广西壮族自治区肝癌高发区HBV基因型、BCP/前C区突变与肝癌相关性的研究

目的 研究广西壮族自治区(广西)扶绥县肝癌高发区HBV基因型、基本核心启动子(BCP)/前C区突变与肝癌的关系。方法 采用病例对照方法收集53例肝癌患者和70例HBV健康携带者的血清,提取HBV DNA,用巢式PCR扩增 HBV S区、BCP/前C区,扩增产物纯化后测序,分析基因型、基因突变与肝癌发生的关系。结果 BCP区A1762T/G1764A及前C区T1858C在病例组中的突变率高于对照组,分别为94.3% vs. 75.7%(P=0.006)和50.9% vs. 31.4%(P=0.029);A1775G在对照组中的突变率高于病例组28.6% vs.13.2%(P=0.041)。多因素logistic回归分析显示,HBV A1762T/G1764A和T1858C突变是肝癌发生的危险因素,OR值分别为5.459(95%CI:1.397~21.332,P=0.015)和3.881(95%CI:1.462~10.305,P=0.006);A1775G突变是肝癌发生的保护因素,OR=0.192(95%CI:0.059~0.622,P=0.006)。结论 HBV C基因型是广西肝癌高发区的主要流行株,HBV BCP区A1762T/G1764A、A1775G、前C区T1858C 突变与HBV相关肝癌的发生有密切关系。     

乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变对血清HBV DNA含量的影响

目的利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区基因突变,探讨前C区/BCP区基因突变后血清HBV DNA水平的变化。方法应用基因芯片技术检测95例慢性乙肝的HBV前C区1896、1814及HBV C基因启动子(BCP)1762、1764四位点突变,同时用荧光定量PCR检测血清HBV DNA含量。结果95份血清标本中,有91份分别检测到了HBV前C区/BCP区基因突变,阳性率95.8%,其中G1896A突变33例(36.3%),A1762T G1764A联合突变64例(70.3%),G1896A A1762T G1764A联合突变22例(24.2%),未检测到A1814C突变毒株。G1896A A1762T G1764A联合突变后,血清HBV DNA水平较未变异组降低(P<0.05),其它各组则无显著变化。结论应用基因芯片法可同时检测HBV多个突变位点。乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变对血清HBV DNA含量有一定的影响。     

耐拉米夫定乙型肝炎病毒聚合酶P区变异与基因分型

目的：分析拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者HBV P区变异和基因分型的关系,为制定针对不同HBV基因型抗病毒的个体化方案提供依据。方法应用聚合酶链反应（ PCR）和酶联免疫吸附试验（ ELISA）对187例拉米夫定耐药患者的HBV DNA载量及HBV-M进行检测,用特异的引物对待检标本HBV P区进行全序列测定,对不同性别、年龄的测序结果的基因分型作比较;并对C、B基因型发生实变模式作分析。结果187例慢性乙型肝炎患者感染的HBV均为B和C基因型,B基因型51例（27.27%）,C基因型134例（71.66%）,并存在混合感染2例（1.07%）;HBeAg含量在B基因型和C基因型间差异有统计学意义（ P〈0.05）;P区基因突变结果显示,B基因型以单纯YMDD突变为主,C基因型以YMDD突变＋ rtL180M 突变为主。结论本研究对象的HBV基因型主要是C型,不同基因型可能决定了与耐药相关的P区变异模式。     

拉米夫定耐药慢性乙型肝炎患者HBV多聚酶区基因突变分析

目的 探讨拉米夫定(LAM)耐药慢性乙型肝炎(CHB)患者多聚酶区序列突变特点.方法 收集63例接受拉米夫定治疗且耐药的CHB患者的临床资料,采用PCR产物直接测序法检测HBVP基因多聚酶区序列耐药变异.结果 63例诊断为耐药的患者中,51例患者检测到LAM相关的HBV多聚酶区基因突变,其中rtM204V/I变异46例(73.0%),rtL180M变异25例(39.7%),rtV173L/M变异5例(7.9%),rtQ214E变异1例(1.6%),rtS213T变异2例(2.%)12,rtV207L/M/I变异2例(3.2%),rtA181T变异3例(4.8%),rtT184I/S/M变异1例(1.6%).结论 对拉米夫定治疗患者的耐药检测除HBV多聚酶区常见的rtLl80M和rtM204V/I位点变异外,还应考虑其他位点的耐药变异.     

应用突变特异PCR检测HBV前C区nt1896位点突变

目的建立检则HBV前C区突变的突变特异聚合酶链反应(msPCR)方法,探讨前C区突变与肝病临床分型、e系统状态及病毒复制的关系。方法根据HBV前C区nt1896G→A突变设计并合成引物,建立msPCR检测方法,通过测序和扩增产物电泳证实msPCR的特异性。结果229例急性肝炎、慢性肝炎轻度、中度、重度及肝硬化患者nt1896突变株感染率分别为25.0%、5.3%、5.2%、27.8%和20.0%;野生株和突变株混合感染率分别是62.5%、32.9%、50.6%、38.9%和38.0%。221例慢性HBV感染者中,野生株、突变株和混合感染者血清HBeAg阳性率分别为71.3%、34.8%和51.1%;HBVDNA含量分别为7.1×108±3.3×106、7.2×107±1.3×106和2.1×109±2.4×106copies/ml;ALT异常率分别为46.3%、73.9%和54.4%,突变组显著高于野生组(P<0.05)。干扰素治疗后,混合感染者血清HBVDNA的阴转率显著高于野生株(P<0.05)。结论msPCR检测nt1896突变灵敏特异,nt1896突变与肝病严重性有密切关系。     

TaqMan MGB探针检测HBV DNA C区双突变方法的建立

目的建立简便、灵敏的HBV DNA C区序列中核心启动子（BCP）双突变的检测方法。方法采用Taq-Man MGB探针技术进行双突变的检测,首先根据双突变的序列设计FAM荧光标记的TaqMan MGB探针和配套的引物,对标准阳性对照和标准阴性对照进行扩增检测,确定灵敏度和特异性,然后对临床HBV DNA阳性血清进行扩增检测,并通过PCR产物直接测序验证所建立方法检测结果的准确性。结果该方法检测出HBVDNA BCP双突变序列的灵敏度为3&#215;10^0拷贝/ml的模板,并且可以稳定地从1&#215;10^3拷贝/ml标准阴性对照中检测出1&#215;10^1拷贝/ml的标准阳性对照。结论该技术适用于临床检测血清中HBV DNA C区BCP双突变。     

HBV基因型研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒科。其基因组结构十分精密，仅约3200bp(3182～3221bp)，是已知真核细胞中最小的DNA病毒。HBV的复制特点是：以mRNA为中间体的逆转录复制，由于这一过程缺乏校对酶的作用容易发生碱基配对错误，因而HBV基因突变十分频繁。随着     

连云港市473例慢性乙肝患者乙型肝炎病毒基因型及耐药基因研究

目的 探讨连云港市慢性乙肝（CHB）患者乙型肝炎病毒（HBV）基因型及耐药基因特点。方法 选择2019年5月至2021年7月连云港市某医院诊断为CHB的患者作为研究对象,采用PCR和反向杂交技术进行HBV的基因序列分型,同时检测HBV的耐药突变位点,并分析不同基因型的耐药突变发生率。结果 共纳入473例HBV患者进行研究,HBV基因型构成比前3位为B型、C型及D型,分别占35.52%、30.02%、14.16%。不同性别HBV基因型比较差异无统计学意义（P>0.05）。检出耐药基因突变100例,突变率为21.14%;共检测出14种耐药突变基因,其中rt180M+rt204V的突变率最高,其次为rt204I、rt204V。100例耐药基因突变中由高到低分别为C型、B型、D型,突变率分别为30.3%、19.0%、11.9%,不同性别间差异有统计学意义（P<0.01）。结论 连云港市HBV基因型以B型及C型为主,其中C型基因的突变率最高,rt180M+rt204V、rt204I、rt204V是本地区常见耐药突变位点,C型基因更容易发生rt204I、rt180M突变。     

HBV耐药基因的实验研究

目的:利用多色荧光PCR技术,建立快速检测HBV耐药基因的方法,并与基因测序法进行对照研究。方法:建立2个反应体系,每个反应体系包含四个耐药位点。对新建的多色荧光PCR法进行灵敏度和特异性分析,并对42例临床收集的服药患者血清进行耐药检测。结果:构建了多色荧光PCR检测HBV耐药位点的体系,其特异性较好,分析灵敏度可达1×103copies/ml。42例样本中检测到YVDD 3例(占7.14%),YIDD 1例(占2.38%);1896变异7例,占总数的16.67%。其他位点未检测到耐药突变。结论:所构建的多色荧光PCR检测体系为临床医院提供快速、简便的HBV耐药位点突变检测手段,较基因测序法方便、快捷。     

HBV基因型与耐药变异的关系

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因型与核苷（酸）类似物耐药变异的关系。方法湖南省衡阳地区122例慢性乙型肝炎患者接受拉米夫定治疗（100mg／d）48-96周,发生耐药变异者改用阿德福韦酯治疗（10mg／d）96周。采用直接测序法进行HBV基因分型,同时检测拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦耐药变异位点。结果122例慢性乙型肝炎患者中,B基因型86例（70．49%）,C基因型24例（19．67％）,未分型12例（9．84％）。42例检出拉米夫定变异株,其中B基因型32例,C基因型10例,B、C基因型拉米夫定耐药变异率分别为37．21％（32／86）和41．67％（10／24）,差异无显著性（x^2=0．16,P=0．69）;42例经阿德福韦酯治疗48周和96周的变异发生率分别为0．00％（0／42）和2．38％（1／42）,B、C基因型阿德福韦酯耐药变异率分别为3．13％（1／32）和0．00％（0／10）。拉米夫定耐药变异类型主要为rtM204V＋rtL180M（35．71％）和rtM204I（38．10％）;B、C基因型比较,拉米夫定耐药变异类型差异无显著性（x^2=17．44,P=0．23）。结论湖南省衡阳地区HBV基因型以B型为主,C型次之;HBV基因型对拉米夫定耐药变异发生率及变异类型无明显影响。     

新疆维吾尔族慢性乙型肝炎患者HBV基因型及亚型分析

目的探讨新疆维吾尔族(维族)慢性乙型肝炎患者中乙型肝炎病毒(HBV)基因型及基因亚型。方法用本实验室建立的HBV基因型及基因亚型特异性引物巢式聚合酶链反应(nPCR)法,对54份新疆维族慢性乙型肝炎患者血清样本进行HBV基因型及亚型分析。随机选取11株经nPCR法鉴定为D基因型的样本,同时进行PreS/S区及PreC/C区测序以鉴定D基因亚型。随机选取2株D型HBV进行基因组全长扩增并克隆测序。从GenBank下载75株各国HBVD1亚型参考序列,根据Kimuratwo-parameter法计算中国新疆地区与其他国家的HBVD1亚型株进化距离。结果新疆维族人群HBV感染以D基因型为主,占66.67%,同时存在B(5.56%)、C(5.56%)基因型及混合感染(22.22%)。新疆存在D1和D3两种亚型,以D1亚型为主。新疆D1亚型与中亚哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦、蒙古等国及中东地区土耳其、伊朗、埃及等国的进化距离较近。结论新疆维族慢性乙肝患者中D基因型为优势株,主要为D1亚型,其进化距离与中亚中东等国较为接近。     

贵州省四城市乙型肝炎病毒感染者病毒基因型调查研究

目的 调查贵州省4城市乙型肝炎病毒（HBV）感染者的病毒基因型及其与临床的关系。方法 选择贵阳、遵义、凯里、都匀4城市慢性HBV感染患者共786例，其中无症状携带者（ASC）346例，慢性肝炎（CH）313例，肝硬化（LC）77例，肝细胞肝癌（HCC）50例。用S基因限制性片段长度多态性确定基因型，直接测序分析B基因亚型，比较主要基因型地区分布及临床特征。结果 786例中，B基因型497例（63．23％），C型275例（34．99％），A型7例（0．89％），D型7例（0．89％），未发现E、F型。B型的分布：凯里市最高（96．04％），遵义、都匀市其次（78．79％、64．52％），贵阳市最低（53．14％）。C型的分布，贵阳（45．84％）高于都匀（34．41％）、遵义（13．13％）及凯里市（3．96％），差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。94例B型感染者中，93例为Ba（98．94％）、1例为目亚型。从ASC、CH、LC到HCC组，B型的分布逐渐降低，而C型在各组的分布逐渐增高。与B型相比，C型感染者年龄较大；ALT水平较高（P〈0．05）；HBeAg阳性较低（P〈0．025）。结论 贵州省存在A、B、C、D4种HBV基因型，但以B型为主，C型其次，A、D型极少。B型中又以Ba亚型为主。B、C基因型在贵州省4城市的分布有一定差异。     

慢性乙型肝炎病毒感染者前C区变异及HBV DNA载量的临床意义

目的探讨慢性HBV感染者前C区A1896变异及HBVDNA载量与肝炎病情进展的关系。方法检测116例慢性HBV感染者前C区A1896变异,比较不同临床类型前C区A1896变异阳性率,再根据前C区变异不同,比较不同临床类型HBVDNA含量的差异。结果不同临床类型前C区变异株检出率差异无统计学意义(χ2=2.863,P=0.581)。在慢性HBV携带者中,变异阳性率同时伴有较高水平的HBVDNA量(P=0.003),其余各临床类型均未见明显差异;但变异情况相同的条件下,HBVDNA载量似随着病情的加重呈降低趋势。结论影响肝炎病情进展的因素错综复杂,前C区A1896变异可能不起作用,但前C区A1896变异可能是影响HBVDNA复制的一个因素。     

感染乙型肝炎病毒不同基因型和亚型患者的临床特点分析

目的明确乙肝病毒不同基因型和亚型在国内的分布及其与病情的相关性。方法收集来自国内8个地区884例慢性乙型肝炎病毒感染者的血清和临床资料,用PCR-RFLP方法鉴定病毒基因型和亚型,分析不同基因(亚)型与病情间的相关性。结果乙肝病毒B(20.77%)和C (78.22%)基因型为最常见,仅1例为D基因型;所有B基因型均为Ba亚型,C基因型中仅发现C2和C1亚型。北方地区患者多感染C基因型(83.62%)/C2亚型(90.32%)。B基因型患者的年龄明显小于C基因型患者(P<0.000)。不同年龄段B基因型和C基因型比较发现,感染B基因型的患者在30岁以下、30～50岁和50岁以上年龄段中所占比例逐渐下降,感染C基因型的患者比例呈现相反趋势(P=0.000)。C1和C2亚型患者的年龄相近。各基因型在肝硬化、慢乙肝和无症状携带者中的分布无差别。B和C基因型(C1和C2亚型)患者的病毒量之间无差别。B基因型患者的肝脏炎症和纤维化评分明显低于C型患者(P<0.05)。结论北方地区以C基因型和C2亚型为主。B基因型患者的年龄明显小于C基因型。B和C基因型(C1和C2亚型)患者的肝脏炎症和病毒量之间无差别。B基因型患者的肝脏炎症和纤维化评分明显小于C型患者。     

长春地区乙型肝炎病毒基因分型与肝病发病关系的研究

目的了解长春地区乙型肝炎(乙肝)患者基因型特点及与肝炎严重程度、疾病转归的关系,以指导临床对疾病进展的判断和指导临床用药。方法选择216例乙肝病毒(HBV)阳性肝炎患者,年龄33-87岁,平均(60．5±11．4)岁。病变程度的判断根据2000年《病毒性肝炎防治方案》中的诊断标准。应用巢式聚合酶链反应方法(nPCR)扩增HBV S基因组序列,用第二轮PCR产物直接进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析;然后用HBV S基因扩增产物采用Sanger双脱氧链终止法进行DNA测序,将所得到的核苷酸序列及推测的相应氨基酸序列通过DNASIS软件处理,并与GenBank中已发表的HBV中国株及国外株进行同源性比较以确定HBV的基因型,证明用S基因序列的RFLP法HBV分型结果与用全基因组序列的基因分析是一致的。表明S基因序列RFLP法的基因分型结果与S基因测序分型结果是一致的。结果216例HBV DNA阳性标本中单基因型分别检测出A、B、C、D四种,其中单基因型中A型有1例(0．46％),B型有19例(8．8％),C型有175例(81．02％),D型有21例(9．72％)。86例HBV DNA阳性住院患者标本中,C型为感染的主要基因型,69例(80．23％)。B型次之,9例(10．47％)。6例原发性肝癌均为C型;20例肝炎后肝硬化的患者中有17例(85．0％)为C型。结论长春地区HBV基因型仍以C型为主(81．02％),B、D型次之(分别是8．8％和9．72％)。同时结果显示长春地区HBV感染有基因多样性趋势,表现在检测出了A单基因型。肝癌、肝硬化与C基因型HBV的相关性最大。C基因型HBV DNA拷贝数较非C基因型高,提示与HBV DNA在C型患者体内长期存在有关。HBV病毒载量与肝脏病变严重程度的关系无统计学意义。     

南通地区乙型肝炎病毒基因分型及其临床意义研究

目的了解南通地区乙型肝炎病毒基因分型情况及其临床意义。方法用PCR法扩增HBV PreS基因并测序,共分析慢性无症状携带者(ASC)、慢性活动性肝炎患者(CAH)和肝癌(HCC)患者血清86份。用C lustalx1.8软件比对,用MEGA3.1作树分型,同时测定样品HBeAg和HBV-DNA。结果南通地区存在HBV B型、C型和B/C混合感染型,其中C型比例最高,占67.44%,而B型和B/C混合感染型均占16.28%。C型患者的血清HBeAg阳性率和HBV-DNA浓度显著高于其他基因型(p<0.05)。结论南通地区存在HBV B型、C型以及B+C混合型,C型为优势型;C型患者的病毒复制最为活跃。     

慢性乙型肝炎临床表现形式与乙肝病毒基因型的关系分析

目的:探讨慢性乙型肝炎基因型与慢性乙型肝炎临床表现类型的关系。方法:对35例慢性乙型肝炎轻度,32例慢乙肝中度以及30例慢乙肝重度患者的血清采用荧光定量PCR技术进行乙肝病毒基因型的检查,分析慢性乙型肝炎的三种表现与乙肝病毒基因型的关系。结果:97例慢性乙肝患者共检出B型基因为39例(40.21%),C型基因为58例(59.79%),在慢性乙型肝炎轻度、中度、重度各组间基因型B和C分布差别无统计学意义(P>0.05),B和C基因型中HBeAg和HBV-DNA载量的表达有差别(P<0.05),C基因型的HBeAg和HBV-DNA载量表达要高于B基因型。结论:本地区慢性乙型肝炎基因型以B和C感染为主,基因型与慢性乙型肝炎轻、中、重分级无关系,C型基因的HBeAg和HBV-DNA载量表达要高于B基因型。     

儿童乙型肝炎血清HBVcccDNA及病毒基因型研究

目的 了解甘肃省儿童血清乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)及病毒基因型情况.方法 随机选择HBV-DNA阳性124例乙肝患儿(男性84例,女性40例),其中HBV携带者65例、慢性乙肝59例(轻度31例、中度18例、重度10例),对以上患儿进行基因分型、肝功、HBV-DNA载量和血清HBV cccDNA检测.结果 中、重度慢性乙肝患儿HBV cccDNA阳性率高于携带者和轻度组(F=25.429,P＜0.01);HBeAg阳性患儿HBV cccDNA检出率高于HBeAg阴性患儿(F=28.386,P＜0.01);HBV cccDNA阳性组的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素均高于阴性组(t值分别为13.241、11.347、15.013,均P＜0.01);124例肝炎患儿中,以C、B基因型为主,C基因型为优势,B/C混合型占一定比例,还有一些其他基因型;C基因型患儿中HBV cccDNA阳性的比例高于B基因型患儿(F=23.216,P＜0.01);而B基因型患儿中HBVcccDNA阴性的比例高于C基因型患儿(F=26.364,P＜0.01).结论 病情越重外周血HBVcccDNA检出率越高,HBV cccDNA和基因型的检测可以较好地反映HBV复制程度和临床严重程度,对诊治乙肝具有一定的指导意义.