RNA干扰技术及其在医学领域的研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是一种由双链RNA介导的基因沉默现象,可以在转录水平和转录后水平发挥作用。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术是近几年研究的热点,已经广泛地应用于抗病毒感染、抗肿瘤等热门领域。RNAi技术有望开辟基因治疗的新途径。本文就RNAi的作用机制及RNAi技术在医学中的应用做一综述。     

基于RNA干扰技术和microRNA调控的丙型肝炎治疗研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)感染是一个全球性的健康问题,全球约有1.7亿人感染了HCV,慢性丙型肝炎常导致肝硬化、肝癌等严重的肝脏疾病,但至今尚无针对HCV感染的有效疫苗或抗体.RNA干扰(RNAi)是一种抵御病毒感染的最具前景的治疗策略,近年来基因治疗领域的发展进一步提升了其临床应用的可行性.RNAi技术加速了对HCV生物学基础的认知,并揭示了许多可作为治疗新靶点的病毒和宿主细胞分子.同时,基因运载体系的发展以及microRNA (miRNA)在HCV感染中关键作用的发现,使得基于RNAi和miRNA的抗病毒治疗策略具有巨大前景.文中就丙型肝炎治疗的RNAi靶点,肝脏靶向基因运载体系,microRNAs抗HCV感染潜能等研究领域中的最新进展作一综述.     

RNA干扰的抗病毒作用：阻止乙型肝炎病毒复制的新策略

近年来，科学家们发现了一种普遍存在的重要的基因调节机制，被称为RNA沉默或者是RNA干扰(RNAi)。虽然RNAi基因调节的机制并没有完全搞清楚，但科学家已将研究的重点放在治疗作用上，特别是抗病毒作用。本文介绍了近年利用小干扰RNA(siRNA)阻止乙肝病毒复制的多个成功的体内和体外研究。这些研究使我们离使用RNAi作为一种抗病毒治疗的手段越来越近。     

RNA干扰及其在医学研究中应用的进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,序列特异的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)是RNAi作用中的效应分子。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术具有明显优势,已经广泛地应用于基因功能研究、抗病毒感染和抗肿瘤等热门领域。现就RNAi作用机制、siRNA的制备、设计及RNAi技术在医学研究中应用做一综述。     

RNA干扰技术的应用

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)是与靶基因序列同源的双链RNA诱导的一种特异性的转录后基因沉默现象。目前 ,RNAi的作用机制已经基本明确 ,并显示了广阔的应用前景。RNAi技术作为新的基因阻断技术已经成功地应用于人类基因组功能的研究 ,同时提供了一条人类抗病毒治疗的新技术。另外 ,借助RNAi技术还有望在将来于基因水平对肿瘤进行治疗。     

乙型肝炎病毒基因型与抗病毒疗效的关系

我国是慢性乙肝的高发区。研究表明积极有效的抗乙型肝炎病毒（HBV）治疗是阻止疾病进展的关键。近几年国内外学者研究发现抗病毒疗效可能与感染的HBV基因型有关。本文综述了HBV基因型与抗病毒疗效相关性的研究进展。     

抗呼吸道合胞病毒感染的新药物作用靶点的筛选

目的为了筛选潜在的抗呼吸道合胞病毒药物作用靶标,以呼吸道合胞病毒感染相关的基因为靶标来构建抑制RSV感染的pSUPER RNAi表达载体,通过体外抗病毒实验进行验证,最后筛选出有效的靶基因。方法利用信使RNA（mRNA）差异显示法,获得特定细胞差异表达的mRNA差异显示谱,通过电子克隆获得这些EST片段的电子延伸产物,得到三十余条与RSV感染密切相关的基因。从中选取部分基因序列作为靶点,化学合成2条编码短发夹RNA序列的寡核苷酸链克隆到pSUPER载体上,构建若干靶向呼吸道合胞病毒感染细胞的相关基因的RNAi质粒。通过体外抗病毒实验来筛选有效的作用靶标结果。结果本研究设计的siRNA序列克隆到了pSUPER上相应位置,序列正确。针对RSV基因构建的重组质粒pshRNA-ZQ06/16/20/26均可减轻RSV所致的细胞病变,降低病毒滴度,重组质粒对细胞生长无明显细胞毒性作用,通过噻唑蓝比色法（MTT）从mRNA水平分析并确定了该RNAi效应对靶基因有特异性抑制作用。结论重组质粒pshRNA-ZQ06/20/26较pshRNA-ZQ16抗RSV作用要强。     

丙型肝炎病毒基因型与干扰素疗效的关系

我国是丙型肝炎的高发区。研究表明积极有效的抗丙型肝炎病毒（HCV）治疗是阻止疾病进展的关键。近几年国内外学者研究发现抗病毒疗效可能与感染的HCV基因型有关。本文综述了HCV基因型与干扰素抗病毒疗效相关性的研究进展。     

干扰素-α作用于HepG2细胞后上调表达基因的筛选

干扰素（IFN）-α是具有多种生物学作用的细胞因子,在机体抗病毒感染、肿瘤抑制、调节免疫反应等方面发挥重要作用,并用于临床多种肿瘤以及病毒性肝炎的治疗,但其确切作用机制并不完全明了.目前认为,IFN-α可以激活与其相关的信号转导通路,通过活化多种目的基因的表达而发挥作用.     

RNA干扰与呼吸系统疾病的治疗

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点,被广泛应用于生物医学等各个研究领域,其在呼吸系统疾病的治疗研究方面也取得了很多突破性的进展,广泛用于病毒感染、肺癌、哮喘等疾病的分子生物学机制的研究与治疗。本文对RNAi技术的发现、作用机制及在呼吸系统疾病治疗上的应用进行了综述。     

靶向C基因的shRNA抗乙型肝炎病毒在BHK-21细胞中的复制与表达

目的 研究靶向乙型肝炎病毒(HBV)C基因的shRNA(shRNA)诱导RNAi(RNAi)在BHK-21细胞中抑制HBV的复制与表达及抗病毒效果.方法 根据成都军区昆明总医院传染病中心克隆测序的中国56个民族CHB患者HBV基因组(基因型B属ayw1亚型)已在GenBank登录注册:CYN/2002和CYN/2000(GenBank登录号AY517488,AY517489,等),为了监测siRNA功能提供报告基因系统,将HBV C基因PCR产物克隆构建成报告基因表达载体pC-EGFP-N1和载体pCDNA3.1B(-),设计并构建两个靶向同源(CYN/2002和CYN/2000)毒株HBV C基因的长24核苷酸(nt)的shRNA表达质粒(S1和S2),随机设计的用于对照的非同源长24 nt的shRNA表达质粒S3,将其克隆到载体pU6上,构建成表达目的 shRNA重组表达载体,并与pC-EGFP-N1共转染BHK-21细胞.首先在BHK-21细胞中使用BH-2型荧光显微镜观察和FACS-440型流式细胞仪检测绿色荧光蛋白(EGFP)表达细胞数量,评估该shRNA表达质粒在转染后不同时间对C基因/EGFP融合报告基因表达的抑制作用,接着在BHK-21细胞中通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)进一步检验了shRNA抗病毒效果.结果 通过BH-2型荧光显微镜观察和FACS-440型流式细胞仪检测,发现在shRNA表达质粒和pC-EGFP-N1共转染BHK-21细胞24 h后,与pC-EGFP-N1或pEGFP-N1单质粒转染相比,S1或S2的共转染组、S1+S2的共转染组使EGFP的表达水平降低了90%,而对照质粒S3或pU6共转染组无显著降低EGFP的表达水平,差异有统计学意义(P＜0.01);应用RT-PCR检测C基因mRNA和EGFP基因mRNA的表达量,结果与BH-2型荧光显微镜和FACS-440型流式细胞仪检测结果相吻合,差异有统计学意义(P＜0.01).进一步证实了RNAi抗病毒效果,抗病毒效应持续时间超过48 h.结果 发现,创建的靶向C基因的shRNA能够有效特异地抗C-EGFP基因在BHK-21细胞中的复制与表达.结论 靶向C基因的RNAi技术能够有效特异地抗HBV在BHK-21细胞中的复制与表达.RNAi可能成为抗重大传染病HBV/HCV安全有效的应急疫苗.     

RNAi在小鼠卵母细胞和胚胎发育研究中的应用

RNA干扰（HNAi）由双链RNA（daRNA）介导的、序列特异地引起转录后基因沉默的现象，是生物体内抵御转座子和病毒感染的重要保护机制之一，也是在生长发育过程中调节内源基因表达的重要途径。RNAI可作为一种简单有效的代替基因剔除的工具应用于功能基因组学和疾病的基因治疗研究。现综述RNAi机制、作用特征及RNAi相关技术在小鼠卵母细胞和胚胎发育研究中的应用。     

RNA干扰中小干扰RNA的设计原则

RNA干扰(RNAi)是由内源性或外源性双链RNA介导的一种高度保守的序列特异性基因表达调控机制,主要通过小干扰RNA(siRNA)和微小RNA发挥作用。由于其具有高效、高特异性、作用稳定等特点,已被广泛地应用于基础实验和疾病治疗的研究中。在进行siRNA介导的RNAi实验时,如何设计高效、特异性抑制靶mRNA的siRNA是实验成败的关键。     

RNA interference and its current application in mammals

Objective The aim of this review was to assess RNA interference (RNAi) and its possibility as a potential and powerful tool to develop highly specific double-stranded RNA (dsRNA) or small interfering RNA (siRNA) based gene-silencing therapeutics. Data sources The data used in this review were obtained from the current RNAi-related research reports. Study selection dsRNA-mediated RNAi has recently emerged as a powerful reverse genetic tool to silence gene expression in multiple organisms. The discovery that synthetic duplexes of 21 nucleotides siRNAs trigger gene-specific silencing in mammalian cells has further expanded the utility of RNAi in to the mammalian system. Data extraction The currently published papers reporting the discovery and mechanism of RNAi phenomena and application of RNAi on gene function in mammalian cells were included. Data synthesis Since the recent development of RNAi technology in the mammalian system, investigators have used RNAi to elucidate gene function, and to develop gene-based therapeutics by delivery exogenous siRNA or siRNA expressing vector. The general and sequence-specific inhibitory effects of RNAi that will be selective, long-term, and systemic to modulate gene targets mentioned in similar reports have caused much concern about its effectiveness in mammals and its eventual use as a therapeutic mordality. Conclusions It is certain that the ability of RNAi in mammals to silence specific genes, either when transfected directly as siRNAs or when generated from DNA vectors, will undoubtedly accelerate the study of gene function and might also be used as a potentially useful method to develop highly genespecific therapeutic methods. It is also expected that RNAi might one day be used to treat human diseases.     

RNA干涉技术在临床医学中的研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)引起的转录后基因沉默机制,具有序列特异性和高效性,RNAi作为一门新的基因阻断技术,在临床医学研究及基因治疗中具有广阔的应用前景。本文对RNAi作用机制以及在疾病发病机制及治疗方面的研究进展综述如下。     

小分子干扰RNA分子化学修饰研究进展

RNA干扰是指转录后的基因沉默现象，可使基因沉默的小分子干扰RNA（siRNA）为基因治疗提供了又一个选择。为了实现其基因治疗价值，根据siRNA的作用机制和反义核酸修饰所取得的经验，为优化其药学性质和有效转运，进行了各种改进。其中，载体修饰和化学方法修饰siRNA是优化其性质的重要方法，本文对两种方法进行了简要的综述。