牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响

背景：糖尿病视网膜病变是糖尿病普通的并发症，牛磺酸是视网膜中含量最丰富的游离氨基酸，它是视网膜再生和发育必需的营养因子，缺乏牛磺酸会引起视网膜结构和功能改变。 目的：探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响。 设计：随机对照观察。 单位：中国人民解放军第三军医大学。 材料：试验于2003—3／2003—12在第三军医大学完成。选取封闭群SD大鼠54只，体质量为250g。将造模成功的糖尿病大鼠54只随机分为糖尿病1月组、牛磺酸干预糖尿病1月组、糖尿病2月组、牛磺酸干预糖尿病2月组、糖尿病3月组和牛磺酸干预糖尿病3月组6组，每组9只。同期选取正常对照组共15只。 方法：动物单笼喂养，自由进食饮水，实验前禁食12h，用链脲佐菌素诱导糖尿病，用尿糖试纸测尿糖达（＋＋＋）以上，尾静脉采血测血糖浓度大于16．7mmol／L即为模型建立成功。采用免疫组化、RT-PCR和Western blotting等技术方法，检测神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白的表达。观察牛磺酸对糖尿病视网膜病变大鼠神经元及神经胶质细胞的影响。 主要观察指标：观察神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白表达。 结果：①免疫组化分析显示：糖尿病大鼠1个月时，牛磺酸即可抑制神经胶质原纤维酸性蛋白的免疫反应性，随着牛磺酸干预时间的延长，神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性渐弱。②RT—PCR检测：2个月始，糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达开始增大，牛磺酸明显下调神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达。③3个月的糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白蛋白表达最强。牛磺酸干预糖尿病大鼠2个月时，神经胶质原纤维酸性蛋白表达减少。 结论：牛磺酸可下调神经胶质原纤维酸性蛋白及mRNA表达，对糖尿病视网膜病变具有保护作用。     

神经调节蛋白-1对早期糖尿病大鼠视网膜病变神经损伤的保护作用

目的:探讨神经调节蛋白-1(NRG-1)对早期糖尿病(DM)大鼠视网膜病变神经损伤的保护作用。方法:SD大鼠30只,随机分成对照(CONT)组、DM组、NRG-1组,每组10只。后两组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DM模型。造模成功后,NRG-1组玻璃体腔注射人重组NRG-1,CONT组、DM组玻璃体腔给予等体积生理盐水。4周后,HE染色检测视网膜神经节细胞(RGC)密度,免疫荧光检测视网膜神经胶质酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白-2(MAP-2)表达,Western blot检测视网膜GFAP、MAP-2蛋白的相对表达量。结果:与CONT组相比,DM组的GFAP表达明显升高,MAP-2表达及RGC密度明显下降(均P<0.01);与DM组相比,NRG-1组的GFAP表达明显下降,MAP-2表达及RGC密度明显增加(均P<0.01)。结论:NRG-1可能通过抑制胶质细胞活化,上调视网膜MAP-2表达,恢复视网膜RGC密度,从而对早期DM大鼠视网膜病变神经损伤有保护作用。     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆及海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景:研究表明,银杏叶提取物具有促进脑损伤后功能修复、改善老年人学习与记忆功能障碍以及促进中枢神经系统可塑性的作用,但其对2型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响又如何呢?目的:观察银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆功能障碍的改善作用和对海马内星形胶质细胞特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白表达的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:广西医科大学药学院药理学教研室。材料:选用84只雄性清洁级Wistar大鼠,8周龄,体质量180～220g。银杏叶提取物粉,广西桂林思特新技术公司提供,含黄酮24.8%,萜内酯6.2%,生产批号:200405。方法:实验于2003-06/2005-03在广西医科大学中心实验室(省重点实验室)药理室完成。①随机抽取70只大鼠,禁食24h,按55mg/kg腹腔注射链脲佐菌素(pH4.4柠檬酸缓冲液配制),注射后第4天,空腹血糖>15mmol/L的56只为2型糖尿病大鼠。②将56只糖尿病大鼠按随机数字表法分为4组:模型组,胰岛素治疗组,银杏叶提取物高、低剂量组,每组14只。4组糖尿病大鼠的空腹血糖差异不明显(P>0.05)。另取未注射链脲佐菌素的大鼠14只作正常对照组。胰岛素治疗组:皮下注射10U/(kg·d);银杏叶提取物高、低剂量治疗组:灌胃银杏叶提取物混悬液100和500mg/(kg·d);正常对照组和模型组:每天灌胃等量生理盐水,连续6个月。③Morris水迷宫实验观察记忆能力改变:圆形水池直径为100cm,高60cm,平台高40cm,水深42cm。大鼠每天上、下午各训练2次,连续4d。第5和8天上午测定每只大鼠学习能力[90s内找到平台的时间(逃避潜伏期);搜寻平台的策略直线式,记分4分;趋向式,记分3分;随机式,记分2分;圆圈式,记分1分)]。④测试结束后,各组取大鼠分别进行反转录聚合酶链反应(n=8)及免疫组织化学(n=6)实验,观察大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白的表达,分别以目的基因胶质纤维酸性蛋白区带的灰度值与内参β-actin区带的灰度值之比和胶质纤维酸性蛋白反应阳性细胞的体密度比表示。⑤组间差异显著性比较采用方差分析和q检验。主要观察指标:银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠Morris水迷宫实验结果及海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响。结果:造模失败脱失14只,其余70只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫实验结果:模型组大鼠第5,8天的逃避潜伏期明显长于正常对照组,搜寻平台策略得分明显低于正常对照组(P<0.01)。胰岛素治疗组及银杏叶提取物高、低剂量组的第5,8天逃避潜伏期均明显短于模型组,搜寻平台策略得分明显高于模型组(P<0.05～0.01)。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组Morris水迷宫实验结果差异不明显(P>0.05)。②海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达:模型组大鼠海马的胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平明显高于其他3组(P<0.01)。免疫组化结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠海马星形胶质细胞胞体明显增大、数量增加、突起明显增粗,胶质纤维酸性蛋白阳性表达细胞的体密度比明显增高(P<0.01)。与模型组比较,胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组海马星形胶质细胞胞体缩小、数量减少、突起明显变短,胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比明显下降(P<0.01)。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平和胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比比较,差异不明显(P>0.05)。结论:2型糖尿病大鼠存在学习记忆能力障碍,反应性星形胶质细胞可能参与了该障碍发生过程,银杏叶提取物可能通过抑制星形胶质细胞反应性增生对糖尿病大鼠学习记忆损伤起到保护作用。     

臂丛损伤修复中胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的:观察大鼠臂丛损伤修复中脊髓前角胶质纤维酸性蛋白的表达并探讨其意义。方法:实验于2004-09/2005-03年在中山大学中山医学院解剖教研室完成。成年雄性SD大鼠65只,其中对照组5只,实验组60只。建立3种臂丛损伤模型:右C7前根撕脱组(A组);右C7前根撕脱 同侧C5～T1后根离断组(B组);右C7前根撕脱 右C5与C6之间脊髓半横断组(C组)。术后1,3,7,14d采用联合行为评分对各组大鼠的神经缺失症状进行评分;评分后取C7节段脊髓,采用免疫组织化学方法和图像分析方法观察星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白的表达。结果:实验选用大鼠65只,其中实验组中C组术后12d死亡1只,进入实验结果分析共64只。①臂丛损伤后脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白表达:A组相似文献   

重组人粒细胞集落刺激因子对实验性脑出血大鼠星形胶质细胞表达的影响

背景:星形胶质细胞是中枢神经系统的主要成分之一,具有对各种损伤产生强烈反应的特性,脑出血后星形胶质细胞大量表达、活性增强,这种由常态转变为反应性状态的星形胶质细胞的病理生理学意义是目前研究热点.目的:探讨重组人粒细胞集落刺激因子对脑出血后星形胶质细胞表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/11在泸州医学院中心实验室完成.材料:清洁级健康榷性SD大鼠50只,随机分为3组:假手术组10只、模型组20只、实验组20只.重组人粒细胞集落刺激因子为深圳新鹏生物工程有限公司产品.方法:模型组、实验组利用鼠脑立体定向仪、采用断尾取自体血法制备脑出血动物模型,假手术组用等量生理盐水代替自体血,余干预措施与模型组一致.造模1 h后,实验组大鼠腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子60 μg/kg,余2组未注射任何物质.主要观察指标:分别于干预后6 h,24 h,48 h,72 h,7 d采用免疫组织化学ABC法检测胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达.结果:假手术组未见胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达.模型组干预6 h即有少量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,48 h后开始增多,至72 h胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数量达高峰(P＜0.05),7 d后仍有大量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞表达,但较72 h时有所减少.实验组干预6 h时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达与模型组相似,干预24 h,48 h,72 h,7 d时胶质纤维酸性蛋白阳性细胞较模型组明显减少(P＜0.05),细胞变形程度减轻.结论:重组人粒细胞集落刺激因子能够抑制脑出血后星形胶质细胞的过度活化,可能对损伤脑组织重建和功能恢复起重要作用.     

乙醇灌胃对大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白、S-100B蛋白表达的影响

目的:观察乙醇灌胃致大鼠海马区神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白表达的改变。方法:实验于2004-09/2005-09在延边大学医学院附属医院神经内科学教研室完成。选用3月龄Wistar雄性大鼠60只,完全随机分为正常组、灌胃1,2,4,6,8周组6组,每组10只,各灌胃组按8g/(kg·d)乙醇灌胃,依周数喂养结束后取大鼠脑组织,常规制片,行胶质纤维酸性蛋白和S-100B蛋白的免疫组化染色,光镜下进行形态学观察;采用HPIAS-1000计算机彩色病理图文分析系统对胶质纤维酸性蛋白和S-100B阳性细胞计数行定量分析,进行各灌胃组与正常组的比较。结果:60只Wistar大鼠中灌胃8周组于喂养第7周死亡1只(死亡原因为乙醇误灌入肺内,造成急性肺水肿而死亡),其余各组动物全部进入结果分析。①形态学改变:正常神经胶质细胞胞体轮廓清晰,星状突起纤细,胶质纤维酸性蛋白分布于胞浆及星状突起中。S-100B阳性染色也见于胶质细胞中,均匀分布于胞浆中。随灌胃周数增加,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞胞体变大、形态各异,突起增多明显且粗大不规则,S-100B阳性细胞体积有所增大,胞浆丰富显色较深。②灌胃1,2,4,6,8组大鼠胶质纤维酸性蛋白和S-100B免疫反应产物阳性细胞计数值均较正常组显著增高,差异有显著性意义犤胶质纤维酸性蛋白阳性细胞计数:(76.49±6.43),(84.20±3.17),(92.60±4.81),(138.20±5.52),(142.12±6.41),(29.32±2.42)个,F=883.62,P<0.05犦;犤S-100B阳性细胞计数:(196.96±11.47),(182.22±17.28),(215.88±15.50),(239.70±14.95),(254.92±23.42),(115.53±11.62)个,F=99.88,P<0.05犦。结论:乙醇使大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S-100B的表达增加,增加的程度与乙醇灌胃时间有关。随着灌胃时间的延长,大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白和S-100B的表达增多。     

微囊化兔坐骨神经组织细胞移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的作用

目的:观察脊髓损伤大鼠进行微囊化兔坐骨神经组织细胞移植后胶质纤维酸性蛋白表达的变化。方法:实验于2004-03/2005-02在江西医学院人体解剖学教研室应用解剖研究室完成。①选取健康成年家兔10只,用于制备坐骨神经组织细胞。②选取健康成年SD大鼠130只,随机分为4组:正常对照组10只、损伤对照组40只、细胞悬液组40只、微囊组40只。③损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠均建立脊髓半横断伤模型,于损伤处分别植入明胶海绵、明胶海绵吸附的10μL细胞悬液、明胶海绵吸附的10μL微囊化坐骨神经组织细胞。移植前后均不使用免疫抑制剂。正常对照组未给予材料移植。④损伤对照组、细胞悬液组、微囊组大鼠分别于术后3,7,14,28d取材,每时相点10只,行免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白表达的变化。结果:实验选取健康成年SD大鼠130只,全部进入结果分析。①术后各组脊髓切片炎性反应苏木精染色结果:脊髓损伤后3d,损伤对照组和细胞悬液组可见明显核固缩,部分神经元萎缩变小,神经元数量减少,细胞边界模糊不清,并有大量巨噬细胞浸润;第7天损伤对照组和细胞悬液组炎性反应进一步加剧,有大量的噬中性粒白细胞浸润,但微囊组少见;第14天损伤对照组和细胞悬液组胶质细胞明显增生、肥大,炎性反应减轻,神经元的形态有所恢复,而微囊组炎性反应较轻,胶质细胞增生减少。②术后各组脊髓切片胶质纤维酸性蛋白免疫组化染色结果:正常对照组可见胶质纤维酸性蛋白染色阳性细胞,空白及阴性对照染色未见阳性反应。损伤对照组和细胞悬液组术后3,7,14d内胶质纤维酸性蛋白的表达呈进行性增高趋势,28d回落。微囊组术后7,14,28d胶质纤维酸性蛋白的表达显著低于损伤对照组、细胞悬液组(P<0.01)。结论:微囊化异种坐骨神经组织细胞移植能抑制损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白的表达,减轻由反应性胶质化所形成的胶质瘢痕。     

睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景:睫状神经营养因子具有多种生物活性,在神经系统发育、分化和损伤修复中具有重要意义.目的:观察睫状神经营养因子对坐骨神经切断吻合后大鼠相应脊髓节段前角星形胶质细胞的特异标记物胶质纤维酸性蛋白表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、生理盐水组及药物组.除对照组外,对所有大鼠实施双侧坐骨神经切断吻合术,药物组手术区局部注射睫状神经营养因子100 ng/kg,1次/d,生理盐水组局部注射等量生理盐水.术后1,3,7,14,21,28 d取相应脊髓节段,免疫组织化学染色观察胶质纤维酸性蛋白的表达,苏木精伊红染色、TUNEL染色对脊髓前角神经元进行计数.结果与结论:大鼠坐骨神经切断吻合后相应脊髓节段星形胶质细胞胞体大,突起分枝多且粗大,神经元数目逐渐减少,凋亡神经元增多,胶质纤维酸性蛋白表达增高.与模型组和生理盐水组比较,药物组神经元存活数目增多,凋亡减少,胶质纤维酸性蛋白表达明显增加(P<0.05或P<0.01).同时,药物组大鼠的运动功能障碍较轻,恢复较快.说明睫状神经营养因子可以通过促进大鼠脊髓前角胶质纤维酸性蛋白的表达起到神经保护作用.     

银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆及海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

背景：研究表明，银杏叶提取物具有促进脑损伤后功能修复、改善老年人学习与记忆功能障碍以及促进中枢神经系统可塑性的作用，但其对2型糖尿病大鼠学习记忆功能的影响又如何呢？ 目的：观察银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠学习记忆功能障碍的改善作用和对海马内星形胶质细胞特异性蛋白胶质纤维酸性蛋白表达的影响。 设计：完全随机分组设计，对照实验。 单位：广西医科大学药学院药理学教研室。 材料：选用84只雄性清洁级Wistar大鼠，8周龄，体质量180-220g。银杏叶提取物粉，广西桂林思特新技术公司提供，含黄酮24．8％，萜内酯6．2％，生产批号：200405。 方法：实验于2003—06／2005—03在广西医科大学中心实验室（省重点实验室）药理室完成。④随机抽取70只大鼠，禁食24h，按55mg／kg腹腔注射链脲佐菌素（pH4．4柠檬酸缓冲液配制），注射后第4天，空腹血糖〉15mmol／L的56只为2型糖尿病大鼠。①将56只糖尿病大鼠按随机数字表法分为4组：模型组，胰岛素治疗组，银杏叶提取物高、低剂量组，每组14只。4组糖尿病大鼠的空腹血糖差异不明显（P〉0．05）。另取未注射链脲佐菌素的大鼠14只作正常对照组。胰岛素治疗组：皮下注射10U／（kg&;#183;d）；银杏叶提取物高、低剂量治疗组：灌胃银杏叶提取物混悬液100和500mg／（kg&;#183;d）；正常对照组和模型组：每天灌胃等量生理盐水，连续6个月。③Morris水迷宫实验观察记忆能力改变：圆形水池直径为100cm，高60cm，平台高40cm，水深42cm。大鼠每天上、下午各训练2次，连续4d。第5和8天上午测定每只大鼠学习能力[90s内找到平台的时间（逃避潜伏期）；搜寻平台的策略直线式，记分4分；趋向式，记分3分；随机式，记分2分；圆圈式，记分1分）1。④测试结束后，各组取大鼠分别进行反转录聚合酶链反应（n=8）及免疫组织化学（n=6）实验，观察大鼠海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白的表达，分别以目的基因胶质纤维酸性蛋白区带的灰度值与内参β-actin区带的灰度值之比和胶质纤维酸性蛋白反应阳性细胞的体密度比表示。⑤组间差异显著性比较采用方差分析和q检验。 主要观察指标：银杏叶提取物对2型糖尿病大鼠Morris水迷宫实验结果及海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响。 结果：造模失败脱失14只，其余70只大鼠进入结果分析。①Morris水迷宫实验结果：模型组大鼠第5，8天的逃避潜伏期明显长于正常对照组，搜寻平台策略得分明显低于正常对照组（P〈0．01）。胰岛素治疗组及银杏叶提取物高、低剂量组的第5，8天逃避潜伏期均明显短于模型组，搜寻平台策略得分明显高于模型组（P〈0．05-0．01）。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组Morris水迷宫实验结果差异不明显（P〉0．05）。②海马星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达：模型组大鼠海马的胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平明显高于其他3组（P〈0，01）。免疫组化结果显示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马星形胶质细胞胞体明显增大、数量增加、突起明显增粗，胶质纤维酸性蛋白阳性表达细胞的体密度比明显增高（P〈0．01）。与模型组比较，胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组海马星形胶质细胞胞体缩小、数量减少、突起明显变短，胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比明显下降（P〈0．01）。胰岛素治疗组和银杏叶提取物高、低剂量组胶质纤维酸性蛋白mRNA表达水平和胶质纤维酸性蛋白表达的体密度比比较，差异不明显（P〉0．05）。 结论：2型糖尿病大鼠存在学习记忆能力障碍，反应性星形胶质细胞可能参与了该障碍发生过程，银杏叶提取物可能通过抑制星形胶质细胞反应性增生对糖尿病大鼠学习记忆损伤起到保护作用。     

脊髓损伤模型大鼠神经胶质细胞增殖与胶质纤维酸性蛋白的表达

背景:星形胶质细胞可以通过细胞裂解释放各种神经营养因子,并可促进损伤脊髓的修复。目的:观察脊髓损伤模型大鼠神经胶质纤维酸性蛋白的表达及对其后肢功能恢复的影响。方法:将SD大鼠采用Allen’s法撞击T9～10节段致脊髓损伤,造模成功后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7,并设置仅蛛网膜下腔移植His蛋白的正常SD大鼠做对照。用BBB评分法评估两组大鼠后肢的运动功能,用免疫组织化学染色法和Western-blot法观察各组神经胶质纤维酸性蛋白的表达。结果与结论:BBB评分结果显示,模型组大鼠脊髓损伤后下肢功能自行恢复率达68%。模型组脊髓损伤3和7d,损伤区域神经胶质纤维酸性蛋白表达逐渐增加(P<0.05),随后逐渐下降,于脊髓损伤28d后逐渐恢复到对照组水平(P>0.05)。脊髓损伤后1～14d两组胶质纤维酸性蛋白表达逐渐升高(P>0.05)。结果证实,脊髓损伤后蛛网膜下腔移植骨形态发生蛋白7可诱导星形胶质细胞增殖,神经胶质纤维酸性蛋白的表达增强,进而促进脊髓损伤大鼠后肢功能的恢复。     

脂质体槲皮素对糖尿病大鼠视网膜糖基化终产物生成及受体表达的影响

目的观察脂质体槲皮素（LQ）对糖尿病（DM）大鼠视网膜糖基化终产物（AGEs）生成及受体（RAGEmRNA）表达的影响。方法采用蒸发-高压均质法制备LQ悬浊液,链脲佐菌素（STZ）法诱导DM大鼠模型,并随机分为DM模型组、LQ低、中、高剂量及氨基胍灌胃组;连续给药12周后,免疫荧光法、RT—PCR方法分别检测DM大鼠视网膜中AGEs沉积情况及RAGEmRNA的表达。结果与DM模型组结果（AGEs：0．922±0．005;RAGEmRNA：1．192±0．098）比较,LQ各组及氨基胍组视网膜中AGEs沉积减少,RAGEmRNA表达也降低（P〈0．05）,以LQ中剂量组（AGEs：0．734±0．007;RAGEmRNA：0．724±0．028）降低最为明显（P〈0．01）。结论LQ可通过有效减少DM大鼠视网膜中AGEs的沉积,下调RAGEmRNA的表达。     

糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子和一氧化氮的变化

背景 糖尿病患者外周血中的血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)和一氧化氮存在正相关,但糖尿病时视网膜组织的 VEGF和一氧化氮是否发生变化尚不清楚.目的 探讨糖尿病大鼠视网膜 VEGF和一氧化氮的变化及其在糖尿病视网膜病变( diabetic retinopathy,DR)发生发展过程中的作用.设计 随机对照实验研究.地点和材料 选择健康成年 SD大鼠(上海 SIPPR-BK实验室提供,合格证 152),在福建医科大学动物实验室喂养.实验在福建医科大学解剖学与组织胚胎学实验室完成.干预 随机分成正常对照组、糖尿病 1月、糖尿病 3月和糖尿病 5月组,每组 20只.除正常组外所有大鼠均一次性腹腔注射链脲佐菌素( streptozotin,STZ)诱发糖尿病模型.应用免疫组织化学方法观察各组视网膜组织 VEGF的表达情况,并检测各组视网膜组织中一氧化氮合酶( nitric oxide synthase,NOS)活性和一氧化氮含量变化.主要观察指标 ①各组视网膜组织 VEGF的表达情况.②各组大鼠视网膜组织中 NOS活性和一氧化氮含量变化.结果 正常大鼠视网膜 VEGF免疫阳性反应仅见于内核层细胞, NOS和一氧化氮含量分别为( 36.17± 1.83) μ kat/g 和 (36.77± 2.33) μ mol/g; 3个月时,糖尿病大鼠视网膜 VEGF表达增强, NOS和一氧化氮含量分别为 (115.19± 31.5) μ kat/g 和 (68.34± 5.46) μ mol/g,与正常组比较,差异有显著性意义( t=7.43,8.15;P《 均 0.01); 5个月时,糖尿病大鼠视网膜表达进一步增强, NOS和一氧化氮含量分别为 (72.35± 16.34) μ kat/g 和 (50.62± 3.01) μ mol/g,与糖尿病 3月组比较,差异有显著性意义( t=4.76, 4.19;P均 《 0.05).结论 糖尿病大鼠视网膜 VEGF的过度表达和 NOS活性、一氧化氮含量的变化在 DR的发生发展过程中起重要作用.     

糖尿病大鼠视网膜TNF-a表达与视网膜血流改变的实验研究

目的通过对糖尿病大鼠视网膜中央动、静脉血流以及肿瘤坏死因子-a（TNF-a）在其视网膜的表达进行连续6个月的测定，探讨分析两者的关系。方法采用右下腹腔内一次性注射Streptozotocin 60 mg／kg诱导Wistar大鼠糖尿病模型35只，分别于成模后1、2、3、4、5和6个月，行彩色多普勒血流检查、视网膜血管消化铺片、视网膜TNF-a的免疫组织化学检测。结果随糖尿病病程延长，TNF-a的阳性表达数目、着色程度及分布范围相应的增加，视网膜动脉血流速度减低，搏动指数、阻力指数增加，静脉流速增加，视网膜微血管狭窄闭塞。结论糖尿病大鼠视网膜血流状况的改变与TNF-a的阳性表达同时存在，TNF-a的阳性表达的强弱与视网膜血流状况不良成正比。     

牛磺酸对大鼠视网膜光损伤导致的细胞凋亡及bcl-2表达量的影响

目的 :探讨牛磺酸与视网膜光损伤诱发的细胞凋亡及与凋亡相关基因bcl- 2蛋白表达量的关系。方法 :建立大鼠视网膜光损伤模型 ,30只wistar大鼠被随机分为 :正常对照组、阳性对照组、牛磺酸用药组。绿色荧光持续照射 2 4h形成视网膜光损伤。用流式细胞术检测视细胞的凋亡率及bcl- 2基因蛋白表达量的变化。结果 :在牛磺酸用药组 ,视细胞的凋亡率明显低于阳性对照组 (P <0 0 1) ,而bcl- 2蛋白表达量却显著高于阳性对照组 (P <0 0 5 )。结论 :牛磺酸通过上调bcl- 2基因蛋白的表达量 ,抑制了视网膜光损伤诱发的细胞凋亡 ,避免视网膜的光损伤。     

凋亡相关基因Bcl-2及Bax在糖尿病大鼠早期视网膜病变细胞凋亡中的作用

目的研究凋亡相关基因 Bcl- 2,Bax在早期糖尿病大鼠视网膜的表达,探讨其在糖尿病视网膜病变细胞凋亡中的作用. 方法选择健康成年 Wistar 大鼠 40只,随机分成正常对照( CON)、糖尿病 1个月( DM1)、 3个月( DM3)及 6个月( DM6)组.腹腔内注射链脲佐菌素( STZ)诱发大鼠糖尿病.制备大鼠视网膜石蜡切片行免疫组化 ABC法染色,并对染色结果进行计算机图像分析. 结果于 CON及 DM各组, Bax和 Bcl- 2二基因的蛋白均在视网膜血管表达,且随病程进展,其阳性反应强度逐渐增加.此外, Bcl- 2阳性反应在 DM3组于色素上皮细胞出现,在 DM6组,再进一步扩大到视杆内节和节细胞.而 Bax在 DM6亦出现于节细胞. 结论凋亡相关基因 Bcl- 2和 Bax在早期糖尿病大鼠视网膜血管和神经细胞的表达随病程的进展逐渐增强,二者在糖尿病视网膜细胞凋亡中起重要作用.     

结缔组织生长因子在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的 通过观察结缔组织生长因子（CTGF）在糖尿病大鼠肾脏中表达的动态改变,探讨CTGF在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法 尾静脉内注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型。采用RT-PCR和Western blot检测1个月、3个月和6个月时糖尿病大鼠肾脏组织中CTGF的mRNA和蛋白的表达。光镜下观察糖尿病大鼠不同时期肾脏组织形态学的改变。结果 糖尿病大鼠1个月、3个月和6个月与同期对照大鼠相比,肾脏CTGF的mRNA表达上调,分别为对照组的1.56倍、2.05倍和3.74倍（P〈0.01）;同时蛋白表达亦上调,分别为对照组的2.48倍、2.93倍和5.82倍（P〈0.01）;此外,糖尿病6个月大鼠的CTGF mRNA和蛋白的表达明显高于糖尿病1个月和3个月大鼠的表达水平（P〈0.01）。组织形态学观察表明,糖尿病大鼠3个月时肾脏出现基膜增厚、肾小球扩张等糖尿病肾病早期的病理改变,随着病程的延长,病理改变越严重;6个月时出现肾小球硬化、肾间质纤维化等晚期的改变。结论 糖尿病大鼠早期肾脏已存在CTGF基因表达上调,在糖尿病肾病的发展过程中,CTGF基因表达上调仍持续存在。因此,CTGF基因表达上调在糖尿病肾病的发生发展中起着重要作用。     

胰激肽原酶对糖尿病大鼠内层视网膜细胞间黏附分子表达的影响

目的:研究胰激肽原酶对糖尿病大鼠视网膜内层细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM)表达的影响。方法:糖尿病动物造模采用健康成年Wistar大鼠腹腔内1次性注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)法。Wistar大鼠78只随机分为正常对照组和糖尿病3个月组(n=33)、糖尿病6个月组(n=33),其中糖尿病大鼠又随机分为胰激肽原酶治疗组和糖尿病对照组。到期取各组大鼠及视网膜进行血管消化铺片和免疫组化,比较分析其ICAM表达的差异。结果:正常组大鼠视网膜可见ICAM有所表达,但糖尿病大鼠ICAM表达增加,且随病程进展而增强(P=0．03)。糖尿病3个月组,胰激肽原酶治疗组ICAM较同期糖尿病对照组表达下降(P=0．036),但糖尿病6个月组间则未见明显差异。结论:糖尿病视网膜病变与ICAM异常表达有关,早期应用胰激肽原酶可能对其有一定抑制作用。     

耐力运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖运载体4基因表达的影响

目的：探讨耐力运动对糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖运载体4（glucose transporter 4，GLUT4）mRNA表达的影响。方法：32只雄性2型糖尿病OLETF大鼠和13只雄性对照LETO大鼠随机分为6组：A1组OLETF运动组、A2组OLETF运动＋胰岛素组、B1组OLETF非运动组、B2组OLETF非运动＋胰岛素组、C组LETO运动组、D组LETO非运动组。A1、A2、C组参照Ploug报道的大鼠游泳运动方法运动12周。A2、B2组经肝门静脉予胰岛素10U／Kg的注射，1min后处死取材。Real—time PCR方法测定GLUT4 mRNA。结果：GLUT4 mRNA表达在A1组比B1组升高3倍．A2组比A1组升高13倍，B2组比B1组升高20倍，差异均有显著性意义；A2组比B2组GLUT4 mRNA升高2倍，差异无显著性意义。结论：耐力运动可以促进GLUT4 mRNA的表达，耐力运动和胰岛素对糖尿病治疗具有协同作用，两者不能相互替代。