现代狂犬病疫苗生产用细胞和毒种:现状和前景

对全球狂犬病预防控制的一个主要挑战是不能充分供应廉价优质的狂犬病疫苗。基于神经组织生产狂犬病疫苗的技术早已过时,现代细胞培养技术提供了适当的病毒培养基质,可以获得高滴度病毒和大规模生产高质量的现代狂犬病疫苗。目前人用疫苗仅使用灭活疫苗,用高度适应细胞的稳定的减毒狂犬病病毒生产的疫苗将是未来的理想疫苗。     

人用狂犬病疫苗不良反应的调查报告

目的分析人用狂犬病疫苗接种后不良反应情况,探讨防治措施。方法对2001年～2009年国内公开报道的狂犬疫苗不良反应进行整理、统计。结合诸暨市狂犬病疫苗使用情况进行分析。结果3种常用的人用狂犬病疫苗（Vero细胞）都可导致不同程度的人体不良反应。结论人用狂犬病疫苗接种可能会发生多种不良反应．必须引起医护工作者重视,应密切观察患者用药情况,发现问题及时处理。     

15岁以下人群冻干人用狂犬病纯化疫苗效果观察

目的了解目前使用的冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞)在15岁以下人群的免疫效果。方法依照我国卫生部《狂犬病暴露后处置工作规范(试行)》的要求全程免疫接种259例15岁以下狂犬病暴露者。完成全程接种后14d检测接种者血清中狂犬病抗体,并对检测结果进行统计分析。结果259例接种者中,狂犬病抗体检测阳性241例,抗体阳性率为93.05%;其中男孩189例,抗体阳性175例,阳性率92.59%;女孩70例,抗体阳性66例,阳性率94.29%。男女之间狂犬病抗体阳性率无显著性差异(χ2=0.04,P>0.05)。按年龄分组看:幼儿组(3岁以下)40例,学龄前儿童组(3～6岁)39例,学龄组(6～10岁)104例,少年组(10～15岁)76例,狂犬病抗体阳性人数分别为33、37、97、74例,阳性率分别为82.50%、94.87%、93.27%、97.37%,其中幼儿组与其他年龄组之间狂犬抗体阳性率有显著性差异(χ2=10.19,P<0.05)。结论冻干人用狂犬病纯化疫苗(Vero细胞)在15岁以下狂犬病暴露者中应用总免疫效果良好。     

Vero细胞HCP试剂盒在冻干乙型脑炎灭活疫苗生产过程中的应用

目的 通过检测冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）生产过程各道工序中的细胞残余蛋白,达到控制疫苗中Vero细胞残余蛋白的目的.方法 采用Vero细胞宿主细胞蛋白（host cell protein,HCP）试剂盒,对2009-2012年共65批冻干乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）在病毒液收获、浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖和半成品配制阶段中的HCP含量进行检测.结果 2009-2012年,病毒液收获阶段Vero细胞HCP含量无明显差异.2010年工艺优化后,2010-2012年的HCP平均值与2009年相比,在浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖、半成品配制阶段分别降低了78.83％、83.42％、78.62％、86.88％、86.40％.结论 通过Vero细胞HCP试剂盒的动态监测,可以对生产过程中Vero细胞的残余蛋白含量实施控制.     

冻干人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)非临床安全性研究

目的 对冻干人用狂犬病疫苗(MRC-5细胞)进行全身主动过敏试验、肌肉刺激性、单次给药毒性和溶血性评价,以考察其安全性.方法 本研究起止时间为2014年3月至2016年10月.按照确定的工艺和质量标准,使用人二倍体细胞MRC-5培养狂犬病固定毒株,灭活、纯化后制备冻干人用狂犬病疫苗,质量检定合格后,用于开展全面的动物毒...     

液体狂犬病疫苗与冻干狂犬病疫苗的预防效果比较

狂犬病是由狂犬病病毒所致的、以侵犯中枢神经系统为主的人兽共患急性传染病。人类对狂犬病普遍易感,通常由病兽咬伤而感染,病死率达100%。狂犬病的主要预防措施为接种狂犬病免疫球蛋白和狂犬病疫苗。本文比较了液体与冻干两种剂型狂犬病疫苗的预防效果。     

狂犬病疫苗的应用

狂犬病仍是发展中国家的主要传染病,目前尚无有效的治疗方法,因此,预防狂犬病显得更加重要.本文针对狂犬病的暴露前和暴露后预防,对所用疫苗和其他生物制品的特点、肌肉注射和皮内注射的优缺点、使用条件、注意事项以及适应证和禁忌证等作了介绍.此外还介绍了WHO推荐的8部位皮内接种法和2部位皮内接种法.     

人用狂犬病疫苗ELISA快速鉴别试验的建立及验证

目的:建立人用狂犬病疫苗快速鉴别试验并进行验证。方法:采用双抗体夹心ELISA,以4株抗狂犬病毒核蛋白单抗包被微孔板,通过捕捉检品中狂犬病病毒核蛋白进行快速鉴别试验,对该方法进行特异性、灵敏度、重复性和适用性验证。结果:采用双抗体夹心ELISA进行鉴别试验,验证结果显示该方法具有较高的特异性和灵敏性,RSD<15%,对于不同疫苗生产毒株均可有效鉴别。结论:双抗体夹心ELISA可以替代传统效力试验对人用狂犬病疫苗进行快速鉴别。     

人用精制狂犬病疫苗不良反应与免疫学效果

目的 :观察人用精制狂犬病疫苗(PHKCRV)的免疫学效果及不良反应。方法 :选择332例健康者 ,按预防性免疫接种程序接种组 2 72人 ,其中PHKCRV 2 4 2人 ,用法国维尔博狂犬病疫苗 (PVCRV ) 30人。按应急性免疫接种程序接种PHKCRV的 6 0人中进行不同剂量 [全量 (1.0mL)组和半量 (0 .5mL)组 ,每组各 30人 ]接种。结果 :　PHKCRV不良反应率为 2 3% (7/ 30 )低于PVCRV的 33% (10 / 30 )。 2种疫苗中和抗体阳转率均为 10 0 %。中和抗体水平预防性接种组为 (10± 5)kU·L- 1,应急性接种组中全量组为 (9± 3)kU·L- 1;半量组为 (7.3± 2 .5)kU·L- 1。结论 :说明该疫苗不仅不良反应轻微而且免疫原性良好     

HPLC法测定人用皮卡狂犬病疫苗和皮卡佐剂中硫酸卡那霉素的含量

目的:建立测定人用皮卡狂犬病疫苗和皮卡佐剂中硫酸卡那霉素含量的HPLC方法。方法:色谱柱为CAPCELL PAKC8 DD(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为磷酸二氢钾缓冲液(0.02 mol.L-1,pH 7.5)-甲醇-乙腈(23∶7∶40);流速为1.0mL.min-1;柱温为45℃;采用柱前衍生化法,衍生化试剂为2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS);检测波长为350 nm。结果:在0.01～1.0 mg.mL-1范围内,硫酸卡那霉素的浓度与峰面积呈现良好的线性关系(A=3×106C-3313.9,r=1.000,n=7);在80%,100%,120%3个浓度下的平均回收率(n=3)分别为82.5%(RSD=1.6%),90.3%(RSD=2.0%),81.6%(RSD=1.8%);方法的最低检测限为0.41μg.mL-1;最低定量限为1.39μg.mL-1;供试品溶液在8 h内稳定(RSD=1.1%)。结论:本方法准确、快速,通用性良好。     

磁珠法结合定量PCR检测肠道病毒71型灭活疫苗中宿主细胞DNA残留量的验证及应用

目的  对磁珠法结合定量PCR（quantitative PCR,qPCR）检测肠道病毒71型灭活疫苗〔非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）〕（EV71疫苗）中宿主DNA残留量进行适用性验证及应用。方法  利用微磁珠与蛋白溶液中DNA的特异性结合,来提取样品中残留的Vero细胞DNA。将已知浓度Vero细胞DNA对照系列稀释后,作为标准品DNA与提取的DNA同时进行qPCR扩增。根据标准品DNA的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中残留DNA进行定量分析。结果  标准品检测范围在0.03～3 000.00 pg/反应。该方法的标准曲线决定系数≥0.98,扩增效率在90%～110%。质控样品回收率在50%～150%,相对标准偏差均小于30%。实验结果的各项参数均在要求范围内。结论  磁珠法可解决残留DNA检测中样品前处理的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对生产过程样品的EV71疫苗中DNA残留量进行定量测定。适用于EV71疫苗中DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。     

肠道病毒71型灭活疫苗（Vero细胞）接种5年免疫持久性观察

目的 观察肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）疫苗III期临床试验接种5年的免疫持久性。方法 在III期临床试验免疫原性亚组中,对完成全程两针次免疫的免前抗EV71中和抗体阴性人群进行免疫后5年采血并检测抗EV71中和抗体,对0 d、56 d、8个月、14个月、26个月、64个月同时具有抗EV71中和抗体检测数据人群评价免疫持久性。结果 共614名受试者完成5年免疫持久性血样采集并获得中和抗体检测结果,其中490名受试者同时具有0天、56 d、8个月、14个月、26个月、64个月抗EV71中和抗体检测数据,疫苗组和安慰剂对照组分别为235名和255名。EV71疫苗免疫后5年,疫苗组抗EV71中和抗体阳性率（100.00%）和抗体几何平均滴度（geometric mean titer,GMT）（369.57）均高于对照组（69.02%和55.58）。分别以抗体滴度8、16、32为阳性判定标准,疫苗组阳性率（100%、99.57%、97.87%）均高于对照组（69.02%、61.96%、59.61%）。对不同年龄亚组进行分析,6~11、12~35月龄受试者免疫后疫苗组5年抗EV71中和抗体阳性（滴度≥8）率（均为100.00%）和抗体GMT（367.14、370.64）均高于对照组（66.67%、71.27%和53.43、63.66）。在EV71疫苗免疫后的各个时间点,疫苗组抗EV71中和抗体阳性率和GMT均高于对照组。结论 该EV71疫苗两针基础免疫后能够诱导良好的免疫原性,在免疫后5年依然保持较好的免疫持久性。     

重组肠道病毒71型疫苗（汉逊酵母）抗原冻干参考品的制备及稳定性研究

目的  制备重组肠道病毒71型（enterovirus A71,EV-A71）疫苗（汉逊酵母）抗原冻干参考品,用于重组EV-A71疫苗（汉逊酵母）的抗原含量测定。方法  选取检定合格的重组EV-A71疫苗（汉逊酵母）原液,加入冻干保护剂,冷冻干燥制备重组EV-A71疫苗（汉逊酵母）抗原冻干参考品,对其进行保护剂抗原含量标定,并对其进行反复冻融试验,37 ℃、2~8 ℃和-20 ℃稳定性研究。结果  制备的抗原冻干参考品鉴别试验、无菌检查结果均符合规定,水分含量为1.4%。经标定,几何均值为2 146 U/ml,几何变异系数为7.2%。10次反复冻融,抗原含量仍无明显变化;37 ℃放置3个月,抗原含量无明显变化;2~8 ℃和-20 ℃分别放置30个月,抗原含量仍较为稳定。 结论  制备了一批稳定的、均一性良好的抗原冻干参考品,可以用于重组EV-A71型疫苗（汉逊酵母）抗原含量测定。     

Comparison of saftey and immunogenicity of purified chick embryo cell rabies vaccine (PCECV) and purified vero cell rabies vaccine (PVRV) using the Thai Red Cross intradermal regimen at a dose of 0.1 ML

Intradermal (ID) vaccination with modern cell culture rabies vaccines is a means to significantly reduce the cost of post-exposure prophylaxis as compared to intramuscular vaccination. In this study we evaluated the efficacy, immunogenicity and tolerability of PCECV and PVRV administered ID in doses of 0.1 mL per site according to the 2-site Thai Red Cross (TRC) regimen. Patients with WHO category III exposure to suspect or laboratory proven rabid animals were administered either PCECV (n = 58) or PVRV (n = 52) ID at a dose of 0.1 mL per site at two sites on days 0, 3 and 7 and at one site on days 30 and 90. Serum samples were withdrawn on days 0, 14, 30, 90 and 180 and rabies virus neutralizing antibody (RVNA) titers were determined by rapid fluorescent focus inhibition test (RFFIT). Patients who were exposed to laboratory confirmed rabid animals were followed up for one year after exposure. All 110 patients developed RVNA titers above 0.5 IU/mL by day 14. Adequate titers >0.5 IU/mL were maintained up to day 180. Both vaccines induced equivalent RVNA titers at all time points and were well tolerated. Five subjects who were bitten by laboratory confirmed rabid dogs were alive and healthy one year after exposure. As demonstrated, PCECV and PVRV are both immunogenic, efficacious and well tolerated when administered in the TRC post-exposure prophylaxis regimen in ID doses of 0.1 mL as recommended by WHO guidelines. The use of PCECV in this regimen may prove more economical in developing countries like India.