依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用

目的探讨依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用及机制。方法取大鼠13.5 d胚胎皮质,提取神经干细胞,分为谷氨酸处理组(500μmol/L)、依达拉奉干预组(500μmol/L谷氨酸+500 ng/mL依达拉奉)和正常对照组。谷氨酸及依达拉奉处理24 h后,应用光学显微镜高倍下观察各组细胞的形态和数量;并对各组细胞作DAPI及TUNEL染色,计数阳性细胞。结果与正常对照组比较,谷氨酸处理组细胞的数量减少(P<0.05);依达拉奉组细胞的数量较谷氨酸组明显增多(P<0.05)。谷氨酸处理组的TUNEL阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.05),依达拉奉组的TUNEL阳性细胞明显少于谷氨酸组(P<0.05)。结论依达拉奉通过拮抗谷氨酸诱导的细胞凋亡对谷氨酸所致的神经干细胞损害起到保护作用。     

丁苯酞对神经干细胞向神经细胞分化的促进作用

目的 研究丁苯酞通过PI3K-AKT信号通路促进神经干细胞向神经细胞分化的作用。方法 分离培养SD大鼠胚胎脑皮质层的神经干细胞,采用分化专用完全培养基培养后,通过光镜下观察和Nestin蛋白免疫荧光法进行鉴定。设置对照组和实验组,其中实验组添加丁苯酞辅助分化,分为丁苯酞低剂量组（1 μmol·L^-1）、中剂量组（5 μmol·L^-1）和高剂量组（10 μmol·L^-1）,作用24 h后,CCK-8法检测神经干细胞的细胞活力,碱性磷酸酶染色法检测神经干细胞的分化能力,免疫荧光法检测神经细胞分化程度,RT-qPCR法检测转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平,Western-blot及RT-qPCR检测PI3K-AKT信号通路的表达。结果 丁苯酞干预后神经干细胞活力提高,分化能力提高,碱性磷酸酶试验呈强阳性,转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平增高,PI3K-AKT信号通路蛋白和mRNA表达水平均增高,且呈现剂量依赖性。结论 丁苯酞可以促进神经干细胞向神经细胞分化,其作用机制可能与PI3K-AKT的激活有关。     

Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的分离胎盘组织来源的间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞,以期找到能成功标记神经干细胞的方法。方法将胎盘组织剪碎后消化、培养,加入神经干细胞诱导因子10ng/mL表皮生长因子（EGF）＋10ng/mL重组人碱性成纤维生长因子（bFGF）＋DMEM/F12,并分别添加相应浓度的血清,预诱导3d后加入DMEM/F12＋0.1μmol/L全反式维甲酸（RA）,10ng/mL胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）＋10ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）进行正式诱导7d。结果诱导10d后用Feridex标记诱导后的细胞,普鲁士蓝染色显示90%以上的干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,Nestin染色显示阳性。结论胎盘来源的间充质干细胞能成功诱导为神经干细胞,且Feridex可成功标记诱导后的细胞。     

同型半胱氨酸对体外大鼠神经干细胞增殖及Notch信号通路相关基因表达的影响

【摘要】目的 研究同型半胱氨酸（Hcy）对体外大鼠神经干细胞(NSCs)增殖及Notch信号通路相关基因Notch1和Hes1mRNA表达的影响。方法 采用无血清培养原代培养新生大鼠NSCs,细胞分为对照组(Hcy-C)、Hcy低剂量组（Hcy-L）、Hcy中剂量组（Hcy-M）、Hcy高剂量组（Hcy-H）。采用免疫组化法检测Nestin、β-tubulin Ⅲ及GFAP的表达对NSCs进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,Real-time PCR检测Notch1、Hes1基因mRNA表达。结果 无血清培养条件下,所培养细胞形成大量呈Nestin抗原阳性细胞组成的神经球;诱导分化6d后,形成β-tubulin Ⅲ表达呈阳性的神经元和GFAP表达呈阳性的星形胶质细胞;Hcy干预组细胞活力低于对照组,且有剂量依赖性(P<0.05)。Hcy干预组Hes1mRNA表达低于对照组(P<0.05)。Hcy-H组Notch1mRNA表达低于其他3组(P<0.05);Hcy-M组Notch1mRNA表达低于对照组和低剂量组(P<0.05)。结论 Hcy能抑制大鼠新生鼠NSCs的增殖,可能与下调Notch信号通路中Notch1和Hes1mRNA表达有关     

大鼠神经干细胞和雪旺细胞体外共培养生长特性

目的：探讨雪旺细胞（SC）对神经干细胞（NSC）的生物作用，为临床移植神经细胞提供依据和方法。方法：将神经干细胞分别在有雪旺细胞骨架、分泌物及活雪旺细胞饲养层的不同环境中培养，同时设立各自对照组，观察神经干细胞迁徙、贴壁能力、分化、细胞代谢、轴突生长、免疫组化神经丝染色情况。结果：与雪旺细胞有关的实验组神经干细胞大量分化为具有细长突起的细胞，神经丝（NF）标记阳性细胞多，突起长（特别是经胎牛血清培养过的雪旺细胞实验组），细胞贴壁力强，细胞生长代谢旺盛，突起粗壮并且生长速度快。结论：雪旺细胞能促进神经干细胞分化，并促进其生长。     

舌鳞癌组织中肿瘤干细胞的分离培养及PIWIL4对其的影响

目的：从人舌鳞癌组织中分离培养肿瘤干细胞细胞（CSC）,鉴定其生物学特性,并研究PIWIL4在CSC中的表达和意义。方法收集9例不同临床分期舌鳞癌患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133＋CD44＋细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL4 mRNA在CSC中的表达;裸鼠皮下接种CSC,观察其成瘤能力。结果成功的从人舌鳞癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSC,CSC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×10^4、1×10^5个CSC均可全部成瘤,PIWIL4 mRNA在CSC的表达也显著高于正常舌组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人舌组织中分离获得CSC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL4,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。     

胶质瘤细胞诱导神经干细胞迁移作用的实验研究

目的观察胶质瘤细胞在体外培养条件下对神经干细胞是否有诱导迁移的作用。方法①从新生1～2dSD大鼠脑皮层分离培养神经干细胞,进行神经干细胞及其增殖能力鉴定。②胶质瘤细胞与神经干细胞限定区域联合培养,观察神经干细胞的生长及其形态学变化。结果①所获得神经细胞球Nestin染色阳性,传代神经细胞球抗BrdU染色阳性。②可观察到神经干细胞球周围长出细胞突起,在靠近胶质瘤细胞的一侧,细胞突起的密度及长度均大于其他方向上的突起并且可见部分干细胞向胶质瘤细胞方向的移动。结论胶质瘤细胞在体外对神经干细胞有诱导迁移作用。     

黄芪甲苷和齐墩果酸对体外神经干细胞增殖和Jagged1 mRNA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷和齐墩果酸对体外神经干细胞增殖和相关基因Jagged1表达的影响。方法 采用机械吹打法从胎鼠脑内获得神经干细胞,随机分组,分别给予不同浓度(10^-6,5×10^-7,10^-7,5×10^-8,10^-8,5×10^-9,10^-9 mol·L^-1)的黄芪甲苷、齐墩果酸进行干预,72 h后用WST法检测细胞的增殖情况,PCR检测Jagged1表达水平。结果 黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖影响不显著,高剂量尚存在细胞毒性。齐墩果酸能促进神经干细胞增殖,且呈一定的剂量效应关系,与对照组和黄芪甲苷组比较均有显著差异(P<0.05)。细胞未分化状态下Jagged1基因存在一定的表达,增殖率越高Jagged1表达水平越高;与同浓度黄芪甲苷组比较,齐墩果酸显著上调Jagged1表达(P<0.05)。结论 不同浓度的黄芪甲苷和齐墩果酸对体外培养神经干细胞增殖和Jagged1表达的影响不同;齐墩果酸作用优于黄芪甲苷。     

染砷大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2表达的变化

目的观察不同剂量三氧化二砷(As2O3)对大鼠生精细胞凋亡及其Bcl-2表达的变化。方法40只健康雄性SD大鼠随机分成四组,分别为0.375、0.75、1.5mg/kg3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16周后,采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)法检测大鼠生精细胞凋亡,免疫组化法检测大鼠生精细胞Bcl-2的表达。结果(1)与对照组相比,生精细胞凋亡指数(AI)显著升高(P<0.01),生精细胞Bcl-2阳性产物表达明显降低(P<0.01)。(2)每日精子生成量与生精细胞凋亡呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。(3)生精细胞凋亡与Bcl-2阳性表达呈负相关(r=-0.737,P<0.01)。结论一定剂量的As2O3可通过抑制生精细胞Bcl-2的表达,促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生雄性生殖毒性。     

肿瘤干细胞靶向治疗研究进展

综述肿瘤干细胞研究的历史和来源,并对肿瘤干细胞在肿瘤临床治疗中的应用及此领域的发展方向作了初步的展望。     

神经干细胞移植治疗小脑性共济失调的疗效评定

目的探讨神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）移植对小脑性共济失调的治疗作用。方法对216例小脑性共济失调患者进行NSCs腰椎脊髓蛛网膜下腔注射,分别于治疗前及治疗后180d对患者日常生活自理能力进行评分。结果采用NSCs移植治疗前和治疗后180d的生活自理能力评分分别为（52.25±9.12）、（73.50±11.35）,有显著差异（P〈0.05）。结论 NSCs移植治疗能改善小脑性共济失调患者的日常生活自理能力,提高生存质量。     

人胎儿肝干细胞异种移植治疗小鼠暴发性肝功能衰竭

目的：探讨人胎儿肝干细胞异种移植治疗暴发性肝功能衰竭伴严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠的可能性与有效性。方法：改进Seglen胶原酶（Ⅳ型）原位灌注结合Percol密度梯度离心法分离纯化中期妊娠流产的男性胎儿肝干细胞。经肝脏注射移植（106细胞）治疗D-氨基半乳糖（1600mg／ks）诱发的暴发性肝功能衰竭雌性SCID小鼠（治疗组），于移植前及移植后24，48，72h及1周取血测定血氨、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBiL），于移植后1，2，4周取受体肝脏组织，PCR方法检测性别决定因子，并与未移植肝干细胞小鼠（对照组）比较。结果：治疗组小鼠中位生存时间较对照组延长（123．4hvs70．4h）（P〈0．05）；移植后治疗组血清ALT、TBiL及血氨水平降低，各时间点均低于对照组（P〈0．05）；治疗组肝脏病理损伤逐渐减轻，存活2周小鼠肝脏组织中性别决定因子呈阳性表达，随时间延长表达增强。结论：人胎儿肝于细胞移植能延长暴发性肝功能衰竭SCID小鼠的存活时间，改善其肝功能及肝脏病理指标。     

人胎儿肝干细胞的分离及鉴定

目的:探索人胎儿肝干细胞的分离及鉴定方法。方法:改进Seglen胶原酶(IV型)原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化4～6个月水囊引产男性胎儿的肝干细胞,CO2培养箱培养,光镜、电镜下观察细胞特点,进行肝干细胞细胞标志SABC免疫组化染色。结果:平均细胞产量(2.10±0.50)×107,细胞活性率为(92.30±1.23)%。光镜下呈游离状态、大小不等的单个细胞,约为正常肝细胞1/5～1/3大小;电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,卵圆形细胞核,核/浆比例较大等特点;甲胎蛋白、细胞角蛋白8、19及α-1-抗胰蛋白酶免疫组化染色呈阳性,白蛋白及白细胞共同抗原染色呈阴性表现,培养3周可形成克隆样结构。结论:改进的Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心法可成功分离、纯化人胎儿肝干细胞。     

干细胞来源外泌体的生物学特性研究进展

目前,干细胞来源外泌体可通过不同的方法对其进行鉴定及提取,从而为干细胞来源外泌体的研究奠定了基础。研究发现干细胞来源外泌体在非肿瘤环境下可通过免疫调节、抗炎、抗氧化、调节蛋白及促进组织功能恢复等方式参与机体的调节功能,在缺氧、脂多糖及转染等外源诱导作用下可干预干细胞分泌外泌体的功能及外泌体的分泌作用。而在肿瘤环境下,多数研究报道干细胞外泌体具有促肿瘤的作用,而通过基因转染干细胞衍生的外泌体对肿瘤具有抑制作用。     

腺苷促进体外培养神经干细胞增殖作用研究

目的研究腺苷促进体外培养神经干细胞（NSCs）增殖作用。方法取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,观察神经球生成情况,特异性蛋白质免疫细胞化学染色和BrdU标记鉴定并判断其增殖能力;将腺苷按0.4,2.0,10.0 μmol&#8226;L 13个浓度加入神经干细胞培养基,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过观察神经球形态、神经球生成数目及 MTT法定量比较,分析不同浓度腺苷对神经干细胞分裂增殖的影响。结果培养物中有大量神经球生成,神经干细胞特异性蛋白质免疫细胞化学染色呈阳性,BrdU标记亦呈阳性反应,所培养的细胞为神经干细胞,具有增殖能力;腺苷中、高浓度组神经球数目、MTT比色结果明显高于溶媒对照组。结论腺苷具有促进NSCs增殖作用。     

PLGA与明胶膜支架材料对神经干细胞生长、分化影响的体外研究

目的：探讨PLGA作为中枢神经组织工程支架材料的可行性。方法：从胎龄14～16d的Wistar大鼠分离培养获得神经干细胞，以10^8/L密度种植于PLGA膜、明胶膜和PLGA／明胶膜表面，置37℃、5％CO2培养箱中共培养，观察神经干细胞在PLGA膜、明胶膜和PLGA／明胶膜表面的生长、分化和PLGA的降解情况。结果：培养获得的神经干细胞表现具有自我更新和多相分化能力，能分化为神经元和胶质细胞。在观察期内PLGA膜无降解，神经干细胞在PLGA膜表面无贴附，但可在PLGA／明胶膜和明胶膜表面贴附、生长和分化。结论：PLGA可作为中枢神经组织工程支架材料。     

An Aminopropyl Carbazole Derivative Induces Neurogenesis by Increasing Final Cell Division in Neural Stem Cells

P7C3 and its derivatives, 1-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-3-(p-tolylamino)propan-2-ol (1) and N-(3-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-2-hydroxypropyl)-N-(3-methoxyphenyl)-4-methylbenzenesulfonamide (2), were previously reported to increase neurogenesis in rat neural stem cells (NSCs). Although P7C3 is known to increase neurogenesis by protecting newborn neurons, it is not known whether its derivatives also have protective effects to increase neurogenesis. In the current study, we examined how 1 induces neurogenesis. The treatment of 1 in NSCs increased numbers of cells in the absence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor 2 (FGF2), while not affecting those in the presence of growth factors. Compound 1 did not induce astrocytogenesis during NSC differentiation. 5-Bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) pulsing experiments showed that 1 significantly enhanced BrdU-positive neurons. Taken together, our data suggest that 1 promotes neurogenesis by the induction of final cell division during NSC differentiation.     

Characterization of Ionic Currents in Human Neural Stem Cells

The profile of membrane currents was investigated in differentiated neuronal cells derived from human neural stem cells (hNSCs) that were obtained from aborted fetal cortex. Whole-cell voltage clamp recording revealed at least 4 different currents: a tetrodotoxin (TTX)-sensitive Na⁺ current, a hyperpolarization-activated inward current, and A-type and delayed rectifier-type K⁺ outward currents. Both types of K⁺ outward currents were blocked by either 5 mM tetraethylammonium (TEA) or 5 mM 4-aminopyridine (4-AP). The hyperpolarization-activated current resembled the classical K⁺ inward current in that it exhibited a voltage-dependent block in the presence of external Ba²⁺ (30µM) or Cs⁺ (3µM). However, the reversal potentials did not match well with the predicted K⁺ equilibrium potentials, suggesting that it was not a classical K⁺ inward rectifier current. The other Na⁺ inward current resembled the classical Na⁺ current observed in pharmacological studies. The expression of these channels may contribute to generation and repolarization of action potential and might be regarded as functional markers for hNSCs-derived neurons.     

神经干细胞移植治疗脊髓损伤临床疗效观察

目的探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的临床疗效。方法对9例脊髓损伤患者进行脊髓探查加损伤局部神经干细胞移植术,术前及术后半年应用ASIA评分系统进行神经功能评定。结果患者在皮肤感觉、运动、二便、排汗等方面均有一定程度的改善;术后ASIA评分与术前比较,两者间有显著差异。结论神经干细胞移植可以改善脊髓损伤患者的感觉、运动、二便及排汗等多方面的神经功能,提高患者生活质量。     

托吡酯促进体外培养神经干细胞增殖的实验研究

目的:研究托吡酯对体外培养神经干细胞的促增殖作用。方法:取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,托吡酯按0.4、2、10μmol.L-13个量级(或3种浓度)加入神经干细胞培养基中,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过神经球生成数目及MTT法定量比较,分析不同浓度托吡酯对神经干细胞分裂增殖的影响。结果:2、10μmol.L-1托吡酯组神经球数目分别为20.67±4.04和49.68±3.79;MTT比色结果分别为0.3546±0.0705和0.5018±0.0369,明显高于溶媒对照组(7.34±2.31、0.2880±0.0093,P<0.01)。结论:托吡酯具有促进神经干细胞增殖的作用。