青蒿琥酯抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用的研究

 目的观察青蒿琥酯对新生血管生成的影响。方法采用鸡胚绒毛尿囊膜方法,检测青蒿琥酯对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成抑制作用,对肿瘤细胞诱导的鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的敏感性以及对MCF-7细胞、白血病K562细胞生长和浸润的影响。结果青蒿琥酯有较强的抗肿瘤细胞和浸润作用,以及抑制血管增殖作用,并且呈剂量依赖性。结论青蒿琥酯具有抑制新生血管增殖作用。     

桃红四物汤Ⅱ号抗血管生成作用及其对KDR/FLK-1表达的影响

目的探讨桃红四物汤(THSWD)Ⅱ号抗血管生成作用及其机理.方法以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测THSWDⅡ号对新生血管的效应,以MTT法检测其对血管内皮细胞ECV304增殖有无抑制作用,并以免疫组化法观察该方对小鼠B16黑色素瘤血管内皮细胞KDR/FLK-1的表达和微血管密度(MVD)计数的影响.结果THSWDⅡ号1 g/mL、2 g/mL组CAM血管指数降低(P＜0.01);THSWDⅡ号1 mg/mL、2 mg/mL组ECV304细胞吸光度值降低(P＜0.01);THSWDⅡ号5 g/kg、10 g/kg组及THSWDⅡ号10 g/kg 环磷酰胺25 mg/kg组肿瘤重量、KDR/FLK-1的表达、MVD计数均降低(P＜0.01).结论THSWDⅡ号具有抗CAM血管生成、抑制ECV304细胞增殖、抑制小鼠B16黑色素瘤生长的作用.其抗肿瘤作用机制可能与抑制内皮细胞KDR/FLK-1的表达,继而抗血管生成有关.     

蜂毒素抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的:研究蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用。方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,光镜下观察蜂毒素对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管形态的影响,应用医学图像分析软件定量检测蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的影响。结果:光镜下可见经蜂毒素作用后,鸡胚绒毛尿囊膜微血管数目减少,管径变细,分布零乱。定量检测结果表明,蜂毒素浓度为:2.0、4.0、8.0μg/mL时的血管生成抑制率分别为:12.11%、29.85%和45.09%,血管数目明显少于生理盐水对照组(P<0.01),却多于沙利度胺组(P<0.01)。结论:蜂毒素可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成,并且呈现浓度依赖关系。     

参麦注射液对血管生成影响的研究

目的：探讨参麦注射液（简称参麦）对血管生成的影响。方法：采用MTT法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞，人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响；琼脂糖刮除法检测参麦对牛血清促进的牛内皮细胞迁移的影响。利用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型。观察参麦对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果：参麦能明显抑制牛内皮细胞增殖，与SMMC-7721比较，差异有显著性；参麦能抑制牛内皮细胞迁移；并可抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成。结论：参麦能抑制血管生成；抑制内皮细胞增殖和迁移可能是参麦抗血管生成的机理之一。同时也说明参麦是一种特异性血管生成抑制剂。     

参麦总皂苷抗血管生成作用研究

目的:探讨参麦总皂苷抗血管生成作用,为临床辅助抗肿瘤分子机理提供理论依据。方法:提取参麦总皂苷,采用MTT法及刮痕法分析总皂苷对人脐静脉内皮细胞HUVECs的增殖和迁移抑制作用;通过荧光定量PCR方法考察总皂苷对人肝癌HepG2细胞株VEGF表达影响;最后,以鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)在体模型对总皂苷抗血管生成作用进行评价。结果:MTT及刮痕实验结果表明,参麦总皂苷可剂量依赖性抑制HUVECs细胞增殖和迁移,其中600μg/mL浓度增殖抑制率达63.9%,150μg/mL处理48h,其迁移抑制率可达73.7%;荧光定量PCR结果表明,总皂苷可以抑制HepG2细胞分泌VEGF;此外,鸡胚绒毛尿囊膜模型证实,参麦总皂苷具有抗血管生成作用。结论:参麦总皂苷可以通过抑制内皮细胞增殖、迁移及抑制癌细胞分泌VEGF表达起到抗肿瘤血管生成作用。     

淫羊藿素抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的:研究淫羊藿素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用.方法:建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,光镜下观察淫羊藿素对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管形态的影响,应用医学图像分析软件定量检测淫羊藿素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响.结果:淫羊藿素作用后光镜下可见:鸡胚绒毛尿囊膜微血管数目减少,管径变细,分布零乱.定量检测结果表明,淫羊藿素浓度为10-6、10-7、10-8 mol/L时血管生成抑制率分别:3.27%、24.88%和41.92%,血管数目明显少于DMSO对照组(P<0.01),却多于人参皂苷Rb1组(P<0.01).结论:淫羊藿素可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成,并呈现浓度依赖关系.     

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。     

蜂毒素抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的：研究蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用。方法：建立鸡胚绒毛尿囊膜模型，光镜下观察蜂毒素对正常鸡胚绒毛尿囊膜微血管形态的影响，应用医学图像分析软件定量检测蜂毒素对鸡胚绒毛尿囊膜微血管生成的影响。结果：光镜下可见经蜂毒素作用后，鸡胚绒毛尿囊膜微血管数目减少，管径变细，分布零乱。定量检测结果表明，蜂毒素浓度为：2．0、4．0、8，0μg／mL时的血管生成抑制率分别为：12．11％、29．85％和45．09％，血管数目明显少于生理盐水对照组（P〈0．01），却多于沙利度胺组（P〈0．01）。结论：蜂毒素可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成，并且呈现浓度依赖关系。     

灵芝孢子油对血管生成作用的研究

目的观察灵芝孢子油(GSO)对血管生成的作用。方法应用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)培养三维血管生成模型和鸡胚尿囊膜(CAM)模型,观察灵芝孢子油含药血清对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移的影响;及对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响。结果灵芝孢子油含药血清,使CAM血管生成减少、变细,其中较大剂量组中、小血管生成数量明显减少。对血管内皮细胞的出芽和管腔形成有抑制作用,较大剂量组抑制作用明显。结论灵芝孢子油具有抑制血管内皮细胞的增殖,抑制新生血管的形成的作用。     

苦豆子提取物抗人结肠癌HCT116细胞株鸡胚尿囊膜移植瘤血管生成的研究

目的：通过观察苦豆子提取物抗人结肠癌HCTll6细胞株鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）移植瘤的血管生成现象,探讨其抗肿瘤血管生成作用及机制。方法：采用人结肠癌HCT116细胞培养并建立鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型,观察苦豆子提取物作用下甜M移植瘤血管生成的变化。结果：苦豆子提取物作用于鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤具有明显的抗血管生成现象,用药组血管面积比（VA／CAM）均明显小于模型对照组,其中大剂量及中剂量组（1000μg／胚、500μg/胚）能达到重组人血管内皮生长因子抑制素组的抗血管生成效果（P值分别为0．899及0．362,差异无统计学意义）。结论：苦豆子提取物具有抑制人结肠癌HCT116鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤血管生成的作用,其作用效果同剂量呈相关性。     

加减大黄廑虫丸抑制血管生成的实验研究

目的探讨加减大黄廑虫丸对血管生成的抑制作用。方法鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）法检测加减大黄磨虫丸对血管生成的影响;采用MTS比色法观察不同浓度的加减大黄磨虫丸对血管内皮生长因子（VEGF）诱导的ECV-504细胞增殖的影响;Tran—swell小室检测不同浓度的加减大黄廑虫丸对ECV-304细胞移行的影响;Matrigel实验检测不同浓度的加减大黄磨虫丸对ECV-304细胞内皮管腔形成的影响。结果加减大黄磨虫丸中、低浓度组能够抑制鸡胚CAM血管生成;MTS比色法显示,0．05—0．20g/ml浓度的加减大黄鹰虫丸对VEGF诱导的ECV-304细胞增殖具有抑制作用,而更低和更高浓度的加减大黄廑虫丸则无抑制作用。Transwell小室实验显示,加减大黄廑虫丸浓度为0、12．5、25．0和50．0mg/ml时ECV-504细胞移行数分别为208．67±17．16、132．67±16．50、78．33±13．50和18．67±6．66;Matrigel实验显示,加减大黄磨虫丸浓度为0、12．5、25．0和50．0mg/ml时ECV-304细胞内皮管腔形成数分别为25．67±1．53、22．33±1．53、16．33±2．52和2．33±1．53,可见抑制细胞移行和管腔形成的作用随浓度增大而增强。结论加减大黄廑虫丸具有明显抑制血管生成的作用。     

三七总皂苷对缺氧再给氧血管内皮细胞NF-κB及ICAM-1表达的影响

目的探讨人脐静脉内皮细胞株（ECV304）缺氧再给氧（H/R）损伤的发生机制及三七总皂苷（tPNS）对该病理生理过程的影响。方法将体外培养的ECV304分为七组,正常组;模型组;tPNS高、中、低浓度组;维拉帕米组;吡咯烷二硫氨基甲酸酯（PDTC）组。对各组进行相应处理后,分别检测各组ECV304超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的含量、核转录因子-B（NF-κB）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达。结果模型组,tPNS高,中、低浓度组、维拉帕米组及PDTC组细胞氧自由基清除功能明显低于正常组,NF-κB及ICAM-1表达明显高于正常组,其中tPNS高、中、低浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于H/R组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于H/R组,且呈浓度依赖性改变,tPNS高浓度组细胞氧自由基清除功能明显高于维拉帕米组及PDTC组,NF-κB及ICAM-1表达率明显低于维拉帕米组及PDTC组同期。结论 H/R可激活ECV304,使细胞氧自由基清除功能明显降低,NF-κB及ICAM-1的表达明显升高;tPNS能有效改善细胞氧自由基清除功能,降低NF-κB、ICAM-1活性,减轻H/R损伤,且高浓度tPNS效果优于维拉帕米、PDTC。     

蟾蜍灵诱导人白血病HL60细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨中药蟾蜍灵诱导白血病HL60细胞凋亡作用。方法 :应用台盼蓝染色法测定HL6 0细胞的生长曲线 ,应用相差显微镜、电子显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳等技术分析细胞凋亡。结果 :蟾蜍灵与HL60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,细胞呈典型的凋亡形态学改变 :细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,呈新月形 ,可见由膜包被细胞内容物的凋亡小体的产生 ;细胞DNA裂解成 180～200bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带。结论 :蟾蜍灵诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。     

沙苑子黄酮对肿瘤血管形成的影响

 目的 观察沙苑子黄酮（ FAC ）对肿瘤血管形成的影响,并探讨其作用机制。 方法 采用四甲基偶氮唑盐蓝（ MTT ）法观察正常条件培养基和肿瘤条件培养基下 FAC 对细胞 ECV304 增殖的作用;采用鸡胚绒毛尿囊膜（ CAM ）模型和裸鼠移植瘤组织微血管密度（ MVD ）分析,观察 FAC 对肿瘤新血管生成的影响;采用免疫组织化学方法观察 FAC 对裸鼠肿瘤组织血管生成因子 (VEGF) 及其受体 Flt-1 、 Flk-1/KDR 、 Flt-4 和血管生成抑制因子内皮抑素 (ES) 蛋白表达的影响。 结果 FAC 对经人肝癌 SMMC-7721 细胞上清液处理的血管内皮细胞增殖有较明显的抑制作用,而对正常状态下的血管内皮细胞毒性较低; FAC 明显抑制 CAM 新生血管生成, FAC-a （ 400 mg·L^-1 ）组的血管指数为 67.5% ;裸鼠移植瘤 MVD 和 VEGF 及其受体 Flt-1 和 Flk-1/KDR 的蛋白表达明显降低, ES 的蛋白表达显著增强。 结论 FAC 可抑制肿瘤组织血管形成,其作用机制与下调 VEGF 及其受体的表达和上调 ES 的表达有关。     

蟾毒灵血浆蛋白结合率的测定

目的:建立血浆中蟾毒灵浓度的分析方法,测定蟾毒灵血浆蛋白结合率.方法:采用平衡透析法测定蟾毒灵血浆蛋白结合率,利用HPLC测定血浆中蟾毒灵浓度,测定并比较大鼠和人血浆中蟾毒灵的血浆蛋白结合率.结果:在0.1~1.0mg·L~(-1),药物浓度对血浆蛋白结合率无显著影响,蟾毒灵与大鼠和人的血浆蛋白结合率存在显著性差异,蟾毒灵与人血浆蛋白结合率高于与大鼠血浆蛋白结合率.结论:蟾毒灵与血浆蛋白具有较强的结合.     

蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的蛋白质组学研究

目的：探索蟾毒灵诱导骨肉瘤细胞株凋亡的作用及相关分子机制。方法：利用MTT法检测蟾毒灵处理骨肉瘤细胞株U2OS,U2OS/MTX300（甲氨蝶呤耐药细胞株）,SAOS2,IOR/OS9后24,48,72 h的生长抑制作用,通过流式细胞仪检测蟾毒灵处理48 h后上述细胞凋亡率,双向凝胶电泳联合MALDI-TOF/TOF质谱技术筛选蟾毒灵处理U2OS细胞48 h后差异表达的蛋白,Western blot法验证相关蛋白表达。结果：蟾毒灵对四株骨肉瘤细胞株生长抑制作用呈时间及剂量依赖性,蟾毒灵对甲氨蝶呤敏感细胞株U2OS及耐甲氨蝶呤细胞株U2OS/MTX300的72 h IC₅₀分别为（37.43±4.1）,（32.24±5.3） nmol·L^-1。流式细胞仪检测结果证实蟾毒灵可显著诱导四株骨肉瘤细胞凋亡。蛋白质组学筛选、鉴定出蟾毒灵处理U2OS 48 h后24种差异表达蛋白,进一步Western blot验证发现凋亡相关蛋白中热休克蛋白27表达变化最为显著,并且过表达热休克蛋白27可部分逆转蟾毒灵诱导U2OS及U2OS/MTX300细胞凋亡的作用。结论：蟾毒灵具有显著诱导骨肉瘤凋亡作用,其中热休克蛋白27蛋白水平下调在蟾毒灵诱导的骨肉瘤细胞凋亡中具有重要作用。     

竹根七中具有血管生成抑制作用有效成分的筛选

目的研究竹根七中对人脐静脉内皮细胞株（ECV304）生长有抑制作用的有效成分。方法用溶剂提取法将竹根七分为不同药用部位，以抗血管内皮细胞生长因子（VEGF）抗体为对照，用人脐静脉内皮细胞膜色谱模型筛选，并对筛选结果用MTT实验进行分析，以初步确定其中的有效成分。结果竹根七的分离成分（ZGQ-C）在其浓度分别为0．625、1．25、2．50、5．00、10．0μg／mL时，对ECV304的增殖抑制率分别为40．51％、51．11％、63．54％、74．32％、81．26％，半数抑制率在1．00～1．25μg／mL范围内；同时在显微镜下观察到细胞的形态有明显的改变。结论ZGQ—C是对ECV304有一定抑制作用的有效成分；人脐静脉内皮细胞膜色谱模型的筛选结果与MTT实验结果之间有较好的相关性。     

蟾毒灵诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的蛋白组学研究

目的:该文通过考察蟾毒灵(bufalin)处理人宫颈癌HeLa细胞株后对细胞蛋白质表达谱的影响,寻找蟾毒灵在HeLa细胞中的可能作用靶点。方法:通过MTT检测细胞活性确定蟾毒灵的IC50,并通过流式细胞术和Hoechst 33342染色检测蟾毒灵诱导细胞凋亡。应用蛋白质组学技术寻找差异表达蛋白点并进行鉴定,用Western blotting试验进行确认。结果:蟾毒灵具有较强的细胞毒作用,IC50(154±21.5)nmol.L-1,可以诱导HeLa细胞发生凋亡。蛋白组学的结果显示蟾毒灵处理组与对照组相比有11个差异表达蛋白,其中9个蛋白点发生了下调;2个蛋白发生了上调。这些蛋白可能是蟾毒灵在HeLa细胞中的作用靶点。Western blotting分析显示heat shock protein 27,vimentin,HNRPK在蟾毒灵处理后的表达调节结果与双向电泳的结果吻合。结论:蟾毒灵可以诱导人宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,其凋亡诱导作用可能是多个靶点蛋白共同参与的结果。     

三种冬凌草素和毛萼乙素体外对人血管生成的影响

 目的研究4种二萜化合物(冬凌草甲素、信阳冬凌草甲素、冬凌草乙素、毛萼乙素,分别简称为SH-A、SX-A、SH-B、ER-B)在体外对血管生成的影响,为发现新的抗肿瘤药物提供线索。方法采用人脐静脉内皮细胞ECV304增殖、迁移试验及小管形成试验研究了4种化合物对血管生成的影响。结果4种二萜化合物对ECV304(人脐静脉内皮细胞系)的增殖、迁移、小管形成具有不同程度的抑制作用,IC₅₀值分别在1.47×10^-5～3.76×10^-5mol·L^-1(抑制作用SX-A>SH-A>SH-B>ER-B)、8.01×10^-7～5.41×10^-6mol·L^-1(抑制作用SH-B最强,而SH-A、SX-A和ER-B相仿)和4.25×10^-7～2.80×10^-6mol·L^-1内(抑制作用SH-B>SH-A>SX-A>ER-B),抑制血管迁移、小管形成的IC₅₀值均低于抑制增殖的IC₅₀。结论4种二萜化合物在体外对人脐静脉内皮细胞系血管形成均有不同程度的抑制作用,值得作为抗肿瘤药物的候选物进一步深入研究。     

沙棘总黄酮对血管内皮细胞保护作用及机制研究

目的 观察沙棘总黄酮对血管内皮细胞的保护作用。