ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响

目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α（ERRα）在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白（GFP）和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞（Ishikawa-空）和ERRα过度表达的（Ishikawa-ERRα）细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用（P〈0.05）。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。     

线粒体DNA突变与子宫内膜癌紫杉醇耐药相关性研究

目的研究线粒体DNA（mtDNA）突变与子宫内膜癌紫杉醇耐药的关系。方法采用紫杉醇（TAX）大剂量冲击方法建立人子宫内膜癌紫杉醇耐药细胞株;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定耐药指数;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期和凋亡率;采用聚合酶链式反应（polymerasechainreaction,PCR）和DNA测序相结合的方法,分析子宫内膜癌细胞株Ishikawa与其耐药株Ishikawa／TAX之间mtDNA的序列突变情况。结果两株细胞中mtDNA的突变热点依次是D-loop区、Cytb基因、ND4基因、ND5基因、Coil基因及ND1基因。但Ishikawa／TAX细胞中mtDNA基因突变次数（72次）明显高于Ishikawa细胞（36次）,两者比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;其突变类型主要是G→A、C→A、缺失A／C和插入C等。结论mtDNA突变可能与子宫内膜癌紫杉醇耐药有关。     

BRD4抑制剂JQ1联合醋酸甲羟孕酮对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1与醋酸甲羟孕酮(MPA)单独或联合作用对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:JQ1与MPA单独或联合作用于孕激素敏感的子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素不敏感的子宫内膜癌HEC-1A细胞。MTT法和流式细胞仪检测药物对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用和凋亡作用。Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、PARP、cleaved PARP及mTOR/Akt通路等相关蛋白的表达。利用siRNA沉默BRD4后,MTT法检测BRD4 siRNA与MPA联用对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用。结果:在孕激素敏感的Ishikawa细胞中,与对照组比较,JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中JQ1+MPA组的细胞增殖率最低,析因分析提示JQ1与MPA有交互作用(P<0.05);JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞凋亡率显著增加(P均<0.05),凋亡相关蛋白变化明显,其中JQ1+MPA组的细胞凋亡率增加最为显著(P<0.05),凋亡相关蛋白变化最大。利用siRNA沉默BRD4后观察联合MPA的作用显示,与对照组比较,BRD4 siRNA组、MPA组、BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率最低。结论:BRD4抑制剂JQ1联合MPA对孕激素敏感的子宫内膜癌细胞有较好的增殖抑制及凋亡作用,其可能机制与抑制mTOR/AKT通路有关。     

子宫内膜癌顺铂耐药细胞株的建立和鉴定及耐药机制研究

目的 建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,鉴定其生物学特性,并探讨其顺铂耐药的机制.方法 采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法,在体外连续诱导、培养子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞,建立子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP.非放射性细胞增殖法(MTS法)测定ISH/DDP细胞对顺铂的耐药指数;绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间;流式细胞术检测ISH/DDP细胞的细胞周期比例;免疫细胞化学法检测ISH/DDP细胞中耐药蛋白--乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、P糖蛋白(P-gp)以及谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)蛋白的表达水平,以综合积分表示.结果 Ishikawa细胞在体外采用顺铂浓度逐步递增联合大剂量顺铂冲击方法 连续诱导、培养,历时10个月,成功建立了子宫内膜癌顺铂耐药细胞株ISH/DDP,其耐药指数为3.77.Ishikawa细胞和ISH/DDP细胞的群体倍增时间分别为34.1 h和40.4 b,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).与Ishikawa细胞相比,ISH/DDP细胞的S期细胞比例[分别为(44.2±6.1)%和(55.3±8.4)%]增加,G2/M期细胞比例[分别为(11.9±0.7)%和(5.7±2.4)%]减少,差异均有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞比例[分别为(44.3±5.7)%和(39.0±10.7)%]减少,但差异无统计学意义(P>0.05).ISH/DDP细胞中BCRP蛋白的表达水平为(16.3±2.0)分,高于Ishikawa细胞的(13.4±1.5)分,差异有统计学意义(P<0.05);而Ishikawa和ISH/DDP细胞中P-gp蛋白的表达水平分别为(16.1±1.0)和(15.5±1.2)分,GST-π蛋白的表达水平分别为(14.9±1.1)和(15.2±1.9)分,分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 ISH/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制可能与细胞中BCRP蛋白的过度表达相关.

Abstract：

Objective To establish the cisplatin(DDP)-resistant cell line from human endometrial cancer cell line Ishikawa and to investigate its resistant mechanism to DDP. Methods A resistant endometrial cancer cell line ISH/DDP was established by gradually increasing dose of cisplatin and high-dose stimulation. The resistant index was estimated by 3-(4,5-dimethylthiazol-zyl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner salt (MTS) assay. Cell growth curve, doubling time and cell cycle phase distribution were measured; drug-resistant protein of breast cancer resistance protein (BCRP),P-glycoprotein (P-gp) and glutathione-S-transferase-π (GST-π) were examined by immuocytochemistry. Results The DDP-resistant cell line ISH/DDP was established with the resistant index of 3. 77. The proliferation of ISH/DDP got slow, doubling time prolonged, which were 40. 1 hours, while it was 34. 1 hours in Ishikawa (P<0.05); and the cell number of G0/G1 phase [(44. 3 ±5. 7)% and (39. 0 ± 10. 7)% ,P >0. 05] and G2/M phase [(11.9 ±0.7)% and (5. 7 ±2. 4)% ,P <0. 05] decreased, while S-phase [(44. 2 ±6.1)% and (55. 3 ± 8. 4) % , P < 0. 05] increased compared with parent cells. The comprehensive score of the expression of BCRP in ISH/DDP was 16. 3 ± 2. 0, while it was 13.4 ± 1. 5 in Ishikawa (P < 0. 05). The score of the expression of P-gp in ISH/DDP and Ishikawa were 15. 5 ± 1. 2 and 16. 1 ± 1. 0 (P > 0. 05) ,respectively. The score of the expression of GST-π in ISH/DDP and Ishikawa were 15. 2 ± 1. 9 and 14. 9 ± 1.1 (P > 0. 05) . Conclusion ISH/DDP cell line showed a typical resistant phenotype and biological characteristics, which may be accounted for high BCRP expression.     

二甲双胍降低人子宫内膜癌裸鼠移植瘤孕激素耐药及其机制的初步研究

目的:研究二甲双胍对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤孕激素耐药性的逆转作用,并初步探讨其可能机制。方法:将40只裸鼠随机分为2组,分别建立人子宫内膜癌ishikawa及孕激素不敏感ishikawa/GLOI细胞裸鼠皮下移植瘤模型,每组各随机分成4个亚组,每亚组各5只小鼠:对照组(生理盐水)、二甲双胍组(二甲双胍200mg/kg灌胃给药,0.1ml/只)、孕激素(MPA)组[甲羟孕酮(MPA)100mg/kg腹腔注射,0.1ml/只]、二甲双胍+MPA组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和MPA腹腔注射)。治疗期间定期测量肿瘤大小及裸鼠质量。实验结束时取出移植瘤,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,计算药物对肿瘤生长的抑制率。应用免疫组化检测肿瘤GLOI、CyclinD1、mTOR、pmTOR蛋白的表达。结果:接种ishikawa细胞株的裸鼠中,二甲双胍组、MPA组、二甲双胍+MPA组的抑瘤率分别为36.63%、55.92%和75.38%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。接种ishikawa/GLOI细胞株的裸鼠中,二甲双胍+MPA组的抑瘤率为41.77%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);而二甲双胍组、MPA组的抑瘤率分别为12.58%和2.79%,与对照组的差异无统计学意义(P0.05)。免疫组化结果显示,接种ishikawa/GLOI细胞的MPA组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的表达与对照组无明显差异(P0.05),余各实验组中GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1的阳性表达率均低于对照组(P0.05)。结论:二甲双胍能逆转人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的孕激素耐药性,其逆转机制可能与下调GLOI、mTOR、pmTOR、CyclinD1表达有关。     

乙二醛酶 I 过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡活性的影响

目的:探讨乙二醛酶I( GLO-I)过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的影响. 方法:采用脂质体将GLO-I基因真核表达载体pcDNA GLO-I及空白载体pcDNA转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,G418 筛选获得抗性亚克隆细胞株. RT-PCR和Western blot法检测子宫内膜癌细胞中GLO-I表达,Western blot法检测未转染组、转染pcDNA-GLO-I组及转染pcDNA组的caspase 3、cyclin D1凋亡和增殖分子的表达. 用DM-SO和10μmol/L甲羟孕酮( MPA)分别刺激转染pcDNA-GLO-I组和未转染Ishikawa细胞, Western blot法检测增殖和凋亡分子表达. 结果:转染pcDNA-GLO-I组细胞中GLO-I mR-NA、蛋白水平均显著高于未转染组( P<0 . 01 ). 与未转染组和转染pcDNA组比较,转染pcDNA-GLO-I组细胞的增殖分子cyclinD1表达增加,凋亡分子caspase 3表达相对减少( P<0 . 05 ). 经MPA刺激后,未转染组Ishikawa细胞的增殖分子cyclinD1表达量明显降低,而凋亡分子caspase 3表达量明显升高( P<0 . 05 ) ,而转染pcDNA-GLO-I组细胞增殖分子和凋亡分子表达均无明显变化( P>0 . 05 ). 结论:GLO-I高表达影响子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡,并影响孕激素对肿瘤细胞的增殖和调控.     

乙二醛酶Ⅰ过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡活性的影响

目的:探讨乙二醛酶I(GLO-I)过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的影响。方法:采用脂质体将GLO-I基因真核表达载体pc DNA GLO-I及空白载体pc DNA转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株。RT-PCR和Western blot法检测子宫内膜癌细胞中GLO-I表达,Western blot法检测未转染组、转染pc DNA-GLO-I组及转染pc DNA组的caspase 3、cyclin D1凋亡和增殖分子的表达。用DMSO和10μmol/L甲羟孕酮(MPA)分别刺激转染pc DNA-GLO-I组和未转染Ishikawa细胞,Western blot法检测增殖和凋亡分子表达。结果:转染pc DNA-GLO-I组细胞中GLO-I mRNA、蛋白水平均显著高于未转染组(P0.01)。与未转染组和转染pc DNA组比较,转染pc DNA-GLO-I组细胞的增殖分子cyclin D1表达增加,凋亡分子caspase 3表达相对减少(P0.05)。经MPA刺激后,未转染组Ishikawa细胞的增殖分子cyclin D1表达量明显降低,而凋亡分子caspase 3表达量明显升高(P0.05),而转染pc DNA-GLO-I组细胞增殖分子和凋亡分子表达均无明显变化(P0.05)。结论:GLO-I高表达影响子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡,并影响孕激素对肿瘤细胞的增殖和调控。     

子宫内膜癌细胞雌激素受体亚型的调控和功能的初步研究

目的初步建立子宫内膜癌雌激素受体（ER）亚型α或β弱表达的细胞模型,研究雌激素及他莫昔芬（TAM）与ER亚型的关系。方法分别设计针对ERα和ERβ的反义寡脱氧核苷酸（ODN）、正义ODN、错义ODN,并转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,将Ishikawa细胞分为4组,即未转染组、反义ODN组、正义ODN组及错义ODN组。蛋白印迹法测定转染后细胞ERα和ERβ蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染ODN后,17β雌二醇和TAM对Ishikawa细胞生长的影响。结果（1）分别针对ERα及ERβ的反义ODN可以选择性下调转染的Ishikawa细胞中ERα及ERβ蛋白的表达（分别下调45％和54％）。（2）17β雌二醇及TAM可以促进未转染组Ishikawa细胞的生长。转染ERα反义ODN后,可抑制17β雌二醇及TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后的24、48及72h为著,反义ODN组各时间点分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）转染ERβ反义ODN后,17β雌二醇对Ishikawa细胞的促生长作用的改变不明显。转染ERβ反义ODN可抑制TAM对Ishikawa细胞的促生长作用,以转染后72h为著,反义ODN组分别与未转染、正义ODN、错义ODN组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论（1）反义核酸技术能够特异性地有效下调Ishikawa细胞中ERα和ERβ蛋白的表达,其可作为子宫内膜癌细胞中ER调控的一种有效的实验手段。（2）17β雌二醇促进子宫内膜癌细胞生长的作用主要通过ERβ介导;ERβ和ERβ均参与TAM促进子宫内膜癌细胞生长的作用。     

选择性环氧合酶抑制剂NS398对子宫内膜癌细胞株的影响

目的探讨环氧合酶抑制剂NS398对子宫内膜癌细胞株的生物学行为的影响。方法2005年9月至2006年11月于华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科实验室用MTT、DNA梯度降解试验及流式细胞仪等方法,研究NS398体外对子宫内膜癌细胞系Ishikawa的抑制增殖、促进凋亡作用。结果NS398对Ishikawa细胞产生明显的生长抑制作用,且表现为剂量依赖性(F=36.598,P<0.01);DNA梯度降解试验、流式细胞仪分析NS398浓度依赖性地诱导了Ishikawa细胞凋亡(F=11.342,P<0.01),且凋亡与细胞周期受阻有关(F=22.445,P<0.01)、主要阻止在G1/S期即DNA合成期。结论NS398对Ishikawa细胞具有显著浓度依赖性的体外生长抑制、诱导凋亡、阻滞DNA合成作用。     

EGFR过表达降低人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的研究

目的:检测表皮生长因子受体(EGFR)基因在子宫内膜癌孕激素敏感细胞株Ishikawa及孕激素不敏感细胞株KLE的表达,探讨EGFR基因过表达对人子宫内膜癌细胞孕激素敏感性的影响。方法:实时定量PCR法和蛋白印迹法检测Ishikawa和KLE细胞中EGFR及PR-BmRNA和蛋白的表达。将EGFR全长cDNA真核表达质粒在脂质体介导下转染至Ishikawa细胞,同时以转染空载体和未转染的Ishikawa细胞为对照,分别应用实时定量PCR检测各组细胞EGFR、PR-BmRNA表达的变化,应用蛋白印迹法检测各组细胞EGFR、PR-B蛋白表达的变化;CCK-8法观察转染EGFR基因后Ishikawa细胞对孕激素敏感性的变化。结果:(1)Ishikawa细胞中,EGFRmRNA和蛋白的表达明显低于KLE细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达则显著高于KLE细胞(P<0.001);(2)稳定转染EGFR基因后,Ishikawa细胞中EGFRmRNA和蛋白的表达水平明显高于转染空载体和未转染的Ishikawa细胞(P<0.001),而PR-BmRNA和蛋白的表达水平则显著降低;(3)10-8、10-7、10-6、10-5mol/L的MPA对未转染和转染空载体的Ishikawa细胞的抑制作用显著(P<0.05),但对稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞无明显抑制作用(P>0.05)。结论:转染EGFR基因能有效提高Ishikawa细胞内EGFR基因的表达,但可下调PR-B基因的表达使Ishikawa细胞对MPA不敏感。     

客观评价子宫内膜癌筛查方法

子宫内膜癌发病率上升,高危人群增多,应该高度关注子宫内膜癌筛查,临床上应用的子宫内膜癌筛查方法有子宫内膜脱落细胞学检查、子宫内膜脱落细胞块病理检查和子宫内膜微量组织获取检查。3种方法各有优缺点。目前,尚缺乏理想的子宫内膜癌筛查方法。     

官腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达及意义

目的 采用实时荧光定量PCR法检测p53、ki-67、bcl-2、bax基因在子宫内膜癌及正常人官腔脱落细胞中的表达变化水平,探讨官腔脱落细胞中p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达变化在子宫内膜癌早期诊断中的意义.方法 收集健康志愿者及子宫内膜癌患者官腔脱落细胞样本共90例;提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测目的基因的表达变化水平;所有实验数据采用SPSS 17.0软件进行统计学分析.结果 荧光定量PCR结果显示,p53基因在正常人官腔脱落细胞中未检测到表达,随着恶性程度升高,表达量显著升高(P＜0.01),ki-67的表达在正常人中表达量最低,随着恶性程度升高,表达量逐渐升高(P＜0.05),bcl-2基因的表达逐渐降低(P＜0.05),bax/bcl-2值随着恶性程度增高而降低.结论 p53、ki-67、bcl-2、bax基因的表达量在子宫内膜癌发生发展过程中呈一定的变化趋势,提示p53、ki-67、bcl-2、bax基因可作为子宫内膜癌早期诊断的分子标志物.     

miR-95在子宫内膜癌组织的表达及临床意义

目的:探讨miR-95在子宫内膜癌患者组织的表达及其临床意义。方法:收集2007年9月至2009年12月子宫内膜癌患者手术标本66例,以癌旁组织标本作为正常对照,应用原位杂交(in situ hybridization,ISH)及实时荧光定量PCR(real time quantityPCR,qRT-PCR)检测子宫内膜癌患者组织及癌旁组织中miR-95的表达水平,分析miR-95表达与子宫内膜癌临床病理参数之间的关系,并分析miR-95表达与患者预后的关系。结果:ISH检测显示,66例子宫内膜癌组织中miR-95阳性表达率为75.76%,与癌旁对照组(25.76%)的差异有统计学意义(P<0.01);qRT-PCR结果显示,临床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜癌组织miR-95表达水平为1.65±0.11、2.92±0.27、3.44±0.29、5.12±0.41,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),各期组间比较,差异亦有统计学意义(P<0.01);有、无盆腔淋巴结转移子宫内膜癌患者组织miR-95的表达水平分别为5.16±0.46、2.39±0.31,差异有统计学意义(P<0.01);高、中、低分化子宫内膜癌组织中miR-95表达水平为3.42±0.33、3.87±0.49、3.57±0.41,三者无统计学差异(P>0.05);Ⅰ型和Ⅱ型子宫内膜癌组织中miR-95表达水平分别为3.94±0.58、3.70±0.45,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),但二者差异无统计学意义(P>0.05);子宫内膜样腺癌和非子宫内膜样腺癌子宫内膜癌组织中miR-95表达水平分别为3.69±0.44,3.73±0.41,与癌旁组织的差异均有统计学意义(P<0.05),但二者差异无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,miR-95表达越高患者生存率越低(P=0.010)。结论:miR-95与子宫内膜癌的发生、临床分期及淋巴结转移等密切相关,将其作为子宫内膜癌潜在的治疗靶点及预后判断具有重大意义。     

子宫内膜组织人乳头瘤病毒感染的初步研究

目的了解正常子宫内膜，宫颈癌患者子宫内膜以及子宫内膜癌组织HPV感染情况。方法选择HPVL1区改良通用型引物Gp5＋／Gp6＋，通过HPV—DNA扩增和DNA测序法，对2004年9月-2006年3月我院妇科收治的25例宫颈癌、30例子宫内膜癌患者的石蜡包埋组织进行HPV检测，以20例子宫肌瘤患者作为对照组。每例宫颈癌取癌组织及正常子宫内膜；每例内膜癌取癌组织及正常宫颈粘膜；每例子宫肌瘤取正常子宫内膜及宫颈粘膜。结果①25例宫颈癌病例中，16例宫颈癌组织及1例子宫内膜组织检测出HPV感染。这例子宫内膜与其相应的宫颈癌组织均为HPV-16型感染；②30例子宫内膜癌组织及其相应的宫颈粘膜组织均未检测出HPV—DNA，检出率均为0（0／30）；③对照组正常子宫内膜及宫颈粘膜均未检出HPV—DNA，检出率均为0（0／20）。结论①子宫内膜HPV感染很少，说明其可能不是HPV复制、成熟的适宜宿主组织；②宫颈癌患者子宫内膜组织的HPV可能由上行感染所致，但感染率较低；③子宫内膜癌的发生、发展可能与HPV无关。     

Sensitivity to cisplatin determined by the histoculture drug response assay and clinical response of endometrial cancer

This study investigated the value of the in vitro histoculture drug response assay (HDRA) for predicting the efficacy of chemotherapy in patients with endometrial cancer. Specimens were obtained from 115 patients with endometrial cancer treated at Keio University Hospital between 1994 and 2002. Tumor fragments were cultured on collagen sponge gel with cisplatin for 7 days, and cell viability was assessed. The cutoff value of the 50% inhibitory concentration of cisplatin was set at 23 microg/mL. Sensitivity of stage III or IV disease to chemotherapy was investigated, and differences of 5-year progression-free survival between patients with sensitive and resistant tumors were evaluated by the Kaplan-Meier method. Tumors were evaluable in 93.0% of patients (107/115). Among 38 patients in stages III or IV, 23 received chemotherapy containing cisplatin. Seven sensitive tumors did not recur, while recurrence/progression occurred within 6 months in 8/16 patients with tumors showing low sensitivity. Among stages III and IV patients, there was a significant difference of 5-year progression-free survival (P < 0.05) between those with tumors showing high or low sensitivity. Accordingly, the HDRA may predict the efficacy of chemotherapy for endometrial cancer.     

应用微小组织块法培养和胰酶滤纸片克隆消化法建立人子宫内膜癌细胞系的研究

目的探讨联合应用胰酶消化＋微小组织块法培养及胰酶滤纸片克隆消化法纯化建立人子宫内膜癌细胞系方法的可行性。方法取3例子宫内膜癌患者的子宫内膜腺癌组织,采用胰酶消化＋微小组织块法进行原代培养,并通过胰酶滤纸片克隆消化法提纯腺上皮癌细胞继续培养;在倒置显微镜下观察细胞形态,行HE和免疫荧光染色对细胞进行鉴定,绘制生长曲线。结果3例患者均1次成功提纯癌细胞,其中1例传代至第5代,1例传代至第3代。1例子宫内膜低分化腺癌细胞体外培养成功,命名为EAG3,并子宫内膜稳定生长传代至20代,细胞生长曲线为“S”形。通过HE染色与原组织病理学比较及免疫荧光细胞法检测角蛋白CK表达阳性,均证实原代细胞为腺上皮恶性肿瘤来源。结论应用胰酶消化十微小组织块培养能缩短原代细胞贴壁时间,应用胰酶滤纸片克隆消化法可以更快捷完成子宫内膜腺癌细胞纯化建系的过程。