防止免疫组化染色中组织脱片的方法与体会

防止免疫组化染色中组织脱片的方法与体会彭敦发（病理解剖学教研室）免疫组化技术是近年来兴起的一项较新技术。在病理诊断、鉴别诊断中起重要作用。然在免疫组化染色过程中常遇到组织脱片问题，致使染色失败。笔者在近年的免疫组化实践中摸索出一点使组织切片不易脱落的...     

免疫组化染色中脱片的原因分析

免疫组化操作步骤多,历时长,且在反复浸泡过程中进行,脱片是免疫组化检测中最常遇到的现象之一.如果染色过程中出现脱片,不但影响日常工作,也浪费试剂.我们通过摸索和实践,针对脱片的原因加以分析,用以下的方法有效的减少了脱片的现象.现介绍如下. 1 玻片处理不当 玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤之一,多聚赖氨酸具有良好的防脱片效果,为目前大多病理实验采用.     

脱钙骨免疫组化染色方法的构建

在对骨骼生理和病理的研究过程中，经常需要制备脱钙的骨免疫组化标本，然而由于骨骼组织的特殊性，制备好的骨组化标本也并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶，脱钙是标本制备中至关重要的过程。一些强酸如盐酸，硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐，但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏，使接下来的工作无法进行；我们仿照目前国外方法：EDTA低温脱钙^[1]，得到的结果比较满意，现总结如下。     

网状纤维染色中脱片的解决方法

网状纤维染色技术是一项特殊的病理染色技术。在网状纤维染色过程中 ,脱片现象经常出现 ,过去采用的封固防脱方法烦琐 ,操作过多 ,切片不洁 ,很不方便。我们经过长期的观察、实践、改进 ,用一种简单易行的方法在防脱片方面取得很好的效果 ,染色的选择性也相应有所提高。现将具体方法介绍如下。1　材料和方法1 .1　材料 :配好 Gomori氏银氨液 [1 ] ,0 .5 %酸性高锰酸钾、1 %草酸、 2 .5 %铁明矾、1 0 %甲醛、0 .2 %氯化金、0 .0 2 %伊红 ,另需 6 0℃烤箱或电吹风。1 .2　方法 :1切片经二甲苯→酒精→自来水→蒸馏水洗数次。 2滴 0 .5 %酸性…     

防止神经组织染色脱片的1种方法

神经组织取材困难 ,在科研中一般只研究某一神经节、神经核或某一区的变化 ,这就限制了切片的数量。若有限的切片在染色过程中脱掉 ,实在让人痛惜。组化染色的时间长 ,这又为脱片创造了条件 ,我们经过探索 ,找到了一种简易可行的方法 ,现介绍如下。1　切片用粘片剂处理粘片剂有ＡＰＥＳ或多聚赖氨酸 (武汉博士德生物工程有限公司 ) ,我们用的是ＡＰＥＳ。操作方法 :将干净载玻片浸泡在 1∶5 0丙酮稀释的ＡＰＥＳ中 30秒 ,取出后略干燥一会 (视室温而定 ,一般 1～ 5分钟 ) ;纯丙酮涮洗 2～ 3次 ,捞出后于无尘处干燥待用。2　展片要充分神经组…     

组织制片中脱片的因素和防止方法

在组织的常规制片、特殊染色和免疫组织化学染色时常常因组织与载玻片的脱离而致染色失败，尤其是免疫组织化学染色，因操作时间长，切片在缓冲液中反复冲洗，脱片的儿率就更大。因此了解脱片的因素和防止脱片的方法至关重要，现介绍如下。     

脱钙液的组分与处理时间对骨髓活检组织HE和免疫组化染色的影响

目的：探讨不同组分的脱钙液及脱钙时间对骨髓活检组织HE染色和免疫组化染色效果的影响。方法：收集36例骨髓活检穿刺组织,分为10%硝酸甲醛液(A液)、10%盐酸甲醛液(B液)和30%甲酸甲醛液(C液)3组,每组12例,分别观察各组的脱钙时间。另收集5例骨髓活检穿刺组织,将同一例标本分成两份,观察不同组分的脱钙液和脱钙处理时间对HE染色和免疫组化染色效果的影响。结果：A液、B液的脱钙时间比C液短;3种方法的HE染色效果均较好;而C液脱钙2 h的Ki67免疫组化染色效果好,但其他方法的Ki67免疫组化染色效果欠佳。结论：采用30%甲酸甲醛液处理2 h的脱钙法,实验操作简便,HE染色和免疫组化染色效果较为满意。     

免疫组化染色中防脱片的技术改进

应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇，是免疫组织化学技术中的关键步骤。微波抗原修复技术是一种有效的抗原修复方法，目前该技术已广泛应用于病理切片的免疫组织化学染色操作中。它利用高温效应和微波的直接作用，打开蛋白间的交联键，暴露组织固定时被封闭的抗原决定簇。但是在微波加热处理组织切片的过程中，常发生脱片现象而导致实验失败。为了克服这个缺点，我们经反复实践摸索，使用简单的材料设计了一种可行的方法，较好地防止了脱片现象的发生。     

谈解决病理染色中脱片问题的几点经验与体会

在切片染色过程中最主要的就是脱片问题，严重时脱片率高达60％，曾进行过多方面的分析，有人认为水质过硬，矿物质含量过高碱性大等原因，经采取玻片涂蛋白甘油等办法，脱片率有所下降，但还是不能从根本上解决闻题，同时还出现了切片背景有污染的现象，尤其是遇到特殊染色，免疫组化等费时的染色时，脱片问题就更为突出．     

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。     

免疫组化染色结果分析

目的探讨免疫组化染色过程中存在的问题及对策。方法收集我院2003年3月～2006年5月ABC法染色的手术切除标本1500例,对存在问题的80例标本进行分析并提出相应对策。结果ABC法染色手术切除标本1500例中,存在问题的80例（5.3%）按染色结果分为：无色片（即无阳性信号）11例（13.7%）;“杂音”染色片（有阳性信号）69例（86.2%）,其中,全片着色12例（17.3%）、切片边缘着色23例（33.3%）、“阴阳脸”着色9例（13.0%）、灶片状着色17例（24.6%）、间质着色4例（5.7%）、细胞浆着色1例（1.4%）、细胞核着色3例（4.3%）。结论每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,避免染色过程中出现的问题可提高免疫组化染色的质量。     

HE染色切片褪色后免疫组化染色方法研究

目的探讨HE染色切片褪色后免疫组织化学染色方法。方法HE染片放人二甲苯中浸泡,清除盖玻片和树胶;梯度酒精水化,蒸馏水洗涤;置入0．25％高锰酸钾5rain,蒸馏水洗,40．5％草酸溶液漂白,蒸馏水洗,自然晾干;滴PLLS1滴于组织片上,摇匀,将切片在60℃烘箱中烘60min烘干;PBS洗5rain×3次;组织需要进行水浴抗原热修复;与对照片按标准S-P方法进行免疫组化染色。结果所有对照片与试验片均为阳性,无一例脱片。结论此方法可用于HE片褪色做免疫组化染色,具有实用价值。     

免疫组化染色结果分析

目的探讨免疫组化染色过程中存在的问题及对策。方法收集我院2003年3月～2006年5月ABC法染色的手术切除标本1500例,对存在问题的80例标本进行分析并提出相应对策。结果ABC法染色手术切除标本1500例中,存在问题的80例(5.3%)按染色结果分为:无色片(即无阳性信号)11例(13.7%);"杂音"染色片(有阳性信号)69例(86.2%),其中,全片着色12例(17.3%)、切片边缘着色23例(33.3%)、"阴阳脸"着色9例(13.0%)、灶片状着色17例(24.6%)、间质着色4例(5.7%)、细胞浆着色1例(1.4%)、细胞核着色3例(4.3%)。结论每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果,避免染色过程中出现的问题可提高免疫组化染色的质量。     

水浴锅煮沸修复抗原进行免疫组化染色方法的探讨

水浴锅煮沸修复抗原进行免疫组化染色方法的探讨林国宏傅海香１胡斌２（基础医学院病理解剖学教研室，沈阳１１０００１）关键词免疫组化；染色；抗原通常应用微波处理的方法对抗原进行修复后做免疫组化的染色。作者利用水浴锅煮沸方法对５０多例肺癌及炎性假瘤组织的抗原...     

陈旧石蜡组织块的免疫组织化学染色及防脱片体会?

目的：总结陈旧石蜡组织块的免疫组织化学染色及防脱片经验。方法选取包埋时间为4年的金黄地鼠胰腺和肝脏石蜡组织块各150个,按照本课题组改进的实验方法进行切片及免疫组织化学染色。结果镜下观察显示,切片染色阳性结构清晰,无非特异性背景着色,脱片率约为10%。结论陈旧石蜡组织块在自来水里浸泡3~4 d 后再切能够提高切片质量;在免疫组织化学中烤片、抗原修复、一抗均是影响脱片的关键环节。     

免疫组化非特异性染色原因及解决方法

免疫组化除正常的真实的阳性信号外常常会遇到不正常的背景着色，这些非正常的着色称为“杂音”染色，又称非特异性染色。非特异性染色常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处、坏死组织及固定不良的组织中心处，非特异性染色常见的有间质着色、全片着色、切片边缘着色、着色区灶状分布等，表现为弥漫性，均匀性的背景染色，也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。     

骨组织脱钙技术及在免疫组化染色中的应用

与一般的软组织不同 ,骨组织石蜡切片在脱水、透明等制片前需要使用脱钙剂除去骨组织中的钙盐才能制备成 4～ 5 μm厚的切片。为了更好地了解脱钙技术对骨组织免疫组织化学染色质量的影响 ,本文根据骨组织及其免疫组织化学染色的特点 ,结合文献对影响骨组织免疫组织化学染色质量的组织的固定、常用的脱钙方法及脱钙液、低温 微波快速脱钙技术及注意事项等方面进展进行了综合分析。     

抗酸-免疫组化双重染色在结核病组织病理学研究中的应用

目的:研究抗酸和免疫组织化学双重染色法在同一张切片上清晰显示结核分支杆菌与巨噬细胞的分布状态.方法:组织切片常规脱蜡、入水,其染色分别按抗酸-免疫组化-苏木素;免疫组化-抗酸-苏木素和免疫组化-苏木素-抗酸顺序进行.结果:组织切片按免疫组化-抗酸-苏木素顺序染色,背景清晰,反差明显,较另两种染色顺序显色效果好.结论:组织切片按首先免疫组织化学染色,在抗酸染色,最后苏木素染色的步骤染色效果最好.能在同一切片中清晰显示结核分枝杆菌与巨噬细胞的分布情况.