辐射防护剂WR-1065与中国仓鼠AA8细胞、胞核及核质体结合的研究

氨巯基类辐射防护剂WR-1065(N-2-巯乙基-1,3-二氨基丙烷)是WR-2721的活性部分.实验选用中国仓鼠卵巢AA8(CHOAA8)细胞与37kBq/ml〔~(14)C〕WR-1065共同培养,通过WR-1065生物稳定性的测定及药物与细胞的结合实验,观察了WR-1065是与细胞随机结合的还是特异性的与细胞核及核质体结合.〔~(14)C〕WR-1065掺入细胞的动力学研究表明:药物在最初30分钟内与细胞迅速结合,逐步达到坪值,且坪值段较宽,直至给药后3小时一直缓慢增长,提示药物在细胞内能迅速达到稳定状态;如将     

多胺耗竭的HeLa细胞辐射敏感性和氨硫醇WR-1065的调节作用

用多胺生物合成抑制剂鸟氨酸脱羧酶抑制剂,如α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)和S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)抑制剂,如a-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)和S-腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)抑制剂,如甲基乙二醛双眯基腺(MG-BG)和5'-﹛[(Z)-4-氨基-2-丁烯]甲胺}-5'脱氧腺昔(MDL73,811)消耗培养的HeLa S3细胞内的多胺,检测细胞的辐射敏感性。     

急性低氧时WR-1065对V79细胞辐射诱发突变的防护作用

作者观察中国田鼠肺纤维细胞V79在次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)位点上辐射诱发突变的程度,来评价在急性低氧情况下WR-1065抗突变的效果.方法:V79-B310H在37℃100mm陪替氏培养皿中(α-MEM-10培养基加10%胎牛血清)生长,使用前,培养的细胞在α-MEM-10培养基(含有5×10~(-5)mol次黄嘌呤、3.2×10~(-6)mol氨基喋呤及5×10~(-6)mol胸腺核苷,〔HAT〕)中生长24h,以减少HPRT突变的自然本底.使用前,细胞从HAT培养基移到常规培养基中生长至少6天.当需要时,在1mL含10~6细胞的玻璃安瓿内通入2min湿的95%N_2和5%CO_2灭菌混合气体造成急性低氧状态.通气前加1     

照射G_1或G_2期细胞后第二次细胞分裂时染色体畸变类型

０７４照射Ｇ＿１或Ｇ＿２期细胞后第二次细胞分裂时染色体畸变类型［英］／ＭｏｏｒｅＲＣ…ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＢｉｏｌ．－１９９３，６３（６）．－７３１～７４１对数生长期的ＪＵ－５６细胞培养和３Ｈ－ＴｄＲ（氚标记胸腺嘧啶，１μＣｉ／ｍｌ）孵育１５ｍｉｎ，...     

WR-1065对不同辐射敏感性人肿瘤细胞的保护作用

目的 :研究抗辐射药 WR- 10 6 5对两种不同辐射敏感性的人恶性胶质瘤细胞系的辐射防护作用。方法 :M0 5 9J和 M0 5 9K恶性胶质瘤细胞系来源于同一肿瘤标本的不同部位 ,M0 5 9J和啮齿类 xrs5突变体细胞为辐射敏感型及双链断裂 (DSB)修复缺陷型细胞 ,而 M0 5 9K和野生型 CHO- K1细胞为抗辐射型细胞。 M0 5 9J和 M0 5 9K细胞在 DMEM/ F12培养基中培养 ,当细胞达到 80 %～ 90 %汇合时分瓶 ,每瓶重新接种 3× 10 5 细胞。两种细胞在Mc Coy′s 5 A培养基中培养 ,当细胞达到 80 %～ 90 %汇合时 ,再分瓶 ,每瓶重新接种 2× 10 6 细胞。…     

硫醇氨WR-1065和WR-255591对培养哺乳动物细胞的辐射防护:γ线照射后防止DNA双链断裂和细胞杀伤间的关系

哺乳动物细胞的基因组DNA可能是电离辐射的临界靶子,硫醇氨能减轻辐射对DNA的损伤程度,是其辐射防护作用的重要机制.在不同类型DNA损伤中,常把DNA双链断裂(DSBs)与细胞杀伤效应等同看待.作者研究了WR-1065和WR-255591对γ射线照射细胞的防护作用.     

WR-2721的临床Ⅰ期研究

1969年,Yuhas和Storer首先报道S-2-(3-氨基丙胺)乙基硫代磷酸(WR-2721)能使小鼠皮肤和骨髓的辐射抗性提高1.4和1.7倍,而不提高这些动物生长的实体乳腺瘤的辐射抗性。在这以后,此药的研究资料扩展到包括另外的4种动物,11种正常组织和9种     

辐射所致细胞周期G_2期延迟及其分子机制

细胞周期Ｇ_２期延迟与调控细胞周期的特定蛋白──细胞周期素（Ｃｙｃｌｉｎ）有关，辐射作用后，细胞周期素的转录、表达发生改变，与细胞周期素结合的ｐ３４~（ｃｄｃ２）磷酸化和脱磷酸化状态也发生变化，从而导致细胞在Ｇ_２期滞留。     

G_1期人淋巴细胞的细胞遗传学与存活适应性反应

用T细胞克隆法分析了用低剂量和高剂量X射线照射PHA刺激后处于第1个G_1期人淋巴细胞的染色体畸变和细胞致死效应,以检验D_1期细胞遗传学适应性反应是否能导致存活适应性反应.血样来自6名献血员,分离并培养单核细胞层,加PHA 12和18小时后,分别以5cGy(20cGy/min)和200cGy或400cGy(1Gy/min)X射线照射培养物.观察细胞存活和染色体畸变情况.对5人的细胞遗传学分析表明,在5cGy+400cGy组均存在适应性反应,其中3人双着丝粒及环以及2人的缺失显著减少;在5cGy+200cGy组,     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G_1期阻滞中的作用

目的　探讨 p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中的作用。方法　采用North ernblot检测 p2 1WAF1mRNA水平的变化 ;采用流式细胞术检测 p2 1蛋白表达及细胞周期的变化。结果　 4 0GyX射线照射后 12h、2 4h、48hG1期EL 4细胞百分数明显高于假照射组 ;p2 1WAF1mRNA水平从照射后 1h开始升高 ,4h达峰值 ,持续至照后 12h ;p2 1蛋白表达在照射后 2～ 48h明显增高。结论　 4 0GyX射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞 ,p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

γ射线诱导的G_2／M期延迟与细胞辐射敏感性之间的关系

γ射线诱导的Ｇ＿２／Ｍ期延迟与细胞辐射敏感性之间的关系［英］／ＮａｇａｓａｗａＨ…ＩｎｔＪＲａｄｉａｔＢｉｏｌ，－１９９４，６６（４）．－３７３～３７９为了测定γ射线照射后细胞周期中Ｓ期细胞的生长及其在Ｇ＿２期的积聚情况，实验通过抗溴化去氧尿苷（Ｂｒ...     

氨基硫醇WR-1065对X射线诱导人淋巴细胞染色体畸变防护作用的研究

为确证WR-1065对X射线诱导染色体畸变的防护作用及其最佳浓度,用染色体畸变和微核作为观察辐射防护的敏感指标,对WR-1065和DMSO(二甲亚砜)进行了防护效果的比较。     

WR-2721衍生物对培养细胞的辐射防护

经初步研究,作者发现S-2(3-氨丙基)氨基乙基硫代磷酸(WR-2721)对培养的V79-171细胞没有防护作用,但是在培养基中加入碱性磷酸酶可引起:①WR-2721在培养基中转化为它的硫醇形式(WR-1065)和二硫物形式(WRSS);②WR-1065和WRSS在细胞中的聚积;③对细胞的明显辐射防护作用。在本工作中,追踪这些现象是为了证实药物由细胞摄取的机制和药物产生辐射防护作用的形式。     

ras-raf信号转导途径对受辐射细胞G_1期阻滞的调控作用

目的　探讨ras raf信号转导途径在受辐射KG 1细胞中对周期的调控作用方式。方法　通过转染DN ras阻断GM CSF的信号传递后 ,瞬间转染cyclinD1,观察cyclinD1对受辐射细胞周期阻滞的影响作用。结果　转染DN ras的受辐射KG 1细胞即使用GM CSF刺激亦不能跳出G1期阻滞 ;瞬间转染cyclinD1能促进受辐射细胞跳出周期阻滞。 结论　ras raf信号转导途径通过促进周期蛋白cyclinD1的表达而对受辐射细胞周期进行调控。     

人神经生长因子在CHO细胞中的高效稳定表达

神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)是神经系统重要的营养因子[1 ] 。NGF的主要生物学效应是维持外周交感、感觉神经元和中枢胆碱能神经元的存活和发育 ,促进神经系统损伤后修复 ,同时还参与调节免疫和造血等非神经系统的功能[2 ] 。NGF在治疗神经损伤、早老性痴呆和外周神经病等方面具有广阔的临床应用前景[3] 。基因工程方法是获得人神经生长因子 (hNGF)的重要手段之一 ,大肠杆菌表达的hNGF ,其体外折叠困难 ,复性后的蛋白生物比活性低。而在哺乳动物细胞中可产生具有较高生物学活性的类似天然蛋白的人神经生长因子。国内尚未有h…     

CHO细胞高效表达载体的优化

目的：研究分析中国仓鼠EF1—α基因的转录调控序列，以构建新型高效表达载体。方法：利用常规分子生物学技术，构建了一系列基于CHEF1—α基因的非翻译区调控序列元件的新型真核表达载体。以组织型纤溶酶原激活剂突变体（k2tPA）作为报告基因，利用本室已建立的CHO-dhfr^--Z^＋定点整合表达系统比较载体表达外源基因的能力，挑选表达量高的载体。进一步添加翻译增强子（H213及V163）序列，再进行评价。结果：CHEF1-α5′UTR及启动子＋3′UTR1．65kb、CHEF1-α5′UTR及启动子＋3′UTR2．7kb这2种组合均可有效提高目的基因tPA的表达，表达效率与对照载体相比分别提高了65．9％和54．5％。在添加翻译增强子V163后，载体pMCEdEF53Ⅲ-163frt-k2tPA的表达效率为对照载体的2．65倍。结论：该载体系统在重组蛋白药物的研发方面具有良好的应用前景。     

阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的 构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2δEGFP),并实现其在CHO细胞中的表达.方法 以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达.结果 测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光.应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的 基因表达.结论 成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达.     

IIn-UK融合基因在CHO细胞中的高表达研究

目的 :构建新型高效真核表达载体 ,实现人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体 低分子量尿激酶 (IIn UK)在CHO细胞中的高表达。方法 :利用常规分子生物学方法 ,通过对neo基因的表达进行不同程度的弱化 ,构建了一系列新型真核表达载体 ,以IIn UK融合基因为目的基因 ,比较这些真核表达载体实现外源基因高表达的能力 ,然后挑选高表达的克隆 ,通过MTX加压扩增 ,以提高IIn UK融合基因的拷贝数及表达水平。结果与讨论 :构建了 5种新型真核表达载体 ,并筛选出优化的真核表达载体 ,通过MTX加压扩增 ,实现了IIn UK融合基因在CHO细胞中的高表达 ,表达量达到 10 μg/ (10 6细胞·2 4h )。     

人白介素6在CHO细胞中的克隆与表达

本研究通过引物设计、转译优化、ＤＮＡ体外重组等技术，构建了ｐＳＶ２·ＩＬ６重组质粒，利用磷酸钙共沉淀法转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶缺陷型（ＣＨＯｄｈｆｒ－）株，经选择培养基筛选及逐渐提高甲氨蝶呤（ＭＴＸ）的浓度加压基因共扩增法，获得一株稳定表达人ＩＬ６的细胞株，用ＩＬ６依赖的杂交瘤细胞株７ＴＤ１测定细胞上清液的ＩＬ６生物学活性为１．９×１０５Ｕ／（１０６细胞·ｄ）。