CD3AK细胞的体外诱导及免疫生物学特征的实验研究

目的：研究ＣＤ３ＡＫ细胞的体外诱导方法及其免疫生物学特征。方法：采用抗单克隆抗体（ａｎｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ）和基因重组人白细胞介素２（ｒＩＬ－２）、植物血凝素（ＰＨＡ０共同诱导人外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）制备ＣＤ３ＡＫ细胞,应用ＡＰＡＡＰ法、吉姆萨染色法分析ＣＤ３ＡＫ细胞的表型、核型等免疫生物学特征。结果：微量的ａｎ－ｔｉ－ＣＤ３ＭｃＡｂ（终浓度３０～５０００ｎｇ／ｍｌ）辅以少量的ｒＩＬ－２（１     

PHA—CD3AK细胞的体外诱导及其生物学特性初步研究

目的：研究PHA—CD3AK细胞的体外诱导方法及其生物学特性,并与LAK细胞进行比较。方法：分离人外周血单个核细胞（PBMC）,采用植物血凝素（PHA）、单克隆抗体（anti—CD3McAb）和基因重组人白细胞介素2（rhIL-2）、共同诱导制备PHA—CD3AK细胞;应用流式法分析PHA—CD3AK细胞的免疫表型、乳酸脱氢酶法（LDH）检测PHA—CD3AK细胞的杀伤活性,并观察其形态;吉姆萨染色法观察其核型。结果：微量anti—CD3McAb（0．05μg／m1）辅以少量rhIL～2（300U／ml）和PHA（100μg／m1）共同培养,即能诱导和大量扩增PHA—CD3AK细胞,其扩增倍数显著高于LAK细胞,维持高扩增的时间也远较LAK细胞持久;当效靶细胞比为80：1时,PHA—CD3 AK细胞对体外肿瘤细胞（K562）杀伤的百分率为56．5％;免疫表型检测PHA—CD3 AK细胞中CD3^＋、CD4^＋、Cd8^＋细胞的比率分别为（86．5±5．89）％、（38．20±5．27）％、（42．63±3．50）％;核型为正常二倍体,染色体数目为46条。结论：PHA—CD3 AK细胞是以CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞为主的异质细胞群,并具有淋巴母细胞样特征,PHA—CD3AK细胞为正常二倍体细胞。PHA—CD3AK细胞是易于体外诱导、扩增能力强,体外存活时间长、杀瘤活性高的一种具有广阔应用前景的肿瘤过继免疫效应细胞。     

CD3单克隆抗体激光活细胞的体外抗肿瘤作用

目的：观察ＣＤ３单克隆抗体激活的杀伤细胞的体外杀伤肿瘤作用。方法;采用ＭＴＴ法测定不同时期ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性。结果：培养到第４天的ＣＤ３ＡＫ细胞已有的杀伤活性,第１０天达高峰;ＣＤ３ＡＫ对Ｋ５６２,Ｈ７４０２和ＭＮＫ４５肿瘤细胞的杀伤活性显著高地ＬＡＫ和ＮＫ细胞,对Ｈｅｌａ－３肿瘤细胞的杀伤活性略低于ＬＡＫ细胞。     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

CD3AK细胞是用抗T细胞表而CD3分子的单克隆抗体激活的新型杀伤细胞，在肿瘤的免疫疗法中愈来愈受到重视。本文用抗CD3单克隆抗体(北医太免疫室提供)和rIL-2(日本盐野义制药株式会社产品)共同刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，诱导CD3AK细胞，系统地研究了其生物特性及其体外抗肿瘤活性并与LAK细胞作比较。     

CD＿3AK与LAK细胞生物活性的比较

采用正常人外周血单个核细胞,经抗ＣＤ３单克隆抗体预刺激后,加入白细胞介素２继续激活的ＣＤ３ＡＫ细胞,与常规ＬＡＫ细胞的生物活性进行了比较。结果表明,ＣＤ３ＡＫ细胞的体外增殖能力,存活时间及细胞活性明显高于ＬＡＫ细胞细胞表型的检测发现ＣＤ３ＡＫ细胞的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋表型高于ＬＡＫ细胞,而ＣＤ１６＋表型低于ＬＡＫ细胞（ｐ＜０．０ｌ）。认为ＣＤ３ＡＫ细胞是一种非ＮＫ型ＹＭ细胞毒活性的肿瘤杀伤细胞,为应用ＣＤ３ＡＫ细胞过继免疫疗法提供了有价值的参考依据。     

CD3AK细胞生物学特性及抗肿瘤作用研究

过继输注体外激活的抗肿瘤效应细胞直接或间接地介导体内肿瘤消退是肿瘤生物治疗研究的重要课题之一。８０年代初,ＮＩＣ的Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ等人发现的ＩＡＫ细胞及其在实验动物和人类肿瘤治疗中抗肿瘤作用的证实将这一工作推进到了一个新的阶段。迄今在用于过继免疫治疗的各种抗肿瘤效应细胞中,ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞已引入临床。但近年来的研究观察表明,ＬＡＫ细胞只对少数肿瘤有效,多数肿瘤疗效不佳。ＴＩＬ细胞的抗肿瘤作用虽然优于ＬＡＫ细胞,但由于前体细胞来源困难,临床推广应用受到一定的限制。因此,目前有关的研究工作随…     

CD3AK细胞的研究进展

过继免疫疗法是目前治疗恶性肿瘤的一个重要辅助治疗方法。它是指体内回输免疫活性细胞,从而达到杀伤恶性肿瘤细胞的目的。与其他抗肿瘤药物相比,它可以在没有损伤机体免疫系统结构和功能的前提下,直接杀伤肿瘤细胞,并且调节和增强机体的免疫功能。用于过继免疫疗法的免疫活性细胞必须具有较强的细胞毒活性和增殖力,目前常用的有抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(anti-CDlmon-odonal antibody activated killer cells,CD3AK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine-activated killer cells,LAg)及细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,aKl)[1~3]。其中研究最多最重要的就是CD3AK细胞。本文拟就其研究进展作一综述。     

淋巴结来源的CD3AK细胞的增殖和表型变化分析

目的：研究肺癌清扫淋巴结的淋巴细胞，经CD3单克隆抗体激活后的杀伤细胞（CD3AK细胞）在体外的增殖和表型变化。方法：取肺癌清扫淋巴结，用机械方法分离成单细胞悬液，加CD3单克隆抗体和小剂量IL2共同培养，每隔1天用流式细胞术进行细胞表型分析及用台盼蓝活细胞计数法观察细胞增殖情况。结果：表型分析显示CD3，CD8，CD56，CD25增加。培养第8天淋巴细胞增殖达高峰，数量是培养前的2.33倍。结论：CD3单克隆抗体能明显激活各种T细胞增殖，使CD3AK细胞维持杀伤功能。     

脐血CD3AK和LAK细胞免疫学特征的比较研究

γIL-2激活的脐血杀伤细胞(LAK)体内外抗肿瘤已有报道,而Anti-CD3McAb作为免疫增强剂,在骨髓、外周血的过继免疫中已取得明显疗效,脐血单个核细胞(MNC)能否被Anti CD3McAb激活为抗肿瘤的杀伤细胞(CD3AK)?是否比其LAK有更多的活性?为探讨这些问题,本实验采用γIL-2+Anti-CD3McAb和单纯γLI-2刺激脐血MNC,观察其表面抗原及细胞因子的变化,并探讨两者对K562和HL-60白血病细胞株的杀伤作用.     

CD3AK细胞及其抗肿瘤研究进展

抗ＣＤ３抗体激活的杀伤细胞－ＣＤ３ＡＫ是一种新型抗瘤免疫活性细胞。Ｔ细胞经抗ＣＤ３单克隆抗体激活后，采用极低剂量ＩＬ－２维持即可长期活性增殖，发挥明显的抗肿瘤细胞效应。依诱导培养过程中ＣＤ３单抗持续存在与否，形成ＣＤ３ＡＫ＾＋和ＣＤ３ＡＫ＾－两种亚类，其作用及方式亦有所差异。ＣＤ３ＡＫ的体内外广谱、高效抗肿瘤作用明显优于ＬＡＫ细胞，临床初步应用亦显示出良好疗效。     

CD3AK细胞对耐药白血病细胞的体外净化作用

目的 :观察CD3 AK细胞对耐药的白血病细胞系及慢性髓细胞白血病 (chronicmyelogenousleukemia ,CML)急变患者原代肿瘤细胞的体外净化作用。方法 :采用固化的抗CD3单克隆抗体联合小剂量IL 2诱导CD3 AK细胞 ;MTT法观察CD3 AK细胞对K5 6 2、HL6 0及其耐药株的细胞毒活性 ;肿瘤细胞集落培养 (tumorcolonyassay ,TCA)观察CD3 AK细胞对K5 6 2、HL6 0及其耐药株集落形成的抑制作用 ;流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM)检测耐药的CML急变患者原代细胞经CD3 AK细胞净化后Pgp阳性细胞的比例变化。结果 :MT法显示CD3 AK细胞在体外对K5 6 2细胞、HL6 0细胞及其耐药株有相似的杀伤作用 ;集落培养观察CD3 AK细胞对HL6 0细胞株及其耐药株的集落形成均有较强的抑制作用 ;FCM结果显示耐药CML原代细胞经CD3 AK细胞净化后Pgp阳性细胞比例下降 2 3 2 0 %。结论 :CD3 AK细胞在体外对耐药白血病细胞株及耐药白血病原代细胞均有较强的净化作用。     

PHA-CD3AK细胞的体外诱导及其生物学特性初步研究

目的:研究PHA-CD3AK细胞的体外诱导方法及其生物学特性,并与LAK细胞进行比较.方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),采用植物血凝素(PHA)、单克隆抗体(anti-CD3McAb)和基因重组人白细胞介素2(rhIL-2)、共同诱导制备PHA-CD3AK细胞;应用流式法分析PHA-CD3AK细胞的免疫表型、乳酸脱氢酶法(LDH)检测PHA-CD3AK细胞的杀伤活性,并观察其形态;吉姆萨染色法观察其核型.结果:微量anti-CD3McAb(0.05μg/ml)辅以少量rhIL-2(300U/ml)和PHA(100μg/ml)共同培养,即能诱导和大量扩增PHA-CD3AK细胞,其扩增倍数显著高于LAK细胞,维持高扩增的时间也远较LAK细胞持久;当效靶细胞比为80:1时,PHA-CD3AK细胞对体外肿瘤细胞(K562)杀伤的百分率为56.5%;免疫表型检测PHA-CDB AK细胞中CD3+、CD4+、CD8+细胞的比率分别为(86.5±5.89)%、(38.20±5.27)%、(42.63±3.50)%;核型为正常二倍体,染色体数目为46条.结论:PHA-CD3AK细胞是以CD3+、CD4+、CD8+细胞为主的异质细胞群,并具有淋巴母细胞样特征,PHA-CD3AK细胞为正常二倍体细胞.PHA-CD3AK细胞是易于体外诱导、扩增能力强,体外存活时间长、杀瘤活性高的一种具有广阔应用前景的肿瘤过继免疫效应细胞.     

脐血CD3AK细胞治疗恶性肿瘤的临床应用研究

目的:研究用脐血单个核细胞制备CD3AK细胞的抗肿瘤作用,探讨肿瘤生物治疗近期疗效的免疫指标.方法:分离脐血单个核细胞,分别用IL-2和IL-2 CD3Ab诱导LAK和CD3AK细胞,并测其扩增数量和对K562细胞的杀伤活性;测定肿瘤患者用CD3AK细胞治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对计数的变化情况和外周血单核细胞(PBMC)的NK杀伤活性.结果:脐血LAK细胞和脐血CD3AK细胞均于培养后11天时扩增倍数最高,分别是培养前的18倍、24倍,对K562的杀伤活性分别是培养前的2.6倍和3.2倍;肿瘤患者输注CD3AK细胞一疗程后,其外周血T淋巴细胞亚群绝对计数有明显升高:总T升高66.0%,Th升高68.0%,Ts升高58.0%;其PBMC的NK杀伤活性由63.0%升高到81.0%,平均升高28.0%.结论:1)脐血单个核细胞是LAK细胞和CD3AK细胞良好的前体细胞.2)LAK和CD3AK细胞的数量和杀伤能力在培养的11天时达高峰,而且CD3AK细胞数量和杀伤活性明显优于LAK细胞.3)CD3AK细胞输注能明显提高肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群绝对计数和PBMC的NK活性.4)肿瘤患者的外周血T淋巴细胞计数和PBMC的NK活性测定可望成为肿瘤生物治疗的一个近期疗效参数.     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅱ CD3AK的免疫生物学特征

本实验采用倒置显微镜、光学显微镜、电子显微镜和荧光激活的细胞分类器(FACS)分析了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征。经抗CD3单抗和rIL-2共刺激后细胞形态学发生明显的变化，细胞异型性明显，有些体积增大，呈圆形或不规则形，往往形成集落：有些细胞体积变小。     

人CD3AK细胞杀伤人肺腺癌细胞的形态学观察

抗CD3抗体激活的杀伤细胞(CD3AK细胞)是一种新型的免疫效应细胞，与LAK细胞相比具有广谱、较高的杀伤活性及低IL-2依赖性的特点，因而受到重视。关于其杀伤机制的研究目前尚无明确报道。本研究把体外培养中贴壁状态的人肺腺癌细胞与用抗CD3单克隆抗体激活的人外周血来源的CD3AK细胞共同培养，电镜下观察了两种细胞的相互作用和靶细胞被杀伤的过程．藉此对CD3AK细胞杀伤肿瘤细胞的机制作一探讨。     

iNOS基因转染人CD3AK细胞的实验研究

目的　构建一氧化氮供体CD3AK/iNOS细胞。方法　用PCR技术从 pCMV/iNOS质粒中扩增出iNOS全长cDNA ,与逆转录病毒pLNCX构建重组质粒 pLNCX/iNOS ;通过脂质体介导把重组质粒转染入包装细胞PA3 17中 ,经G418筛选出抗性克隆。通过NIH3T3细胞测定病毒滴度。用病毒上清感染人CD3AK细胞。测定CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含量及iNOS活性。结果　经过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定重组质粒的正确性。G418筛选出 16个抗性克隆 ,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。NIH3T3细胞测定病毒滴度为 2 .1× 10 4CFU /ml。经重组逆转录病毒上清转染后CD3AK /iNOS细胞合成并分泌的NO含量及iNOS活性比CD3AK细胞明显增高。结论　逆转录病毒载体 pLNCX可有效地介导iNOS的转染。成功构建CD3AK/iNOS细胞 ,有效提高iNOS活性及NO含量。     

CD3AK细胞治疗原发性肝癌的实验及临床应用研究

目的观察CD3AK细胞体外杀瘤活性及其治疗中晚期原发性肝癌的效果。方法采用抗CD3单克隆抗体（CD3McAb）辅以少量rlL—2和PHA诱导外周血淋巴细胞制备CD3AK细胞。体外实验用MTT法测定其对K562、Hela—3和H7402肿瘤细胞株杀瘤活性，然后应用于临床，将140例中晚期肝癌患者随机分为三组，A组5l例（CD3AK细胞十化疗），B组45例（单纯化疗），C组44例（单用CD3AK细胞治疗）。结果CD3AK细胞体外对K562、Hela－3和H7402细胞株杀瘤率分别为78．54％、34．09％和64．37％，抗肿瘤效应的最佳时期在培养的第7～10天之间；临床治疗部分缓解率（PR）A、B、C组分别为45．1％、17．7％和20．5％，A、B两组比较有显著性差异（P＜0．o1）。结论CD3AK细胞是继LAK细胞后又一为有效的杀瘤细胞，临床应用安全可靠、有效，在中晚期肝癌辅助治疗中有着良好的应用价值，合理结合其它疗法可增强疗效。     

CD3AK细胞不同途径输注时体内的分布

过继输注体外激活的免疫效应细胞以介导体内肿瘤消退或缓解是现代免疫学在肿瘤治疗研究中的重要进展之一。然而 ,迄今有关临床观察表明其作用有限 ,究其原因 ,认为效应细胞不能迁移至靶器官是影响治疗效果的重要因素之一[1] 。本研究皆在探讨ＣＤ3ＡＫ细胞不同途径输注时的体内迁移和分布特征 ,为临床选择合理的治疗途径提供实验依据。1材料与方法1.1实验材料与试剂　　重组ＩＬ 2购自军事医学科学院 ;抗ＣＤ3单抗购自武汉生物制品研究所 ;同位素51Ｃｒ购自上海原子能研究所 ;ＲＢＭＩ 1640培养基为ＧＩＢＣＯＬ公司产品 ;γ 免疫记数仪 ,双…     

混合脐血血浆用于CD3AK细胞培养的研究

近年来,对于脐带血的研究重新引起了人们的重视,如脐带血造血干细胞替代骨髓进行移植、脐血输注治疗慢性再障、脐血ＬＡＫ细胞培养,脐血细胞用于基因治疗的实验也正在积极开展。脐血血浆的利用也日益增多,如脐血血浆用于造血于细胞体外扩增的研究等。本文旨在探讨混合脐血血浆用于免疫效应细胞培养的效果。采用混合脐血血浆和成人ＡＢ血清培养两组ＣＤ３ＡＫ细胞,于不同培养天数行细胞计数,并于第７,１４天用Ｍ３Ｔ法测两组细胞对Ｋ５６２,ＨＬ－６０肿瘤细胞株的杀伤活性,用ＡＰＡＡＰ法检测其免疫表型。结果显示,混合脐血血浆组…     

CD3AK细胞与LAK细胞的比较

抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共刺激法诱生扩增的ＣＤ３ＡＫ与用等量ｒＩＬ－２诱生扩增的ＬＡＫ间有明显差异：１）扩增倍数和细胞毒活性强度及其动态学不同：在诱生初期，ＣＤ３ＡＫ细胞数下降，细胞扩增倍数低于ＬＡＫ；对Ｋ５６２的细胞毒不知 性低于ＬＡＫ，诱生８天后ＣＤ３ＡＫ的扩增倍数和