软骨源性形态发生蛋白-1研究进展

软骨源性形态发生蛋白-1是骨形态发生蛋白家族中的一种生长因子,在四肢骨发育,尤其是在早期软骨化阶段起着重要的调节作用,它的缺失和过度表达都会引起相应的骨与关节疾病.利用它的体内外生物学特性,已对其体外移植及治疗软骨缺损和畸形的潜能进行了深入研究,并将逐步应用于临床.该文就软骨源性形态发生蛋白-1的生物学作用及相关基因疾病作一综述.     

软骨形态发生蛋白1诱导犬真皮成纤维细胞向软骨细胞表型分化的实验研究

目的探讨软骨形态发生蛋白1（Cartilage-derived morphogenetic protein-1,CDMP1）诱导体外培养的犬真皮成纤维细胞（Dermal fibroblasts,DFs）向软骨细胞表型分化的可行性。方法应用CDMP1细胞诱导液对体外扩增至第4代的犬DFs进行诱导培养,观察细胞的形态变化,以免疫荧光染色和RT-PCR检测细胞中软骨特异蛋白的表达情况。结果诱导培养6 d后,实验组部分DFs呈星形或多角形,免疫组化染色显示有软骨特异的II型胶原分泌,RT-PCR检测也表明有Ⅱ型胶原、aggrecan和SOX9表达。但是诱导培养10 d后,均转为阴性。结论 CDMP1可以诱导犬DFs向软骨细胞表型分化,有可能成为组织工程化纤维软骨的种子细胞。     

软骨源性形态发生蛋白-1与关节软骨修复研究现状

软骨源性形态发生蛋白-1是骨形态发生蛋白家族中的一员,其转录主要在骨骼肢端、胚胎发育期骨骼前体内和周围、软骨母细胞聚集区及形成软骨前体的组织周围,尤其是在关节区内.软骨源性形态发生蛋白-1转录和翻译是目前已知唯一的早期关节形成的标志,在早期软骨化和晚期软骨细胞成熟阶段起着重要的调节作用,它的缺失和过度表达都会引起相应的骨与关节疾病.利用软骨源性形态发生蛋白-1的生物学特性,对其体外移植及治疗软骨缺损的潜能正进行深入研究,并将逐步应用于临床.该文就其在关节软骨修复中作用的研究现状作一综述.     

软骨形态发生蛋白1诱导瘢痕成纤维细胞表达软骨表型的实验研究

目的应用软骨形态发生蛋白1(CDPM1)诱导瘢痕成纤维细胞向软骨细胞分化,探讨其作为烧伤后耳软骨缺损修复的种子细胞的可行性。方法取瘢痕切除术患者的增生性瘢痕组织,提取瘢痕成纤维细胞,CDPM1诱导培养(2%胎牛血清F-12培养液,CDMP1终浓度为100 ng/mL),设阴性、阳性对照组。Image Plus图像软件观察细胞形态变化;免疫荧光、RT-PCR及Western Blot分析诱导前后的软骨相关Ⅰ、Ⅱ型胶原、Sox9、Aggrecan的表达;对第4代细胞行Micromass法培养诱导,HE染色、免疫组织化学染色及Safranine-O染色对诱导结果进行检测。结果诱导后瘢痕成纤维细胞由长梭形向多角形转变,Image Plus软件分析示诱导后细胞长宽比例为(1.48±0.21):1,与诱导前的(7.21±1.54):1相比,差异有统计学意义(P<0.05);与软骨细胞的(1.31±0.13):1相比,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光、RT-PCR、Western Blot结果显示,诱导后瘢痕成纤维表达软骨相关指标Ⅱ型胶原、Sox9、Aggrecan。Micromass诱导后行HE染色显示,诱导后部分细胞出现软骨特征性陷窝结构,免疫组织化学染色显示Ⅱ型胶原阳性染色,Safranine-O染色显示微团块诱导后细胞基质红染。结论瘢痕成纤维细胞在软骨形态发生蛋白1诱导下可以向软骨细胞分化,有望成为烧伤后耳软骨缺损修复的种子细胞。     

软骨形态发生蛋白1诱导的瘢痕成纤维细胞体内成软骨能力的实验研究

目的探讨软骨形态发生蛋白1(CDMP1)诱导的瘢痕成纤维细胞在体内环境下的软骨构建能力。方法取瘢痕切除术后丢弃的增生性瘢痕组织,提取瘢痕成纤维细胞。将瘢痕成纤维细胞与PGA/PLA支架复合,CDMP1软骨诱导液(CDMP1终浓度为100 ng/m L)进行诱导培养2周,设为诱导组(n=10);将常规培养液培养的瘢痕成纤维细胞-材料复合物植入裸鼠体内作为阴性对照,设为非诱导组(n=4);将软骨细胞-材料复合物植入裸鼠体内作为阳性对照,设为软骨组(n=4)。分别于4周和8周后取材,进行各组湿重、糖胺聚糖(GAG)含量测定,HE染色、Safranine-O染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果体内培养4周、8周后各组湿重、GAG含量测定显示,诱导组均高于非诱导组(P<0.05)。体内培养4周后,诱导组HE染色结果显示,瘢痕成纤维细胞诱导后出现软骨细胞陷窝结构;Safranine-O染色结果示,GAG均匀分布于基质;免疫组织化学染色示部分瘢痕成纤维细胞基质中COLⅡ阳性表达。8周时,诱导组的类软骨结果相对4周时更加成熟,更加符合软骨结构分布。结论在CDMP1诱导下,瘢痕成纤维细胞与PGA/PLA材料复合,在体内可以形成类软骨组织,具备一定的成软骨能力。     

软骨源性形态发生蛋白-1的研究进展

1994年,Storm等发现了生长分化因子-5（Growth/Dif-ferentiation Factor-5,GDF-5）;同年,Chang等克隆出一种名为软骨源性形态发生蛋白-1（Cartilage-derived morphogenetic protein-l,CDMP-1）的多肽,并证实两者是同一种蛋白因子。     

人骨形态发生蛋白对体外培养胎儿关节软骨块的影响

为了解人骨形态发生蛋白（ｈＢＭＰ）对软骨细胞的影响,作者观察了ｈＢＭＰ对体外培养关节软骨块中软骨细胞表达骱钙素（ＢＧＰ）。ｈＢＭＰ的影响及对软骨基质中钙沉积的影响。结果显示：ｈＢＭＰ可诱导软骨块中的关节软骨的细胞表达ＢＧＰ、ｈＢＭＰ并可促进软骨基质中的钝沉积。作者认为,ｈＢＭＰ有诱导软骨块中软骨细胞进一步分化为成骨细胞样细胞的作用,并推测这可能是软骨内化骨过程中,成骨细胞的另一来源的。     

先天性小耳畸形残耳软骨细胞的体外生物学行为的实验研究

目的 探讨先天性小耳畸形残耳软骨细胞体外生长的生物学特性.方法 取先天性小耳畸形患者外耳再造手术中废弃的残耳软骨组织,采用胶原酶消化法获得残耳软骨细胞;体外传代培养及生物学特性研究:细胞形态学观察,细胞生长曲线测定,Ⅱ型胶原免疫组化鉴定残耳软骨细胞.RT-PCR检测第1～5代残耳软骨细胞的Ⅱ型胶原及蛋白多糖的mRNA表达.结果 原代和第1～3代残耳软骨细胞生长旺盛,呈多角形,第3代以后细胞体积变大,呈长梭形转化,细胞增殖逐渐减弱;免疫组化检测第2代残耳软骨细胞Ⅱ型胶原表达呈阳性;RT-PCR显示mRNA水平第1～3代软骨细胞Ⅱ型胶原高表达,随传代次数增加表达逐渐减弱,第5代基本消失;第1～3代细胞蛋白多糖呈高表达,第4代以后随传代表达逐渐减弱.结论 体外成功分离培养出残耳软骨细胞,第1～3代细胞形态保持稳定,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖稳定呈高表达.     

传代对残耳软骨细胞体内软骨形成能力的影响

目的：研究传代对残耳软骨细胞体内软骨形成能力的影响。方法分离培养人残耳软骨细胞,将第3-8代细胞分别复合聚羟基乙酸/聚乳酸支架,构建组织工程化软骨;体外培养4周后植入裸鼠体内观察8周。采用组织学染色观察各组标本的软骨形成情况;Real-time PCR检测软骨分化相关基因的表达;生物力学分析新生软骨的弹性模量。结果各代复合物体外培养4周时均不能形成软骨组织,但第3-5代残耳软骨细胞COL 2A1、第3-4代的SOX 9和第3代的DLK 1仍可维持较高的表达水平（P〈0.05）;体内植入8周后,第3-6代复合物均有不同程度的弹性软骨结构形成,并随代次增高而减少,第3-6代复合物的弹性模量明显高于第7、8代。结论残耳软骨细胞传至第4代仍能保持良好的体内软骨形成能力,但扩增传代对残耳软骨细胞软骨表型去分化的影响在第7代后已无法逆转。     

小耳畸形残耳软骨的生物化学研究

目的　探讨正常耳软骨与先天性小耳畸形的残耳软骨生化成分的异同 ,进而推论小耳畸形的病因。方法　选取年龄在 10岁左右 ,Tanzer分类ⅡA型的 7例先天性小耳畸形患者的残耳软骨 (A组 )。同时取 7名同龄尸体的正常耳廓耳甲部分的软骨 (B组 )。各取 7份标本做生化检查 ,测定胶原、糖胺多糖 (glycoaminoglycan ,GAG)含量 ;硫酸软骨素 (chondroitinsulfate,Chs)、硫酸角质素 (keratansulfate ,KS)和透明质酸 (hyaluronan ,HA)各占GAG的百分含量。结果　A组与B组之间胶原含量差异无显著性意义 ;GAG含量差异有显著性意义A组 (49.0 0± 2 5 .6 0 ) μg/mg比B组 (2 8.2 5± 4 .80 ) μg/mg多。在GAG中的组成部分中 ,A组HA(38.96± 4 .97) %、Chs(2 9.0 2± 4 .12 ) %、KS(32 .16± 7.4l) %与B组HA(32 .94± 3.2 4 ) %、Chs(33.10± 2 .6 1) %、KS(33.96± 1.6 6 ) %之间HA和Chs含量差异有显著性意义 ,而KS含量差异无显著性意义。结论　残耳软骨与正常耳软骨中胶原含量无差异 ,但含GAG前者比后者多。在GAG中的各成分的百分含量中 ,残耳软骨含HA较高 ,Chs较低 ,KS与正常耳软骨无差异。     

Cathepsin K在人软骨细胞体外培养去分化过程中的表达研究

目的通过基因芯片技术研究在体外培养的去分化人软骨细胞的基因改变，从中筛选出目标基因，并对其在各代软骨细胞中的表达进行研究。方法取体外培养的P1代和去分化的P4代软骨细胞进行8300点基因芯片的DNA微阵矩杂交，筛选出差异最明显的基因，并通过RT-PCR和Western-blot方法检测各代软骨细胞中该基因的表达水平。结果体外培养的P1、P4代软骨细胞间共140个基因差异表达，其中Cathepsin K基因表达差异水平最明显，P4与P1的比值平均为29．72，RT-PCR显示在596bp的条带处，随传代次数增加逐渐增亮，半定量分析P4／P1为3．21，差异有统计学意义（P〈0．05）。Western-blot检测显示在相对分子质量为40000的蛋白条带随体外传代蛋白浓度增加，灰度分析P4／P1为3．39，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论基质降解半胱氨酸蛋白酶Cathepsin K在去分化软骨细胞中表达强烈，提示其与软骨细胞去分化过程中的基质降解有关。     

先天性小耳外中耳畸形断面影像解剖学分析

目的 通过对先天性小耳患者外、中耳的畸形断面影像解剖学特征的系统研究,比较其与正常解剖之间的差异,总结重要解剖结构的变异规律及相互关系,以利于临床分型及手术治疗.方法 选取2009年6月至12月中国医学科学院整形外科医院外耳整形中心住院诊断为小耳畸形的36例患者,采用自身对照研究.研究组50只耳,其中单侧畸形22例22只,双侧畸形14例28只;对照组为单侧畸形之健侧耳22例22只.行螺旋CT颞骨高分辨扫描,应用Mimics软件,生成冠状位、矢状位图像及三维重建图像,进行距离和角度的测量.结果 小耳畸形患者以Max分型,鼓室前后径Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别为(7.75±1.92)mm、(6.17±2.56)mm、(6.31±3.40)mm(F=5.777,P=0.001);鼓室上下径Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别为(14.66±4.75)mm、(14.35±5.12)mm、(9.97±4.36)mm(F=6.601,P=0.001);3型小耳畸形乳突气化程度分别为硬化型13.33%、13.64%、30.77%,板障型13.33%、18.18%、7.69%,混合型0、9.09%、38.46%,气化型73.33%、59.09%、23.08%(x2=24.11,P=0.002);面神经遮盖前庭窗的发生率分别为21.43%、47.62%、54.55%(x2=23.44,P=0.002).研究组与对照组间差异有统计学意义.结论 小耳畸形根据Max分型,具有随耳廓畸形程度增加,中耳畸形程度亦增加的趋势,其中Ⅱ型小耳的解剖结构变异复杂,可进行亚分型.

Abstract：

Objective To analyze the sectional anatomical features of auricular and middle ear malformation in patients with microtia so as to improve the clinical classification and the instruction of surgery. Methods From Jun. to Dec. 2009,36 cases with microtia were selected in the center of auricular reconstruction in Plastic Surgery Hospital, including 22 cases of unilateral microtia and 14 cases of bilateral microtia. 22 patients with unilateral microtia were studied with the contralateral healthy ears as controls. Spiral CT was performed for high-resolution scan of the temporal bone. The coronal, sagittal and 3D reconstruction images were created with Mimic software. Several distances and degrees were measured. Results The patients were classified by Max classification. The anteroposterior diameter and the vertical diameter of tympanic cavity were (7. 75 ± 1. 92) mm and ( 14. 66 ± 4. 75 ) mm for type Ⅰ ; (6.17±2.56) mm and(14. 35 ±5. 12) mm for type Ⅱ ; (6. 31 ±3. 40) mm and (9.97 ±4.36) mm for type Ⅲ ( P = 0.001). The mastoid pneumatization degree for type Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ were 13.33% , 13.64% ,30.77% in sclerotic type, 13. 33% , 18. 18 % , 7. 69% in diploetic type, 0, 9. 09% , 38. 46% in composite type,73. 33% ,59. 09% ,23. 08% in pneumatic type(x2 = 24. 11 ,P = 0. 002 ). The cover of fenestra vestibuli by facial nerve was 21. 43% ,47.62%, 54.55% (x2 =23.44, P = 0. 002 ) for type Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ. There was a statistical difference between the microtia group and the control group. Conclusions According to the Max classification, the middle ear malformation changed along the auricular malformation. The anatomical variations was complicated in type Ⅱ microtia, which should be sub-classified.     

Variable hand and foot abnormalities in family with congenital vertical talus and CDMP-1 gene mutation

Isolated foot anomalies, including congenital vertical talus, were shown recently to occur in heterozygous carriers of CDMP-1 (cartilage-derived morphogenetic protein-1) gene mutations. Six families with isolated congenital vertical talus with apparent autosomal dominant inheritance were ascertained. DNA was isolated from 17 affected individuals and 24 unaffected individuals from these families and subjected to mutational analysis of the CDMP-1 gene. A missense mutation was identified (1312C>T) that results in an R438C substitution in the CDMP-1 active domain. This segregated with disease in one Northeren American family. Phenotypic variability in this family includes brachydactyly type C, clinodactyly, calcaneo valgus deformity, and congenital vertical talus. Metacarpophalangeal profiles (MCPPs) confirm incomplete penetrance in one family member. Hence, CDMP-1 mutations may be found in individuals with apparently isolated CVT, although careful examination of family members may reveal additional, subtle hand and foot abnormalities. However, mutations in CDMP-1 do not appear to be a frequent cause of isolated congenital vertical talus.     

先天性小耳畸形EYA1基因启动子区域甲基化初步研究

目的 探讨先天性小耳畸形EYA1基因启动子区域CpG岛甲基化状态.方法 应用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析技术,检测了64例先天性小耳畸形患者和36例健康对照的EYA1基因启动子区域CpG岛甲基化情况.结果 先天性小耳畸形患者EYA1基因的CpG_Unit3和CpG_Unit5甲基化程度分别为0.092 58±0.033 846和0.092 2±0.023 79,与健康对照相比明显降低,其差异具有统计学意义(P=0.001和0.019).结论 先天性小耳畸形存在EYA1基因低甲基化情况,可能与该病的发生发展相关.     

米非司酮对子宫腺肌病灶组织细胞作用的实验研究

目的　观察米非司酮对子宫腺肌病灶组织细胞的作用。　方法　采用噻唑兰法观察米非司酮对 11例子宫腺肌病患者腺肌病灶组织原代培养细胞体外生长状态的影响 ,实验分为 1.2 5、2 .5、5 0mg/L 3个药物浓度组 ,培养 5 2h ,测定OD值 ,并与空白对照组对比。　结果　 1.2 5、2 .5、5 0mg/L组及对照组的OD值分别为 (0 .2 19± 0 .0 4 4 )、(0 .185± 0 .0 38)、(0 .15 2± 0 .0 33)、(0 .2 6 2± 0 .0 6 8) ,5 0与 1.2 5mg/L组有显著差异 (P <0 .0 1) ,5 0、2 .5mg/L组与对照组有显著差异 (P <0 .0 1)。细胞生长抑制率 2 .5mg/L组 (IR =2 9.4 %)是 1.2 5mg/L组 (IR =16 .4 %)的 1.79倍 ,5 0mg/L组 (IR =4 2 .0 %)是 2 .5mg/L组的 1.4 3倍。　 结论　米非司酮能够抑制子宫腺肌病腺肌组织细胞的生长 ,其抑制能力与药物浓度呈正相关。     

退行性变黄韧带细胞的体外培养及初步鉴定

目的：探讨黄韧带退变的发生机理。方法：采用组织块培养法，体外培养正常黄韧带和退变性黄韧带细胞．并进行细胞化学、免疫细胞化学等方面研究。结果：黄韧带细胞可以在体外增殖和传代，退变性黄韧带细胞呈现出某些成骨细胞表型特征，而正常黄韧带细胞主要为成纤维细胞表型。结论：退变黄韧带中存在大量具备某些成骨细胞表型特征的细胞，其中包括软骨细胞，它们可能被骨形成蛋白等骨生长因子所调控。     

胰岛素样生长因子对体外培养豚鼠肋软骨细胞的影响

目的：了解胰岛素样生长因子(insulin-1ike growthfactor-1，IGF-1)对体外培养豚鼠肋软骨细胞分裂增殖及功能代谢的影响。方法：体外单层培养豚鼠肋软骨细胞，对照组培养液为无血流清DMEM，实验组在培养液DMEM中加入IGF-1使其终浓度分别为10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml，作用6天后，检测细胞DNA含量和培养液中糖醛酸的含量。结果：IGF-1在10～100ng／ml浓度范围能明显增加培养软骨细胞的DNA及糖醛酸的含量，且以50ng／ml作用效果最明显，与对照组相比，有统计擘意义(P＜0．01)。结论：IGF-1对体外培养肋软骨细胞有刺激，并以剂量依赖性方式影响细胞的增殖及功能代谢。     

体外培养成骨细胞的研究进展

随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞,研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性,在不同环境下可以形成骨组织,联合支架的应用,构建组织工程骨,将其植入体内修复骨缺损.现就成骨细胞的来源、分化调控因子、复合移植及中医药方面的研究进展作一综述.     

An analysis of quantitative measurements of drainage exudate using negative suction in 96 microtia ear reconstructions

Negative suction drainage is commonly used for the prevention of seromas or hematomas in auricular reconstruction surgery; however, there are few reports regarding the quantitative measurement of negative suction and its relation to disposed time, patient age or microtia type. In the present study, the authors recorded the volume of suction exudate in microtia reconstruction and elaborate on the relevant details of controlling negative suction. A negative suction drainage system was applied in 96 microtia patients between 2007 and 2010. Two small polyethylene drains were inserted adjacent to the concha and the scapha, respectively. The volume of exudate was recorded for three days after surgery and was analyzed according to disposed time, patient age and microtia type. The drains were removed on the third postoperative day, when only a small amount of exudate remained. A significant change in drainage was observed over three days postoperatively, and the quantity decreased progressively on the third postoperative day. Comparison of age groups showed that the volume of drainage from adults was greater than that from children or adolescents in the first two postoperative days, regardless of whether the drains were inserted in the scapha or concha. No statistical differences were found on the third postoperative day. A comparison of drain types revealed no statistically significant differences between scapha and concha drains three days postoperatively. The analysis demonstrated that drainage quantity is related to disposed time and patient age, but not to microtia type. The authors recommend removal of suction drains on the third postoperative day. Moreover, individualized negative suction treatment according to age or microtia type provides a safe and consistent approach to achieving acceptable results and fewer complications.