取其病毒上清液依次感染人肝癌细胞系HepG2,以四环素调控凋亡素基因在HepG2/Off-VP3细胞中的表达,以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:重组逆转录病毒载体pRevTRE—VP3构建成功;经PCR和RT—PCR证实凋亡素基因在HepG2细胞中得到了表达;HepG2/Off-VP3—8细胞在无四环素培养环境中凋亡率明显高于在1μg/ml四环素环境中的细胞凋亡率(P＜0．05)。结论:凋亡素基因经RevTet系统导入人肝癌细胞HepG2后,可在四环素调控下表达凋亡素并诱导HepG2细胞凋亡。     

tMfn2基因诱导血管平滑肌细胞的凋亡

背景:线粒体融合素2蛋白,主要通过磷脂酰肌醇3激酶,蛋白激酶B诱导血管平滑肌细胞凋亡.去除穿膜区序列的线粒体融合素2蛋白,相对分子质量减小41%,诱导凋亡作用可能更强.目的:观察比较去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路.设计、时间及地点:基因水平的对比观察实验.于2008-01/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心实验室完成.材料:大鼠血管平滑肌细胞及携带半乳糖甘酶基因、携带线粒体融合素2基因和携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒均由陈光慧教授惠赠.方法:将大鼠血管平滑肌细胞传代培养3～10代后随机分为4组,①空白对照组:不加干预.②携带半乳糖甘酶基因的对照组:感染携带半乳糖甘酶基因的重组腺病毒.③携带线粒体融合素2基因的实验组:感染携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒.④携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的实验组:感染携带去除穿膜区序列线粒体融合素2基因的重组腺病毒.主要观察指标:①重组腺病毒感染血管平滑肌细胞24 h后观察完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因的表达情况.②感染后24,48和72 h采用流式细胞术、酶联免疫吸附法观察细胞凋亡情况.③免疫印迹分析病毒感染血管平滑肌细胞24 h后磷酸化蛋白激酶B表达变化.结果:①感染后完整的和去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均有表达.②去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用显著增强,且呈时间依赖性(P<0.01).③两个实验组中磷酸化蛋白激酶B水平均明显降低,但去除穿膜区序列的线粒体融合素2基因实验组更显著(P<0.01).结论:去除穿膜区序列的线粒体融合素基因2诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用更强,其机制与抑制蛋白激酶B磷酸化有关.     

野生型p53基因转移对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：血管平均滑肌细胞的凋亡在球囊损伤后３０分钟内即已经开始,用基因转移的方法加速这一经过是控制再狭窄的途径之一。选择野生型ｐ５３作为目的基因,观察其对血管平滑骨细胞生长及凋亡的影响。方法：构建了野生型ｐ５３基因重组反转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ｐ５３。重组载体转染培养的大鼠主动脉增滑肌细胞,测定转染效率和ｐ５３基因的表达,用细胞存活曲线、流式细胞仪和ＤＮＡ “ｌａｄｄｅｒ”法检测了细胞生长和凋亡状况     

白细胞介素-1β对人冠脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶系统分泌平衡的影响

目的:研究白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase3,MMP-3)金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metallopro-teinase1,TI MP-1)分泌平衡的影响。方法:培养HCASMC,至第5~7代时,分别加入20μg.L-1和0μg.L-1的IL-1β(0μg.L-1组设为对照组),均分别孵育2h、4h、8h、24h、36h后,收集细胞培养液上清;采用IL-1β(0、5、20、40μg.L-1)刺激HCASMC6h后分别收集细胞和细胞培养液上清。采用ELISA法检测细胞培养液上清内MMP-3及TI MP-1的表达量。结果:IL-1β组MMP-3,TI MP-1的表达量在2h时开始增加,并随时间的延长而不断增加,MMP-3/TI MP-1在2h开始升高,8h达到顶峰,后缓慢下降;随IL-1β剂量增加,MMP-3和TI MP-1的表达量、MMP-3/TI MP-1均不断升高。结论:IL-1β可造成HCASMC分泌不稳定斑块标记物MMP-3、TI MP-1及MMP-3/TI MP-1的升高,说明炎症可能是急性冠状动脉综合征发生发展的机制之一。     

HIV-慢病毒载体有效转导人肺动脉平滑肌细胞的实验研究

目的使用不同的HIV-载体感染人肺动脉平滑肌细胞,并使用HIV慢病毒载体将外源基因转入人肺动脉平滑肌细胞。方法应用ADA/Luc、HXB2/Luc、VSV-G/Luc和VSV-G/GFP感染人肺动脉平滑肌细胞U87.CD4.CCR5和U87.CD4.CX-CR4。结果ADA/Luc和HXB2/Luc均能感染具有相应复合受体的U87.CD4,但不能感染人肺动脉平滑肌细胞。VSV-G/Luc和VSV-G/GFP能有效转导至人肺动脉平滑肌细胞中,于感染第3天,表达VSV-G/GFP的人肺动脉平滑肌细胞的阳性率为18%。结论应用HIV慢病毒载体能够向人肺动脉平滑肌细胞中导入外源基因。     

支架涂层材料对血管平滑肌的影响

[目的]探讨支架涂层材料对血管平滑肌的影响.[方法]以SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞为载体,采用MTT试验检测苯乙烯丁烯共聚物及多聚乳酸涂层材料对血管平滑肌细胞的增殖能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期.[结果]随着培养天数增加,苯乙烯丁烯共聚物组和多聚乳酸组平滑肌细胞数量都呈递增趋势;相同时间内苯乙烯丁烯共聚物组和多聚乳酸组细胞数量显著低于对照组(P<0.05),但苯乙烯丁烯共聚物组与多聚乳酸组差异无显著性(P>0.05);与对照组相比,苯乙烯丁烯共聚物及多聚乳酸组细胞周期均有不同程度变化,主要表现为G0/G1期细胞数显著高于对照组,S期、G2/M期细胞数显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),苯乙烯丁烯共聚物组与多聚乳酸组比较差异无统计学意义(P>0.05).[结论]苯乙烯丁烯共聚物及多聚乳酸可能通过抑制细胞周期中的第1个调控点(G1→S限制点)抑制主动脉血管平滑肌细胞增殖,两种涂层材料之间无明显差异.     

参麦注射液对人气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨参麦注射液（SMI）对人气道平滑肌细胞（HASMCs）细胞外信号调节激酶（ERK）表达的影响及SMI与ERK、细胞增殖的关系。方法：将体外培养的HASMCs随机分为对照组和参麦干预组,采用Western-blot检测磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达,采用流式细胞术观察细胞的周期,四甲基偶氮唑盐（MTT）微量比色分析法检测细胞的增殖,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,以观察参麦注射液对培养的HAMSCsERK表达及增殖的影响。结果：参麦干预组p-ERK蛋白的表达下降,参麦可显著降低HASMCs吸光度值及PCNA的表达,并使增殖期（S＋G2M期）细胞数显著减少（均P〈0.05）。结论：SMI通过剂量依赖效应抑制HAMSCs的ERK信号传导途径,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑。     

血红蛋白类携氧载体对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾离子通道电流的影响

目的 评价不同剂量血红蛋白类携氧载体（HBOC）对大鼠肺动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾离子通道（BKCa）电流的影响.方法 采用二步酶消化法急性分离Sprague Dawley（SD）大鼠肺动脉平滑肌细胞.BKCa电流采用四氨基吡啶（4-AP）进行分离并使用全细胞电压钳记录.选取急性分离后状态良好的大鼠肺动脉平滑肌细胞30个,根据计算机生成的随机数将其分为5组,每组6个平滑肌细胞,分别给予血红蛋白含量（kg/L）为0.25×10^-2,0.50×10^-2,1.00×10^-2,2.00×10^-2,3.00×10^-2的HBOC处理.观察不同剂量HBOC对BKCa电流的影响,并与给予HBOC前的BKCa电流相比较（实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准）.结果 经血红蛋白含量为0.25×10-2 kg/L的HBOC处理后,BKCa电流轻度增加,BKCa电流值与基础值比较,增加3.90％;分别给予血红蛋白含量（kg/L）为0.50×10^-2,1.00×10^-2,2.00×10^-2,3.00×10^-2的HBOC处理后,BKCa电流呈不同程度下降,BKCa电流值与基础值比较,分别下降8-04％,28.61％,46.53％和65.97％,HBOC对BKCa电流的抑制作用呈剂量依赖性（b=0.931 6,P=0.007）.结论 HBOC呈剂量依赖性抑制大鼠肺动脉平滑肌细胞BKCa电流.BKCa电流的下降可能是HBOC导致血管收缩的原因.     

坏死血管平滑肌细胞释放IL-1对其周围正常肌细胞迁移能力的影响

[目的]观察坏死的血管平滑肌细胞对周围正常细胞迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制.[方法]采用无血清无糖低氧条件制备血管平滑肌细胞坏死模型,并收集坏死细胞培养上清液(简称坏死上清)干预正常细胞.实验设置坏死上清干预组(A组)、IL-1干预组(B组)、坏死上清与IL-1拮抗剂联合干预组(C组)以及无血清低糖DMEM培养的对照组(D组).RT-PCR检测各组细胞基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9 mRNA的表达;Western blot检测各组细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达;Transewell检测各组细胞的迁移能力.[结果]A组和B组MMP 2、MMP9mRNA的表达均显著高于D组,差异具有统计学意义(P＜0.05),C组MMP-2、MMP-9mRNA的表达显著低于A组和B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).A组和C组MMP 2、MMP-9蛋白的表达显著高于D组(P ＜0.05),且具有时间依赖性.C组MMP-2、MMP-9蛋白的表达显著低于A组和B组(P＜0.05).条件培养液培养24 h,B组细胞迁移能力显著高于D组(P＜0.05),C组迁移细胞数显著低于A组和B组(P＜0.01),A组细胞迁移能力无显著变化.条件培养液培养48 h,A组和B组细胞迁移个数显著高于D组(P＜0.01),C组迁移细胞数显著低于A组和B组(P ＜0.01).[结论]坏死的血管平滑肌细胞可能通过释放IL-1促进了周围正常平滑肌细胞MMP-2、MMP-9的表达,进而促进细胞的迁移.     

大鼠肺动脉平滑肌细胞钙池操纵的钙通道及其意义

【目的】通过对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙库操纵性通道（SOC）的研究,阐述导致肺动脉平滑肌细胞内钙离子稳态失衡的信号途径,为治疗相关疾病提供新的思路。【方法】荧光探针Fura-2／AM标记细胞内Ca^2＋后。用荧光分光光度计检测EGTA耗竭胞内钙库后激活的SOC通道对急性酶分离的大鼠肺动脉平滑肌细胞（Ca^2＋）的影响。【结果】在无Ca^2＋缓冲液中,大鼠肺动脉平滑肌细胞静息Ca^2＋为（72．48±3．12）nmol／L,向细胞悬液中分别引入两种浓度的Ca^2＋（终浓度分别为1．5;3．0nmol／L）,此时静息Ca^2＋为（121．56±6．45）,（187．97±2．98）nmol／L,而预先用EAGA10mmol／L处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞Ca^＋显著提高。上述升高效应对Verapamil（5μmol／L）不敏感,但可被2APB（20～100μmol／L）抑制。且抑制率随2-APB浓度的提高而增加。【结论】通过对急性酶分离的大鼠单个肺动脉平滑肌细胞上胞内钙库耗竭激活的SOC通道的研究,对于进一步深入研究钙通道活性改变在肺血管收缩（HPV）反应中所起的作用具有重要意义。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用。结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性。     

内皮细胞调节的细胞培养液对血管平滑肌细胞增殖和胶原Ⅰ合成的作用

目的建立稳定的人胎盘脐带血管内皮细胞和平滑肌细胞模型来研究:内皮细胞调节的培养液对平滑肌细胞的增殖和胶原Ⅰ产物的影响。方法 (1)细胞培养:内皮细胞培养参照Maruyama的方法,从人胎盘脐带静脉获取。平滑肌细胞参照Fischer-Dzoga等所描述的方法,从人脐带动脉获取。(2)内皮细胞和平滑肌细胞的鉴定:在显微镜下观察细胞外形、用单克隆鼠抗人CD31和兔抗人第八因子(vWF)行免疫组化确认;同样,平滑肌细胞通过显微镜观察细胞外形、用单克隆鼠抗人平滑肌肌动蛋白进行免疫组化来确认。(3)用无血浆的Dulbecco’s Modified Eagle Medium(DMEM) 培养液制备内皮细胞调节的细胞培养液。(4)对在内皮细胞调节的细胞培养液刺激下的平滑肌细胞研究:用细胞与3H- 胸腺嘧啶结合闪烁记数法测定平滑肌细胞的增殖;用固相载体酶联免疫法来测定平滑肌细胞释放到培养液中的可溶性胶原Ⅰ的浓度。结果 (1)内皮细胞的鹅卵石状外形、单克隆鼠抗人CD31免疫组化和兔抗人vWF免疫组化均呈阳性反应。平滑肌细胞典型的纺锤样形状,单克隆鼠抗人平滑肌肌动蛋白免疫组化呈现阳性反应。(2)内皮细胞调节的细胞培养液对平滑肌细胞增殖和胶原Ⅰ产物的影响:50％内皮细胞调节的培养液对平滑肌细胞增殖和胶原Ⅰ产物有显著的刺激作用,与对照组相比,实验组平滑肌细胞增殖显著增加到(170．6±13．7)％(P<0．01),胶原Ⅰ产物显著增加到(128．0±7．7)％(P<0．01)。结论内皮细胞调节的细胞培养液在体外有刺激血管平滑肌细胞增殖和提高平滑肌细胞胶原Ⅰ产物浓度的作用。