熟地等4味中药的植物雌激素作用的实验研究

目的:观察熟地黄、白芍、当归、川芎等中药对性未成熟SD大鼠子宫系数的影响,以及含药血清对人乳腺癌MCF7细胞体外增殖的影响,评价其植物雌激素样作用.方法:正常雌性性未成熟SD大鼠,体重(70±5)g,按体重均衡和随机的原则分为7组(正常对照、己烯雌酚、熟地黄、白芍、当归、川芎和四物汤组),分别每天分早、晚2次灌胃,给药均持续4 d,第5天腹主动脉取血,分离血清,分离子宫并称重,免疫组化法测定子宫组织雌激素受体表达量;药物血清用于MCF7细胞体外增殖,细胞周期和雌激素受体ERα蛋白表达的测定.结果:熟地黄、白芍和当归组的幼鼠子宫系数均高于正常对照组(P＜0.05);川芎组幼鼠子宫系数与正常对照组相比,差异无统计学意义;白芍、当归、川芎的含药血清均可显著促进MCF7细胞MTT体外增殖(P＜0.05),并且4味中药的药物血清均能使MCF7细胞S期细胞数和细胞增殖指数PI增加(P＜0.01),当归和川芎可提高MCF7细胞ERα蛋白的表达水平(P＜0.05),熟地黄和白芍的药物血清对MCF7细胞的ERα蛋白表达水平,与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论:熟地黄、白芍和当归等中药的免煎剂有植物雌激素样作用,川芎组整体实验和体外细胞培养结果不完全一致,已烯雌酚在本实验剂量时有使幼鼠体重增长减缓的作用,而实验剂量的中药未表现出此样作用.     

以小鼠子宫增重实验考察四物汤植物雌激素样作用的配伍规律宰

目的 用正交设计原理,通过研究不同配伍比例的四物汤(熟地、当归、白芍、川芎)对幼鼠子宫增重和血清雌激素水平的影响,探讨四物汤的植物雌激素样作用.方法 将正常性未成熟雌性ICR小鼠,随机分为9个正交实验组,每组12只,分别灌胃按L9(34)正交实验设计配制的9个生药质量浓度为1 g·mL-1的四物汤药液,每天1次,连续7天,第8天眼眶取血,分离血清,用EUSA试剂盒检测血清E2、P、FSH水平,分离子宫并称重,计算子宫系数.结果 熟地等四味药物对幼鼠子宫系数影响顺序为B>D>C>A,子宫系数增加较大的组合为A3B2C1D2,川芎对幼鼠子宫系数影响有统计学意义;四味药物对幼鼠血清E2水平的影响顺序为D>A>B>C,血清E2水平较高的组合为A3B3C3D2四味药物对血清E2水平的影响均无统计学意义;四味药物对血清P的影响顺序为A>C>D>B,血清P水平较高的组合为A1B2C2D2,熟地对血清P的影响有统计学意义;四味药物对血清FSH水平影响顺序为D>A>C>B,血清FSH水平较高的组合为A3B2C2D2,川芎对血清FSH水平影响有统计学意义.结论 不同配伍比例的四物汤,植物雌激素活性有显著差异,临床应根据患者的具体情况,综合考虑用药.     

以小鼠子宫增重实验考察四物汤植物雌激素样作用的配伍规律

目的用正交设计原理,通过研究不同配伍比例的四物汤（熟地、当归、白芍、川芎）对幼鼠子宫增重和血清雌激素水平的影响,探讨四物汤的植物雌激素样作用。方法将正常性未成熟雌性ICR小鼠,随机分为9个正交实验组,每组12只,分别灌胃按k（3^4）正交实验设计配制的9个生药质量浓度为1g·mL^-1的四物汤药液,每天1次,连续7天,第8天眼眶取血,分离血清,用ELISA试剂盒检测血清E2、P、FSH水平,分离子宫并称重．计算子宫系数。结果熟地等四昧药物对幼鼠子宫系数影响顺序为B〉D〉C〉A,子宫系数增加较大的组合为A3B2C1D2,川芎对幼鼠子宫系数影响有统计学意义;四味药物对幼鼠血清E2水平的影响顺序为D〉A〉B〉C,血清E2水平较高的组合为A3B3C3D2,四味药物对血清E：水平的影响均无统计学意义;四味药物对血清P的影响顺序为A〉C〉D〉B,血清P水平较高的组合为A1B2C2D2,熟地对血清P的影响有统计学意义;四味药物对血清FSH水平影响顺序为D〉A〉C〉B,血清FSH水平较高的组合为A3B2C2D2,川芎对血清FSH水平影响有统计学意义。结论不同配伍比例的四物汤,植物雌激素活性有显著差异,临床应根据患者的具体情况,综合考虑用药。     

基于Apriori算法的四物汤类方组方特点分析

目的:研究四物汤类方组方特点,探讨四物汤方中药物间的配伍关系。方法:采用"以药类方"的方法,从中医方剂数据库(源于《中医方剂大辞典》)中检索得到含有当归、地黄、川芎、白芍其中任意3味药物的方剂5842首,建立数据库,采用Apriori算法,研究类方中药物间配伍关系。结果:从支持度来看,当归对白芍、地黄、川芎均为强支持;地黄对白芍、川芎,川芎对白芍,白芍对地黄为较强支持。药物对全方的影响:当归>地黄>白芍>川芎;药对对全方的影响:当归-地黄>当归-白芍>当归-川芎>地黄-川芎>地黄-白芍>川芎-白芍。结论:作为四物汤类方核心的当归、地黄、川芎、白芍4味药中,当归与其它药物的联系最为紧密,表现为四物汤类方的中心环节;当归-地黄药对则为方中的中心药对。     

四物汤及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及mRNA表达的影响

研究四物汤复方及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及其mRNA表达水平的影响。大鼠口服灌胃四物汤及其配伍水煎液2周后,处死,用生理盐水灌流肝脏,制备肝微粒体,采用混合探针与肝微粒体体外孵育法考察四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响。利用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450 mRNA表达的影响。四物汤复方组CYP1A2酶活性与对照组相比升高(P<0.05),熟地白芍、当归白芍、当归川芎以及白芍川芎组的CYP1A2和CYP2C19的酶活性与对照组相比降低(P<0.05),复方组、单药组、2味药配伍组的CYP2B6的酶活性与对照组相比降低(P<0.05)。复方组对CYP1A2的mRNA表达具有上调作用(P<0.05),4味单药对CYP2B1 mRNA表达具有下调作用的(P<0.05)。四物汤复方对大鼠肝脏CYP1A2的酶活性具有诱导作用,熟地和当归组与对照组相比酶活性相当,但与白芍合用后显著下调了CYP1A2的酶活性。复方及其配伍对CYP2B6的酶活性具有抑制作用,其中当归对酶活性下调作用较强。复方对CYP1A2以及4味单药对CYP2B1的mRNA表达的影响与酶活性水平相平行。     

扶正消瘤方对人乳腺癌MCF-7干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:观察扶正消瘤方含药血清对人乳腺癌MCF-7干细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用体外悬浮培养乳腺癌MCF-7干细胞作为研究对象,中药灌胃方法制备大鼠含药血清;实验设计为空白对照组,无药血清模型组、中药等效量组、中药1倍量组、中药2倍量组共5组;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,荧光免疫细胞化学法检测细胞凋亡情况。结果:中药含药血清等效剂量组、中药1倍剂量组和中药2倍剂量组对人乳腺癌MCF-7干细胞的抑制率均明显高于空白对照组和无药血清组(P0.05);与空白对照组及无药血清组比较,扶正消瘤方含药血清组人乳腺癌MCF-7干细胞凋亡明显增多。结论:扶正消瘤方能明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,诱导其细胞凋亡。     

四物汤抗氧化活性及抗菌活性研究

目的探讨四物汤的抗氧化活性及抗菌活性,为四物汤的临床应用提供科学理论依据。方法准确称量单味药当归、川芎、白芍、熟地黄各200 g,制作样品,采用自由基清除率法测定四物汤的抗氧化活性,采用平板打孔法和试管二倍稀释法测定四物汤的抗菌活性,对比单味药、中药及组方清除OH·自由基的IC_(50)、3种供试菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌)对中药及组方的敏感程度、中药及复方的MIC(最小杀菌质量浓度)和MBC(最小抑菌质量浓度)。结果四物汤具有明显的OH·自由基清除作用,单味药当归的OH·自由基清除率最高,组方白芍、川芎的OH·自由基清除率最高。大肠杆菌、链球菌对四物汤的敏感程度为高度敏感,金黄色葡萄球菌为中度敏感。三种供试菌对各组方的敏感程度均为高度敏感。四物汤的MIC和MBC小于各组方(P0.05)。结论四物汤及其组方均有较强的抗氧化活性和抗菌活性。     

四物汤组方前后脂溶性化学成分的GC/MS分析

目的探讨四物汤及其组方中各单味药组方前后的脂溶性化学成分。方法采用索式提取法提取四物汤及其组方各单味药中的脂溶性成分,进行甲酯化处理后用气相色谱/质谱联用技术分离和鉴定其中成分的组成和含量。结果四物汤及其组方单味药熟地、白芍、当归和川芎中分别鉴定出25、38、41、30、51个化合物,分别占总量（不明确）的92.952%、76.093%、87.133%、70.304%、92.708%。结论四物汤及其组方各单味药主要成分均为不饱和脂肪酸类。     

新疆石榴皮等9种天然药物植物雌激素活性的实验研究

目的 对几种天然药物进行植物雌激素的活性筛选.方法 采用人乳腺癌细胞增殖法与酵母菌雌激素筛检实验法对9种天然药物进行了植物雌激素活性的研究.结果 成功地建立了E-SCREEN法与Yeast Estrogen Screen实验法,此两种方法均可检测到1×10~(-13) mol/L的雌二醇.MCF-7细胞增殖实验结果表明,鹰嘴豆、新疆石榴皮、罗勒、枸杞水提取物可促使ER(+)MCF-7细胞的增殖(P＜0.05),提示它们具有植物雌激素样活性;酵母双杂交(Yeast two-hybrid)系统实验结果表明,鹰嘴豆、石榴皮水提取物均能使酵母系统中的β-半乳糖苷酶的活性增强(P＜0.05),提示它们具有植物雌激素样活性.结论 E-SCREEN法敏感性高,并有快速、简便等优点,适用于大量化合物的初选.     

四物汤及两味中药组方对γ射线照射所致血虚证小鼠作用机制的研究

[目的]探讨四物汤及其两味药组方治疗血虚证小鼠的补血作用机制。[方法]采用60^Coγ射线全身照射制成实验性小鼠血虚证模型，测定外周血象、CD34^ 细胞、细胞周期、NFS60细胞增殖以及造血干祖细胞的增殖情况。[结果]1)四物汤在各指标上都优于其两味药组方；(2)两味药组方中，当归相关组对CFU—E，CFU—Mix，CFU—GM的促进作用较好，且有升高白细胞的作用；而地黄相关组对CFU—E有增殖作用；白芍相关组能明显促进NFS60细胞的增殖；川芎相关组增加CD34抗原表达，并促进细胞由G0/1期向S期转化，其作用和所含的川芎嗪有关。[结论]四物汤全方优于两味药组方，各组方的作用靶点和作用强度各有异同。     

斑蝥素对HL—60细胞和QGY7703细胞的作用研究

采用MTT法和流氏细胞仪技术,研究了斑蝥素对HL－60细胞和QGY7703细胞的存活率和细胞周期分布影响。结果表明,斑蝥素对HL－60细胞的IC50是15．34μmol/L,对QGY7703细胞的IC50是18．54μmol/L。按蝥素处理HL－60细胞和QGY7703细胞24h后,G2－M期细胞分布都有所增加,G0－G1期细胞分布都有所降低;斑蝥素处理HL－60细胞24h后,G0－G1期峰前有亚二倍体峰出现,说明斑蝥素在所用剂量下降够诱导HL－60细胞发生凋亡。     

The effects of oridonin on cell growth, cell cycle, cell migration and differentiation in melanoma cells

Oridonin, a diterpenoid isolated from Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara, is currently one of the most important traditional Chinese herbal medicines. We investigated the anti-proliferation effect of oridonin on the cultured murine melanoma cell line K1735M2. The growth inhibition activity of oridonin for K1735M2 cells occurred in a time- and dose-dependent manner (IC50 was 7.4+/-0.6 microM). Further studies showed that these inhibition effects were associated with dose-dependent G2/M phase arrest and differentiation induction. Detection of morphological observation showed that oridonin could induce K1735M2 cells to produce dendrite-like structures. The results of the migration indicated that oridonin affected motility of K1735M2 cells in a dose-dependent manner. These results suggested that oridonin is a potential candidate for melanoma cancer therapy.     

九香虫三氯甲烷浸提物对两种癌细胞增殖和周期的影响

目的研究九香虫三氯甲烷浸提物对胃癌细胞SGC-7901和肝癌细胞HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法本研究采用冷浸法获得九香虫的三氯甲烷浸提物;MTT法分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞的细胞周期的影响。结果九香虫三氯甲烷浸提物能抑制SGC-7901细胞和HepG2细胞的体外增殖并呈明显的剂量依赖性,IC50分别为1 193.52和964.34μg/mL;流式细胞术分析表明,三氯甲烷浸提物作用后HepG2细胞的S期和G2/M期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例明显升高。结论九香虫三氯甲烷浸提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起。     

血管内皮细胞-平滑肌细胞共培养体系研究进展

血管内皮细胞(endothelial cells,EC)和血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,VSMC)的相互作用、相互影响维持血管生理功能和多种疾病的发生发展,EC-SMC联合培养模型是目前研究这2种细胞间相互影响的最佳方式。作者对现有的EC-SMC共培养模型及共培养对这2种细胞结构和功能的影响进行综述,为在微观上深入研究二者的相互关系提供依据,也为建立更接近机体生理/病理状态的EC-SMC体外共培养体系提供参考。     

宝藿苷对人食管癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究香加皮中宝藿苷-Ⅰ对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制.方法 采用MTT法分析不同质量浓度宝藿苷-Ⅰ(12.5、25、50 μg/mL)分别作用24、48、72 h后,对Eca-109细胞增殖的影响;流式细胞术分析宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞周期的影响;RT-PCR技术检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1mRNA表达的影响;Western blotting方法检测宝藿苷-Ⅰ对Eca-109细胞Cyclin B1蛋白表达的影响.结果 25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P<0.05),作用48 h的IC50为24.8μg/mL.25、50μg/mL宝藿苷-Ⅰ作用48 h后,随宝藿苷-Ⅰ质量浓度的增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降,G2/M期细胞比例明显提高,细胞的Cyclin B1蛋白及mRNA表达水平降低,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论 香加皮宝藿苷-Ⅰ可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用町能与下调细胞Cyclin B1表达有关.     

姜黄素对人食管癌细胞Eca-109增殖及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响及其作用机制。方法采用MTT法分析不同浓度姜黄素对Eca-109细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析姜黄素对Eca-109细胞周期的影响,采用RT-PCR技术检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc linB1mRNA表达的影响,采用W estern-b lotting方法检测姜黄素对Eca-109细胞Cyc lin B1蛋白表达的影响。结果 20,40,60μmol/L姜黄素均可明显抑制Eca-109细胞的增殖(P均<0.05),特别是姜黄素作用24 h后,随姜黄素浓度增加,Eca-109细胞的G0/G1期细胞比例明显下降而G2/M期细胞比例明显提高,Cyc lin B1蛋白与mRNA表达水平均降低,与对照组比较均有显著性差异(P均<0.01)。结论姜黄素可抑制Eca-109细胞增殖,使细胞周期阻滞,该作用可能与下调细胞Cyc lin B1表达有关。     

维吾尔族剥脱综合征患者与正常人角膜内皮细胞密度及六角形细胞比例的对比分析

目的观察维吾尔族剥脱综合征患者及维吾尔族正常人中央区角膜内皮细胞密度,六角形细胞比例。方法选择维吾尔族正常人40例40只眼,维吾尔族剥脱综合征患者40例40只眼,应用非接触型角膜内皮显微镜观察角膜内皮细胞密度及六角形细胞的比例。结果维吾尔族正常人角膜内皮密度为（2623．27±388．52）mm^-2,维吾尔族剥脱综合征患者角膜内皮密度为（2306．36±383．13）mm^-2（t=3．46,P=0．001）,维吾尔族正常人六角形细胞的比例为0．56±0．12,维吾尔族剥脱综合征患者六角形细胞的比例为0．48±0．14（t=2．87,P=-O．005）。结论维吾尔族剥脱综合征患者角膜内皮密度及六角形细胞比例均较同族正常人低。     

皮肤光老化与细胞免疫

从免疫学的角度来探讨光老化的形成机制及光老性疾病的治疗，已经成为光老化研究的热点和方向。在光老化过程中，郎格罕氏细胞（LC）、角朊细胞（KC）、单核一巨噬细胞、T细胞、中性粒细胞和肥大细胞的数量、形态结构及产生细胞因子的能力都发生的相应的改变，光老化有其深刻的细胞免疫机制。     

雷公藤红素对肝癌细胞SMMC-7721凋亡和周期的调控作用及机制

目的研究雷公藤红素对肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡的影响及机制。方法应用CCK8试剂检测雷公藤红素对SMMC-7721细胞的毒性和增殖影响,用软琼脂克隆形成试验检测药物对肝癌细胞的克隆形成能力的干预,通过核染色及检测活化caspase-3水平观察细胞凋亡情况,用流式细胞术检测药物干预对细胞周期分布的影响,并用Western blot检测细胞周期相关蛋白细胞周期素B1(cyclin B1)及细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle protein 2,cdc2)水平。结果雷公藤红素以剂量依赖性方式使SMMC-7721细胞的增殖下降和克隆形成减少,使细胞凋亡增加及细胞周期阻滞在G2/M期,同时增加失活cdc2表达,并导致cyclin B1的积聚。结论雷公藤红素可显著抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖并促进细胞凋亡,对分裂周期相关蛋白调控导致的分裂阻滞可能是影响其对细胞凋亡和增殖作用的机制之一。     

金雀异黄素对巨噬细胞RAW 264.7 增殖、形态和细胞周期的影响

目的研究金雀异黄素对巨噬细胞RAW264．7增殖、细胞形态及细胞周期的影响,以探讨其对免疫系统的作用。方法以鼠源巨噬细胞系RAW264．7为细胞模型,将金雀异黄素用二甲基亚砜（DMSO）溶解,再用培养液稀释成所需终浓度为12．5、25、50、100kcmol&#183;L^-1的4组及溶剂对照组（DMSO体积含量比低于0．1％）。通过WST-1细胞增殖实验、倒置相差显微镜及流式细胞仪分别检测金雀异黄素对巨噬细胞的增殖、细胞形态及细胞周期的影响。结果金雀异黄素对巨噬细胞的影响呈时间和剂量依赖关系。50-100μmol&#183;L^-1,浓度的金雀异黄素作用巨噬细胞24h和48h后均能抑制细胞增殖,细胞增殖率分别为77％～81％、58％-73％（P〈0．01）;并能影响细胞形态改变,表现为细胞体积增大,并形成较长伪足。流式细胞结果显示．该浓度金雀异黄素可将巨噬细胞阻滞在S-G2／M期。结论金雀异黄素能抑制巨噬细胞细胞增殖,影响巨噬细胞形态,可能与干扰细胞周期有关。