组蛋白H3乙酰化对脑胶质瘤中Nanog基因的调控作用

目的：探讨组蛋白H3乙酰化修饰对脑胶质瘤增殖相关标记因子Nanog的调控作用。方法体外培养胶质瘤U87细胞,用不同浓度的Apicidin在不同时间内干预U87细胞作为实验组,另设加入DMSO溶剂的DMSO组,及不加药的空白对照组。MTT增殖实验观察Apicidin对细胞增殖的影响,并选出合适的干预浓度。Real-time PCR检测Nanog mRNA表达水平变化,Western blot检测组蛋白H3乙酰化及Nanog蛋白水平,染色质免疫共沉淀（ChIP） Real-time PCR技术检测Nanog启动子区域组蛋白H3乙酰化水平。结果 MTT结果显示：实验组细胞生长出现显著抑制,48 h内细胞增殖的半数抑制浓度IC50为（1.74±0.13）μmol/L。与空白对照组比较,实验组脑胶质瘤U87细胞中Nanog mRNA表达降低46.52%±0.53%（P＜0.05）,H3乙酰化水平和Nanog蛋白也均明显降低（P＜0.05）,实验组Nanog启动子区组蛋白H3乙酰化水平降低46.52%±0.82%（P＜0.05）。结论在脑胶质瘤细胞系中,组蛋白H3低乙酰化水平抑制Nanog表达,Nanog受组蛋白H3乙酰化修饰的调控。     

胶质瘤组织中Nanog基因的表达及其意义

目的探讨Nanog基因在不同病理级别胶质瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法和逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR）方法从蛋白和mRNA水平检测50例不同病理级别胶质瘤组织和7例正常脑组织标本中Nanog的表达。结果 Nanog蛋白在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性细胞率分别为18.3%±9.6%、37.9%±19.0%、53.4%±19.8%,差异有统计学意义（F=14.918,P=0.000）;NanogmRNA的相对含量在胶质瘤组织WHOⅡ级、Ⅲ级、Ⅳ级中分别为0.1824±0.0310、0.3730±0.0961、0.4594±0.0453,差异有统计学意义（F=65.901,P=0.000）,Nanog蛋白和mRNA表达强度随着病理级别增高而升高,而在正常脑组织中均未见表达。结论 Nanog在胶质瘤组织中高表达,其表达强度与病理级别密切相关,为进一步研究其与肿瘤干细胞关系及其在胶质瘤的生物学行为中所发挥的作用奠定基础。     

曲古抑菌素A调节U251细胞组蛋白乙酰化和NDRG2表达

目的观察曲古抑菌素A（TSA）对脑胶质瘤细胞组蛋白H4乙酰化的调节和对NDRG2表达的影响及其对细胞增殖的作用。方法0．1～1．0μmol／LTSA分别处理U251细胞12～96h后用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法比色检测U251细胞的生长活性,流式细胞仪（FCM）分析细胞周期,实时定量多聚酶链反应（real—timePCR）检测U251细胞NDRG2的mRNA表达水平,Westernblot方法检测组蛋白H4乙酰化和NDRG2蛋白的表达水平。结果TSA可明显抑制U251细胞的增殖;流式细胞仪检测显示G0／G1期细胞比例增加,S期细胞比例略有降低,表明发生G0／G1阻滞,随用药剂量的增加还伴有明显的G2／M阻滞。加入不同浓度TSA后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显增高,组蛋白H4的乙酰化水平也明显增强。结论一定浓度的TSA可抑制U251细胞的增殖,提高组蛋白H4乙酰化及NDRG2的表达水平,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

PD-ECGF、HGF在胶质瘤中的表达及与肿瘤血管生成的关系

目的 探讨胶质瘤组织中血小板源性内皮细胞生长因子（PD—ECGF）、肝细胞生长因子（HGF）的表达及与肿瘤血管形成的关系。方法 用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）测定了30例胶质瘤和6例正常脑组织的PD-ECGF mRNA水平，用NIH Image软件量化分析目标PCR条带的面积与吸光度；采用原位杂交法检测HGF mRNA的表达；用免疫组化法检测CD34的表达，计算微血管密度（MVD）．并结合临床和病理资料进行分析。结果 胶质瘤组织中PD—ECGF基因呈过度表达．高级别（Ⅲ～Ⅳ级）胶质瘤组织中PD—ECGF mRNA的平均表达水平（0．73±0．18）显著高于低级别（Ⅰ～Ⅱ级）胶质瘤（0．47±0．33）及正常脑组织（0．11±0．17），三组比较差异有显著性（P=0．000）；生存时间≥2年组中PD—ECGF mRNA的表达水平（0．47±0．29）低于生存时间〈2年组（0．81±0．11），差异有显著性（P=0．001）。HGF mRNA在正常脑组织均未见表达，在低级别和高级别胶质瘤组织中阳性率分别为35．7％和75．0％，差异有显著性（P=0．030）；生存时间≥2年组中HGF mRNA的阳性表达率（27．8％）低于生存时间〈2年组（83．3％），差异有显著性（P=0．003）。MVD在正常脑组织、低级别和高级别胶质瘤组织中分别为（8±4）个、（20±7）个和（29±6）个，差异有显著性（P=0．000）；MVD和PD—ECGF mRNA、HGF mRNA之间存在显著正相关（r1=0．390，P1=0．033；r2=0．514，P2=0．004），PD-ECGF mRNA和HGF mRNA之间存在显著正相关（r=0．370．P=0．044）。结论 胶质瘤中MVD比正常脑组织显著增高，显示了胶质瘤丰富血供的肿瘤血管生成特征。PD—ECGF、HGF在胶质瘤中的表达显著增强，在肿瘤血管生成中起着重要作用，能共同调节胶质瘤的血管形成．可用于判断胶质瘤的生物学行为．并对判断预后有指导意义。     

H3K27me3与高级别胶质瘤生存预后的关系

目的 探讨组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）与高级别胶质瘤生存预后的关系。方法 选取2015年6月至2017年9月手术切除的64例高级别胶质瘤标本,另选取颅脑损伤内减压术中切除的非肿瘤脑组织10例为对照,免疫组织化学染色法检测组织H3K27me3表达,根据染色评分分为高表达和低表达。随机选取3例非肿瘤脑组织、3例WHO分级Ⅲ级胶质瘤组织、3例WHO分级Ⅳ级胶质瘤组织,应用免疫印迹法检测H3K27me3的蛋白表达。胶质瘤病人随访截止2022年10月,记录总体生存期。结果 免疫组化染色检测结果显示,高级别胶质瘤组织H3K27me3高表达率（59.37%）明显高于非肿瘤脑组织（20.00%;P<0.05）。免疫印迹法检测结果显示,WHO分级Ⅳ级胶质瘤组织H3K27me3蛋白表达水平明显高于WHO分级Ⅲ级胶质瘤组织和非肿瘤脑组织（P<0.05）。64例胶质瘤中位随访时间为62.23个月,5年生存率为37.5%。多因素Cox回归分析显示,H3K27me3高表达是高级别胶质瘤不良生存预后的独立影响因素（P<0.05）。生存曲线分析显示,H3K27me3高表达高级...     

N-cadherin、E-cadherin及β-catenin在胶质瘤中的表达及意义

目的探讨神经-钙粘素（N—cadherin），上皮-钙粘素（E—cadherin）及B—catenin在人脑胶质瘤中的表达及意义。方法采用S—P免疫组化方法检测N—cadherin、E—cadherin、β—catenin在42例不同级别胶质瘤及8例正常脑组织中的表达。结果N—cadherin，E—cadherin及β—catenin的表达在正常脑组织与胶质瘤之间以及胶质瘤的高低级别组间存在显著差异（P〈0．05），并且在生存时间〉2年组与生存时间≤2年组间差别显著（P〈0．05）；N—cadherin与β—catenin的表达随着肿瘤级别的升高而增高，且二者在胶质瘤中的表达呈正相关（P〈0．05，r=0．778）。E—cadherin的表达随着肿瘤级别的升高而下降，E—cadherin与N—cadherin、β—catenin的表达呈负相关（P〈0．05，r1=-0．747，r2=-0．783）；结论提示N—cadherin与β—catenin的过度表达和E—cadherin的表达下调在胶质瘤的侵袭及恶性进展中起着重要作用。N—cadherin与β—catenin的表达可能与胶质瘤患者的预后密切相关，提示可作为反映胶质瘤恶性程度与预后的指标。     

NF—κB和uPA在人脑胶质瘤中的表达

目的 究人脑胶质瘤中核转录因子-κB（NF—κB）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的表达，探讨二者在胶质瘤侵袭性生长和恶性进展中的作用。方法 用免疫组化SP法检测52例脑胶质瘤和5例正常脑组织中NF—κB和uPA的表达和分布情况.结果 NF-κB及uPA在正常脑组织中均未见表达；在52例脑胶质瘤中NF-κB有41例表达，其在高级别胶质瘤中的阳性表达率高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。uPA在52例胶质瘤中则全部表达，其在高级别胶质瘤中的表达强度明显高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。NF-κB和uPA在胶质瘤中的表达呈正相关（r=0.542，P〈0．01）。结论 脑胶质瘤中，活化的NF-κB可促进uPA表达．从而促进胶质瘤的侵袭性和恶性进展。     

NF—κB和uPA在人脑胶质瘤中的表达

目的 究人脑胶质瘤中核转录因子-κB（NF—κB）和尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的表达，探讨二者在胶质瘤侵袭性生长和恶性进展中的作用。方法 用免疫组化SP法检测52例脑胶质瘤和5例正常脑组织中NF—κB和uPA的表达和分布情况.结果 NF-κB及uPA在正常脑组织中均未见表达；在52例脑胶质瘤中NF-κB有41例表达，其在高级别胶质瘤中的阳性表达率高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。uPA在52例胶质瘤中则全部表达，其在高级别胶质瘤中的表达强度明显高于低级别胶质瘤（P〈0．01）。NF-κB和uPA在胶质瘤中的表达呈正相关（r=0.542，P〈0．01）。结论 脑胶质瘤中，活化的NF-κB可促进uPA表达．从而促进胶质瘤的侵袭性和恶性进展。     

胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化检测及意义

目的检测胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区甲基化表达,并探讨其Nanog基因表达的关系。方法使用无血清悬浮培养法获得胶质瘤干细胞并鉴定;采用甲基化特异性多聚酶链反应(MSP)分别检测胶质瘤干细胞和胶质瘤细胞系U87中Nanog基因启动子区甲基化状态,实时定量多酶链反应(RT-PCR)检测相应细胞中Nanog表达情况。结果由U87胶质瘤细胞系成功获得胶质瘤干细胞(GSCs);MSP检测胶质瘤干细胞和U87细胞系Nanog启动子区皆呈非甲基化状态,且胶质瘤干细胞中Nanog非甲基化程度高于U87细胞系(t=6.988,P=0.000)。实时定量PCR结果显示胶质瘤干细胞中Nanog mRNA相对表达量高于U87细胞系。结论胶质瘤干细胞中Nanog基因启动子区呈非甲基化状态,可能与Nanog基因表达有关,且可能促进Nanog的转录并维持着胶质瘤干细胞的恶性生物学活性。     

缝隙连接蛋白43和胰岛素样生长因子Ⅰ与脑胶质瘤恶性程度的相关性研究

目的 探讨缝隙连接蛋白43（cx43）、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）和细胞核相关抗原Ki-67在人脑胶质瘤中的表达及相关性。方法 采用免疫组织化学SP法检测45例胶质瘤组织和10例正常脑组织中Cx43、IGF-Ⅰ、Ki-67的表达。结果 Cx43在Ⅰ-Ⅱ级脑胶质瘤中阳性表达率为87．5％，Ⅲ-Ⅳ级中的阳性表达率为42．9％，两者间的差异有显著性（P〈0．01），且随Ki-67表达升高而降低（r=-0．893，P〈0．01）；IGFⅠ在Ⅰ-Ⅱ级脑胶质瘤中的表达（阳性率58．3％）与在Ⅲ-Ⅳ级（阳性率85．7％）中的表达差异有显著性（P〈0．05），且与Cx43的表达呈明显负相关（r=-0．688，P〈0．01）。结论 Cx43表达水平的下调或缺失不是胶质瘤发生的始动因素，可能是胶质瘤恶性演进过程中的一个重要分子事件，促使肿瘤细胞恶性增殖程度增加。     

恶性胶质瘤SPARC基因的甲基化状态及其表达水平分析

目的探讨胶质瘤组织中富含半胱氨酸的酸性分泌性糖蛋白（SPARC）基因甲基化状态和mRNA表达水平及两者相关性。方法2008年3月至2011年12月收集98例胶质瘤组织标本和98例正常脑组织标本（颅脑损伤患者术中切取）以及胶质瘤细胞系LN229,提取DNA和RNA,利用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测SPARC基因甲基化状态;利用实时荧光定量PCR检测SPARC基因mRNA表达水平。结果胶质瘤细胞系LN229中SPARC基因呈高度甲基化,其mRNA表达水平极低;去甲基化处理后,mRNA表达水平明显升高（P〈0．01）。胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率（70．4％,69／98）明显高于正常脑组织（21．4％,21／98;P〈0．01）,但其mRNA表达水平明显低于正常脑组织（P〈0．01）。而且随着胶质瘤级别的增加,胶质瘤组织中SPARC基因甲基化率明显呈升高（P〈0．05）,但其mRNA表达水平却明显降低（P〈0．01）。伴有SPARC基因甲基化的胶质瘤组织SPARC基因mRNA表达水平明显低于非甲基化胶质瘤组织（P〈0．01）。然而,伴有SPARC基因启动子甲基化的胶质瘤患者生存期与非甲基化患者无统计学差异（P〉0．05）。结论胶质瘤组织中SPARC基因呈高甲基化状态,其mRNA呈低水平表达;SPARC基因mRNA表达水平受其甲基化的影响;SPARC基因高甲基化可能与胶质瘤的发生相关。     

胶质瘤患者抑癌基因RASSF1A启动子区甲基化研究

目的探讨RASSF1A抑癌基因在胶质瘤组织及脑正常组织中甲基化程度及与临床特征的关系。方法46例脑胶质瘤组织及6例脑正常组织采自手术患者。用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）方法检测46例胶质瘤（其中包括星形细胞瘤19例，室管膜瘤16例，胶质母细胞瘤11例）及6例脑正常组织中RASSF1A基因甲基化状态。并对RASSF1甲基化发生率与临床各因素之间的关系进行分析。结果（1）46例脑胶质瘤组织DNA标本中RASSF1A基因甲基化发生率为65．2％（30／46）；6例脑正常组织中RASSF1A基因启动子未发生甲基化；RASSF1A在胶质瘤和脑正常组织之间发生甲基化率比较差异有显著性，（P=0．017，P〈0．05）。在46例脑胶质瘤中RASSF1A有30例发生甲基化，其中低级别组14例（14／26），高级别组16例（16／20），两组之间甲基化率比较无明显差异，（P〉0．05）。其中星形细胞瘤，室管膜瘤，胶质母细胞瘤甲基化发生频率分别为63．2％（12／19），68．8％（11／16），63．6％（7／11）。在各组之间甲基化发生率比较均无统计学意义，（P〉0．05）。②RASSF1A基因甲基化程度与脑胶质瘤病理分型、肿瘤大小之间无显著相关性。结论RASSF1A在胶质瘤中有甲基化发生，在脑正常组织中未发生甲基化，检测胶质瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化情况对临床判断肿瘤发生发展有指导意义。     

脑胶质瘤中ppENK基因启动子区的甲基化状态研究

目的 检测脑胶质瘤组织中候选抑癌基因ppENK基因启动子区的甲基化状态,探讨ppENK基因启动子的异常甲基化水平在脑胶质瘤发生发展中的作用以及与临床病理资料之间的关系.方法 采用巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction nPCR)方法和亚硫酸氢盐修饰后测序法(Bisulfite sequence polymerase chain reaction BSP),检测32例脑胶质瘤组织和10例正常脑组织中ppENK基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 脑胶质瘤组织中ppENK基因启动子甲基化率为40.6％(13/32),明显高于正常脑组织中ppENK基因启动子甲基化率0％(0/10),两者差异存在统计学意义(P=0.015).在低级别(Ⅰ-Ⅱ级)组和高级别(Ⅲ- Ⅳ级)组脑胶质瘤中ppENK基因启动子甲基化率分别为21.1％(4/19)和69.2％ (9/13),通过分析表明两者差异存在统计学意义(P=0.006).结论 ppENK基因启动子的CpG岛在脑胶质瘤中存在高甲基化现象,可能与胶质瘤发生有关.ppENK基因启动子的甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,与年龄、性别、病理分型无关.     

人脑星形细胞瘤中组蛋白修饰方式及意义

目的探讨组蛋白修饰与人脑星形细胞瘤发生及病理分级的关系。方法选取西京医院神经外科2006年至2008年经病理证实的星形细胞瘤患者肿瘤组织标本67例和正常脑组织标本10例,通过免疫组化方法,检测组蛋白3个位点（H3K4diMe、H4K12Ac、H3K18Ac）的修饰水平。结果在正常脑组织中组蛋白3个位点均无修饰;在星形细胞瘤中均有修饰,有2个位点（H3K4diMe、H4K12Ac）的修饰水平随星形细胞瘤病理级别的增高而升高,且呈现明显差异（P〈0．05）,但H3K18Ac的修饰水平并末随肿瘤病理级别的增高发生显著变化。结论组蛋白修饰与人脑星形细胞瘤的发生有关,且修饰水平的变化与病理级别相关。     

脑胶质瘤中hMLH1基因表达及启动子区的甲基化状态研究

目的检测脑胶质瘤中hMLH1基因表达及其启动子区的甲基化状态,探讨其在肿瘤发生中的作用。方法采用免疫组化及甲基化特异性聚合酶链反应方法,检测51例脑胶质瘤hMLH1基因表达和启动子区甲基化状态。结果 hMLH1阳性表达率为78.4%(40/51),甲基化率为13.7%(7/51),均与性别、年龄、病理类型无相关性。hMLH1在低级别(Ⅰ~Ⅱ级)胶质瘤和高级别(Ⅲ~Ⅳ级)胶质瘤中的阳性表达率分别为92.0%(23/25)和65.4%(17/26),两者差异显著(P0.05)。hMLH1在低级别(Ⅰ~Ⅱ级)和高级别胶质瘤中hMLH1启动子区甲基化率分别为0.0%(0/25)和26.9%(7/26),两者差异显著(P0.05)。hMLH1表达阳性的胶质瘤和表达阴性的胶质瘤中启动子区甲基化率分别为7.5%(3/40)和36.4%(4/11),两者差异显著(P0.05)。结论 hMLH1基因在胶质瘤中表达及启动子区甲基化状态与胶质瘤病理分级有关,hMLH1可能在胶质瘤的发展中起作用,其启动子区甲基化可能负调控hMLH1基因表达。     

脑胶质瘤EZH2基因的表达分析

目的探讨脑胶质瘤果蝇zeste基因增强子同源物2（EZH2）蛋白的表达变化。方法选取2010年5月至2011年12月手术切除的胶质瘤组织标本83例,其中2008年WHO分级Ⅰ级15例,Ⅱ级20,Ⅲ级26例,Ⅳ级22例;术前均未接受放疗或化疗。另外,收集30例颅脑损伤内减压手术切除的无肿瘤脑组织作为对照。采用实时荧光定量PCR法检测EZH2 m RNA表达。根据EZH2 m RNA表达水平分为高表达组（EZH2 m RNA≥0.3,48例）和低表达组（EZH2 m RNA〈0.3,35例）,分析两组术后生存期。结果胶质瘤组织EZH2 m RNA表达水平明显高于对照组（P〈0.01）,高级别胶质瘤（WHOⅢ、Ⅳ级）组织EZH2 m RNA表达水平明显高于低级别胶质瘤（WHOⅠ、Ⅱ级）组织（P〈0.01）。低表达组患者术后生存期较高表达组显著延长（P〈0.01）。结论脑胶质瘤组织EZH2 m RNA呈高表达,且其表达水平与病理分级具有相关性。     

不同级别胶质瘤MMP-9、E-cad、nm23的表达变化

目的研究不同级别人脑胶质瘤MMP-9、E-cad、nm23的表达变化。方法采用免疫组化方法检测96例人脑胶质瘤组织中MMP-9、E-cad、nm23的表达。按照2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准分级：Ⅰ级4例,Ⅱ级35例,Ⅲ级27例,Ⅳ级30例。另选取5例正常脑组织作为对照组,均为非颅内疾病死亡的尸检标本。结果随着胶质瘤病理级别增高,MMP-9表达显著增加（rs=-0.322,P〈0.01）,nm23表达显著降低（rs=-0.355,P〈0.05）。E-cad阳性表达与胶质瘤级别无明显相关性（P〉0.05）。MMP-9与E-cad表达呈显著负相关（rs=-0.440,P〈0.01）,E-cad与nm23表达呈显著正相关（rs=0.325,P〈0.01）。结论MMP-9、E-cad、nm23在不同级别胶质瘤中表达水平不一样。     

人脑胶质瘤中ING4和CTGF的表达及其意义

目的 探讨人脑胶质瘤中生长抑制因子4(ING4)及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA的表达及其意义.方法 采用荧光实时定量聚合酶链式反应法检测ING4和CTGF mRNA在30例脑胶质瘤组织和5例正常脑组织中的表达水平,统计分析表达水平和肿瘤级别之间的关系以及二者表达水平的相天性.结果 ING4 mRNA在Ⅰ～Ⅱ级...