TA2小鼠恶性淋巴瘤B淋巴细胞型(L87—TA2)模型首次成功建立

1987年5月20日本实验室发现一只正常饲养的14月龄TA2近交系雌性鼠腹部膨隆。经脱颈处死剖检发现,腹股沟、腋下及腹腔散在大小不等9个结节,最大1.5×1×1cm,最小直径0.5cm。经组织学观察,为弥漫性浸润性生长的瘤细胞,呈圆形,胞浆少,圆形核,核膜厚,染色质颗粒粗。多见核分裂相。定为恶性弥漫性淋巴瘤B淋巴细胞型。国内至今未见报道。经4年余传44代观察,肿瘤生长稳定,移植率100％,未见自发消退,并有广泛淋巴结转移。宿主平均存活31.2±5.5天。染色体检查,众数以三倍体、四倍体及超四倍体为主。鼠抗免单克隆抗体免疫荧光染色显示瘤细胞核周呈“兰绿”色光环状,证实为恶性B淋巴细胞型。该模型对8种已知     

免疫耐受动物人瘤异种移植模型建立的研究——Ⅰ、叙利亚仓鼠人胃癌异种移植模型的建立

给新生24小时内叙利亚仓鼠腹腔和皮下接种2×10~6人胃癌BGC-823细胞,制备人瘤异种移植模型。终身荷瘤率为66.67％,终身荷瘤存活时间为47.25±8.08天。移植瘤的组织结构和细胞超微结构与原肿瘤标本基本一致,染色体G显带符合人类细胞模型。     

人脾原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及生物学特性的研究

目的 建立人脾原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型,为探讨其发病机理和实验治疗提供工具,方法 将11例人脾原发性恶性淋巴瘤新鲜组织植入裸鼠脾裨内,观察原位移植的成瘤、移植瘤的侵袭和转移及其形态学特征（光镜、电镜、免疫组织化学）。结果 筛选出1株人脾原发性（非霍奇金B细胞性裂核细胞型）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型（BFNHL－HMN－1）,已传至41代;1株人脾原发性（非霍奇金B细胞性裂核细胞型）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型（LM－BFNHL－HMN－2）,已传至47代;1株2脾原发性（非霍奇金T免疫母细胞）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型（TINHL－HMN－3）,已传至37代,共移植裸鼠611只,其肿瘤移植生长率、肝转移率和液氮冻存复苏成活率均为100％。BFNHL－HMN－1和TINHL－HMN－3肿瘤完全限于脾内,呈结节状生长,或伴有脾门淋巴结累及,无腹腔淋巴结和器官转移。LM－BFNHL－HMN－2肿瘤不仅限于脾脏,并有脾门淋巴结及肝转移。原位移植瘤组织经病理学、超微结构观察,流式细胞仪DNA含量测定及染色体核型的分析,表明与人脾原发性恶性淋巴瘤细胞相一致。结论 所建立的3株人脾原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,完整地模拟了人脾原发性恶性淋巴瘤患者的临床过程,为研究人脾原发性淋巴瘤的生物学和实验治疗提供了理想的动物模型。     

TA2系小鼠乳腺癌肺转移(BCML-TA299)模型的建立及生物学特性的实验研究

目的:研究乳腺癌BCML-TA299生物学特性、DNA状况、相关基因蛋白的表达水平及其意义。方法:应用同系小鼠原位移植BCML-TA299细胞增殖动力学组织形态学、超微结构观察、流式细胞仪以及免疫组织化学染色技术检测TA2系小鼠乳腺癌移植瘤生物异质性、基因DNA状况和蛋白质的表达水平,研究其与细胞生物特性的关系。结果:用TA2系小鼠自发乳腺癌伴肺转移组织在同系小鼠乳腺原位建立了乳腺癌肺转移A型BCML-TA299模型。历时2年多,鼠间传至第47代,移植成功率为100%。未见自发消退,肿瘤生长特性稳定。鼠间荷瘤存活中位数为51天,平均为58.8±10.03天。肿瘤倍增时间为3.11天(指数生长期)。各代移植瘤病理形态学、超微结构观察证实保持了原代瘤的特征,转移瘤与原发瘤结构一致。染色体检查为鼠类肿瘤染色体,DNA含量经流式细胞仪检测显示为异倍体肿瘤。鼠间传代移植瘤与转移瘤保持p53、cerbB-2、nm23基因异常表达。经抗癌药物敏感实验,表明对CAP(CTX、ADM、DDP)联合化疗最为敏感,而单药紫杉醇作用差。结论:本模型可为研究乳腺癌生物异质性提供有价值的实验工具。     

人低分化鼻咽癌上皮细胞系(CNE—2Z)裸小鼠移植模型的建立及其特性研究

本文报告人低分化鼻咽癌裸小鼠移植模型的建立及其生物学特性的研究,实验动物为NC系裸小鼠(少量Swiss系),使用CNE—2 Z细胞(1×10~6/0.5ml细胞)皮下接种,历时二年,在203只动物传代30次,移植成功率为100％。组织学及超微结构显示为低分化鳞状细胞癌特征,染色体显示人类肿瘤细胞染色体,有EB病毒基因组存在及EB病毒核抗元(EBNA)、膜蛋白(LMP)表达。我们所建立人低分化鳞状细胞癌裸鼠移植模型,具有移植成功率高,呈进行性生长,恶性程度高,不会自行消退等特点,可供进一步研究鼻咽癌生物学特性及实验性治疗之用。     

人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型的建立

目的 建立人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,为探讨其发病机制和实验治疗提供工具。方法 将5例人小肠恶性淋巴瘤新鲜组织植入裸鼠小肠黏膜层内,观察原位移植成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学(光镜、电镜、免疫组织化学)、染色体核型和流式细胞分析。结果 有3例原位移植获得成功。依据新的WHO恶性淋巴瘤分类标准,建成1株人小肠原发性(非霍奇金B细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型(HSIL-1)、1株人小肠原发性(非霍奇金B细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型(HSIL-2)和1株人小肠原发性(非霍奇金T细胞)恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型(HSIL-3)。免疫组织化学显示,HSIL-1和HSIL-2的CD19、CD20、CD22、CD40、CD45、CD72阳性,HSIL-3的CD3、CD7、CD45RO阳性。染色体众数范围55～69条,为亚三倍体核型。移植瘤细胞的DNA指数为1.46～1.71,均为异倍体。HSIL-1、HSIL-2和HSIL-3分别传至32代、27代和21代,共移植裸鼠443只,其肿瘤移植生长率、液氮冻存复苏成活率和自发转移率均为100％。移植瘤在裸鼠小肠内呈侵袭性生长,破坏肠壁各层组织结构,出现血道、淋巴道及种植性转移。原位移植瘤与来源人小肠恶性淋巴瘤细胞一致。结论 3株人小肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型完整地模拟了人小肠原发性恶性淋巴瘤患者的临床过程,为研究小肠恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供了理想的动物模型。     

人卵巢癌裸鼠移植瘤模型的建立及其生物学特性的实验应用研究

研究用1例人卵巢癌淋巴转移的癌组织直接移植于裸鼠皮下,建成一株人卵巢癌移植瘤动物模型,已传至第26代.移植成功率达100%,平均裸鼠带瘤存活中位数为102天.肿瘤倍增时间为7.17(SD=±1.02天).组织学和超微结构形态证实保持了原人肿瘤的特征,有淋巴结转移行为.人类肿瘤染色体特征.保留了分泌癌胚抗原的能力.具有P53癌基因蛋白的异常表达.移植瘤细胞可在体外培养并传至5代.流式细胞仪及显微分光光度计检测移植瘤,提示肿瘤为多倍体,各代移植瘤的DNA指数与第一代肿瘤基本一致(DI1.05~1.40).经初步应用研究,用传代移植瘤组织提取抗原免疫BALB/C小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与小鼠缺欠型骨髓瘤系进行融合,制备了一株抗卵巢癌单克隆抗体,经免疫组化染色(ABC法)可显示有与人卵巢癌阳性反应.说明裸鼠人体卵巢癌模型的建立,为深入进行该类肿瘤诊断及治疗研究提供了有效途径.     

自体造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤15例临床分析

目的:评价自体造血干细胞移植(AHSCT)治疗恶性淋巴瘤患者的疗效。方法:采用AHSCT治疗恶性淋巴瘤患者15例,其中霍奇金淋巴瘤患者3例(均为复发病例),非霍奇金淋巴瘤患者12例(Ⅲ、Ⅳ期或复发病例,IPI评分2-4分)。采集外周血造血干细胞前均经化疗及动员剂动员(CHOP方案9例,CHOP+MTX 3例,CEP、大剂量MTX、单用G-CSF各1例)。预处理方案为联合化疗10例(BEAC、CBV方案为主),联合化疗加放射治疗5例(TBI、TLI各1例,提前局部照射3例)。结果:移植后白细胞≥1.0×109/L的中位时间为10(9-13)天,血小板≥50×109/L的中位时间为14(11-17)天。随访时间为1-110.5个月。中位生存时间为43(1-110.5个月)个月,3年总生存率(OS)为66.7%。结论:AHSCT是一种治疗复发难治恶性淋巴瘤的安全有效的方法。     

人体腹腔恶性间皮瘤细胞系AMS-82的生物学特性

本文报告人体恶性间皮瘤细胞系AMS—82的建株过程及其生物学特性标本来源于一62岁女性病人。经剖腹探查及病理活检诊断为恶性间皮瘤。经贴壁静置培养目前已稳定传代生长三年多。该细胞系在相差镜下观察多数为长棱形细胞,有丰富的伪足及微绒毛。H、E、染色巨瘤细胞及核分裂相多见。传代三天后呈对数生长,倍增时间43小时,分裂指数82％。染色体分析提示该细胞主要为4倍体及超4倍体细肿。组化分析提示该细胞系能产生透明质酸。用BALB/C无胸腺裸鼠作肿瘤移植试验,皮下注射5×10~6细胞后4天长出瘤块,移植瘤的病理特征、组化分析与原始接种的肿瘤相同。将该细胞系在液氮中长期冻存,复苏均获成功。     

脐带血血清体外培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响

目的：观察脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞对干细胞移植病人造血重建的影响及不良反应。方法：用10%脐带血血清体外培养体系培养的人骨髓间充质干细胞联合自体外周血干细胞移植治疗3例恶性淋巴瘤患者,计数BM-MSC的数目,观察其造血重建时间、不良反应。结果：采用10%脐带血血清培养体系培养BM-MSC,回输时达到2.82-3.96×106/kg,3例患者中性粒细胞〉0.1×109/L的时间为移植后第9-12天,血小板〉20×109/L的时间为移植后第9-15天,无明显不良反应。结论：10%脐带血血清培养体系是一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法,此法培养的BM-MSC联合APBSC移植治疗恶性淋巴瘤患者,加速了造血重建,未见明显不良反应,具有临床应用价值。     

己酮可可碱增强（E）—（2‘）—脱氧—氟亚甲基胞苷的细胞毒性和对宫颈癌细胞的放射增敏作用

目的观察己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)对(E)－(2')－脱氧－氟亚甲基胞苷[(E)－2－deoxy-2-(fluoromethylene)cytidine,FMdC]的细胞毒性和放射增敏作用的影响。方法在人类宫颈癌细胞系C33-A和C4-I,FMdC和PTX的细胞毒性和放射增敏作用应用MTT和克隆形成分析。两种药物的细胞毒性相互作用应用Isoborogram分析。常规照射剂量2Gy时的放射增敏比（sensitive enhancement ratio,SER）定义为2Gy时对照组存活分数（survival fraction,SF）和药物处理组SF之比(SER2Gy)。结果PTX增加FMdC对C33-A和C4-I细胞的细胞毒性,并呈剂量依赖关系。单药FMdC对C4-I和C33-A的50％抑制浓度（50％inhibition concentration,IC50）分别为139.5nmol/L和46.7nmol/L。在C4-I细胞,0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/LPTX降低FMdC的IC50至58.0nmol/L、40.6nmol/L和20.9nmol/L。在C33-A细胞,0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/LPTX降低FMdC的IC50至32.1nmol/L、23.3nmol/L和9.1nmol/L。Isoborogram分析表明,FMdC和PTX的细胞毒性效应为相乘作用。应用克隆形成分析,照射前用30nmol/LFMdC处理指数生长期C33-A和C4-I细胞48h或照射后立即单用0.25～1.0mmol/LPTX,均能观察到各自的放射增敏作用;如果两药联合应用,细胞放射敏感性明显增加。在C4-I细胞系,单药30nmol/LFMdC和0.5mmol/LPTX的SER2Gy分别为2.08±0.66和1.76±0.30,而两药联合时的SER2Gy为3.18±1.32。在C33-     

Interleukin-2 and interferon alpha 2 combination

We have studied activity and toxicity of subcutaneous recombinant interleukin-2 and interferon alpha 2b in a series of 14 patients with advanced renal cell carcinoma. No objective response was observed, and the median survival was 16 months (range 3-19); toxicity was acceptable. All the patients had poor prognostic factors and were pretreated with interferon.     

HDM2 phosphorylation by MAPKAP kinase 2

p53 stability is regulated by HDM2, a RING domain protein that acts as an E3 ligase to ubiquitinate p53 and target its degradation. Phosphorylation of HDM2 on serine 166 by AKT has been shown to enhance HDM2 activity and promote the degradation of p53. Here, we show that MAPKAP kinase 2 (MK2) can phosphorylate HDM2 on serine 157 and 166 in vitro. Treatment of cells with anisomycin, which activates MK2, also results in phosphorylation of HDM2 on serine 157 and 166 in vivo. Mutation of the MK2 phosphorylation sites in HDM2 to aspartic acid renders HDM2 slightly more active in the degradation of p53, and mouse cells deficient for MK2 show reduced Mdm2 phosphorylation and elevated levels of p53 protein. Together, our results suggest that MK2 may act to dampen the extent and duration of the p53 response.     

Antitumor activity of 2'-deoxy-2'-methylidenecytidine, a new 2'-deoxycytidine derivative

The antitumor activity of 2'-deoxy-2'-methylidenecytidine (DMDC), an inhibitor of DNA synthesis, was examined and compared with that of 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine (ara-C) against various murine tumors and human tumor xenografts. Against P388 murine leukemia, repeated treatments of DMDC were more effective than its single administration. Interestingly, DMDC was effective against colon 26 murine carcinoma, M5076 murine reticulum cell sarcoma, LX-1 human lung cancer xenograft, and SK-Mel-28 human melanoma xenograft, which are less sensitive or refractory to ara-C, while DMDC was not more potent against murine leukemias P388 and L1210 than ara-C. The in vitro cytotoxic effects of DMDC and ara-C against L1210 leukemia cells were prevented dose dependently by deoxycytidine, suggesting that DMDC, like ara-C, may require phosphorylation by deoxycytidine kinase for antitumor activity. DMDC was effective against human and murine experimental tumor models, especially nonleukemic tumors refractory to ara-C, suggesting that DMDC will be a promising agent for the treatment of cancer.     

转染和干扰Runx2基因对K7M2细胞的影响

 目的探讨干扰和转染Runx2基因后对K7M2骨肉瘤细胞体外生物学活性的影响。方法分别将阴性对照质粒、携带Runx2和siRNA Runx2的质粒转染到K7M2细胞中。应用Western blot检测转染和干扰Runx2基因对其蛋白表达的影响,并检测细胞体外的增殖能力(MTT )、侵袭性、迁移性和黏附性的变化,并应用流式细胞仪（FCM）检测相应细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化。结果与空白对照组比,转染Runx2和siRunx2组的K7M2细胞中Runx2蛋白表达分别明显增强和减弱,而阴性对照质粒组没有明显改变。转染siRunx2组的细胞,MTT结果显示增殖能力明显下降,迁移性、侵袭性和增殖指数（PI）也明显下降,与空白对照组比差异有统计学意义（P<0.05）,黏附性和凋亡率却没有明显变化。转染Runx2组K7M2的细胞增殖能力、迁移性、侵袭性和PI明显增高,与空白对照组比差异有统计学意义（P<0.05）,黏附性和凋亡率没有明显变化。阴性对照组和空白对照组比上述指标没有明显改变。结论Runx2可以促进K7M2细胞增殖,增强细胞的侵袭、迁移能力,其机制可能是和改变细胞周期的分布,使细胞更快的进入G₂/M期有关。     

Polymorphisms in prostaglandin synthase 2/cyclooxygenase 2 (PTGS2/COX2) and risk of colorectal cancer

Inflammation plays a key role in the development of colorectal cancers. We have investigated the relationship between PTGS2 (COX2) polymorphisms and colorectal cancer risk in a hospital based case-control study. We recruited 292 patients with colorectal cancer and 274 controls from new patients admitted to Bellvitge Hospital, Barcelona, Spain, from 1996 to 1998. Subjects responded to a questionnaire on risk factors. Genotypes of the eight more frequent polymorphisms of PTGS2 were determined. Two polymorphisms are located in the promoter sequence, one in the untranslated region of exon 1, one in exon 3, one in intron 5, two in the untranslated region of exon 10, and one downstream of the last polyadenylation (poly-A) signal. Associations were analysed with logistic regression models assuming a dominant effect for rare variants to increase statistical power. An association was detected between colorectal cancer and a polymorphism in the untranslated region of exon 10 of PTGS2, with an odds ratio (OR) of 2.49, 95% confidence interval (CI) of 1.17-5.32, P=0.01. A nearby polymorphism downstream of the last poly-A signal also showed a nonsignificant increase in risk (OR 2.17, 95% CI 0.99-4.78, P=0.05). Analysis of haplotypes confirmed that individuals with these variants were at increased risk of colorectal cancer (OR compared to the most frequent haplotype: 2.17, 95% CI 0.97-4.84, P=0.06) Interactions between PTGS2 genotype and use of nonsteroidal anti-inflammatory drugs and risk of colorectal cancer were also explored.