大豆苷元对HEC-1B细胞增殖及雌激素受体报告基因表达的影响

目的探讨大豆苷元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其对雌激素受体报告基因表达的影响。方法体外培养子宫内膜癌细胞子宫内膜癌雌、孕激素受体阴性细胞系(HEC-1B),采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度大豆苷元对子宫内膜癌细胞增殖的影响,同时检测大豆苷元对雌激素应答原件(ERE)调控的雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)的荧光素酶报告基因表达的影响。结果大豆苷元对HEC-1B细胞体外增殖有明显抑制作用,差异有统计学意义(P<0.01),其抑制作用有明显量效和时效性特征。在浓度为20～80×10-6mol/L的大豆苷元作用下,报告基因luc的表达较正常对照组明显提高,差异有统计学意义(P<0.05),在80×10-6mol/L时到达最高值;大豆苷元通过ERβ介导的报告基因表达水平的升高程度强于ERα,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大豆苷元可通过调节子宫内膜癌细胞ERα和ERβ介导的报告基因的表达,调整ERα/ERβ比例,从而抑制子宫内膜癌细胞的增殖。     

植物雌激素的筛选及抗皮肤老化的体外研究

目的筛选植物雌激素,并进一步研究植物雌激素对成纤维细胞合成胶原蛋白的影响。方法采用细胞增殖实验(MTT法)观察64种植物提取物或有效部位对雌激素受体(ER)阳性细胞系MCF-7增殖的影响,筛选具有雌激素样作用的植物提取物或有效部位;并用ER阴性的MDA-MB-231细胞和ER拮抗剂ICI 182780,考察促进MCF-7细胞的增殖作用是否由ER介导。采用圆点印迹法评估植物雌激素对成纤维细胞合成1型原胶原蛋白(PC-1)的影响。结果在筛选的64种植物提取物或有效部位中,葛根、决明子、啤酒花、桑叶、甘草植物提取物及大豆异黄酮可有效诱导MCF-7细胞增殖,但对MDA-MB-231细胞无诱导增殖作用;ICI 182780抑制其诱导MCF-7细胞增殖的作用。葛根素和染料木素显著促进人成纤维细胞合成PC-1(P<0.01),其中葛根素的作用较强;黄豆苷元则显著抑制PC-1合成(P<0.01)。结论葛根提取物和大豆异黄酮具有较强的雌激素样活性,主要的活性成分葛根素和染料木素可显著促进人成纤维细胞合成胶原蛋白,提示具有潜在的祛皱、抗皮肤老化的功效。     

雷洛昔芬对血管内皮细胞ERE转录活性的影响及与雌激素受体亚型的关系

目的:研究雷洛昔芬对血管内皮细胞雌激素应答元件(ERE)转录活性的影响与雌激素受体(ER)亚型的关系。方法:采用腺病毒载体将雌激素受体α型(ERα)或雌激素受体β型(ERβ)导入培养的血管内皮细胞,构建ERE荧光素酶报告基因质粒ERE鄄TK鄄Luc,采用真核细胞转染技术将ERE鄄TK鄄Luc与内参照质粒PRL鄄SV40共同转染血管内皮细胞,双荧光素酶报告法检测雷洛昔芬刺激的转染细胞荧光素酶的相对活性。结果:导入ERα细胞,雷洛昔芬刺激后荧光素酶活性为0.0247±0.0008,显著低于未接受雷洛昔芬刺激细胞的0.0418±0.0007穴P<0.001雪;导入ERβ的细胞,雷洛昔芬刺激后荧光素酶活性为0.0304±0.001,未接受雷洛昔芬刺激的细胞为0.0306±0.003,二者相比无明显变化(P>0.05)。结论:雷洛昔芬显著抑制ERα介导的血管内皮细胞ERE转录活性。     

金雀异黄素对雌激素依赖靶基因转录的调节作用

目的观察金雀异黄素(genistein,GNT)对雌激素受体(estrogen receptor,ER)靶基因的转录调节作用。方法采用不同浓度的金雀异黄素(5、10、20 ng/m L)+雌二醇(10 ng/m L)或雌二醇单独处理乳腺癌细胞MCF7,36 h后收集细胞检测金雀异黄素对雌激素反应元件(estrogen response element,ERE)报告基因的转录调控作用,通过定量PCR技术检测金雀异黄素对ER靶基因PDZK1和GREB1转录水平的影响。结果随着金雀异黄素浓度的增高,ER报告基因的转录水平逐渐下降,与之相一致,PDZK1和GREB1的转录水平也逐渐下降,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论金雀异黄素能够与雌二醇竞争结合细胞表面的ER,并拮抗ER调控的靶基因表达。     

大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)

目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

大豆异黄酮以雌激素非依赖方式改善自发性高血压大鼠的内皮功能

大豆异黄酮类化合物中染料木素和大豆黄素的结构与17β-雌二醇非常相似，都是雌激素受体α型和β型的配体，且对雌激素受体β型有更强的亲和力。作者比较研究了染料木素、大豆黄素和17β-雌二醇对自发性高血压大鼠（SHR）和Wistar Kyoto大鼠（WKY）离体主动脉环内皮功能的作用和可能机制。     

雌激素受体亚型介导的荧光素酶报告基因试验方法的建立及应用

目的 建立人源性雌激素受体（hERα/β）介导的荧光素酶报告基因试验方法,比较不同雌激素受体亚型介导的报告基因试验的反应性和灵敏度,为检测内分泌干扰物拟雌激素活性提供研究工具。方法 以恒河猴肾细胞（LLC-MK2）为转染细胞,以萤火虫荧光素酶基因（Luc）为报告基因,利用瞬时转染的方法,将表达hERα/hERβ的质粒与重组Luc报告基因质粒pERE-minP-Luc2P、内对照质粒pGL4.74共转染LLC-MK2细胞,建立由hERα/β介导的Luc报告基因试验方法。以雌二醇(E 2)、己烯雌酚(DES)作为阳性受试物,以10-5 mol/L 雌激素拮抗剂（ICI 182,780）和不同浓度的E 2共同染毒,观察Luc表达的变化。用双酚A（BPA）和染料木黄酮（GS）对方法的有效性进行检验并比较雌激素受体两亚型反应性、灵敏度和特异性。结果 hERα报告基因系统对E 2的最低检测限为1.9×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的30.7倍。hERβ报告基因系统对E 2的最低检测限为2.2×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得最高诱导倍数,是对照组的14.4倍。ICI 182,780在10-5 mol/L浓度下能显著抑制两个报告基因系统E 2的雌激素活性。未转染受体表达载体hER-pcDNA3.1的LLC-MK2细胞用不同浓度E 2诱导,两个报告基因系统均与E 2无明显反应。BPA和GS在以上两个不同的报告基因系统中均能诱导Luc表达,但同一受试物在不同雌激素亚型介导的报告基因系统中表达倍数不同。结论 本研究建立ER不同亚型的报告基因试验有较高的灵敏度和重复性。hERα介导的报告基因试验灵敏度高于hERβ,在hERα系统中BPA雌激素活性强于GS,在hERβ系统中GS雌激素活性强于BPA。     

大豆苷原对成骨细胞MC3T3-E1甾体激素受体辅激活因子1表达的调节作用及其机制

目的：研究大豆苷原对成骨细胞MC3T3－E1甾体激素受体辅激活因子1（steroid receptor coactivator-1,SRC-1）和核受体辅抑制因子（nuclear receptor corepressor,NcoR）表达的调节作用及其机制。方法：体外培养MC3T3-E1细胞于含29／6胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）的α最低必须培养基（α—minimal essential medium,α—MEM）中,给予不同浓度大豆苷原或10^-6 mol／L的雌二醇作用3d后收获细胞,采用蛋白质印迹法观察SRC-1和NcoR蛋白的表达水平。分别应用雌激素受体（estrogen receptor,ER）拮抗剂ICI182780（Faslodex,ICI,10^-7 mol／L）和雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）特异性拮抗剂（methyl—piperidino—pyrazole,MPP,10^-6 mol／L）干预,观察大豆苷原对细胞SRC-1和NcoR蛋白表达水平的影响。结果：大豆苷原可上调MC3T3-E1细胞SRC-1的表达,10^-7mol／L和10smol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别增加至对照组的2．5倍（P〈0．05）和2倍（P〈0．05）。各剂量组NcoR表达水平与对照组比较差异无统计学意义。雌二醇组SRC-1水平与对照组比较未见明显变化,而其NcoR表达水平较对照组下调35％（P〈0．05）。ICI182780可拮抗大豆苷原对SRC-1的上调作用。在ICI182780作用下,各剂量组SRC-1蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义;MPP干预下,10^-7mol／L和10^-5 mol／L大豆苷原组SRC-1的蛋白水平分别为对照组的1．8倍（P〈0．05）和2．4倍（P〈0．05）。结论：大豆苷原可增加成骨细胞SRC-1的蛋白表达水平,提高细胞SRC-1／NcoR比值。ER8参与了大豆苷原对SRC-1的调节过程。成骨细胞内SRC-1蛋白的增加和SRC-1／NcoR比值的提高是大豆苷原促进成骨细胞分化的机制之一。     

雌激素受体在乳腺癌中的表达及其临床意义

长久以来人们发现雌激素能够调控乳腺的生长、分化以及功能。而雌激素必须与雌激素受体(estrogen receptor,ER)结合以后才能对靶细胞发挥生物学效应。因此,ER在调节正常乳腺的生长、分化以及乳腺癌的发生和进展方面起到了重要作用。现就此做一综述。1 ER的结构和作用机制1.1 ER的结构ER是配体依赖转录活性因子超家族(类固醇激素受体、甲状腺激素受体、维生素D3受体、维甲酸受体等)成员之一,有ERα和ERβ两种亚型[1.2],ERα和ERβ有不同的基因编码。ERα基因位于6号染色体的6q 25.1区,由140 kb碱基构成,编码由595个氨基酸组成、分子…     

Modulation of Isoflavones on Bone—nodule Formation in Rat Calvaria Osteoblasts in vitro

Objective:to observe the effects of two main isoflavones,daidzein and genistein on the bone-nodule formation in rat calvaria osteoblasts in vitro.Methods:Osteoblasts obtained from newborn Sprague-dawley rat calvarias were cultured for several generations.The second generation cells were cultured in Minimum Essential Medium supplemenmted with ascorbic acid and Na-beta-glycerophosphate for several days,in the presence of daidzein and genistein,with or without the estrogen receptor antagonist ICI 182780.Number of nodules was counted at the end of the incubation period(day 20) by staining with Alizarin Red S calcium stain.The release of osteocalcin,as a marker of osteoblast activity,was also determined on day 7 and 12 during the incubation period.Results:compared with the control,the numbers of nodules were both increased by incubation with daidzin and genistein,17β-estradiol was used as a positive control and proved to be a more effective inducer of the increase in bone-nodules formation than daidzein and genisterin.The release of osteocalcin into culture media was also increased in the presence of daidzein and genistein,as well as 17β-estradiol on day 7 and day 12(day 12 were higher).The estrogen receptor antagonist ICI 182780 completely blocked the genistein-and 17β0estradiol-induced increase of nodule numbers and osteocalcin release in osteoblasts.Howerver,the effects induced by daidzein could not be inhibited by ICI 182780.Conclusion:These findings suggest that geinistein can stimulate bone-nodule formation and increase the release of osteocalcin in rat osteoblasts.The effects,like those induced by 17β-estradiol,are mediated by the estrogen receptor dependent pathway,Daidzin also can stimulate bone-nodule formation and increase the release of osteocalcin in rat osteoblasts,but it is not,at least not merely,mediated by the estrogen receptor dependent pathway.     

金雀黄素对子宫内膜癌细胞Erα和ERβmRNA水平的调节

目的:研究金雀黄素对子宫内膜癌细胞ERα,ERβ mRNA的调节作用,探讨植物雌激素对子宫内膜癌的作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据.方法:体外培养子宫内膜癌细胞系Ishikawa,采用实时荧光定量RT-PCR方法,观察不同剂量金雀黄素对两种雌激素亚型表达的影响,阳性对照为雌二醇、孕酮作用组.结果:(1)低剂量金雀黄素能提高子宫内膜癌细胞ERα mRNA表达,但其作用较雌二醇明显弱;低剂量金雀黄素能降低ERβ mRNA的表达,而雌二醇对ERβ mRNA作用不明显.(2)高剂量金雀黄素的作用与孕酮相似,能下调子宫内膜癌细胞ERα mRNA和ERβ mRNA表达,但较孕酮作用弱.结论:金雀黄素对子宫内膜癌细胞ERα mRNA和ERβ mRNA的表达作用不同,而且与其剂量有一定关系.推测金雀黄素有雌激素受体调节剂的作用.     

雌激素受体拮抗剂ICI182780(Faslodex)对17β-雌二醇作用下子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182780(Faslodex)对17β-雌二醇(E2)作用下ER阳性的Ishikawa细胞和ER低表达的HEC-1A子宫内膜癌细胞系细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨ICI182780治疗子宫内膜癌的可行性.方法:应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞技术观察ICI182780对E2作用下的子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.结果:随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌细胞在570 nm处的光密度值增大,Ishikawa细胞G0～G1期的比例减少,S期的比例增多,HEC-1A细胞各期的比例变化不显著.随着ICI182780的浓度增加,ICI182780可以使E2作用下Ishikawa细胞的光密度值逐渐下降至基础状态水平,并且使其发生细胞凋亡,表现为早期凋亡细胞增多,使细胞G0～G1期的比例升高,S期的比例下降;HEC-1A细胞的上述变化不显著.结论:ICI182780可以抑制E2对Ishikawa细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,同时也使细胞周期停滞在G1期;ICI182780对HEC-1A细胞的增殖、凋亡和细胞周期无明显影响.ICI182780有可能用于ER阳性子宫内膜癌的治疗.     

金雀黄素和大豆黄酮对人乳腺癌细胞系体外增殖作用的影响

应用体外细胞培养和MTT比色法.研究大豆异黄酮类化合物金雀黄素和大豆黄酮对人乳腺癌细胞系体外增殖作用的影响.结果大豆异黄酮类化合物能明显抑制人乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231的体外增殖,且呈明显的剂量依赖性和时间依赖性.金雀黄素和大豆黄酮对MDA-MB-231细胞的抑制作用不如MCF-7明显,而金雀黄素的抑制作用优于大豆黄酮.说明金雀黄素和大豆黄酮对乳腺癌细胞系体外增殖具有明显的抑制作用,为进一步阐明其防癌抑癌作用机理奠定了实验基础.     

雌激素受体亚型与子宫内膜癌预后因素的关系

目的　研究子宫内膜癌组织中 ERα m RNA和 ERβ m RNA表达状况及其与子宫内膜癌预后因素的关系。方法　用双重 RT- PCR测定 4 1例子宫内膜癌组织中 ERα m RNA和 ERβ m RNA的表达 ,分析 ERα/ ERβm RNA比值与子宫内膜癌预后因素的关系。结果　 4 1例子宫内膜癌组织中 ERα m RNA阳性率为 95 % (39/ 4 1) ,ERβ m RNA阳性率为 90 .2 % (37/ 4 1)。 ERα/ ERβ>1者 2 1例、占 5 1.2 % ,ERα/ ERβ<1者 14例、占 34.1%。 ERα/ERβ m RNA比值与子宫内膜癌预后因素相关。结论　 ERα m RNA相对高表达 (ERα/ ERβ>1)可能是子宫内膜癌预后良好的指标。 ERβ m RNA相对高表达 (ERα/ ERβ<1)可能与子宫内膜癌预后不良有关。     

大豆异黄酮激活PPARγ促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡

目的探讨染料异黄酮(genistein,GEN)和大豆苷元(daidzein,DAI)对人前列腺癌DU-145细胞凋亡的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活体受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)的关系。方法采用过氧化物酶体增殖物反应元件(peroxisome proliferator responsive element,PPRE)驱动的荧光素酶报告基因检测GEN、DAI对DU-145细胞PPARγ的激活作用;GEN、DAI单独或联合PPARγ选择性拮抗剂GW9662处理DU-145细胞,采用免疫荧光化学染色方法观察PPARγ定位分布变化;TUNEL法和AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果 GEN、DAI明显增强转染PPRE-TK-Luc质粒的DU-145细胞中荧光素酶表达活性,且这种作用可被GW9662所逆转。GEN或DAI单独作用于DU-145细胞时,PPARγ发生核移位;细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。GW9662分别与GEN或DAI联合作用时,GEN、DAI促进PPARγ核移位和诱导细胞凋亡的作用明显削弱(P<0.05)。结论大豆异黄酮可通过激活PPARγ信号途径,促进人前列腺癌DU-145细胞凋亡。