甲醛对人脐静脉内皮细胞氧化损伤作用

目的 探讨甲醛对人脐静脉内皮细胞的损伤作用及可能机制。方法 将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度甲醛（0、5、10、20、40、80μmol／L）下；同时以过氧化氢为阳性对照组，抗氧化药物维生素C为保护组。24h后通过MTT比色法检测细胞生长抑制率，硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛含量，观察甲醛是否对内皮细胞具有损伤作用及维生素C对甲醛损伤的内皮细胞是否具有保护作用。结果 甲醛能抑制细胞的生长活性，细胞生长抑制率随甲醛浓度的增加而增加；甲醛诱导细胞外丙二醛的生成，且其含量随甲醛浓度的增加而增加。维生素C能降低甲醛对内皮细胞的生长抑制率，降低细胞外MDA含量。结论 甲醛能诱导内皮细胞产生损伤作用，这种作用与其增加内皮细胞产生过多的脂质过氧化物有关。抗氧化刺维生素C能减轻甲醛对内皮细胞的氧化损伤。     

牛膝多糖对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察牛膝多糖对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVEC,分为空白对照组、模型对照组、牛膝多糖低、中、高浓度组(浓度为5%、10%、15%),显微镜观察细胞形态;微板法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测内皮素-1(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果:与模型对照组比较,牛膝多糖中、高浓度组细胞形态改善,LDH活性显著减低、ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和t PA显著升高。结论:牛膝多糖对H2O2诱导的HUVEC损伤具有显著地保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对小鼠脑缺氧的保护作用

背景：研究发现黄芩茎叶总黄酮(Total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis George，TF)能够增强、改善实验动物学习、记忆能力和降低D-半乳糖产生的神经病理改变，通过腹腔注射NaNO2和断头引起小鼠脑缺氧模型可以进一步验证TF改善记忆能力的作用。目的：研究TF对小鼠脑缺氧的保护作用。设计：完全随机对照实验研究。地点和材料：由承德医学院中药研究所实验动物中心提供的100只昆明小鼠在承德医学院中药研究所生化研究室完成实验。干预：作者用50，100和200mg／kg TF连续灌胃小鼠7d，1次／d，末次给药后60min，各组小鼠分别腹腔注射NaNO2或断头。主要观察指标：以小鼠腹腔注射NaNO：后存活时间和断头后小鼠张口呼吸的持续时间为检测指标。结果：与对照组相比，50，100和200mg／kg TF组小鼠腹腔注射NaNO2后存活时间比盐水对照组分别延长25．3％，50．2％和68．3％；3个剂量组小鼠断头后张口呼吸的持续时间分别是盐水对照组的1．00,1．07和1．48倍，对照组脑复康也显示较强的抗脑缺氧作用。结论：黄芩茎叶总黄酮对小鼠脑缺氧有保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用

背景：黄芩是一味常用中药，传统药用其根，茎叶一向是被废弃，为充分利用黄芩茎叶资源，本研究所对黄芩茎叶的药理药化进行了系统研究。目的：探讨黄芩茎叶的主要药效部位总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用。设计：随机对照实验。单位：承德医学院中药研究所。对象：实验于1999-03／2000-01在承德医学院中药研究所完成。Wistar大鼠60只，雄性，初始体质量（200&;#177;10）g，由中国医学科学院实验动物繁育场提供，合格证号：01-3008。干预：大鼠60只被随机分为6组，每组10只，正常对照组，高脂模型组，总黄酮小、中．大剂量组（剂量分别为12．5，25，50mg/kg）和氯苯丁酯组（剂量为25mg/kg）。正常对照组饲喂基础饲料，高脂模型组饲喂高脂饲料，总黄酮大、中、小剂量组和氯苯丁酯组，在喂高脂饲料的同时给予相应剂量的药物。连续给药30d，观察大鼠的血脂变化。主要观察指标：应用CL-7200型全自动生化分析仪，检测大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的含量，并计算动脉粥样硬化指数（总胆固醇一高密度脂蛋白／高密度脂蛋白）。结果：纳入60只大鼠均进入结果分析。①大鼠血清总胆固醇含量：高脂模型组明显高于正常对照组[（5．01&;#177;1．05，2．33&;#177;0．35）mmol/L，（P〈0．01）]；总黄酮小、中、大剂量组分别为（4．15&;#177;1．12，3．03&;#177;0．31，2．98&;#177;0．56）mmol／L．小剂量组与模型组比较差异无显著性（t=1．74，P〉0．05），中、大剂量组与模型组比较差异显著（t=5．66-5．23，P〈0．01）。②大鼠血清三酰甘油的含量：总黄酮小、中、大剂量组分别为[（1．22&;#177;0.56，156&;#177;0．41，1．24&;#177;0．45）mmol／L]，与模型组[（2．14&;#177;0．74）mmol／L]比较差异显著（t=2．19-3．45，P〈0．05～0．01）。③大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量：总黄酮小、中、大剂量组分别为[（2.67&;#177;0．45，1.41&;#177;0．23，1．29&;#177;0．23）mmol／L]，与模型组[（3．94&;#177;0．42）mmol／L]比较差异显著（t=5．77-12．71，P〈0．05-0．01]。④大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量：总黄酮小、中、大剂量组分别为[（0．72&;#177;0．23，0．91&;#177;0．32，1．05&;#177;0．23）mmol／L]，小剂量组与模型组[（0．56&;#177;0．21）mmol／L]比较差异无显著性0=1．51，P〉0．05），中、大剂量组与模型组比较差异显著（t=2．92-4．38，P〈0．05-0．01）。⑤动脉粥样硬化指数：总黄酮小、中、大剂量组分别为（2．96&;#177;1．35，2．10&;#177;0．97，1．55&;#177;0．41），与模型组（4．23&;#177;0．65）比较差异显著（t=3．54—9．49，P〈0．01）。结论：黄芩茎叶总黄酮对大鼠长期喂以高脂饲料所造成的血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇的升高有明显的抑制作用，并使高密度脂蛋白胆固醇的含量有一定程度的升高，表明总黄酮对大鼠实验性高脂血症有明显的预防作用。     

恒磁场对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的　研究不同强度的恒磁场对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。方法　体外培养的第 3代人脐静脉内皮细胞 ,分为对照组及不同剂量磁场组。各剂量磁场作用组的磁感应强度分别为 0 .0 5mT、0 .1mT、1mT、10mT、30mT、60mT和 10 0mT ,磁场作用时间均为 48h。用3H TdR法及MTT法测定细胞增殖。结果　 0 .0 5mT组细胞增殖显著高于对照组 (0 .2 92± 0 .0 10对 0 .2 2 0± 0 .0 0 8,P <0 .0 5 ) ;0 .1mT组细胞增殖与对照组相比无明显差异 (0 .2 31± 0 .0 0 9对 0 .2 2 0± 0 .0 0 8,P >0 .0 5 ) ;其余剂量组细胞增殖均显著低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　 0 .0 5mT的恒磁场可以促进人脐静脉内皮细胞的增殖     

黄芩茎叶总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用

背景黄芩是一味常用中药,传统药用其根,茎叶一0是被废弃,为充分利用黄芩茎叶资源,本研究所对黄芩茎叶的药理药化进行了系统研究. 目的探讨黄芩茎叶的主要药效部位总黄酮对大鼠实验性高脂血症的预防作用. 设计随机对照实验. 单位承德医学院中药研究所. 对象实验于1999-03/2000-01在承德医学院中药研究所完成.wistar大鼠60只,雄性,初始体质量(200±10)g,由中国医学科学院实验动物繁育场提供,合格证号01-3008. 干预大鼠60只被随机分为6组,每组10只,正常对照组,高脂模型组,总黄酮小、中、大剂量组(剂量分别为12.5,25,50 mg/kg)和氯苯丁酯组(剂量为25 mg/kg).正常对照组饲喂基础饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料,总黄酮大、中、小剂量组和氯苯丁酯组,在喂高脂饲料的同时给予相应剂量的药物.连续给药30 d,观察大鼠的血脂变化. 主要观察指标应用CL-7200型全自动生化分析仪,检测大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的含量,并计算动脉粥样硬化指数(总胆固醇-高密度脂蛋白/高密度脂蛋白). 结果纳入60只大鼠均进入结果分析.①大鼠血清总胆固醇含量高脂模型组明显高于正常对照组[(5.01±1.05,2.33±0.35)mmol/L,(P＜0.01)];总黄酮小、中、大剂量组分别为(4.15±1.12,3.03±0.31,2.98±0.56)mmol/L,小剂量组与模型组比较差异无显著性(t=1.74,P＞0.05),中、大剂量组与模型组比较差异显著(t=5.66～5.23,P＜0.01).②大鼠血清三酰甘油的含量总黄酮小、中、大剂量组分别为[(1.22±0.56,1.56±0.41,1.24±0.45)mmol/L],与模型组[(2.14±0.74)mmol/L]比较差异显著(t=2.19～3.45,P＜0.05～0.01).③大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇含量总黄酮小、中、大剂量组分别为[(2.67±0.45,1.41±0.23,1.29±0.23)mmol/L],与模型组[(3.94±0.42)mmol/L]比较差异显著(t=5.77～12.71,P＜0.05～0.01].④大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇含量总黄酮小、中、大剂量组分别为[(0.72±0.23,0.91±0 32,1.05±0.23)mmol/L],小剂量组与模型组[(0.56±0.21)mmol/L]比较差异无显著性(t=1.51,P＞0.05),中、大剂量组与模型组比较差异显著(t=2.92～4.38,P＜0.05～0.01).⑤动脉粥样硬化指数总黄酮小、中、大剂量组分别为(2.96±1.35,2.10±0.97,1.55±0.41),与模型组(4.23±0.65)比较差异显著(t=3.54～9.49,P＜0.01). 结论黄芩茎叶总黄酮对大鼠长期喂以高脂饲料所造成的血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇的升高有明显的抑制作用,并使高密度脂蛋白胆固醇的含量有一定程度的升高,表明总黄酮对大鼠实验性高脂血症有明显的预防作用.     

不同时长的过氧化氢刺激对人脐静脉内皮细胞衰老的影响

目的 研究不同时长下200μmol/L过氧化氢(H2O2)刺激对人脐静脉内皮细胞(human umbil-ical vein endothelial cell,HUVEC)衰老的影响,为氧化应激诱导细胞衰老模型提供参考.方法 把HUVEC分为空白组和H2O2暴露组,暴露组分别在200μmol/L终浓度的H2O2作用0....     

黄芩茎叶总黄酮对U937细胞增殖的影响

目的研究黄芩茎叶总黄酮（TF）对人类单核肿瘤细胞U937增殖的影响。方法U937细胞以5×10^4个／ml的浓度，培养于含胎牛血清（FCS）10％的RPMI 1640全培养液中，TF浓度分别为0、25、50、100、150、2130mg／L组，每组8孔接种于24孔培养板中孵育7d。每天计数各孔细胞密度，第7天测定细胞悬液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。结果TF 25～200mg／L组U937细胞密度均低于TF 0mg／L组，浓度越高细胞密度越低（P〈0．05）。TF 0～150mg／L组细胞悬液LDL活性差别无统计学意义（P〉0．05），TF 200mg／L组LDL与其他5组相比均具有统计学意义（均P〈0．05）。结论TF具有抑制U937细胞增殖的作用，高浓度的TF（〉1200mg／L）对体外培养的U937细胞具有毒性作用。     

蜂胶乔松素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察蜂胶乔松素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的影响,探讨其对人脐静脉内皮细胞可能的保护作用。方法:实验于2006-03/10在泰山医学院生命科学研究所(省重点实验室)完成。①实验材料:取出生1h内新生儿脐带,患者知情同意。②实验分组及方法:培养人脐静脉内皮细胞,建立脂多糖损伤模型(以10mg/L的脂多糖培养液培养细胞12h),实验分为空白对照组(加等量D-Hank’s液)、脂多糖组(10mg/L)、乔松素组(加10mg/L脂多糖预孵育12h后,按50,100,200mg/L分别加入乔松素),各组设8个复孔,共同孵育24h。③实验评估:光镜下观察细胞形态,MTT法观察乔松素对人脐静脉内皮细胞活性的影响,ELISA方法检测培养上清中血管假血友病因子的含量,TUNEL检测细胞凋亡率。结果:①细胞形态:空白对照组细胞紧密贴壁,呈铺路石状生长。脂多糖组可见多数细胞呈圆形;乔松素组见上述细胞较脂多糖组明显减少。②乔松素对人脐静脉内皮细胞活性、凋亡及血管假血友病因子含量的影响:与对照组比较,脂多糖组能明显诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡(P<0.01),不同浓度乔松素组可改善内皮细胞形态,组织活性明显升高(P<0.05),同时抑制内皮细胞血管假血友病因子的释放(P<0.05),使脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡细胞数明显减少(P<0.05)。结论:乔松素能增强人脐静脉内皮细胞活性,抑制脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡,从而发挥可能的内皮细胞保护功能。     

蜂胶黄酮对人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9的影响

背景:研究表明,基质金属蛋白酶9与动脉粥样硬化斑块的稳定性有关,蜂胶黄酮具有抗动脉粥样硬化的作用.目的:拟证实蜂胶黄酮对人脐静脉内皮细胞摹质金属蛋白酶9表达的影响.设计、时间及地点:对比观察.实验于2008-01/08在山东泰山医学院生命科学研究所完成.材料:蜂胶黄酮由泰山医学院生命科学研究所实验室提取;出生1 h内新生儿脐带由山东泰安市中心医院提供,产妇知情同意.方法:进行人脐静脉内皮细胞的体外培养和鉴定.按四甲基偶氮唑盐实验筛选的浓度,分别加入25,50,100,200 mg/L不同剂量的蜂胶黄酮处理细胞24 h,以空白组做对照.主要观察指标:免疫细胞化学染色和ELISA法测定蜂胶黄酮对基质金属蛋白酶9表达的影响.结果:不同剂量的蜂胶黄酮作用人脐静脉内皮细胞24 h后均能明显抑制细胞基质金属蛋白酶9的表达,并且随着浓度的升高抑制作用明显增强.结论:蜂胶黄酮能明显降低人脐静脉内皮细胞基质金属蛋白酶9的表达.     

Melatonin attenuates homocysteine‐induced injury in human umbilical vein endothelial cells

Homocysteine (Hcy) is a major risk factor for vascular disease and is closely associated with endothelial dysfunction. Melatonin is a neurohormone that is mostly produced by the pineal gland. Studies have reported that melatonin exhibits neuroprotective effects in several neurodegenerative disorders. The aim of the current study was to investigate the possible protective effect of melatonin against Hcy‐induced endothelial cell apoptosis in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and to explore the underlying mechanisms. HUVECs were exposed to Hcy in the presence or absence of melatonin. The effect of melatonin on viability was examined by MTT assay. Intracellular reactive oxygen species (ROS) levels were determined by 2′,7′‐dichlorofluorescein diacetate (DCF‐DA). Further, expression of Bax, Bcl‐2, and caspase‐3 was analyzed by Western blot analysis. Lipid peroxidation (LPO) levels, total antioxidant power (TAP), and total thiol molecules were also evaluated. The results of this study revealed that melatonin significantly prevented Hcy‐induced loss in cell viability in HUVECs. It was found that ROS significantly increased in the presence of Hcy, whereas melatonin reduced ROS production. Melatonin also downregulated Bax, upregulated Bcl‐2, and decreased the expression and activity of caspase‐3. Hcy increased the levels of LPO, and this effect was significantly attenuated by melatonin. Melatonin also increased the levels of TAP and total thiol molecules. It was concluded that melatonin played a protective role against Hcy‐induced endothelium cell apoptosis through inhibition of ROS accumulation and the mitochondrial‐dependent apoptotic pathway.     

抗氧化酶交联的多聚血红蛋白对H_2O_2引起的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨交联了抗氧化酶的聚合人血红蛋白对过氧化氢(hydrogenperoxide,H2O2)引起的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法按照对细胞处理方法的不同,分为正常对照组、单加H2O2组、抗氧化酶交联的多聚血红蛋白(PolyHb-SOD-CAT)+H2O2组、多聚血红蛋白(PolyHb)+H2O2组、单加PolyHb-SOD-CAT组和单加PolyHb组,化学比色法检测细胞内还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Ca2+浓度,免疫组化技术检测核转录因子NF-kB在细胞内的分布,RT-PCR技术检测血红素氧化酶(heme oxygenase,HO-1)、内皮型一氧化氮合酶(endothelialnitric oxide synthase,eNOS)的mRNA表达情况,流式细胞术检测细胞死亡情况。结果与对照组相比,单加H2O2组的GSH浓度为(0.006 4±0.003 9)mmol/L,Ca2+浓度为(690.05±145.11)nmol/ml,NF-kB大量位移入核,HO-1、eNOS的mRNA表达量上升,细胞死亡率高;而与单加H2O2组比,PolyHb-SOD-CAT+H2O2组的GSH浓度为(0.0214±0.009 8)mmol/L,Ca2+浓度为(172.43±24.09)nmol/ml,NF-kB绝大部分仍位于胞浆内,HO-1、eNOS的mRNA表达量明显降低,细胞死亡率下降。结论PolyHb-SOD-CAT能够抑制H2O2引起的血管内皮细胞氧化损伤。     

Fluvastatin reduces oxidative damage in human vascular endothelial cells by upregulating Bcl-2

Background:  3-Hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors (statins) have been widely used in clinical practise and their efficacy in reducing cardiovascular risk has been well described. Objectives:  To investigate the effect of low doses of fluvastatin (nanomolar) on H₂O₂-induced cell damage and the underlying mechanism. Methods and results:  Primary cultures of human umbilical vein endothelial cells were used, and the effects of fluvastatin on H₂O₂-induced apoptosis, necrosis, and proliferation were observed. H₂O₂ at a concentration of 100 μ m significantly induced apoptotic cell death after 24-h cell culture. Fluvastatin at low concentrations (10–100 n m ) prevented H₂O₂-induced apoptosis, as determined by a DNA fragmentation assay and by cell counting with trypan blue and Hoechst 33342 nuclei staining. The protective effect of fluvastatin was mediated by the upregulation of Bcl-2 expression as probed by real-time polymerase chain reaction and Western blotting. Using siRNA to knock down the expression of Bcl-2, the protective effect of fluvastatin was abolished. Fluvastatin had no direct effect on the H₂O₂-sensitive TRPM2 calcium channel. Conclusions:  These results suggest that fluvastatin has a potent protective effect against H₂O₂-induced apoptosis via upregulation of Bcl-2 expression. The findings provide a new insight into the mechanism by which fluvastatin is able to modulate the influence of oxidative stress on vascular endothelial cells.     

替米沙坦对人血管内皮细胞血管紧张素转换酶-2表达的调节作用研究

目的 探讨替米沙坦对人血管内皮细胞血管紧张素转换酶-2（ACE2）表达的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,以替米沙坦（终浓度分别为10^-7、10^-6、10^-5 mol/L）刺激24 h;以替米沙坦（终浓度为10^-6 mol/L）分别刺激6、12和24 h;以2型血管紧张素Ⅱ受体特异性阻断剂PD123319（终浓度为10^-6 mol/L）单独或与相同终浓度的替米沙坦联合刺激12 h.以蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测ACE2蛋白表达量,以逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）检测ACE2 mRNA表达.结果 替米沙坦呈剂量（浓度）和时间依赖性使ACE2蛋白及基因表达量显著增加.与对照组比较,替米沙坦在终浓度分别为10^-7、10^-6、10^-5 mol/L时,可使ACE2蛋白表达量分别增加1.5、2.7和4.6倍,使ACE2 mRNA表达分别增加1.2、2.3和4.5倍;于6、12和24 h,替米沙坦（终浓度10-6 mol/L）分别使ACE2蛋白表达量增加1.6、2.7和4.2倍,使ACE2 mRNA表达分别增加1.3、2.3和4.0倍;与对照组及替米沙坦组比较,PD123319对ACE2蛋白及基因表达无影响.结论 替米沙坦呈剂量（浓度）和时间依赖性显著上调ACE2蛋白及基因表达,此作用可能与阻断血管紧张素Ⅱ受体无关.     

人脐静脉内皮细胞分离培养及鉴定技术

目的探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外分离原代培养的方法,并总结对培养的细胞鉴定方法。方法通过胰酶灌注法从人脐带获取内皮细胞进行分离培养,并采用免疫组化法及光镜和透射电镜观察超微结构鉴定所获得的细胞系。结果分离的HUVEC在体外7-10天左右可长成单层,光镜下胞体为单层铺路石状排列。第VⅢ因子相关抗原的检测为阳性。透射电镜下观察培养的内皮细胞胞浆内可见Weibel-Palade小体。结论用胰酶灌注法是获得脐静脉内皮细胞的有效方法。本方法为血管内皮细胞的研究提供了实验模型。     

The effect of folic acid on the homocysteine metabolism in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs)

Mild hyperhomocysteinaemia is associated with increased risk for vascular disease. We studied homocysteine export from human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) by measuring total homocysteine (tHcy) concentrations in the culture medium. Under standard culture conditions tHcy concentrations in the HUVEC culture medium increased by constant amounts after 24, 48 and 72 h [mean = 2.5 (SD ± 0.7) μmol L⁻¹ homocysteine every 24 h]. As the cells are the only source of homocysteine increase in the culture medium, we designate this as homocysteine export from HUVEC. Folic acid supplementation to the culture medium lowered the homocysteine export in a dose-dependent manner. Methyl-tetrahydrofolate (MeTHF) and folinic acid (a stable precursor of MeTHF) were in this respect about 10 times more effective than folic acid. A 50% reduction in the homocysteine export was seen with 10–30 nmol L⁻¹ MeTHF supplementation; reduction to almost zero was seen with 100–300 nmol L⁻¹ MeTHF. Additions to the culture medium of the other vitamins involved in the homocysteine metabolism, such as vitamin B₁₂, vitamin B₆ and flavin adenine dinucleotide, did not show any effect on homocysteine export. Because homocysteine export reflects an imbalance in the homocysteine metabolism, our observations showed a susceptible dependency of this metabolism on folic acid in endothelial cells.     

久强脑立清对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素分泌的影响

目的观察久强脑力清 (JNQ)含药血清对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)分泌一氧化氮 (NO)和内皮素 (ET 1)的影响 ,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用。方法取原始JNQ含药血清体积分数的 80 %、40 %、2 0 %、10 %和 5 %作用于原代培养的HUVECs 2 4h后 ,分别检测上清中的NO和EI 1的含量。结果不同浓度的JNQ含药血清作用组的NO、ET 1含量与正常血清对照组比较增加 (P <0 0 5 ) ;NO/ET 1比值随着含药血清浓度的增加 ,比正常血清组增高 (P <0 0 5 )。结论JNQ含药血清通过提高HUVECs分泌NO和ET 1,具有保护内皮细胞功能和维持NO/ET 1平衡的作用     

人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞移植用于大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:探讨人脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞(MSCs)移植对脊髓损伤功能恢复的影响,寻找一种更适合治疗脊髓损伤的细胞源。方法:采集新鲜人脐带血和脐带,分离培养单个核细胞和MSCs。将脊髓损伤模型随机分成3组:单个核细胞移植组、MSCs移植组和低糖必需培养基(L-DMEM)培养组。采用免疫组化和免疫荧光检测细胞移植后1—4周细胞在脊髓内的存活情况和迁移情况,使用BBB行为学评分评估大鼠脊髓功能恢复情况。结果:L-DMEM培养液组在术后各时间点观察评分无明显差异,而细胞移植组脊髓功能处于逐渐恢复过程,与L-DMEM培养液比较,差异有显著性意义。单个核细胞移植组对损伤脊髓功能的修复作用较MSCs移植组显著,且差异有显著性意义。结论:与MSCs相比较,人脐血单个核细胞更适合作为治疗脊髓损伤的细胞源。     

RNAi特异性抑制A20基因对H2O2诱导人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

锌指蛋白A20是近年来细胞内源性保护机制研究的新靶点,目前研究表明锌指蛋白A20抑制肿瘤坏死因子,脂多糖等多种炎性细胞因子诱导核因子κB信号通路激活所引起的血管平滑肌细胞增殖,但有关A20抗细胞氧化损伤方面的影响报道甚少。目的：观察锌指蛋白A20基因干扰对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞核中核因子κB表达的影响及可能的分子生物学机制。设计、时间及地点：随机对照实验,于2007—03／200806在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成。材料：体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞,构建针对Genbank中人A20的基因序列,采用脂质体Lipofectamine^TM2000介导80pmol siRNA,6μL转染。方法：将培养的第4代人脐动脉血管平滑肌细胞随机分6组,①空白组：培养基培养,未给与任何干预。②A20siRNA组：转染A20siRNA24h。③scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA24h。④H2O2组：H2O2持续刺激6h。⑤H2O2＋A20siRNA组：转染A20siRNA24h后H2O2持续刺激6h。⑥H2O2＋scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA24h后H2O2持续刺激6h。主要观察指标：以RT—PCR,Western-blotting检测A20基因表达变化,以四甲基偶氮唑蓝方法测定细胞增殖活性,以流式细胞技术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化,以Westem—blotting检测细胞核中核因子κBp65的蛋白含量表达。结果：H2O2组细胞增殖率明显高于空白组,但低于H202＋A2O2＋siRNA组（P〈0．05）。H2O2组S期、G2／M期构成百分比,增殖指数均较空白组明显升高,然而较H2O2＋A20siRNA组明显降低（P〈0．05）,空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少（P〈0.05）：H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2＋A20siRNA组（P〈0．05）干扰效率大约55％。细胞核中核因子KBp65有少量表达：A20siRNA干扰后核因子KBp65含量明显增加;H2O2刺激后核因子KBp65表达含量显著增加但明显低于H2O2＋A20siRNA组（P〈0．05）。结论：A20基因可抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞的增殖,其分子机制可能通过其负反馈抑制了核因子κB介导的信号转导途径。     

白藜芦醇对H2O[DK(]2[DK)]诱导的人脐带间充质干细胞凋亡的保护作用

摘要：目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对H2O2诱导的人脐带间充质干细胞（hucMSCs）凋亡的保护作用。 方法：体外培养hucMSCs,采用细胞实时监测和MTT法分析不同浓度Res对hucMSCs增殖的影响;以H2O2处理hucMSCs构建氧化应激模型,分别设对照组、H2O2诱导组和Res干预组;western blot检测各组细胞活化的凋亡蛋白3(Actived-caspase3)水平;TUNEL实验检测细胞的凋亡情况,qRT-PCR法检测核因子E2相关因子2（Nrf 2）的表达水平。 结果：低浓度（1、5、10、20 μmol/L）Res对hucMSCs的增殖无影响,而50、100 μmol/L Res对hucMSCs增殖具有明显的抑制作用;与对照组（0.05±0.01）相比,H2O2诱导组Actived-caspase3的表达水平（0.36±0.01）明显增加（q=9.968,P＜0.05）,[JP2]而Res干预组Actived-caspase 3的表达水平（0.13±[JP]0.07）较H2O2诱导组明显下调（q=7.283,P＜0.05）;TUNEL实验证实Res预处理能明显改善H2O2诱导的hucMSCs凋亡;与对照组（1.00±0.06）相比,H2O2诱导组Nrf 2的表达水平（0.50±0.07）明显降低（q=9.026,P＜0.01）,而Res干预组明显升高（2.10±0.14）,差异有统计学意义（q=28.37,P＜0.01）。 结论：Res可减轻H2O2诱导的hucMSCs的凋亡,且与其增强细胞抗氧化能力有关。