体外药敏试验及化疗耐药和敏感分子特征指导的恶性脑胶质瘤临床个体化化疗研究

目的 探讨恶性脑胶质瘤临床个体化化疗的策略.方法 恶性脑胶质瘤新鲜肿瘤组织用MTT法进行化疗药物体外药敏试验;用免疫组织化学方法 检测肿瘤组织O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)蛋白表达,据MGMT测定结果选择化疗方案;经手术后病理确诊的MGMT表达阳性的恶性脑胶质瘤患者,接受3组化疗方案化疗:含亚硝脲类药物化疗组,含替莫唑胺化疗组,不含亚硝脲和替莫唑胺化疗组.评价3组化疗方案的近期疗效和不良反应;用FISH方法 检测间变性少突胶质细胞瘤组织1p/19q LOH,据检测结果选择化、放疗模式.结果体外药敏试验阴性符合率较高,为14/15.据MGMT表达情况选择化疗方案的客观有效率为34%,疾病控制率为72%.MGMT阳性表达的恶性脑胶质瘤,含亚硝脲类化疗组、含替莫唑胺化疗组、不含亚硝脲和替莫唑胺化疗组的客观有效率及疾病控制率分别为:0和2/11、3/18和11/18、7/22和17/22.不含亚硝脲和TMZ化疗组的客观有效率和疾病控制率均较含亚硝脲化疗组高,有统计学差异(P<0.05).结论 据体外药敏试验及MGMT测定选择化疗方案,可提高近期疗效;MGMT阳性表达的恶性胶质瘤病人,不含亚硝脲和替莫唑胺化疗方案有较好疗效;但含替莫唑胺化疗方案也可应用.     

褪黑激素抗胶质瘤作用体外试验研究

报告了褪黑激素（ＭＬＴ）抗胶质瘤作用的体外试验。采用生长曲线、集落形成率、蛋白含量测定、核仁组织区定量研究及抗增殖细胞核抗原ｋｉ－６７单抗免疫组化分析，表明ＭＬＴ对ＴＪ８６１人脑恶性星形细胞瘤体外细胞系的细胞增殖有明显抑制作用。应用流式细胞术分析细胞周期时相发现ＭＬＴ使细胞阻滞于Ｇ２／Ｍ期。此外，ＭＬＴ尚可明显减少肿瘤细胞的多胺合成。因此，ＭＬＴ的抗胶质瘤增殖作用值得进一步研究。     

脑胶质瘤化疗敏感性的体外实验研究

目的 探讨体外培养的脑胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测26例原代培养胶质瘤细胞在体外对顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)化疗药物的敏感性.结果 19例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为DDP>CFX>5-FU>VCR.患者年龄与药物敏感性均无明显相关性;除DDP外,病理分级与其他药物敏感性无明显相关性.结论 比色法是一种快速、有效检测体外药物敏感性的方法.体外药敏试验对排除无效药物、筛选敏感药物进行个体化的化疗,提高临床化疗效果,具有重要意义.     

脑胶质瘤体外化疗药物敏感性试验与耐药基因蛋白表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤耐药相关基因蛋白的表达情况,分析其与化疗药物体外敏感性之间的相关性。方法采用组织培养药敏检测法测定50例脑胶质瘤标本对五种不同类型化疗药物：顺铂（cisplatin,DDP）、长春新碱（vincristine,VCR）、替尼泊甙（teniposide,VM26）、尼莫司汀（nimustine,ACNU）和替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的体外敏感性（通过计算体外抑制率）;同时在组织芯片平台上,运用免疫组织化学法检测耐药相关蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）、P-170、TopoⅡ、谷胱苷肽-S-转移酶霄（GST-百）的表达,并用免疫组织化学法和原位杂交法检测P53蛋白及p53基因的表达。结果（1）ACNU体外抑制率与GST-盯表达水平之间呈显著性负相关r=-0．318,P〈0．05）。②耐药相关蛋白GST-π与P-170、TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r分别为0.317和～0．298,P〈0．05）。③突变型P53蛋白与野生型p53mRNA之间呈显著性负相关（r=-0．806,P〈0．001）。④突变型P53蛋白与TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r=0．401,P〈0．01）。结论肿瘤体外药敏试验结合耐药相关基因蛋白的检测。对于胶质瘤个体化化疗方案的制定及临床化疗疗效的预测等具有重要意义。     

脑胶质瘤的化疗敏感性研究

目的应用MTT比色法比较六种抗肿瘤药物对脑胶质瘤细胞的抑制作用，为临床化疗筛选药物、制定化疗方案提供指导。方法应用MTT比色法对62例脑胶质瘤新鲜标本进行化疗药物敏感性研究。结果六种药物敏感率经卡方检验有明显差别，由高至低依次为：Vm-26、Fotemustine、BCNU、CBP、DDP、Vp-16。病人性别对药物敏感率无影响，年龄、术前机能状态KPS评分对大多数药物敏感率无影响，肿瘤病理分级只对部分药物敏感率有影响。结论MTT比色法是一种快速、准确检测体外药物敏感性的方法。Vm-26抑制肿瘤细胞增殖作用较强，优于Fotemustine、BCNU、CBP、DDP、Vp-16。     

体外药敏试验指导下脑胶质细胞瘤化疗的临床研究

目的以体外敏感性试验结果指导化疗病人与常规化疗病人进行对照研究,评价肿瘤细胞体外敏感与体内化疗作用的相关性。方法选择62例行肿瘤全切除术或次全切除术的脑胶质细胞瘤患者作为试验组,对其手术切除的肿瘤标本先进行体外细胞培养,然后应用MTT比色法进行药敏试验,根据药敏试验结果制订化疗方案；选择同期年龄、性别、生存机能状态和手术肿瘤切除程度与试验组相匹配的常规化疗患者为对照组,随访两组的生存机能状态、复发情况和死亡情况。采用SPSS10．0软件进行数据处理。结果试验组评价时的KPS评分为64．52±35．84,对照组则为33．60±36．24,两者存在统计学差异(t=4．516,P=0．000)；术后随访2～4年,试验组的复发率为32．3%,对照组则为60．0%,两者存在统计学差异(X~2=8．620,P=0．003)；试验组的病死率为22．6%,对照组则为48．0%,两者存在统计学差异(X~2=7．978,P=0．005)；试验组的生存率高于对照组,两者存在统计学差异(X~2=7．29,P=0．0069)。结论应用药敏试验指导化疗有助于改善患者的生存机能状态,降低复发率和病死率,提高生存率：药物对肿瘤细胞作用在体外敏感与体内有效间存在密切相关性。     

利用RNA干扰技术抑制Cyr61表达对人脑胶质瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术抑制Cyr61基因表达增强人脑胶质瘤U251细胞对化疗药物敏感性及凋亡能力的研究.方法 针对Cyr61 Mrna序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建Prnat-Cyr61重组表达载体,转染人脑胶质瘤U251细胞:通过RT-PCR和Western blot分析其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察U251细胞对化疗药物顺铂和替莫唑胺敏感性的改变;用流式细胞仪检测U251细胞体外凋亡的变化.结果 成功构建Prnat-Cyr61重组质粒,并成功转染U251细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在Mrna及蛋白水平分别显著抑制Cyr61基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在和顺铂或替莫唑胺联合作用下,Prnat-Cyr61组U251细胞的生长抑制率和凋亡率都明显增高(P<0.01).结论 Prnat-Cyr61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并增强U251细胞对化疗药物敏感性及其体外凋亡率.     

VM26联合MeCCNU在人脑低级别胶质瘤治疗中应用的初步探讨

目的 探讨人脑胶质瘤手术切除和放疗后O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)阳性的低级别胶质瘤患者应用替尼泊甙(VM26)+甲基环亚硝脲(MeCCNU)联合治疗疗效.方法 总结分析我科2005.01-2008.10年收治的资料较完整、全切肿瘤22例,MRI增强扫描未见肿瘤征像,术后病理证实免疫组化MGMT阳性的弥漫...     

不同病理级别脑胶质瘤的肿瘤干细胞体外分离培养和增殖分化

目的探讨不同病理级别的人脑胶质瘤的肿瘤干细胞在体外分离培养和增殖分化的情况。方法通过对不同病理级别手术切除的胶质瘤新鲜标本在体外无血清培养基中分离培养和体外增殖分化进行观察研究和分组比较它们的增殖能力。结果在无血清培养基中,Ⅰ级胶质瘤的肿瘤干细胞不能形成克隆球;Ⅱ级胶质瘤的肿瘤干细胞可形成中等克隆球;只有Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞才能形成大型克隆球。在血清培养基中,Ⅰ级胶质瘤干细胞增殖缓慢、分化较晚;Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞增殖迅速、快速进入分化期;Ⅱ级胶质瘤肿瘤干细胞增殖分化介于两者之间。分组比较,发现在不同培养基中和不同病理级别胶质瘤干细胞各组之间在增殖和分化能力上均存在统计学差异(P<0.01)。结论胶质瘤的肿瘤干细胞在生物特性上存在多样性。Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤的肿瘤干细胞易于分离培养,增殖分化能力较强;Ⅰ级胶质瘤的肿瘤干细胞增殖分化缓慢,有助于动态观察脑肿瘤干细胞自我更新和增殖分化的过程,是一个较好的观察研究对象。     

人原代胶质瘤细胞自杀基因治疗体外研究

目的：应用原代培养的胶质瘤细胞作不研究对象,观察ＡＣＶ对转染了ＨＳＶ－ｔｋ基因的肿瘤细胞的杀伤作用。方法：表达单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ｔｋ）重组逆转录病毒载体ＳＴＫ,经包装细胞ＰＡ３１７包装成重组逆转录病毒,ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度,用此病毒感染原代培养的人胶质瘤细胞,以Ｇ４１８选择后获得ＴＫ＋肿瘤细胞。ＭＴＴ法及活细胞动态观察ＡＣＶ对转基因细胞的毒性作用。结果：ＡＣＶ对ｔｋ＋胶质瘤细胞     

原肌球蛋白1与胶质瘤放射敏感性的体外研究

目的 研究原肌球蛋白1(tropomyosin 1,TPM1)与胶质瘤U251细胞放射抵抗性之间的关系,为进一步寻找提高胶质瘤的放射敏感性的可能靶点提供理论依据。方法 转染shRNA-TPM1(pc DNA3. 1-TPM1)抑制(诱导) U251和RR-U251细胞的TPM1表达。各组细胞进行放射治疗后,采用MTT法、划痕实验、侵袭实验、流式细胞术分别检测U251(RR-U251)细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡能力。用Western Blot检测TPM1蛋白表达水平,进而观察各组细胞放射敏感性的变化。结果 与U251细胞相比,RR-U251细胞的TPM1蛋白表达水平明显下降(P 0. 01)。各组细胞进行放射治疗后,与对照组相比,沉默TPM1的RR-U251和U251细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著提高,细胞凋亡率降低(均P 0. 05)。TPM1基因过表达时逆转了这一现象。结论 TPM1可提高胶质瘤U251细胞的放射敏感性。TPM1与胶质瘤细胞的放射抵抗机制有关,其可能是改善胶质瘤放射敏感性的潜在靶点。     

神经胶质瘤药物靶向性化疗的研究进展

在神经胶质瘤治疗中,药物化疗特别是药物靶向性化疗是胶质瘤治疗中最重要的环节之一,然而临床应用结果表明,胶质瘤化疗效果并不理想。本文对传统胶质瘤药物化疗存在的缺陷进行了分析,从化疗药物载体系统,胶质瘤化疗药物的一些重要靶点和胶质瘤干细胞标志物几个方面进行论述,介绍近年来胶质瘤靶向性化疗方面取得的一些进展和仍然存在的问题,旨在为胶质瘤化疗相关研究提供有价值的信息。     

脑胶质瘤化疗敏感性实验研究

目的探讨脑胶质瘤细胞体外对化疗药物的敏感性，为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测50例原代培养胶质瘤细胞在体外对替尼泊甙（VM-26）、卡氮芥（BCNU）、顺铂（CDDP）、长春新碱（VCR）、甲氨蝶呤（MTX）5种化疗药物单一或联合化疗的敏感性。结果42例获得药敏结果，成功率达84％。42例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为VM-26〉BCNU〉CDDP〉VCR〉MTX。两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）对胶质瘤细胞的敏感性明显优于单一用药（P〈0．01），且对绝大多数胶质瘤细胞增殖抑制率较高。结论两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）可能对胶质瘤的化疗效果更好。     

多胺类似物DENSPM对人胶质瘤LN229细胞增殖的抑制作用

目的 探讨多胺类似物二乙基去甲精胺(DENSPM)对人的胶质母细胞瘤LN229细胞的抑制作用.方法 用DENSPM处理LN229细胞后,采用单溶液细胞增殖检测(MTS)法、细胞流式术、高效液相色谱法、定量逆转录酶-聚合酶链反应(qRT-PCR),分别检测其细胞增殖率、细胞周期变化和细胞内过氧化氢水平、细胞内多胺表达水平、亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、多胺氧化酶(PAO)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)mRNA表达变化.结果 LN229细胞经DENSPM处理后,其存活率随着药物浓度的增加而逐渐降低(F=124.051,P＜0.001),并于体外培养72 h后在细胞增殖周期中出现典型的亚凋亡峰;细胞内过氧化氢水平于72 h后显著升高(F=57.27,P＜0.001);细胞内腐胺、亚精胺和精胺水平显著下降(P≤0.001),而乙酰亚精胺和乙酰精胺水平显著上升(P ＜0.001);亚精胺/精胺-N1-乙酰基转移酶、多胺氧化酶和鸟氨酸脱羧酶水平上升(P＜0.001).结论 DENSPM可能通过降低肿瘤细胞内多胺表达水平,来抑制LN229细胞的生长并诱导其发生凋亡.     

脑胶质瘤药物化疗新进展

不同级别脑胶质瘤的生物学行为存在显著差异,而不同的治疗方法患者预后也明显不同。脑胶质瘤的常规治疗方法包括手术切除、放射治疗以及药物化疗,其中化疗在恶性胶质瘤治疗中的地位已     

新型小分子靶向药物F90对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44生长抑制作用

目的探讨新型小分子靶向药物F90在体外对人恶性胶质瘤细胞系SHG-44的生长抑制作用。方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]方法,集落生成试验探讨F90对SHG-44细胞的生长抑制作用,采用蛋白免疫印迹(Immunoblotting,West-ernblot)方法检测F90对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)信号传导通路及凋亡相关蛋白的影响。结果 F90抑制SHG-44细胞的生长,并且呈一定的剂量相关性。MTT试验及集落生成试验的半数有效抑制浓度(50% inhibitory concentration,IC50)分别为(5.08±1.21)μmol/L和(0.14±0.03)μmol/L。F90抑制EGFR及其下游通路信号蛋白的磷酸化,上调P53蛋白的表达,并下调BCL-2蛋白的表达。结论 F90可能通过干扰EG-FR通路,体外抑制胶质瘤细胞株SHG-44的生长。     

人恶性胶质瘤细胞株U251三种克隆的分化特性和胶质瘤干细胞的初步鉴定

目的 观测U251细胞的克隆在形态和分化上的差异,鉴定含胶质瘤于细胞的克隆.方法 克隆形成实验观察U251细胞克隆的形态并分类,免疫细胞化学染色观测不同克隆GFAP和nestin的表达差异.分离低分化克隆,检测其自我更新能力、多向分化潜能及CD133表达情况.结果 U251细胞可形成紧密型、中间型和松散型三种克隆类型.紧密型克隆分化程度最低,此克隆在无血清培养基内形成神经干细胞样细胞球,具有自我更新能力、多向分化潜能,并表达CD133.结论 U251细胞的克隆在形态和分化程度上存在差异,紧密型克隆可能富含胶质瘤干细胞.     

脑胶质瘤组织培养化疗药物敏感性的研究

目的建立脑胶质瘤的组织培养药敏检测法，用于筛选化疗药物及指导临床个体化化疗。方法应用组织培养药敏检测法对69例人脑胶质瘤标本进行化疗药物敏感性测定，所测药物为脑肿瘤常用化疗药物顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、替尼泊甙（VM26）、尼莫司汀（ACNU）、替莫唑胺（TMZ）及DDP＋VM26组合。比较6组化疗药物体外抗肿瘤作用的差异，并分析药物敏感性与病人临床资料之间的相关性。结果DDP＋VM26组合用药的敏感性与VM26单独用药比较，差异无统计学意义．但明显优于其他4种单药。病人性别、年龄、肿瘤初发或复发均对药物敏感性无显著性影响；除组合用药DDP＋VM26外，其他药物的敏感性与病理分级无显著相关性。结论胶质瘤标本不同个体对同一药物及同一个体对不同药物的敏感性差异很大，脑胶质瘤化疗应优先选择以VM26为主的联合用药。     

反义寡核苷酸逆转大鼠胶质瘤细胞多药耐药性的实验研究

目的探讨针对多药耐药基因(MDR-1)上特异位点的反义寡核苷酸对体外培养的大鼠胶质瘤细胞多药耐药性的逆转作用。方法根据MDR-1基因的碱基序列设计合成硫代修饰的寡核苷酸,通过阳离子脂质体介导转染胶质瘤耐药细胞,应用流式细胞仪、RT-PCR等方法,对转染后的耐药细胞进行P-170、MDR-1mRNA水平的检测;用MTT法对转染后的细胞进行化疗药物敏感性试验,评价寡核苷酸对多药耐药性的逆转效果。结果流式细胞结果显示转染后胶质瘤耐药细胞P-170表达明显低于转染前(P<0.05);RT-PCR可见转染后细胞的MDR-1mRNA水平减低;药物敏感性试验显示反义寡核苷酸转染后胶质瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性增强(P<0.05),含有脂质体的转染体系组对化疗药物的敏感性显著高于不含脂质体的转染体系组(P<0.01)。结论特异序列的反义寡核苷酸能够明显抑制大鼠胶质瘤细胞的P-170表达和减低MDR-1mRNA水平,进而对胶质瘤细胞的多药耐药性产生明显的逆转作用;应用阳离子脂质体作为转染载体可显著提高转染效率。