CD133基因表达与人脑胶质瘤恶性程度相关性分析

目的探讨人脑胶质瘤组织中胶质瘤干细胞标志物CD133的表达与肿瘤恶性程度的关系。方法应用实时荧光定量PCR方法检测75例不同病理级别胶质瘤组织及4例正常脑组织中CD133基因的表达情况，并与肿瘤病理级别进行相关性分析；同时采用免疫组化法检测35例肿瘤组织和2例正常脑组织中CD133的表达情况，在蛋白表达水平予以验证。结果CD133在基因转录水平和蛋白表达水平具有良好的相关性。CD133在正常脑组织中未见表达，在各级别胶质瘤中均有表达，且差异有显著性（P〈0．01）；CD133表达量与肿瘤的恶性程度呈正相关（P〈0．01）。结论检测胶质瘤CD133表达水平有助于评价肿瘤的生物学行为，并为针对肿瘤干细胞的靶向治疗提供参考依据。     

人脑胶质瘤中CD133的表达及其意义

目的 探讨CD133 mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达及其与病理分级的相关性.方法 用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)对43例胶质瘤患者、16例正常脑组织标本(均为急性颅脑损伤患者行内减压术切除的脑组织)进行CD133 mRNA检测.结果 (1)43例胶质瘤组织中CD133 mRNA表达全部呈阳性,而16例正常脑组织标本中仅有1例CD133 mRNA表达呈弱阳性.病例组和正常对照组CD133 mRNA的阳性率分别为100%和6.25%.病例组和对照组CD133 mRNA表达阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).(2)在病例组中,参照1993年WHO分级标准分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级组,计算分组的标本CD133 mRNA与β-actin mRNA灰度比值.Ⅰ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间CD133 mRNA表达均高于Ⅰ级;Ⅱ级和Ⅲ、Ⅳ级之间差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅲ、Ⅳ级之间CD133 mRNA表达均高于Ⅱ级.(3)相关性分析:CD133 mRNA表达量与胶质瘤病理分级呈正相关性(r=0.987,P＜0.001).结论 检测胶质瘤组织中CD133 mRNA的表达可用于胶质瘤患者的诊断及恶性程度和预后的判断.     

胶质瘤中CD105与VEGF表达的相关性

目的探讨胶质瘤组织中CD105与血管内皮生长因子(VEGF)表达的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测58例胶质瘤和10例正常脑组织标本中CD105和VEGF蛋白表达情况,并分析其相关性。结果①正常脑组织CD105蛋白表达阴性,而各级胶质瘤组织均有CD105蛋白阳性表达。高倍视野(×200倍)下Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织CD105标染的微血管密度(CD105-MVD)分别为(6.33±2.97)个/视野、(10.69±2.88)个/视野、(19.13±5.14)个/视野和(25.13±5.51)个/视野,且与病理分级呈正相关(r=0.834,P<0.01),不同级别各组间均差异显著(P<0.01)。②VEGF在正常脑组织中表达阴性,而在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤组织阳性细胞率分别为(15.00±3.39)%、(20.26±9.64)%、(36.19±10.75)%和(55.94±11.69)%,且与病理分级呈正相关(r=0.836,P<0.01)。除Ⅰ级和Ⅱ级胶质瘤间无明显差异外,其余各组间均有明显著差异(P<0.01)。③CD105-MVD与VEGF阳性细胞率呈显著正相关(r=0.671,P<0.01)。结论胶质瘤组织中CD105-MVD与VEGF阳性细胞率有显著相关性,可作为判断胶质瘤恶性程度的指标之一。     

胶质瘤中CD105与VEGF、Ki-67表达的相关性

目的探讨胶质瘤中CD105与血管内皮生长因子(VEGF)、Ki-67表达的相关性。方法对58例胶质瘤和10例正常脑组织标本采用免疫组化法检测CD105、VEGF、Ki-67蛋白表达情况并分析其相关性。结果①在正常脑组织中CD105、VEGF和Ki-67均表达阴性,且与各级胶质瘤的表达相差显著(P<0.01)。②Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤CD105标染的微血管密度(CD105-MVD)分别为(6.33±2.97)个/视野、(10.69±2.88)个/视野、(19.13±5.14)个/视野和(25.13±5.51)个/视野,不同级别的胶质瘤间差异显著(P<0.01),且其表达与病理分级呈正相关(r=0.834,P<0.01)。③Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤VEGF阳性细胞百分率分别为(15.00±3.39)%、(20.26±9.64)%、(36.19±10.75)%和(55.94±11.69)%,除Ⅰ、Ⅱ级之间外,其余各级别胶质瘤间相差显著(P<0.01),且其表达与胶质瘤病理分级呈正相关(r=0.836,P<0.01)。④Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤Ki-67标记指数(Ki-67LI)分别为(4.20±1.30)%、(5.32±2.08)%、(9.88±3.24)%和(22.25±6.68)%,除Ⅰ、Ⅱ级之间外,其余各级别胶质瘤间相差显著(P<0.01),且其表达与胶质瘤病理分级呈正相关(r=0.872,P<0.01)。⑤CD105-MVD与VEGF阳性细胞百分率、Ki-67LI均呈显著正相关(r1=0.671,r2=0.699,P<0.01)。结论胶质瘤中CD105-MVD与VEGF阳性细胞百分率、Ki-67LI均有显著相关性,提示其可作为判断胶质瘤恶性程度的指标。     

人脑胶质瘤中CD15、Ki-67的表达及其临床意义

目的研究细胞粘附分子CD15及Ki-67抗原在人脑胶质瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化S-P法检测例正常脑组织和858例人脑胶质瘤组织中CD15和Ki-67的表达。结果CD15和Ki-67在正常脑组织中均不表达,而在各级别的人脑胶质瘤中均有表达差异极显著,(P<0.01)。CD15和Ki-67的表达在高级别胶质瘤中均显著高于低级别胶质瘤(P<0.01),且CD15和Ki-67的表达呈显著正相关(P<0.05,r=0.462)。结论Ki-67可以作为评估胶质瘤细胞增殖的良好指标,CD15和Ki-67的表达可为判断胶质瘤的恶性程度和临床病理分级提供有意义的依据。     

ILK与PKB在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨整合素连接激酶（ILK）和蛋白激酶B（PKB）在正常脑组织及脑胶质瘤组织中的表达及临床病理意义。方法采用免疫组织化学SP染色技术测定8例正常脑组织及51例脑胶质瘤组织中ILK和PKB的表达。结果ILK和PKB蛋自在正常脑组织中均阴性表达,而在各级别胶质瘤组织巾均有不同程度的表达,并随着胶质瘤恶性程度的增高,ILK和PKB表达的阳性细胞率逐渐增高,其在高级别胶质瘤中的表达明显高于低级别胶质瘤（P〈0．05）。在胶质瘤中ILK和PKB蛋白表达呈显著正相关（r=0．95,P〈0．05）。结论ILK和PKB蛋白在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的临床病理分级密切相关,可能参与胶质瘤的发生发展,联合检测有助于判断胶质瘤恶性程度及预后。     

脑肿瘤干细胞的增殖活性与病理级别的相关性研究

目的检测增殖细胞核标记物Ki-67与脑肿瘤干细胞（BTSCs）标记物CD133、Nestin在60例脑胶质瘤组织中的表达,探讨BTSCs的增殖活性与病理级别的相关性。方法采用免疫组织化学SP法检测CD133、Nestin和Ki-67在60例胶质瘤组织中的表达;采用免疫荧光双染法检测Ki-67、CD133和Nestin之间的共表达情况。计算两种方法中CD133＋细胞、Nestin＋细胞和Ki-67＋细胞所占的百分率,并将Ki-67＋细胞与CD133＋细胞、Nestin＋细胞和肿瘤病理分级分别进行相关性分析。结果按照WHO 2000的神经系统肿瘤分类分级标准所有标本分为Ⅱ级18例,Ⅲ级23例,Ⅳ级19例,在不同的病理级别组中,CD133＋、Nestin＋和Ki-67＋细胞的表达有明显差异,并且免疫荧光双染相比免疫组化单染更能代表BTSCs的增殖活性研究。在免疫荧光共表达中,随着病理级别的升高,CD133＋/Ki-67＋细胞（F=30.668,P=0.000）或Nestin＋/Ki-67＋细胞（F=15.316,P=0.000）的百分比差异都有显著性,并且同时均与CD133＋/Nestin＋BTSCs的表达成正相关。结论Ki-67＋指标与肿瘤级别成正相关,可以作为预后判断的指标,同时与BTSCs标记物CD133、Nestin的表达之间也有明显的相关性,并且,免疫荧光双染得出的BTSCs的增殖活性与病理级别的相关性研究更有统计学意义。     

端粒结合蛋白-1在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨端粒结合蛋白-1(TRF-1)在不同级别脑胶质瘤及正常脑组织中的表达及其临床意义。方法选取58例脑胶质瘤和10例脑外伤内减压脑组织石蜡切片标本作为研究对象,应用免疫组化技术检测各组TRF1的表达水平,应用半定量法计算不同标本肿瘤细胞免疫标记的频率和强度积分。结果共58例不同级别胶质细胞瘤,其中低度恶性组(WHOⅠ、Ⅱ级)27例,高度恶性组(WHOⅢ、Ⅳ级)31例,10例脑外伤病人内减压脑组织作为正常对照。在所有胶质瘤组织及正常脑组织中均检测到TRF1表达,其中正常脑组织中TRF1表达高积分构成比90.00%,低度恶性胶质瘤组(WHOⅠ、Ⅱ级)的TRF1表达高积分构成比62.96%,高度恶性胶质瘤组(WHOⅢ、Ⅳ级)29.03%。统计分析发现,TRF1在不同级别胶质瘤中的表达与其恶性程度成负相关。结论在人脑胶质瘤和正常脑组织均有TRF1的广泛表达,其在不同级别脑胶质瘤中的表达水平与其恶性程度负相关,即随肿瘤的恶性程度的增高出现表达下调,TRF1可作为脑胶质瘤临床病理分级和恶性程度判断的参考指标。     

胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67及MGMT 的表达及临床意义

目的 探讨不同级别胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67 及MGMT 的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测152 例胶质瘤中P53、EGFR、Ki-67 及MGMT 表达,统计分析上述蛋白的表达差异.结果 P53 在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中阳性率分别为71.4%,73.1%和60.0%.95 例EGFR 阳性,其阳性表达率与染色强度均与病理级别呈正相关(P ＜0.01).Ki-67 均为阳性表达,Ki-67LI 在高级别胶质瘤中明显高于其在低级别胶质瘤中的表达水平(P ＜0.01).MGMT 阳性84 例,阴性68 例,在低级别胶质瘤和高级别胶质瘤之间的MGMT 表达无明显差异(P ＞0.05).结论 EGFR 和Ki-67 表达与肿瘤病理级别呈正相关,与胶质瘤恶性进展及预后差密切相关.P53 和MGMT 与肿瘤病理级别无明显相关性.检测有助于评估胶质瘤侵袭能力、增殖性,预测胶质瘤对放、化疗敏感性及判断分子靶向药物治疗是否有效.     

人脑胶质瘤中Livin、p53的表达及其与肿瘤恶性程度的关系

目的 探讨Livin、p53在不同级别人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的关系.分析二者在胶质瘤细胞凋亡过程中的信号转导机制.方法 应用免疫组织化学技术检测Livin、p53蛋白在41例人脑胶质瘤和10例正常脑组织中的表达.结果 Livin、p53蛋白在10例正常脑组织中均不表达,在41例胶质瘤组织中表达率分别为87.8%和41.5%.Livin和p53蛋白在低级别胶质瘤中表达较低,在高级别胶质瘤中表达较高,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Spearman等级相关分析显示,Livin蛋白与p53蛋白表达呈正相关(r=1.000,P＜0.01).结论 Livin和p53在人脑胶质瘤组织中表达上调,细胞凋亡受到抑制,引起肿瘤恶性增殖,与胶质瘤病程发展、恶性程度明显相关,这可能是胶质瘤恶性增殖的一个机制.     

瘦素与CD105在胶质瘤组织中的表达及其相关性研究

目的观察脑胶质瘤组织中瘦素和CD105的表达情况及其相关性,并探讨其意义。方法采用免疫组织化学染色法检测54例不同级别的脑胶质瘤组织及14例正常脑组织中瘦素与CD105的表达。结果正常脑组织中未检测到瘦素与CD105的表达。胶质瘤组织中瘦素和CD105的阳性表达率分别为75．93％和81．48％,且胶质瘤病理级别与二者的表达呈明显正相关（P〈0．01）;胶质瘤组织中瘦素与CD105表达呈正相关（P〈0．01）。结论瘦素可能参与了脑胶质瘤的发展,并可促进肿瘤组织中新生血管的生成。     

NF—κB和uPA在人脑胶质瘤中的表达

目的 究人脑胶质瘤中核转录因子-κB（NF—κB）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的表达，探讨二者在胶质瘤侵袭性生长和恶性进展中的作用。方法 用免疫组化SP法检测52例脑胶质瘤和5例正常脑组织中NF—κB和uPA的表达和分布情况.结果 NF-κB及uPA在正常脑组织中均未见表达；在52例脑胶质瘤中NF-κB有41例表达，其在高级别胶质瘤中的阳性表达率高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。uPA在52例胶质瘤中则全部表达，其在高级别胶质瘤中的表达强度明显高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。NF-κB和uPA在胶质瘤中的表达呈正相关（r=0.542，P〈0．01）。结论 脑胶质瘤中，活化的NF-κB可促进uPA表达．从而促进胶质瘤的侵袭性和恶性进展。     

25例恶性胶质瘤中肿瘤干细胞的分离与检测

目的 从不同病理级别胶质瘤组织标本中分离、培养并鉴定胶质瘤干细胞.方法 取25例(23例原发胶质瘤,2例复发胶质瘤)新鲜人脑胶质细胞瘤标本,分离脑肿瘤细胞,接种于含生长因子的无血清达尔伯克(氏)必需基本培养基/F-12(DMEM/F-12)培养基中培养至细胞形成干细胞球,免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞CD133、Nestin的表达情况,干细胞球诱导分化后检测细胞表面分化标记物β微管蛋白Ⅲ(β-TubulinⅢ)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)表达情况.结果 被检测的23例原发胶质瘤标本中,随着胶质瘤级别的增高,形成神经球的时间缩短,数量增多.2例复发胶质瘤组织分离得到的细胞形成的神经球较原发胶质瘤快而多.免疫荧光方法检测神经球CD133、巢蛋白(Nestin)表达阳性.神经球细胞经诱导分化后β-TubulinⅢ、GFAP表达阳性.结论 胶质瘤组织中存在肿瘤干细胞,不同级别胶质瘤中BTSC数量及增殖能力不同.     

BDNF在人脑胶质瘤的表达和意义

目的研究脑源性神经营养因子（BDNF）在人脑胶质瘤内的表达以及他们与胶质瘤病理分级的关系。方法用免疫组织化学亲合素-生物素过氧化物酶复合物法（ABC法）和Westernblot检测了5例正常人脑组织和80例胶质瘤样本中BDNF表达水平。结果免疫组化和Westernblot结果显示正常人脑和各级胶质瘤组织内均有BDNF表达,阳性反应物主要位于胞浆。BDNF在胶质瘤中的蛋白水平高于正常脑组织（P〈0．05）,且随胶质瘤病理级别的增加而逐渐增高（P〈0．05）。结论胶质瘤中BDNF表达随病理级别增高而增加,提示BDNF在胶质瘤的发生过程中起重要作用。     

IL-13RoL2在脑胶质瘤中的表达及其临床诊断意义

目的探讨自细胞介素13受体α2（IL-13Rα2）在脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度的关系。方法免疫组化染色检测59例脑胶质瘤、3例脑膜瘤、3例癫痫病灶组织、5例正常脑组织及U251细胞中IL-13Rα2蛋白的表达,分析其与肿瘤恶性程度的关系。结果正常脑组织、脑膜瘤及癫痫病灶中均无IL-13Rα2的表达;而59例胶质瘤组织中33例IL-13Rα2表达阳性,阳性率55．9％;胶质瘤组织IL-13Rα2阳性表达率显著高于非胶质瘤组织（P〈0．05）。高级别胶质瘤（Ⅲ、Ⅳ级）IL-13Rα2阳性表达率为78．1％（25／32）,低级别（Ⅰ、Ⅱ级）胶质瘤为29．6％（8／27）,两者相较差异显著（P〈0．05）。U251细胞IL-13Rα2表达阳性。结论本结果提示胶质瘤中IL-13Rα2蛋白表达与其恶性程度有关。     

脑胶质瘤干细胞鉴定与增殖及耐药特性的实验研究

目的 从胶质瘤组织中分离和培养出肿瘤干细胞,并初步探讨其生长特性. 方法 收集脑胶质瘤手术标本并获取细胞,用含有表皮生长因子(EGF)、白血病细胞抑制因子(LIE)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的无血清培养液原代培养,再经免疫磁珠分离得到CD133+细胞.并用免疫细胞化学技术检测CD133、NSE和GFAP在细胞中的表达以鉴定CD133+细胞,比较不同恶性级别胶质瘤组织的CD133+细胞生长情况,并用CCK8法比较CD133+和CD133-细胞对替尼泊苷(VM-26)的耐药性. 结果 从胶质瘤组织中成功分选获得CD133+细胞,这些细胞能自我更新,增殖,并分化成NSE+和GFAP+的细胞.恶性度高的胶质瘤组织中CD133+细胞生长速度明显比低级别中的CD133+细胞快,且CD133+细胞在含有VM-26培养基中的存活细胞数显著多于CD133-细胞(P＜0.05). 结论 胶质瘤组织中存在肿瘤干细胞,这类细胞具有很强的耐药性,高恶性度胶质瘤组织中的CD133+细胞具有更强的增殖能力.