多氯联苯和苯并（a）芘联合作用对HepG2细胞CYPA1和微核的影响

目的探讨多氯联苯（PCBs）153通过诱导P450酶活力对苯并（a）芘【B（a）P】遗传毒性的影响。方法PCB153设3个剂量组（1、10、100μmol／L），B（a）P设1个剂量组（50μmol／L），DMSO为溶剂对照组，3-甲基胆蒽（3-MC）为阳性对照组。以不同浓度的PCB153（1、10、100μmol／L）染毒HepG2细胞48h后再与B（a）P联合染毒24h。通过荧光分光光度法测定HepG2细胞CYP1A1酶活力（EROD）。同时采用胞质分裂阻滞法微核试验（CBMNT）分析细胞的微核，计算微核率和核分裂指数（NDI）。结果与溶剂对照组相比，1、10、100μmol／L的PCB153和50μmol／L的B（a）V单独染毒均可诱导EROD活力增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。与溶剂对照组比较，100μmol／L的PCBl53和50μmol／L的B（a）V可诱导微核率显著升高，差异有统计学意义（P〈0．01）。与B（a）V单独染毒组比较，B（a）V和PCB153联合染毒时，EROD活力和微核率均显著升高，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。与溶剂对照组比较，100μmol／L的PCB153和50μmol／L的B（a）V及所有联合染毒组均使HepG2细胞NDI明显降低，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论PCB153对B（a）P的遗传毒性作用具有一定的促进作用，这种促进可能与PCB153诱导P450酶活力有关。     

苯并[α]芘对神经细胞DNA损伤及细胞周期的影响

[目的]通过研究苯并[α]芘（BaP）染毒后神经细胞DNA损伤和神经元细胞周期改变,探索BaP致神经细胞凋亡的机制。[方法]采用新生1-3d的sD大鼠神经元细胞,培养5d。以BaP同时加入S9对细胞染毒,染毒组浓度分别为10、20、40μmol/L,并设空白对照组和溶剂对照组,继续培养48h。以20μmol／L BaP染毒,分别于染毒0、6、12、24、48h后处理细胞。用单细胞琼脂糖凝胶电泳（SCGE）检测DNA损伤,采用流武细胞仪检测细胞周期变化情况。[结果]SCGE结果显示,与空白对照组和溶剂对照组相比,20、40μmol／L染毒组神经细胞Olive尾矩、尾DNA含量、尾长均明显增加,头DNA含量明显降低,且有统计学意义（P〈0．05）。与Oh组相比,染毒48h组神经细胞Olive尾矩、尾DNA含量、尾长均有明显增加,头DNA含量明显降低,差异均有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组相比,40μmol／L染毒组G1期和s期神经细胞百分数差异有统计学意义（P〈0;05）;与Oh组相比,染毒48h组G1期和S期神经细胞百分数明显增加,且差异有统计学意义（P〈0．05）。[结论]BaP可引起神经细胞DNA断裂,诱发细胞周期重启。     

二硫化碳对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨二硫化碳（CS2）对大鼠视网膜组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及细胞凋亡的影响。方法将24只SD雄性大鼠随机分为对照组、低剂量CS2染毒组和高剂量CS2染毒组，染毒结束后取视网膜组织制成切片，测量内视网膜厚度比率，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶染色（NADPH-NDP）法检测iNOS活力，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果（1）染毒组的内视网膜（包括内核层、内丛状层、节细胞层、神经纤维层和内界膜）厚度减小，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（2）染毒组视网膜iNOS表达增加，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。（3）染毒组视网膜出现细胞凋亡，凋亡指数与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；高剂量染毒组与低剂量染毒组之间差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论CS2能激活视网膜组织iNOS表达，由此产生的过量的NO可损伤视网膜细胞。同时，视网膜细胞凋亡也是CS2所致视网膜损害的机制之一。     

苯并[a]芘染毒致小鼠脑组织胞核DNA损伤

目的研究苯并[a]芘（BaP）染毒对小鼠脑组织胞核DNA的损伤。方法将50只昆明种小鼠随机分为5组，每组10只，染毒组分为高、中、低3个剂量组，并设溶剂对照及空白对照组。染毒组用BaP的植物油溶剂进行腹腔注射处理，高、中、低剂量组每次分别腹腔注射BaP7．8，3．2和1．3mg／kg，每周4次。溶剂对照组用植物油溶剂作平行处理，空白对照组不做处理。实验中观察记录小鼠一般情况及神经系统症状，染毒10周后取各组小鼠脑组织制作切片及细胞悬液，DNA断点末端核糖核酸转移酶地高辛标记法（TUNEL）及单细胞凝胶电泳（SCGE）2种方法检测小鼠脑组织神经细胞DNA的损伤。结果（1）高剂量BaP染毒组小鼠有明显的全身及神经系统中毒症状。（2）TUNEL法检测，染毒组与对照组以及不同剂量BaP染毒组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤率差异均有统计学意义（P〈10^-16～10^-62）。（3）SCGE法检测，高剂量BaP染毒组与对照组之间小鼠脑组织胞核DNA损伤程度差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高剂量BaP具有神经系统毒性。BaP染毒可引起小鼠脑组织胞核DNA损伤，损伤率及损伤程度随染毒剂量增加而增加。     

HSP70在苯并(a)芘致细胞DNA损伤中的保护作用

[目的]研究热休克蛋白70(HSP70)对苯并(a)芘[B(a)P]所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤的保护作用。[方法]用含HSPTO基因cDNA的pcDNA3．0／HSP70重组质粒转染A549细胞,提高A549细胞HSP70表达水平,以空载体质粒pcDNA3．0转染作载体对照。对肺腺癌A549细胞(A549)、空载体质粒pcDNA3．0转染A549细胞(A549／pcDNA)和HSP70过表达A549细胞(A549／HSP70),用不同浓度的B(a)P(1、5、10、50、100μmol／L)染毒24h,MTT法测定细胞存活率、单细胞琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA损伤。用溶剂二甲基亚砜处理细胞组作为未染毒细胞组。[结果]B(a)P染毒作用时,A549/HSP70细胞在50、100μmol／L浓度组存活率明显高于A549细胞。A549、A549／pcDNA和A549/HSP70细胞的DNA损伤程度都伴随B(a)P染毒浓度增加而增加。与各自未染毒细胞相比,染毒A549和A549／pcDNA细胞的Olive尾矩值均有明显增加(P<0．05),A549／HSP70细胞在5、10、50、100μmol／L浓度时,Olive尾矩值明显升高(P<0．05)。与A549细胞组相比,在各染毒浓度下,A549/HSP70细胞Olive尾矩值均有降低(P<0．05)。A549／pcDNA细胞Olive尾矩值均无明显改变。[结论]HSP70对苯并(a)芘所致肺腺癌细胞A549的DNA损伤具有保护作用。     

大剂量维生素C对DNA氧化烷化损伤影响

目的 观察大剂量摄入维生素C（VC）对DNA氧化损伤及烷化损伤的影响。方法以补充大剂量VC饲料给幼年Wistar大鼠，剂量分别为0，2000，5000，10000mg／kg饲料，不添加VC作为对照组，干预时间为60d。干预结束后，采用单细胞凝胶电泳法检测和评价淋巴细胞DNA自发损伤和H202诱导的氧化损伤；留取尿液用毛细管电泳法检测大鼠尿中O^6-甲基鸟嘌呤（O^6-methylguanine,06～MeG）含量。结果各组大鼠的DNA自发损伤差异无统计学意义（P〉0．05）。10μmol／L的H2O2诱发DNA损伤时，随剂量增加，DNA损伤逐渐加重，对照组为59．060AU，2000mg／kg饲料剂量组为69．900AU，5000mg／kg饲料剂量组为75．768AU。比对照组升高28％（P〈0．05），10000mg／kg饲料剂量组为79，655AU，比对照组升高49％（P〈0．01）。各组O^6-MeG的含量差异有统计学意义（P=0．01）。10000mg／kg饲料剂量组含量最高为2．434mg／g肌酐，比对照组升高36％（P〈0．05）。结论高剂量VC对DNA自发损伤没有影响。而对10bμmol／L H2O2的诱导损伤，补充5000mg／kg饲料和10000mg／kg饲料的VC可加重DNA损伤。给大鼠补充10000mg／kg饲料的VC可导致DNA烷化损伤产物O^6-MeG生成增多。     

焦化作业工人淋巴细胞HSP70表达及作用

目的探讨热应激蛋白70（HSP70）在焦炉工人外周血淋巴细胞的表达水平及其意义。方法用微核试验和碱性单细胞凝胶电泳技术（彗星试验）检测淋巴细胞的染色体畸变和DNA损伤情况，用蛋白印迹（westem blot）法检测淋巴细胞HSP70表达水平。结果外周血淋巴细胞微核率和彗星尾长在高暴露组显著高于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；HSP70的表达水平在高暴露组、低暴露组和对照组分别为1．12±0．36。1．34±0．83。0．89±0．40，低暴露组明显高于对照组（P〈0．05）；高暴露组工人的外周血淋巴细胞HSP70的表达水平与彗星尾长呈负相关（r=-0．416，P=0．03）。结论焦炉作业环境可诱发外周血淋巴细胞HSP70蛋白表达，较高水平HSP70的表达对细胞DNA损伤具有保护作用。     

p，p＇-DDE、β-BHC对大鼠支持细胞FasL mRNA表达及NF-κB活性的影响

[目的]研究有机氯农药DDT和六六六的代谢产物（p，p＇-DDE）和β-BHC及联合染毒对离体培养大鼠支持细胞（sertoli cell）FasL mRNA表达及NF—κB活性的影响。[方法]分离大鼠睾丸支持细胞进行原代培养2d，以DMSO为溶剂对照，分别以终浓度为10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及联合染毒支持细胞24h，应用RT-PCR法研究支持细胞FasL mRNA的表达；用激光共聚焦显微镜检测NF—κB的转位激活状况。[结果]10、30、50μmol／L的p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒支持细胞后，FasL mRNA表达升高，50μmol／L剂量组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），各组内低、中剂量组与高剂量组差异有统计学意义（P〈0．05）；NF-κB活性明显增强。[结论]支持细胞经p，p＇-DDE、β-BHC及其联合染毒后，FasL mRNA表达明显升高，NF—κB的活性随染毒剂量的增加而增强，且联合作用比单独作用更加明显。     

甲基汞对小鼠睾丸生殖细胞凋亡作用

目的研究甲基汞对小鼠睾丸生殖细胞凋亡及其作用机制。方法采用原位末端标记（TUNEL）和免疫组织化学方法研究甲基汞对小鼠睾丸生殖凋亡及其凋亡基因的表达。结果甲基汞可使雄性小鼠睾丸生殖细胞的凋亡率增加，随着甲基汞染毒剂量的增加，1150LD50、1／10LD50组凋亡率与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．0S）。1／10LD50剂量染毒组低于1150LD50组，差异无统计学意义（P〉0．05）。Fas、Fas—L、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3（caspase-3）表达增强，11100LD50组阳性表达率最高，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05），随着染毒剂量的增加。各染毒组的阳性表达率有所下降。结论甲基汞可以诱导雄性小鼠生殖细胞的凋亡。     

汽车尾气对大鼠肺脏的氧化应激和遗传毒性作用

[目的]探讨汽车尾气对大鼠肺脏生物大分子的氧化损伤作用。[方法]将汽车尾气的颗粒物、冷凝物和半挥发性有机物的二氯甲烷提取物（extracts of gasoline engine exhaust,EGE）减压挥干后用二甲亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）定容到200L／mL。将40只SD大鼠分为5组,每组8只。以DMSO为溶剂对照,以汽车尾气0、5．6、16．7、50．0L／kg的剂量经气管滴注染毒,每周1次,共4次,末次染毒24h后处死,测定肺脏脏器系数以及肺组织内丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羰基蛋白（carbonyl protein,CP）含量以及超氧化物岐化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH—Px）活力;并用彗星试验检测肺组织细胞中DNA的损伤程度。[结果]各组动物体重和肺脏脏器系数与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;16．7、50．0L／kg剂量组肺组织中MDA含量分别达到了4．57、4．48nmol／mg蛋白,故对照组明显升高（P〈0．05）;CP含量在50．0L／kg剂量组为8．91μmol／mg蛋白,较对照组明显增加（P〈0．05）;SOD和GSH—Px活力在50．0L／kg剂量组分别为1697．61NU／mg蛋白和14．80U／mg蛋白,与对照组比较均明显降低（P〈0．05）。在16．7L／kg和50．0L／kg组,肺组织细胞的拖尾率与对照组比较均明显增加（P〈0．05）,但各组尾长的增加无统计学意义。[结论]汽车尾气可诱导大鼠肺组织生物大分子的氧化损伤和DNA单链断裂。