蛋白激酶 C信号通道在阻塞性黄疸肝损害发生发展中的作用

目的 探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机理。方法（1）采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞，行原代培养，用蛋白激酶C（PKC）激动剂帕斯酶埃（PMA）、拮抗剂切勒埃（cheleryhrine)作用于肝细胞，再用50μmol/L甘氨鹅脱氧胆酸钠（GCDC）作用后行流行细胞术（FCM）及用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT)介导的脱氧核苷酸（dUTP)缺口末端标记技术（TUNEL）检测肝细胞凋亡情况。（2）分别于结扎大鼠胆总管后3d、7d、14d及21d处死大鼠，用TUNEL技术及免疫组织化学方法检测阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及PKC蛋白的表达。结果（1）随PMA浓度的增加，肝细胞的凋亡明显增加，随Chelerythrine的增加，肝细胞的凋亡明显减少。（2）大鼠胆总管结扎后随结扎时间的延长细胞凋亡指数（AI）增加，结扎14d后AI达高峰。PKC蛋白表达越强，AI就越高。结论 蛋白激酶C信号通道参与了阻塞性黄疸肝细胞凋亡的调节，并在阻塞性黄疸肝损害的发生和发展中起重要作用。     

阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡及蛋白激酶C信号通道的调控作用

目的探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机制。方法采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞，行原代培养，用蛋白激酶(PK)C激动剂帕斯酶埃(PMA)、拮抗剂切勒斯埃作用于肝细胞，再用50μmol／L甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用后行流式细胞术(FCM)及用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸(duTP)缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况。结扎大鼠胆总管后3、7、14、21d处死大鼠，用TUNEL技术及免疫组织化学方法检测阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及PKC蛋白的表达。结果随PMA浓度的增加，肝细胞的凋亡明显增加。随Chelerythrine的增加，肝细胞的凋亡明显减少。大鼠胆总管结扎后随结扎时间的延长细胞凋亡指数(AI)增加，结扎14d后AI达高峰。PKC表达越强，AI就越高。结论PKC信号通道参与了阻塞性黄疸肝细胞凋亡的调节，并在阻塞性黄疸肝损害的发生和发展中起重要作用。     

蛋白激酶C在阻塞性黄疸肝损伤中的作用及果糖防治机制的研究

目的探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机制。方法采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞，行原代培养。(1)用蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)激动剂PMA、拮抗剂Chelerythrine作用于肝细胞，再用50μmol／L甘氨鹅脱氧胆酸钠(glycochenodeoxycholate，GCDC)作用后行FCM及TUNEL检测肝细胞凋亡情况；(2)使用不同浓度果糖(Fructose)作用于肝细胞，100μmol／L的GCDC作用后行FCM及TUNEL检测；(3)结扎大鼠胆总管，有和无果糖喂养后3d、7d、14d、21d处死大鼠，分别用TUNEL技术及SAN2法检测阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及PKC蛋白的表达。结果(1)随PMA浓度的增加，肝细胞的凋亡明显增加，随Chelerythrine的增加，肝细胞的凋亡明显减少；(2)经果糖作用后，100μmol／L的GCDC致肝细胞的凋亡率明显减少，且随果糖作用浓度的增加肝细胞凋亡率减少；(3)大鼠胆总管结扎后，无果糖作用时，随结扎时间的延长，细胞凋亡指数(AI)增加，结扎14d后AI达高峰，PKC蛋白表达越强，AI就越高。有果糖作用时，PKC蛋白在14d、21d表达较无果糖作用时明显减少，凋亡指数较无果糖作用时均明显减少。结论蛋白激酶C信号通道参与了阻塞性黄疸肝细胞凋亡的调节，并在阻塞性黄疸肝损害的发生和发展中起重要作用。果糖通过抑制PKC的表达在阻塞性黄疸肝损伤中起保护作用。     

阻塞性黄疸大鼠肝组织细胞凋亡及相关基因bcl-2、bax的表达

目的　探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机制。方法　用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测 4 0只阻塞性黄疸大鼠肝脏组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl 2和bax蛋白的表达。结果　胆总管结扎后 ,随结扎时间的延长细胞凋亡增加 ,结扎 14d后细胞凋亡达高峰 ,凋亡指数 (AI)达 5 8.2 3± 1.5 8,各组AI差异有显著性 (P <0 .0 5 )。在阻塞性黄疸过程中 ,bcl 2蛋白表达越强 ,bax蛋白表达越弱 ,AI亦越少。结论　bcl 2和bax蛋白均参与了阻塞性黄疸肝组织中细胞凋亡的调节。     

梗阻性黄疸大鼠胆道引流时机对肝细胞凋亡的影响

目的 探讨不同引流时机对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响.方法用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测阻塞性黄疸大鼠胆道不同时机引流时肝脏组织细胞增殖、凋亡状态及凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达.结果 胆总管结扎后,随结扎时间的延长TBIL、ALP、ALT及细胞凋亡增加,结扎7d后肝细胞凋亡达高峰,14 d、21 d有_卜降趋势,胆道引流后,TBIL、ALP、ALT、凋亡指数(AI)迅速下降,早期引流(3天以前)下降程度明显高于晚期(7天以后),差异有显著性(P＜0.05).在阻塞性黄疽过程中,bax蛋白表达越强,bcl-2蛋白表达越弱,AI亦越高.结论 早期引流有利于改善肝功能、降低肝细胞凋亡率,bcl-2和bax蛋白均参与了阻塞性黄疸肝细胞凋亡的凋节.     

阻塞隆黄疸肝脏中细胞凋亡的初步观察

目的：观察阻塞性黄疸中肝、胆细胞凋亡。方法：结扎Ｗｉｓｔａｒ大鼠胆总管建立阻塞性黄疸模型，运用普通组织学、原位末端标记方法检测阻塞性黄疸不同时间肝、胆细胞凋亡及解除梗阻后细胞凋亡的情况。结果：大鼠胆总管结扎术后３天即可见肝脏细胞凋亡明显增多，早期随着血清胆红素增高，细胞凋亡数量逐渐增加，后期由于纤维组织大量增生，肝细胞凋亡相对减少；解除梗阻后，细胞凋亡逐渐减少，直至正常。结论：细胞凋亡作为细胞死亡     

阻塞性黄疸中肝细胞凋亡及机制的研究

目的：观察阻塞性黄疸中肝细胞凋亡，并进一步探讨其分子机制。方法：结扎Wistar大鼠胆总管建立阻塞性黄疸模型，应用普通组织学、原位末端标记方法检测阻塞性黄疸不同时期肝细胞凋亡，及解除梗阻后病理学和细胞凋亡的变化情况；采用ELISA、生物化学等方法检测血清胆红素、肿瘤坏死因子（TNF）－α、三酰甘油浓度；并应用免疫组化方法检测肝脏转化生长因子（TGF）－β1的表达。结果：大鼠胆总管结扎术后3天，即可见肝胆管扩张，细胞凋亡明显增多，早期随着胆红素升高，肝细胞凋亡数量与之呈正相关，后期纤维组织大量增生，肝细胞凋亡相对减少；解除梗阻后，细胞凋亡逐渐减少，直至正常。结扎胆总管后，其血清TNF－α和三酰甘油值相应增高，肝脏开始表达TGF－β1并逐日增多；解除梗阻后，又逐日减少直至正常。结论：细胞凋亡方式存在于阻塞性黄疸肝脏中，与胆红素、TNF－α、TGF－β1等密切相关。     

阻塞性黄疸肝脏中细胞凋亡的初步观察

目的 :观察阻塞性黄疸中肝、胆细胞凋亡。方法 :结扎 Wistar大鼠胆总管建立阻塞性黄疸模型 ,运用普通组织学、原位末端标记方法检测阻塞性黄疸不同时间肝、胆细胞凋亡及解除梗阻后细胞凋亡的情况。结果 :大鼠胆总管结扎术后 3天即可见肝脏细胞凋亡明显增多 ,早期随着血清胆红素增高 ,细胞凋亡数量逐渐增加 ,后期由于纤维组织大量增生 ,肝细胞凋亡相对减少 ;解除梗阻后 ,细胞凋亡逐渐减少 ,直至正常。结论 :细胞凋亡作为细胞死亡一种方式存在于阻塞性黄疸肝脏中 ,与阻塞性黄疸的病理变化密切相关     

Bcl-2基因在阻塞性黄疸大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的:探讨Bcl-2基因对阻塞性黄疸大鼠肝细胞损害中细胞凋亡的调控作用。方法:采用胶原酶原位肝灌注法获取对照组大鼠肝细胞及阻塞性黄疸实验组术后3、7、14、21d大鼠的肝细胞,分别用RT-PCR检测Bcl-2mRNA的表达。分离对照组及实验组14d组大鼠的肝细胞行原代培养后,使用100μmol/L甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDC)作用于两组肝细胞24h后,用FCM法测定肝细胞的凋亡比率,用TUNEL技术进行肝细胞凋亡的原位检测。结果:(1)对照组大鼠肝细胞无Bcl-2mRNA表达,实验组术后7、14、21d组大鼠肝细胞均有Bcl-2mRNA表达;(2)GCDC作用两组大鼠肝细胞后,实验组比对照组肝细胞凋亡明显减少(P<0.001)。结论:在阻塞性黄疸过程中,大鼠肝细胞通过表达Bcl-2基因是抑制胆盐致肝细胞的凋亡作用的途径之一。     

胆盐诱发肝细胞凋亡及蛋白激酶C信号通道的作用

目的 从细胞凋亡的角度探讨阻塞性黄疸肝损害的调控机理。方法 采用胶原酶原位肝灌注法获取大鼠肝细胞,行原代培养,使用不同浓度甘氨鹅脱氧胆酸钠（ＧＣＤＣ）及蛋白激酶Ｃ激动剂ＰＭＡ,拮抗剂白屈莱赤碱作用肝细胞后,用流式细胞术（ＦＣＭ）分析肝细胞的凋比率,用生物率－ｄＵＴＰ标记的ＴＵＮＥＬ技术进行凋亡的原位检测。结果 随ＧＣＤＣ浓度的增加,肝细胞的凋亡比率明显增加,１５０μＭ ＧＣＤＣ作用后肝细胞的凋亡率     

梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡分析及硒的保护作用

目的 研究梗阻性黄疸（梗黄）大鼠肝脏细胞凋亡的发生发展规律及其机制，以及硒的抗凋亡作用。方法 使用生化和末端脱氧核甘酸介导生物素标记（TUNEL）技术测量不同组别，不同梗黄时间大鼠肝脏的谷胱甘肽过氧化物酶（GPx)活性，活性氧（ROS）水平及凋亡指数（AI），并进行多元分析，结果 胆总管结扎3d后，凋亡细胞开始出现，7d时显著增多，均11d达高峰，14d时有所减少。单纯梗黄组（OJ）ROS水平随时间延长而持续升高，GPx活性则进行性下降，AI与ROS水平变化呈正相关（r=0.95)，于11d时达高峰。硒治疗组呈现相似变化，但各时相点上GPx活性均高于OJ组（P＜0．05）。ROS水平和AI则相反（P＜0．05）。结果表明，ROS促进凋亡的作用最为明显，胆红素和胆汁酸次之。GPx 则表现出显著的凋亡拮抗作用。结论 ROS是梗黄大鼠肝脏细胞凋恨的重要因素。硒对肝细胞凋亡有明显保护作用。     

梗阻性黄疸鼠肝脏血红素氧化酶-1及一氧化碳含量的研究

目的 探讨梗阻性黄疸时肝脏血红素氧化酶-1(HO-1)及血浆中一氧化碳(CO)含量的变化。方法 48只 Wistar 大鼠随机分为 4组:假手术对照组(CG)、梗阻性黄疸 7 d组(7 d)、梗阻性黄疸 14 d组(14 d)和梗阻性黄疸 21 d组(21 d),采用免疫组织化学法对肝细胞中 HO-1表达进行分析,应用双波长分光光度计法测定大鼠肝静脉、门静脉及下腔静脉血浆中CO含量。结果 梗阻性黄疸时 HO-1不仅在 Kupffer细胞中表达,而且在肝实质细胞中呈弥漫性表达上调,14 d组和 21 d组肝实质细胞中HO-1表达均较7 d组增加(P<0.01)。梗阻性黄疸各组肝静脉血浆中CO含量较CG组增高(P<0.05,P<0.01);14 d组门静脉血浆中CO含量升高明显,与CG组比较差异有显著性(P<0.05);梗阻性黄疸各组肝静脉血浆中 CO含量与同时间组门静脉血浆中 CO含量相比均显著升高(P<0.01)。梗阻性黄疸各时间组肝静脉CO含量的增高与肝实质细胞中HO-1表达的变化呈显著正相关(P<0.01)。结论 梗阻性黄疸时肝细胞HO-1表达上调致CO产生增多,从而有助于增加肝血流量并减少肝脏功能损害。     

An improved rat model of obstructive jaundice and its reversal by internal and external drainage.

BACKGROUND: A simple and reproducible rat model that allows studies of the reversal of obstructive jaundice (OJ) by internal (ID) and external (ED) drainage is not available at present. METHODS: OJ was induced in rats by double ligation and division of the common bile duct. To minimize tissue handling and dissection the duodenum was extracted with a ophthalmic muscle hook and the common bile duct isolated using very fine forceps. One week after bile duct ligation, ID was accomplished by implanting a length of infant feeding tube between the dilated bile duct and the duodenum. ED was achieved by placing a PVC tube into the dilated bile duct and exteriorizing the other end at the nape of the neck. RESULTS: Minimal adhesions were found around the dilated common bile duct, which made relaparotomy for drainage easy. Alanine transaminase, total bilirubin, alkaline phosphatase, and gamma-glutamyltransferase were significantly raised after bile duct ligation. All parameters returned to control levels after ID for 7 days. In the ED group plasma albumin was significantly decreased and alkaline phosphatase remained marginally elevated. CONCLUSIONS: We have developed a simple and reproducible rat model that allows for the study of reversal of OJ by ID or ED. We also demonstrated that ID is superior to ED in reversing impaired liver function in OJ.     

阻塞性黄疸时肠粘膜免疫功能变化的实验研究

阻塞性黄疸(阻黄)病人机体免疫功能受到抑制。本实验目的是研究阻黄时肠粘膜免疫功能的改变。实验包括阻黄组和对照组,采用胆总管结扎制造阻黄模型,以胆汁外引流组作为对照,每组15只动物。制造阻黄模型后2周,取小肠检测肠液中分泌型IgA(S-IgA)浓度、肠粘膜内淋巴细胞体外刺激转化能力、粘膜固有层内淋巴细胞亚群。结果显示:与对照组相比,阻黄鼠肠液S-IgA浓度降低;肠粘膜内淋巴细胞刺激转化能力降低;粘膜固有层内含IgA浆细胞、CD4阳性和CD8阳性淋巴细胞数目减少,差别有显著性(P>0.05)。因此,我们认为阻黄时肠粘膜免疫功能受到明显抑制。     

梗阻性黄疸-选择性胆管外引流大鼠模型的建立

目的建立梗阻性黄疸-选择性胆管外引流（约占30%肝脏体积）动物模型,了解其对胆汁分泌及肝功能改善的影响,为肝门部胆管癌减黄实验及临床研究提供参考。方法采用结扎切断SD大鼠左中叶肝胆管及胆总管预制外引流管10d的方法,制作大鼠选择性胆管外引流模型,在引流的0、1、4、7、10、14d收集胆汁及检测肝功。结果成功建立了大鼠完全梗阻性黄疸部分肝脏外引流的模型并观测到其对胆汁分泌及肝功能改善的影响。结论与梗阻性黄疸全肝外引流模型相比,梗阻性黄疸约30%肝脏外引流能够改善肝功能,而且可以增加预保留肝的功能代偿。     

The Role of Tubuloglomerular Feedback in Acute Impairment of Renal Function in Obstructive Jaundice

Acute renal functional impairment not infrequently accompanies liver dysfunction and, particularly with bile duct obstruction, may be extremely severe. Recent studies suggest that tubuloglomerular feedback (TGF) activated by circulating non-electrolyte factors which occur during liver dysfunction may contribute to the intense renal vasoconstriction thought to be central to the functional renal impairment.

In this study, serum from two patients with obstructive jaundice (OJ) and renal impairment, and from rats with OJ due to bile duct ligation were either dialysed or treated with furosemide, known to block electrolyte-mediated TGF. These sera, when perfused into loops of Henle in rat nephrons, induced a significant fall of 28% in stop-flow pressure, an indirect measure of glomerular capillary pressure thus implying arteriolar vasoconstriction.

These findings are consistent with the hypothesis that circulating, non-electrolyte factors, which stimulate TGF, occur in cases of obstructive jaundice and that these may contribute to the renal impairment.     

雷帕霉素在大鼠梗阻性黄疸模型中对肝脏保护作用的研究

目的：探讨雷帕霉素对大鼠梗阻性黄疸肝脏保护作用的相关研究。方法：采用胆总管结扎方法建立大鼠梗阳性黄疸模型,将54只SD大鼠随机分为假手术组（A）组18只,梗阻性黄疸（B）18只,梗阳性黄疸＋STAT抑制剂雷帕霉素RPM处理组（C）18只。分别于术后1、3、5d处死大鼠,显色基质法测定各组内毒素含量,取肝脏组织测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,RT-PCR测肿瘤坏死因子基因表达。结果：B和C组TNF-α mRNA表达水平均增加,B组较C组内毒素水平含量低,肿瘤坏死因子基因表达水平低,SOD活性相对高,MDA含量低,有显著差异。结论：梗阻性黄疸时TNF-α表达明显升高,通过雷帕霉素干预,肝组织TNF-α 的表达下降,SOD活性增加,MDA含量减少,可防止梗阳性黄疸所致失控性炎症反应性肝损伤。     

内皮素受体拮抗剂PD142893对梗阻性黄疸大鼠并发肾功能损害的影响

目的：了解梗阻性黄疸（obstructive jaundice，OJ）大鼠模型血浆和肾组织内皮素（endothelin，ET）含量变化对肾功能的影响以及应用ET受体拮抗剂PD142893后的变化。方法：假手术组、OJ组及OJ＋药物组共32只Wistar大鼠分别于术后5、10、15和20d（每组n=8）采用放射免疫法测定血浆和肾匀浆的ET含量，同时测定血清TBIL、肌酐清除率，对肾脏行光镜下病理组织形态学观察。结果：在OJ组和OJ＋药物组中血清TBIL含量、血浆和肾组织匀浆中ET含量随梗阻时间延长而明显增加；OJ组在术后5d即表现为肌酐清除率下降，随梗阻时间延长而加重并伴有肾脏病理形态的进行性改变，而OJ＋药物组对比OJ组相应的改变出现的较晚；在非药物治疗组中，肌酐清除率与血浆和肾组织匀浆中ET含量呈负相关。结论：OJ时的高胆红素血症是导致肾功能损害的原因之一，胆色素对肾脏有直接的毒性作用；OJ引起血浆和肾组织中ET的病理性升高，由其介导的多种生物学效应是最终导致肾功能损害的重要原因；肽类非选择性ET受体拮抗剂PD142893对OJ大鼠的肾脏具有保护作用。     

胆汁酸在梗阻性黄疸小鼠肝部分切除术后肝再生中作用的研究

目的：探讨胆汁酸（CA）在梗阻性黄疸（OJ）小鼠肝部分切除术后肝再生中的作用及机制。 方法：180只健康雄性小鼠随机均分为6组,分别行假手术（对照组）、胆总管结扎（OJ组）、胆总管结扎并于7 d加行外引流（ED组）、胆总管结扎+0.2%CA灌胃并7 d后加行外引流（ED+0.2%CA组）、胆总管结扎+1%CA灌胃并于7 d后加行外引流（ED+1%CA组）、胆总管结扎并于7 d后加行内引流（ID组）,各组分别于实验第14天行70%肝切除,且各外引流组改行内引流。检测各组肝切除术后不同时间点肝再生率与肝组织增殖细胞核抗原Ki-67表达、叉状头盒M1b基因（Foxm1b）mRNA相对表达、成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）蛋白表达,并观察部分组肝细胞原位凋亡情况。 结果：除对照组外,肝再生率、肝组织Ki-67阳性表达率、Foxm1b mRNA及FGFR4蛋白表达在其余各组均由高到低依次为：ID组>ED+0.2%CA组>ED组>OJ组>ED+1%CA组,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）;ID组与对照组间各指标差异均无统计学意义（均P>0.05）;肝细胞凋亡率由高到低依次为：ED+1%C组>ED组>ED+0.2%CA组>对照组,组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。 结论：内引流通过减少内源性CA的丢失有利于肝切除后肝再生;外源性低浓度CA可以恢复外引流引起的肝再生障碍,可能与其上调Foxm1b与FGFR4的表达从而促进肝再生有关。