外源性血管内皮细胞生长因子对急性肝功能衰竭小鼠肝再生的影响

目的探讨外源性血管内皮细胞生长因子(VEGF)对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用。方法雄性昆明种小鼠分为正常对照组、模型组和保护组。模型组和保护组一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN),保护组于造模前60min给予VEGF腹腔注射,而模型组、正常对照组分别注射同等体积的0.5%氯化钠溶液作为对照,给药后6h分别留取血清、肝组织标本。检测肝功能变化,HE染色观察肝组织病理改变,ELISA检测血清肝细胞生长因子(HGF)水平,免疫组织化学分析肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果保护组小鼠血清ALT[(328.44±38.26)U/L比(754.55±89.58)U/L]和AST[(345.94±53.86)U/L比(812.66±72.68)U/L]水平明显低于模型组(均P<0.05)。与模型组比较,保护组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻。保护组小鼠血清HGF水平[(1.31±0.09)ng/L比(0.56±0.05)ng/L]和肝组织中PCNA表达阳性率[(30.34±2.58)%比(11.63±1.08)%]明显高于模型组(均P<0.05)。结论外源性VEGF对小鼠急性肝功能衰竭具有保护作用,其机制可能与促进肝细胞再生有关。     

一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭保护作用的实验研究

目的探讨一氧化碳释放分子-2对小鼠急性肝功能衰竭(ALF)的保护作用及机制。方法雄性C57BL/6小鼠30只随机分为对照组、模型组和保护组,每组10只。通过一次性腹腔注射脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)构建小鼠ALF的动物模型,CORM-2于造模前30 min行尾静脉注射,造模后6 h分别留取血清、肝组织标本。生化分析仪检测血清中ALT、AST水平,HE观察肝脏病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TNF-α和IL-6的水平,反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TNF-α和IL-6 mRNA的表达。结果保护组小鼠血清ALT[(1274.60±157.24)U/L比(3499.00±136.19)U/L]和AST[(1151.50±244.58)U/L比(4079.50±481.11)U/L]水平均明显低于模型组(均t1=33.81,t2=17.16,P0.05);与模型组比较,保护组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞坏死程度明显减轻[(0.14±0.05)比(0.37±0.05),t=10.29,P0.05];保护组小鼠血清和肝组织中TNF-α[(139.60±28.39)pg/mL比(447.34±128.17)pg/mL、(0.31±0.03)比(0.69±0.05)]和IL-6[(215.21±85.16)pg/mL比(1461.58±244.90)pg/mL、(0.33±0.03)比(0.72±0.05)]表达水平明显低于模型组(均t1=7.41,t2=20.61,t3=15.20,t4=21.15,P0.05)。结论 CORM-2能够抑制小鼠ALF时的炎性反应,减轻肝脏病理损伤,其机制可能与抑制促炎细胞因子TNF-α和IL-6的释放有关。     

急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3及TGF-β1 mRNA的表达及罗格列酮的干预

目的: 观察D-氨基半乳糖(D-Ga lN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝衰竭TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达,并探讨罗格列酮的干预作用.方法: ♂昆明小鼠随机分为3组: 正常组、对照组、干预组.对照组和干预组以D-Ga lN/LPS腹腔注射构建小鼠急性肝衰竭模型,正常组则相应予以生理盐水腹腔注射;干预组于造模前2 h予以罗格列酮灌胃,正常组和对照组则相应予以生理盐水灌胃.比较各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,肝组织病变程度及肝组织TNF-α、Caspase-3,TGF-β1 mRNA的表达水平.结果: D-GalN联合LPS腹腔注射成功构建了小鼠急性肝衰竭模型,对照组肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA的表达较正常组明显增高( P＜0.001);干预组小鼠血清ALT,AST水平明显低于对照组(403.6±76.1 U/L vs 3664.8±646.1 U/L,464.6±63.0 U/L vs 3514.0±468.9 U/L,均P＜0.001),肝组织中TNF-α、Caspase-3、TGF-β1 mRNA表达水平明显低于对照组(0.270±0.042 vs 0.459±0.072,0.388±0.033 vs 0.553±0.033,0.261±0.031 vs 0.403±0.042,均P＜0.001);与对照组比较,干预组肝组织炎性细胞浸润明显减少,肝细胞以变性为主,未见明显坏死.结论: 罗格列酮可能通过下调T N F - α、Caspase-3、TGF-β1的表达对D-GalN/LPS小鼠急性肝衰竭起保护作用.     

Caspase-12在D-氨基半乳糖联合脂多糖诱导小鼠急性肝功能衰竭中的表达及作用

目的探讨Caspase-12在D-氨基半乳糖(D-Gal)/脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肝功能衰竭发生发展过程中表达水平的变化及Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡途径在急性肝功能衰竭中的作用。方法以D-Gal/LPS联合腹腔注射诱导小鼠急性肝功能衰竭建立实验模型,在不同时间点动态检测血清氨基转移酶水平和观察肝组织病理变化,评估肝细胞凋亡和肝坏死演变过程;应用琼脂糖凝胶电泳检测肝细胞DNA凋亡条带;用半定量逆转录聚合酶链反应检测肝组织中Caspase-12 mRNA表达水平;west- ern blot检测Caspase-12、Bip/GRP78蛋白表达。结果药物诱导5h时肝组织中典型凋亡细胞增多,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)开始升高,Caspase-12 mRNA表达明显增加, Caspase-12蛋白量表达反而减少;7h镜下出现大量肝细胞凋亡和坏死,ALT、AST水平达高峰,分别为(2564±1384)U/L和(1198±497)U/L,正常对照组为(59±17)U/L和(135±12)U/L,Caspase- 12 mRNA表达仍增加,Caspase-12蛋白表达量继续降低;9h 肝细胞坏死明显,伴散在凋亡细胞,ALT、AST水平明显下降,Caspase-12 mRNA表达较7 h下降。Bip/GRP78蛋自表达从5 h开始,至7 h逐渐增加。结论D-Gal/LPS诱导小鼠急性肝功能衰竭早期Caspase-12 mRNA表达水平逐渐升高,后期(7-9 h)降低,与肝细胞凋亡发生的时相一致;Caspase-12蛋白酶因内质网应激而被大量活化,提示Caspase-12介导的内质网应激肝细胞凋亡参与炎症性急性肝功能衰竭的发生发展,是急性肝功能衰竭中肝细胞损伤的重要机制之一,提示早期干预Caspase-12表达及活化对急性肝功能衰竭可能具有保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠肝细胞线粒体自噬的影响

目的在非酒精性脂肪性肝炎模型小鼠中探索N-乙酰半胱氨酸(NAC)对肝细胞线粒体自噬的影响。方法C57BL/J6小鼠分别给予16周的正常饮食、高脂高糖(HFCD)饮食和HFCD+NAC饮食。比较HE和Masson染色、ALT、AST、IL-1β、肝组织甘油三酯水平评价小鼠肝损伤。通过免疫荧光染色观察线粒体自噬。比较3组小鼠肝组织内线粒体自噬标志物在mRNA和蛋白水平的变化。结果HFCD组小鼠较对照组ALT[(24.9±2.12)比(176.7±44.32)U/L,P<0.05]、AST[(76.7±9.06)比(291.3±39.66)U/L,P<0.05]、IL-1β[(2.94±0.08)比(9.12±1.21),P<0.05]显著升高,HFCD+NAC组较HFCD组肝功能好转,IL-1β降低[(9.12±1.21)比(6.77±0.58)ng/L,P<0.05]。HFCD组小鼠肝组织内Parkin、PINK1表达降低,同时LC3B II/I比值降低,P62表达量增高。提示HFCD组小鼠肝细胞线粒体自噬水平降低。HFCD+NAC组较HFCD组线粒体自噬水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论NAC可能通过改善肝细胞线粒体自噬,进而减轻肝细胞炎症进展。     

丹参酮Ⅰ在肝缺血再灌注损伤小鼠模型中的保护作用

目的探讨丹参酮Ⅰ(T-Ⅰ)在小鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)模型中的保护作用。方法C57BL/6J小鼠36只随机分为假手术(sham)组(n=6)、缺血再灌注(IR)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(5 mg/kg)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(10 mg/kg)组(n=6)、IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组(n=6)和IR+T-Ⅰ(40 mg/kg)组(n=6),各组均腹腔注射给药,sham组与IR组注射等量溶剂橄榄油,IR+T-Ⅰ组每日给药1次,连续给药7 d,末次给药2 h后建立70%的HIRI模型,再灌注6 h后收集血清及肝脏标本;试剂盒检测血清ALT、AST水平,检测肝组织内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、Caspase-3及还原型谷胱甘肽(GSH)指标;HE染色观察肝组织病理情况,TUNEL法检测肝细胞凋亡水平,免疫组化检测Caspase-3、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的血清ALT[(192.48±23.67)U/L]、AST[(123.19±9.16)U/L]较IR组[ALT:(336.90±41.52)U/L,AST:(206.90±18.81)U/L]均显著下降(P值均<0.01),确定了20 mg/kg为最佳浓度;与IR组[MDA:(3.48±0.95)μmol/mg;Caspase-3:(1.04±0.35)μmol/mg;SOD:(160.29±27.37)U/mg;GSH:(1.03±0.42)μmol/mg]比较,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的MDA[(1.34±0.21)μmol/mg]、Caspase-3[(0.69±0.97)μmol/mg]均显著降低(P值均<0.05),而SOD[(274.47±30.53)U/mg]及GSH[(2.12±0.27)μmol/mg]均明显升高(P值均<0.05);HE染色显示,IR组肝小叶结构紊乱,肝细胞灶性或大面积变性坏死;与IR组相比,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组肝细胞坏死面积减小,肝组织结构基本完整;免疫组化结果显示,与IR组比较,IR+T-Ⅰ(20 mg/kg)组的小鼠肝细胞凋亡数目明显减少,Caspase-3蛋白表达明显减少,HO-1蛋白表达明显增加。结论T-Ⅰ通过抑制肝脏氧化应激反应和肝细胞凋亡对小鼠HIRI中起到保护作用。     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响

目的探讨冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法取150只小鼠,随机分成5组,每组30只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平。结果模型组小鼠48 h存活率为0.0%(0/30),而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5%(19/30)和80.6%(24/30,P0.01);组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为(345.3±54.1)U/L和(500.2±53.5)U/L,明显高于对照组的[(42.3±0.6)U/L和(117.1±9.8)U/L,P0.01],两个Oridonin干预组分别为(303.9±39.5)U/L和(340.6±2.8)U/L及[(130.2±38.3)U/L和(209.8±36.2)U/L,P0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著高于正常对照组(P0.01),而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著低于模型组(P0.01)。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

组蛋白乙酰化酶抑制剂(DCH36_06)对小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的探讨P300/CBP组蛋白乙酰化酶抑制剂DCH36_06对LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法 75只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常对照组20只、ALI模型组20只、药物干预组20只和药物对照组15只,分别予腹腔注射0.9%氯化钠溶液、LPS/D-Gal、LPS/D-Gal+DCH36_06和DCH36_06处理。前3组小鼠于LPS/D-Gal刺激4 h后每组各处死5只,采集小鼠血清和肝组织,检测肝功能指标并进行HE、TUNEL染色评估肝组织病理学变化和肝细胞凋亡。RT-PCR和ELISA检测肝组织中促炎细胞因子的表达水平。余小鼠继续饲养至24 h,以观察各组小鼠24 h生存率。结果急性肝损伤模型组15只小鼠24 h存活6只,DCH36_06药物干预组15只小鼠24 h存活13只。LPS/D-Gal诱导4 h后模型组肝组织中可见显著肝细胞变性坏死,炎症细胞浸润并见散在肝细胞凋亡,与模型组相比,干预组小鼠肝组织坏死性炎症及凋亡均明显减轻。干预组小鼠血清AST、ALT和TBil水平分别为(281.4±48.1)U/L、(175.2±32.5)U/L和(9.8±0.7)μmol/L,模型组小鼠分别为(1151.0±111.1)U/L、(921.5±47.9)U/L和(21.0±0.4)μmol/L差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR和ELISA检测结果显示,与模型组肝组织中促炎细胞因子TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA(72.0±9.3、91.4±4.6、175.5±19.6)及蛋白表达量[(25.9±2.3)pg/mL、(816.5±60.8)pg/mL、(305.6±20.1)pg/mL]相比,干预组肝组织内促炎细胞因子TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA(15.4±0.2、6.0±1.6、21.5±0.9)及蛋白表达量[(7.9±1.2)pg/mL、(211.4±22.4)pg/mL、(53.2±7.3)pg/mL]均显著下调(P0.05)。结论 DCH36_06对LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用,其机制可能与下调肝内促炎细胞因子表达,减轻肝组织炎性损伤相关。     

BET选择性抑制剂38号化合物对急性肝损伤小鼠保护作用研究*

目的 探讨溴域和末端外结构域(BET)选择性抑制剂38号化合物对CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其机制。方法 使用脂多糖(LPS)刺激Raw264.7巨噬细胞,诱导急性细胞炎症模型,设对照组、LPS处理组和LPS与38号化合物共培养组,提取细胞RNA,采用RT-qPCR法检测炎症相关细胞因子mRNA水平。构建CCl₄诱导的ALI模型,将24只小鼠随机分为对照组、模型组和药物干预组。采用免疫组化法检测肝组织抗F4/80 和抗Ly-6G阳性细胞。结果 LPS刺激细胞模型组IL-1βmRNA水平为(23246.0±1185.0),显著高于对照组【(1.1±0.1),P＜0.05】,细胞IL-6 mRNA水平为(7740.0±322.2),显著高于对照组【(1.1±0.4),P＜0.05】,TNF-αmRNA水平为(132.2±2.7),显著高于对照组【(1.0±0),P＜0.05】,而38号化合物干预处理后细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平均显著降低,在80 nM处理组分别为(2409.0±147.6)、(66.0±2.1)和(36.7±1),在40 nM处理组分别为(4790.0±206.4)、(314.1±10.7)和(47.0±1.5),在20 nM处理组分别为(10079.0±500.3)、(1112.0±22.0)和(73.0±1.8),在10 nM处理组分别为[(13794.0±1025.0)、(2576.0±46.3)和(96.8±7.2),P＜0.05],呈现浓度依赖性;ALI小鼠血清ALT和AST水平分别为(8281.0±2710.0)U/L和(5330.0±2435.0)U/L,显著高于对照组[分别为(51.5±7.0)U/L和(215.3±12.4)U/L,P＜0.05],而干预组分别为(3634.0±713.9.0) U/L和(2876.0±667.1)U/L,较模型组显著降低(P＜0.05);ALI小鼠模型肝组织结构紊乱,炎症反应明显,肝细胞大片坏死,大量的炎症细胞聚集,而药物干预组上述病理学变化均较模型组减轻。结论 BET选择性抑制剂38号化合物能减轻由CCl₄诱导的小鼠急性肝损伤,改善肝功能和肝组织结构的破坏,对小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能与抑制了炎症相关的细胞因子表达,从而减少了炎症细胞的聚集有关。     

不同途径移植骨髓间充质千细胞治疗肝硬化小鼠的效果比较

目的 评价经不同途径移植骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗小鼠肝硬化的效果差异.方法 46只BALB/c小鼠随机分为正常对照组5只和肝硬化模型组41只.用CC14橄榄油皮下注射构建小鼠肝硬化模型,选取肝硬化小鼠36只,随机分为对照组、尾静脉移植组、脾内移植组,每组各12只.以全骨髓贴壁法获得第3代BMSC,通过流式细胞分析术行细胞表面鉴定,选取尾静脉及脾脏注射至肝硬化小鼠体内.移植后4周分别取血检测肝功能,取肝组织切片进行HE、Masson染色及α平滑肌肌动蛋白(αSMA)免疫组化检查,检测小鼠肝细胞组织损伤和纤维化情况.组间比较采用单因素方差分析.结果 造模8周后,模型组小鼠毛发变稀,色泽暗黄,摄食减少,活动减少,体质量下降.细胞移植后,脾内移植和尾静脉移植组小鼠AIb较对照组明显升高[(29.05±3.41) g/L vs (21.03±2.18) g/L,(29.46±3.25) g/Lvs (21.03±2.18) g/L],ALT、AST明显降低[(170.67±32.72)U/L vs(254.58±47.93)U/L,(166.58±28.24) U/L vs (254.58±41.93) U/L;(202.17±31.58) U/L vs (293.08±35.23) U/L,(186.50±33.13)U/L vs(293.08±35.23) U/L],差异均有统计学意义(P值均＜0.01);两移植途径间比较差异均无统计学意义(P值均＞0.05);组织病理改变显著,两移植组小鼠肝硬化程度减轻,胶原纤维及坏死面积减少,组织结构好,与对照组比较,肝脏胶原面积比值显著降低[(14.36±2.21)％ vs (26.38 s0.82)％,(10.88±1.27)％vs(26.38±0.82)％](P值均＜0.01).免疫组化染色提示两移植组的αSMA阳性表达细胞数较对照组均明显下降(14.40±1.69)％ vs (25.6±0.73)％,(9.97±1.46)％ vs(25.60±0.73)％](P值均＜0.01).结论 经两种途径移植BMSC对肝硬化小鼠肝功能、病理组织学等方面均有改善,二者效果相似.     

C6orf120基因敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响

目的 探讨功能未知基因C6orf120缺失对刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)大鼠中性粒细胞和巨噬细胞的影响.方法 抽取野生型(wild type,WT)大鼠和C6orf120基因敲除型(C6orf120-/-)大鼠各24只,随机...     

匹伐他汀对冠心病合并非酒精性脂肪肝患者肝功能的影响

目的:观察匹伐他汀对肝功能正常冠心病(CHD)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者肝功能的影响。方法:选择我院CHD合并NAFLD且肝功能正常的患者205例为CHD+NAFLD组,根据NAFLD严重程度患者被分为轻度组87例、中度组64例、重度组54例,另选择同期在我院就诊的单纯CHD患者70例(CHD组)作为对照。四组均在常规治疗的基础上给予匹伐他汀治疗,治疗15d。观察四组治疗前后血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)水平和严重肝功能损害发生率。结果:治疗后CHD组、CHD+NAFLD轻、中、重度组血清ALT、AST、γ-GT水平均显著升高(P均=0.001),且四组治疗后ALT[(45.89±11.36)U/L比(46.92±12.67)U/L比(46.35±11.95)U/L比(47.32±14.06)U/L]、AST[(46.32±12.13)U/L比(48.54±13.49)U/L比(47.63±12.57)U/L比(48.66±13.54)U/L]、γ-GT[(58.49±14.86)U/L比(57.62±11.38)U/L比(57.92±10.51)U/L比(58.52±13.8)U/L]水平及严重肝功能损害发生率(2.90%比3.57%比1.61%比3.92%)相比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论:与单纯CHD患者比较,匹伐他汀用于肝功能正常CHD联合NAFLD患者未增加肝功能损害,具有良好的临床安全性。     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌Caspase-3活性的影响

目的：观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Caspase（半胱氨酸天冬氨酸酶）-3活性的影响。方法：选择高血脂SD大鼠48只,随机分为3组：假手术组（开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线）、缺血再灌注组（收紧结扎线缺血40min,放松结扎线再灌注240min）、缺血后处理组（缺血40min后,再灌注10s,缺血10s,连续3个循环,然后再灌注240min）,每组16只。再灌注结束后自右颈动脉采血,测定血清肌酸激酶（CK）活性,再灌注心肌凋亡程度,及Caspase-3活性,并进行比较分析。结果：再灌注结束后,①缺血后处理组和缺血再灌注组CK活性明显高于假手术组[（745.26±62.18）U/L比（926.38±76.49）U/L比（237.67±21.82）U/L],缺血后处理组明显低于缺血再灌注组（P均〈0.05）;②心肌凋亡细胞计数：假手术组未见明显细胞凋亡（〈5%）,缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组[（11.7±2.6）%比（20.8±3.4）%,P〈0.05];③缺血后处理组缺血区心肌组织Caspase-3活性明显低于缺血再灌注组[（545.79±98.25）μmol PNA/mg比（739.83±113.57）μmol PNA/mg,P〈0.01]。结论：缺血后处理可以减轻高血脂大鼠缺血再灌注损伤,其心肌保护作用可能与降低Caspase-3活性有关。     

榭皮黄酮通过抑制Traf6/NF-κB信号转导通路增强5-氟尿嘧啶对HepG2的化疗作用

目的 研究榭皮黄酮（quercetin,Qu）影响肝癌细胞HepG2对5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）的敏感性及Traf6/NF-κB信号转导通路。方法 体外培养HepG2细胞,取对数期细胞进行后续实验,将细胞分为对照组（不含任何药物的培养基孵育细胞24 h）、单独Qu组（含40μg/ml Qu的培养基孵育细胞24 h）、单独5-FU组（含50μmol/L 5-FU的培养基孵育细胞24 h）、Qu+5-FU联合处理组（含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同孵育细胞24 h）、单独Traf6抑制剂C25-140组（2μmol/L C25-140的培养基孵育细胞8 h）、C25-140+Qu+5-FU组（C25-140预处理细胞8 h,然后含40μg/ml Qu和50μmol/L 5-FU的培养基共同处理细胞24 h）。采用CCK8法检测细胞活力,采用倒置显微镜记录细胞克隆数,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot检测剪切的半胱氨酸蛋白酶-7(cleaved-caspase 7,Cle-caspase 7)、Clecaspa...     

Role of cathepsin B-mediated apoptosis in fulminant hepatic failure in mice

AIM: To investigate the pathogenic role of cathepsin B and the protective effect of a cathepsin B inhibitor (CA-074Me) in fulminant hepatic failure in mice.METHODS: LPS/D-Gal N was injected into mice of the model group to induce fulminant hepatic failure;the protected group was administered CA-074me for 30 min before LPS/D-Gal N treatment; the normal group was given isochoric physiologic saline. Liver tissue histopathology was determined with HE at 2,4, 6 and 8 h after Lps/D-Gal injection. Hepatocyte apoptosis was examined by TUNEL method. The expression of cathepsin B in liver tissues was investigated by immunohistochemistry, Western blot and RT-PCR.RESULTS: Compared with the normal group, massive typical hepatocyte apoptosis occurred in the model group; the number of apoptotic cells reached a maximum 6 h after injection. The apoptosis index (AI) in the protected group was clearly reduced (30.4$$$$markedly increased in drug-treated mice compared with the normal group ( P < 0.01). Incubation with LPS/D-Gal N at selected time points resulted in a timedependent increase in cathepsin B activity, and reached a maximum by 8 h. The expression of cathepsin B was significantly decreased in the protected group ( P <0.01).CONCLUSION: Cathepsin B plays an essential role in the pathogenesis of fulminant hepatic failure, and the cathepsin B inhibitor CA-074me can attenuate apoptosis and liver injury.     

整蛋白型肠内营养对老年肝硬化患者营养指标、NRS2002评分、肝功能及并发症的影响

目的 探讨整蛋白型肠内营养对老年肝硬化患者营养指标、NRS2002评分、肝功能及并发症的影响.方法 选取2015年3月至2019年3月文昌市人民医院收治的148例老年肝硬化患者为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组74例.对照组进行常规饮食,观察组在常规饮食的基础上加用整蛋白型肠内营养剂,两组连续干预6个...     

Urotensin Ⅱ在急性肝衰竭小鼠肝组织中的表达及损伤作用

目的:探讨Urotensin Ⅱ(UⅡ)在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝组织中的表达及损伤作用.方法:♂Balb/c小鼠随机分成4组(每组6只):正常对照组(A组)、预处理对照组(B组)、模型组(C组)和预处理模型组(D组).模型动物以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射,预处理动物在造模前30min,用UⅡ受体拮抗剂Urantide0.6mg/kg尾静脉注射.LPS/D-GalN攻击12h后,采集血清和肝组织标本,并观察24h小鼠存活情况;采用Reitman-Frankel法检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino-transferase,AST)活性水平;采用HE染色显微镜观察肝组织损伤程度;RT-PCR法检测UⅡ及其受体UTmRNA的表达;ELISA法检测血清UⅡ多肽分泌水平;免疫组织化学方法检测肝组织UⅡ多肽及其UT受体蛋白质表达.结果:C组小鼠死亡率为66.7%,A、B和D组所有动物均存活;LPS/D-GalN攻击引起C和D组小鼠血清ALT和AST水平显著升高(P<0.01),而D组较C组显著降低(2271.09U/L±102.24U/Lvs1160.67U/L±258.32U/L,1569.42U/L±204.04U/Lvs1030.31U/L±108.09U/L,P<0.01);C组小鼠肝组织结构破坏明显,见大片出血性坏死及炎症表现,D组肝组织结构保持完整,仅有局灶性出血坏死,炎症明显减轻;C和D组小鼠血清UⅡ多肽水平较A和B组高(P<0.01),但D组较C组明显降低(3.73g/L±0.52g/Lvs1.90g/L±0.27g/L,P<0.01);LPS/D-GalN诱导了C和D组小鼠肝组织UⅡ和UT的mRNA及蛋白质高水平表达,而D组的表达水平较C组显著降低(P<0.01).结论:LPS/D-GalN可诱导ALF小鼠肝组织表达和分泌UⅡ,并促进肝组织UT受体的表达;UⅡ的表达与分泌可能存在正反馈调控机制;UⅡ/UT受体介导了LPS/D-GalN诱导的ALF的发生.     

硫辛酰胺对db/db小鼠肝损伤的保护作用研究

目的观察硫辛酰胺(ALM)对db/db小鼠肝损伤的保护作用及可能机制。方法db/db小鼠随机分为糖尿病组(DM)和ALM组,C57BL/6J小鼠为正常对照组(NC),每组各6只。ALM组于第9周时予ALM[100 mg/(kg·d)]进行灌胃干预,干预8周后处死小鼠,检测生化指标及肝组织谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醇(MDA)表达量,油红O、HE染色观察肝脏病理学改变,Western blot法检测肝组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白水平。结果与NC组比较,DM组体重、TG、TC、FBG升高,MDA含量升高[(0.73±0.04)vs(0.92±0.17)nmol/mg,P<0.05],CAT活性降低[(1.08±0.18)vs(0.52±0.14)U/mg,P<0.05],ALT、AST活性升高[(16.85±3.84)vs(22.42±4.56)U/g,(6.07±1.91)vs(8.19±1.51)U/g,P<0.05],Nrf2、HO-1的表达升高[(0.33±0.25)vs(1.81±0.34),(0.29±0.13)vs(1.25±0.19),P<0.05]。与DM组比较,ALM组体重、TG、TC降低,MDA降低[(0.92±0.17)vs(0.56±0.11)nmol/mg,P<0.05],CAT活性升高[(0.52±0.14)vs(0.91±0.20)U/mg,P<0.05],ALT、AST活性降低[(22.42±4.56)vs(17.08±5.08)U/g,(8.19±1.51)vs(5.10±0.46)U/g,P<0.05],Nrf2、HO-1表达降低[(1.81±0.34)vs(1.01±0.30),(1.25±0.19)vs(0.52±0.17),P<0.05]。结论ALM可抑制T2DM小鼠肝损伤的发生发展,其机制可能是通过改善肝组织脂质沉积、抑制氧化应激,调节Nrf2、HO-1蛋白表达以实现。     

合并非酒精性脂肪性肝病对恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者抗病毒疗效的影响

目的 探讨合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒治疗疗效的影响.方法 2015年1月～2019年1月我院诊治的HBeAg阳性的初治的CHB患者289例,其中合并NAFLD患者102例,未合并NAFLD患者187例.给予所有患者恩替卡韦治疗,观察96 w.结果 合并NAFLD患者体质指数为...