乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA

HBV共价闭合环状脱氧核糖核酸（cccDNA）是嗜肝 DNA病毒基因组的复制中间体,是嗜肝 DNA 病毒部分基因的mRNA和前基因组 RNA的合成模板,在 HBV感染初期即能检测到,且长期存在于细胞核中。其在 HBV 复制过程中起着关键的作用,它的长期存在也是乙型病毒性肝炎慢性化的主要原因之一。HBV cccDNA肝细胞中持续感染及抗病毒治疗复发之间的关系受到广泛的关注与肯定,现就 HBV cccDNA 常用检测方法及其临床意义作一综述。     

乙型肝炎病毒cccDNA研究动态

乙型肝炎病毒（HBV）生命周期中关键的一步是共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA．cccDNA）的形成。HBVcccDNA给病毒复制和前基因组mRNA的合成提供模板，与HBV在肝细胞中的持续感染及抗病毒治疗的复发有重要关系。本文就有关HBV cccDNA的研究现状作如下综述。     

乙肝病毒cccDNA的研究进展

乙型肝炎病毒基因组为双链松弛环状DNA(rcDNA)。HBV感染发生后,HBVDNA进入细胞,rcDNA转化为共价闭合环状DNA(cccDNA),并以cccDNA为模板开始一系列的病毒复制过程。HBV复制是一种保守的机制,在转录后模板cccDNA仍然完整,并且可反复转录,所以cccDNA是嗜肝病毒持续感染的关键因素,     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立及应用

HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)主要位于受感染的肝细胞核内,微量HBV cccDNA在肝细胞内的持续存在,是导致HBV持续感染、抗病毒药物停用后乙型肝炎复发的主要原因[1].本研究旨在建立一种特异性较强、灵敏度较高、重复性较好的荧光定量PCR方法,真正实现对血清HBVcccDNA的检测.     

乙型肝炎病毒感染的肝癌患者肝组织中乙型肝炎病毒cccDNA的检测

HBV属嗜肝DNA病毒家族,其基因组是双链松弛环状DNA(rcDNA),相对分子量为(1.6～2.0)×109,全长约为3.2 kb。在HBV的生命周期中,共价闭合环状DNA (cccDNA)是HBV的原始复制模板,对HBV的复制及感染状态的建立具有十分重要的意义。清除HBV cccDNA是目前抗HBV药物研究的一个重要目标。我们对天津市第三中心医院收治的20例HBV感染的肝癌患者肝组织(包括癌     

外周血单核细胞中HBV cccDNA检测的意义及进展

HBV在复制过程中存在着共价闭合环状DNA(cccDNA)形式,cccDNA是HBV复制的原始模板,是HBV持续感染的主要原因,也是HBV一个重要生物活性指标。HBV是嗜肝病毒,但可能存在肝外感染,有研究表明,外周血单核细胞(PBMC)中可以检测到HBV cccDNA。归纳了PBMC中HBV cccDNA在乙型肝炎患者肝移植术后及抗病毒治疗后HBV复发、HBV母婴传播中的预测作用,以及其参与HBV肝外感染的可能机制。由此可见,PBMC HBV cccDNA在HBV的治疗及研究中有重要意义。     

外周血单核细胞HBV cccDNA水平与乙型肝炎抗病毒疗效

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）,是HBV前基因组RNA复制的原始合成模板,cccDNA的存在是病毒复制及感染得以维持的根源。本研究对10例CHB患者进行外周血单核细胞HBV cccDNA定量分析,同时检测血清HBV DNA水平,探讨外周血HBV DNA阴转、HBeAg脏清学转换与肝组织cccDNA水平的关系,为临床寻求一种简易有效的监测方法。     

抗乙型肝炎病毒治疗的近况

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA病毒,感染肝细胞后松弛型部分双链环状基因组DNA进入细胞核内变成共价闭环DNA(cccDNA),并以后者的负链为模板转录为mRNA,再以此mRNA为模板逆转录为DNA。这种独特的细胞内复制方式决     

肝组织乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA定量与拉米夫定、阿德福韦疗程的关系

细胞外HBV DNA是一种松弛环状的双链DNA(rcDNA)分子,其两条链均不闭合.HBV共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)是一种不断折叠而形成的超螺旋结构DNA分子,是嗜肝病毒持续感染的关键因素 ~[1].在乙型肝炎(乙肝)抗病毒治疗过程中,单纯依靠监测外周血HBV DNA远不够.本研究对治疗前、治疗过程中乙肝患者进行肝组织活检,定量分析肝组织中HBV cccDNA,同时检测肝组织及血清HBV DNA,探讨其相互关系,为临床选择抗病毒治疗方案、确定治疗终点等提供理论依据.     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA YMDD位点基因序列自然变异的检测与分析

HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)是病毒转录和复制的原始模板,并能长期稳定地存在于被感染的肝细胞核内.目前,抗病毒治疗难以完全将其清除,寻找细胞核内早期出现的耐药变异cccDNA,可为初始联合抗病毒治疗策略提供关键证据,从而降低发生耐药的可能.本研究应用套式PCR结合直接测序法检测85例未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者肝内HBV cccDNA的YMDD位点,并对YMDD变异株进行克隆分析,了解变异株所占的比例.并用同样方法检测血清及肝组织HBV松弛环状DNA (relaxed circular DNA,rcDNA)的YMDD位点,探讨其与cccDNA变异的关系.     

乙型肝炎病毒cccDNA定量与乙型肝炎临床及病理关系

目的探讨慢性乙型肝炎（CHB）肝组织HBVcccDNA定量与乙型肝炎的关系。方法分别采用荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测48例CHB肝组织HBVcccDNA定量、肝组织和血清HB VDNA定量、乙型肝炎病毒标志物。同时用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法（SP）检测肝细胞中HBcAg表达。分析肝组织HBVcccDNA与组织和血清HBV DNA、HBeAg、肝细胞内HBcAg水平及肝脏炎症活动度的关系.结果1．肝组织HBVcccDNA定量与组织和血清HBV DNA定量呈正相关（r=0．837，P〈0．001；r=0．627，P〈0．005）；2．肝组织HBV cccDNA定量与肝细胞内HBcAg半定量呈正相关（r=0．618，P〈0．005）；3．肝组织HBV cccDNA定量与肝脏炎症活动度尤明显相关（P〉0．05）：4．HBeAg阳性较抗-HBe阳性患者肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量高（P〈0．05）。结论荧光定量PCR法检测肝组织HBV cccDNA定量是评价HBV复制最直接可靠的指标，在CHB的诊断和抗病毒治疗中有重要意义。但与肝组织炎症无明显相关。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测

目的优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法,并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的分布情况。方法标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10~7拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBV DNA和cccDNA。结果10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到10~3拷贝/mL。所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBV DNA和cccDNA检测均阳性,总HBV DNA含量为3．19×10~2～6．69×10~7拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7．32×10~0～6．51×10~6拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBV DNA含量是cccDNA含量的10．7倍至9．2×10~5倍。结论本方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。     

应用巢式-实时定量PCR方法检测慢性乙型肝炎患者PBMC中HBV cccDNA

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）是HBV复制的原始模板,是HBV持续感染的关键因素。外周血单核细胞（PBMc）中HBV cccDNA的存在状态及动态变化成为研究HBV肝外分布及复制问题的热点。诸多研究证实,PBMC中存在HBVDNA,但是否存在HBV复制模板HBV cccDNA及复制过程,却有不同意见。     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的扩增与清除动力学

HBV基因组是一种松弛环状的双链DNA(relaxed circular DNA,rcDNA)分子,其两条链均不闭合,在病毒的复制过程中,病毒DNA进入宿主细胞核,两条链的缺口被补齐,形成超螺旋的共价闭合环状DNA(covalently dosed circular DNA,cccDNA).cccDNA是HBV在肝内进行复制的原始模板,虽然其含量较少,但对病毒在宿主细胞内感染状态的建立以及维持病毒在细胞内的复制过程具有十分重要的意义.     

抗乙型肝炎病毒治疗的近况

乙型肝炎病毒(HBV)是一种嗜肝DNA病毒,感染肝细胞后松弛型部分双链环状基因组DNA进入细胞核内变成共价闭环DNA(cccDNA),并以后者的负链为模板转录为mRNA,再以此mRNA为模板逆转录为DNA。这种独特的细胞内复制方式决定了其治疗的困难性。近年来国内外在应用生物反应调节剂(如干扰素α和胸腺肽α1)和直接抗病毒药物(各种核苷     

慢性乙型肝炎抗病毒耐药及其处理

乙型肝炎病毒(HBV)是一种DNA病毒,它通过逆转录在肝细胞中进行复制.HBV感染肝细胞后,附着在肝细胞上,然后穿透肝细胞,进入细胞核,形成共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),宿主RNA聚合酶Ⅱ以cccDNA为模板,转录出长短不一的mRNA,进入细胞质.     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA荧光定量聚合酶链反应法的建立及应用

乙型肝炎病毒（HBV）共价闭合环状DNA（cccDNA）是HBV基因组复制中间体mRNA和前基因组RNA的合成模板，是HBV持续感染的关键。近期研究表明，cccDNA也是抗病毒治疗结束后乙型肝炎复发的主要原因。本研究旨在建立和应用荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测慢性乙型肝炎患者血清HBV cccDNA水平。     

HBV感染恢复期血清标志物与肝细胞HBV cccDNA检测对照

目的:了解肝组织乙肝病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸(HBV cccDNA)与血清HBV复制指标的关系,以探索判定抗HBV的疗程终结点的观察方法。方法:既往HBV感染者、乙型肝炎肝硬化肝癌及慢性乙型肝炎(CHB)患者各13例,将血清HBV DNA、HBV-M及肝组织HBV cccDNA检测结果进行对照。结果:肝硬化肝癌及CHB患者抗-HBe阳性分别为12例和9例,血HBV DNA阳性分别为6例和8例,肝细胞HBV cccDNA均阳性;既往HBV感染13例中,HBsAg阴性,抗-HBs和/或抗HBc阳性各7和6例,有3例肝细胞中HBV cccDNA阳性。抗-HBs阳性的7例肝细胞HBV cccDNA阴性,抗-HBe阳性及抗HBs合并抗-HBe阳性者,肝细胞HBV cccDNA分别为105拷贝/ml和103拷贝/ml,与抗-HBs阳性组对照,t=4.5、4.0(P均<0.01),差异有非常显著性意义。CHB患者核苷类治疗后全应答,肝组织HBV cccDNA仍均为阳性。结论:抗-HBs阳性HBV感染后恢复期血清,肝组织HBV cccDNA阳性比率明显低于CHB抗HBe阳性HBV DNA阴性病例。抗病毒治疗CHB的终点,应是血清抗-HBs阳性的出现。     

慢性HBV感染患者不同阶段的表面抗原定量检测及其与病毒载量的相关性

HBsAg是HBV感染患者体内最先出现的HBV相关蛋白,血清HBsAg定性检测阳性是HBV现症感染的标志.最近,血清HBsAg定量检测的临床意义引起学界广泛的关注,原因是HBsAg水平可反映肝内共价闭合环状DNA(cccDNA)的水平.在聚乙二醇干扰素(peg-IFN)治疗过程中,HBsAg水平对慢性乙型肝炎(CHB)患者的持续病毒学应答有较好的预测价值[1-2].然而,在慢性HBV感染的自然病程中,病毒、肝细胞和宿主免疫系统之间存在长期持续的相互作用,病毒复制与HBsAg的合成是一个动态变化的过程.     

慢性乙型肝炎治疗中的困惑

全球有近3.5亿HBV携带者,其中每年有约50万～100万例死于HBV相关性感染.慢性乙型肝炎的治疗目标是阻断炎症进展、预防肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌,达到这一目标须在出现不可逆的肝损害之前就能彻底清除HBV.可是,由于肝外HBV的存在、HBV DNA可能与宿主基因组整合以及共价闭合环状DNA(cccDNA)的存在,因此治疗停止后常伴随病毒复制而病情迅速反弹[1].