端粒酶激活与上皮性卵巢癌化疗敏感性及其预后的关系

目的：探讨端粒酶活性水平对卵巢化疗疗效及预后影响。方法：以TRAP－PCR－ELISA法检测卵巢癌组织中端粒酶活性;以MTT法检测卵巢癌细胞对CDDP、ADM敏感。结果：22例卵巢癌组织中,端粒酶阴性者3例（13．64％）,阳性者19例（86．36％）。8例端粒酶活性高于2U者,PAC方案化疗有效者5例（62．5％）,11例端粒酶活性低于2U者,化疗均有效（100％）。端粒酶活性高于2U者,进展与复发或死亡5例（62．5％）,而端粒酶活性低于2U者仅1例出现复发,无死亡。结论：随着端粒酶活性增高,卵巢癌对CDDP、ADM敏感性下降。     

血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性影响的研究

目的:探讨血根碱对紫杉醇耐药卵巢癌A2780/taxol细胞生长及化疗敏感性的影响和机制。方法:培养A2780/taxol细胞,分为对照组、血根碱组、紫杉醇组、血根碱+紫杉醇组,对照组加0.9%氯化钠液,血根碱组加2.0μmol/L血根碱,紫杉醇组加2μg/ml紫杉醇,血根碱+紫杉醇组同时加2.0μmol/L血根碱及2μg/ml紫杉醇。应用MTT法、流式细胞仪和Western blot法检测血根碱对A2780/taxol细胞增殖、凋亡、克隆形成及Bax、β-tubulinⅢ蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,血根碱组、紫杉醇组及血根碱+紫杉醇组均能显著抑制A2780/taxol细胞增殖,血根碱+紫杉醇组抑制率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞克隆形成率[(35.67±7.37)%、(27.67±2.52)%和(8.87±3.38)%]明显降低,血根碱+紫杉醇组降低最为明显(P0.05);紫杉醇组、血根碱组及血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率[(18.01±7.13)%、(57.03±12.91)%和(81.68±11.23)%]明显增加,血根碱+紫杉醇组细胞凋亡率最高(P0.05);紫杉醇组、血根碱组、血根碱+紫杉醇组Bax蛋白表达显著上调、β-tubulinⅢ蛋白表达显著降低,血根碱+紫杉醇组表达量变化最大(P0.05)。结论:血根碱可下调β-tubulinⅢ表达,诱导肿瘤细胞凋亡,增强紫杉醇对耐药卵巢癌细胞的生长抑制作用,从而促进其对紫杉醇药物的敏感性。     

MDM2蛋白对卵巢癌细胞药物敏感性的影响

卵巢癌在进行化学药物治疗(化疗)中的耐药问题十分棘手。目前，关于p53-MDM2蛋白对癌细胞对顺铂类化疗药物敏感性(药敏性)影响的研究日渐深入，MDM2蛋白是p53的调节因子，是一种细胞原癌蛋白，其过度表达时，可阻断p53的功能。为了解MDM2蛋白在卵巢癌细胞中的表达及对卵巢癌细胞耐药性的影响，我们选取p53野生型的人类     

化疗对卵巢癌患者NK细胞活性的影响

目的 观察化疗对NK细胞活性的损伤程度。方法 收集1999～2001年32例上皮性卵巢癌，观察化疗前后NK细胞活性的变化。然后与IL-2共培养，观察其活性恢复情况．结果 化疗后与化疗前比较，NK细胞活性下降明显，差异有统计学意义。应用IL-2共培养后，化疗前NK细胞活性明显升高；化疗后第1～3疗程细胞活性升高有显著性，第4～6疗程活性无显著性变化。结论 化疗损伤了NK细胞的活性，早期损伤程度较轻，能恢复；晚期损伤程度较重，短期内不能恢复。     

RNAi沉默CD147基因对卵巢癌细胞HO-8910pm生物学行为的影响

目的:采用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术,利用构建的稳定转染CD147 shRNA表达质粒载体的HO-8910pm/pGE-1 CD147shRNA细胞株观察卵巢癌细胞系HO-8910pm CD147基因的沉默作用及生物学效应。方法:用免疫细胞化学法、激光共聚焦检测HO-8910pm细胞CD147的表达;MTT法绘制细胞生长曲线,观察裸鼠卵巢癌皮下移植瘤的成瘤性。结果:pGE-1CD147shRNA转染人卵巢癌细胞系后,CD147的表达受到高效且特异的抑制,细胞侵袭力减弱,荷瘤裸鼠成瘤力下降,抑瘤率达58.8%(P<0.01)。结论:RNA i沉默CD147基因可影响卵巢癌的侵袭和成瘤,有可能成为治疗卵巢癌的新途径。     

术前化疗对晚期卵巢癌预后的影响

目的：探讨术前化疗对晚期卵巢癌预后的影响。方法：将曾行肿瘤细胞减灭术上皮性卵巢癌患者按照术前是否化疗分为两组，进行回顾性分析，比较两组患者与预后有关的指标及生存情况。结果：1990年1月至1998年12月，收治ⅢC期、Ⅳ期上皮性卵巢癌患者，并施行肿瘤细胞减灭术者共71例，其中术前化疗组26例，术前未化疗组45例，两组患者手术范围基本相同，术前化疗组期别晚，分级高，预后不良的组织病理类型所占比例高，但治疗结果两组间达到满意肿瘤细胞减灭术的比例无明显差别，追踪随访术前化疗组及未化疗组，5年存活率分别为30．72％及40．60％（P＞0．05）。结论：对术前估计难以达到满意的肿瘤细胞减灭术的晚期卵巢癌患者，术前化疗有可能提高生存率。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。     

卵巢癌化疗的最新进展

介绍上皮性卵巢癌在临床化学治疗方面的最新进展:拓普替康、吉西他宾、脂质体阿霉素等新药的l临床应用;多种联合化疗方案应用于复发性卵巢癌;外周血干细胞移植支持下的大剂量化疗仍处于试验阶段,限制临床应用;卵巢癌患者的生活质量(QOL)越来越受到广大学者的关注,QOL与多种因素相关,选择化疗方案时应考虑对QOL的影响,有研究表明多数复发性卵巢癌患者认为生存时间较生活质量更重要.     

短发夹状RNA对卵巢癌细胞survivin mRNA表达及紫杉醇药物敏感性的影响

目的观察表达短发夹状RNA(shRNA)的mU6/survivin质粒转染卵巢癌细胞株OVCAR3细胞后,对OVCAR3细胞survivin mRNA表达的抑制作用,以及对OVCAR3细胞紫杉醇药物敏感性的影响。方法将表达绿色荧光蛋白的pEGFPC2质粒与脂质体按不同比例转染OVCAR3细胞,流式细胞仪检测其转染效率。根据转染效率最高时pEGFPC2质粒与脂质体的比例,将mU6/survivin质粒转染入OVCAR3细胞。实验分为3组未转染组、脂质体组、转染组,RT-PCR技术检测3组OVCAR3细胞中survivin mRNA的表达,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡率的变化。四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测3组OVCAR3细胞对紫杉醇的50%抑制浓度(IC50)。结果pEGFPC2质粒与脂质体按1∶2比例转染OVCAR3细胞时其转染效率最高,达23.6%。将mU6/survivin质粒与脂质体也按1∶2比例转染OVCAR3细胞24h后,未转染组、脂质体组、转染组细胞survivin mRNA的相对含量分别为0.81±0.05、0.79±0.12、0.26±0.04,转染组survivin mRNA相对含量下降至未转染组的32%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。转染组转染24h后,细胞凋亡率为(31.9±1.2)%,明显高于未转染组的(4.9±0.7)%和脂质体组的(5.6±0.5)%(P=0.000);转染组细胞周期被阻滞于G0/G1期,G2/M期减少,分别与未转染组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。MTT比色法检测结果显示,未转染组、脂质体组、转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50分别为(0.305±0.032)、(0.157±0.031)、(0.019±0.001)μmol/L,转染组OVCAR3细胞对紫杉醇的IC50降低为未转染组的1/16,两组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论shRNA可有效抑制卵巢癌细胞survivinmRNA的表达,并显著提高了卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性。     

EZH2基因与卵巢癌细胞系A2780化疗敏感性的关系

目的:探讨RNA干扰沉默果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)基因与卵巢癌细胞A2780顺铂敏感性的关系.方法:获得稳定表达EZH2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的人卵巢癌细胞A2780-shEZH2,实时定量PCR(Rea...     

卵巢癌细胞减灭术后化疗方式的探讨

目的动脉导管介入灌注化疗途径，增加肿瘤局部血管内高浓度抗癌药物，来提高卵巢癌细胞减灭术后疗效的方法。方法经手术及病理证实晚期卵巢癌未能彻底切除，行细胞减灭术后，41例患者实施单侧股动脉插管同侧髂内动脉灌注化疗术。结果41例腹胀腹水症状消失，B超检查5例肿块完全消失，36例肿块缩小，其中PR14例，MR22例，结论单侧股动脉导管介入同侧髂内动脉灌注化疗治疗卵巢癌效果优良。     

卵巢癌的新辅助化疗

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤,其治疗遵循手术、化疗、放疗和免疫治疗等综合治疗模式.新辅助化疗作为一种新的肿瘤治疗理念日益受到重视,认为应用新辅助化疗可提高理想肿瘤细胞减灭术成功率,而对生存率的改善尚存在不同意见.综述新辅助化疗应用现状、存在问题及展望.     

MRP2基因单核苷酸多态性对晚期卵巢癌铂类化疗敏感性的影响

目的 :探讨MRP2基因单核苷酸多态性与晚期卵巢癌对铂类化疗敏感性的关系。方法 :本研究包括 89例晚期卵巢癌患者 ,其中Ⅲ期 77例 ,Ⅳ期 12例。所有患者均行肿瘤细胞减灭术 ,术后常规化疗 6～ 8疗程 ,均用顺铂加紫杉醇及其他药物化疗。 89例患者中 ,完全缓解 (CR)或部分缓解 (PR) 6 2例 ,肿瘤无变化 (NC)或进展 (PD) 2 7例。采用单核苷酸延伸技术 ,检测肿瘤组织中MRP2基因促进子 (C 2 4T)、第 10外显子 (G12 4 9A)及第 2 8外显子 (C3972T)的单核苷酸多态性。观察其对铂类化疗敏感性的影响。结果 :MRP2基因促进子及第 2 8外显子单核苷酸多态性对卵巢癌患者对铂类化疗反应无明显影响 ,而MRP2基因第 10外显子突变型与铂类化疗敏感性密切相关 (P <0 0 5 )。结论 :MRP2基因第 10外显子单核苷酸多态性影响晚期卵巢癌患者对铂类化疗的敏感性     

预测卵巢癌化疗耐药的生化指标

卵巢癌治疗中化疗耐药严重影响预后和生存率,因此有很多有关卵巢癌化疗耐药机制的研究并发现某些生化指标在耐药患者中出现异常表达.这些指标正逐渐应用于临床以预测卵巢癌患者是否存在化疗耐药.     

雌激素对内膜癌细胞中FAK基因转录的影响

目的定量观察雌激素刺激后内膜癌细胞的焦点粘连激酶（Focal—adhesion kinase，FAK）转录水平。方法不同浓度的17β-雌二醇体外刺激雌激素敏感的内膜癌细胞株RL95—2。加用三苯氧胺或ICI 182，780雌激素拮抗剂的细胞及未加雌激素的细胞设为阴性对照。经不同作用时间后，采用实时RT—PCR方法测定处理后的细胞内FAK的mRNA水平。结果在给予不同浓度的雌激素共培养1d或5d后，细胞的FAK基因的转录水平对比阴性对照细胞无明显改变。结论雌激素对内膜癌细胞的FAK转录可能无显著影响。FAK基因在内膜癌组织中的过度表达的机理需要进一步深入研究。     

siRNA靶向沉默CXCR4基因对人卵巢癌SW626细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默趋化因子受体4(CXCR4)基因对卵巢癌SW626细胞增殖、迁移及侵袭的影响,为卵巢癌的基因治疗提供新的理论依据。方法:构建CXCR4干扰RNA质粒载体,重组扩增后转染CXCR4阳性的人卵巢癌细胞株SW626,以RT-PCR和Western blot检测CXCR4基因及蛋白表达的变化,MTT检测CXCR4干扰质粒对卵巢癌细胞增殖的影响,Transwell检测CXCR4干扰质粒对卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:转染48h后,人卵巢癌细胞株SW626的转染效率为80%～90%,抑制了卵巢癌细胞CXCR4基因及蛋白的表达(P<0.05),部分抑制了癌细胞的增殖(P<0.01),但此作用并不随时间变化而有明显变化;癌细胞的迁移及侵袭率均明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论:CXCR4 siRNA可通过下调CXCR4的表达抑制人卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

卵巢癌腹腔化疗的有关问题

晚期卵巢癌标准一线治疗方案为肿瘤细胞减灭术+铂类为基础的联合化疗.作为卵巢癌最重要的辅助治疗,卵巢癌标准一线化疗经历了顺铂+阿霉素+环磷酰胺(PAC)和顺铂+环磷酰胺(PC)、顺铂+紫杉醇(PT)和当前标准化疗方案卡铂+紫杉醇(CT)几个阶段,标准给药方式均为静脉化疗,取得了良好的临床疗效,患者生存率逐步改善.然而,卵巢癌多局限于盆、腹腔内种植生长,因此,腹腔内局部给药即腹腔化疗(intraperitoneal chemotherapy)具有重要的理论依据.     

IL-2基因转导对卵巢癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的:探讨IL-2基因转导能否改变卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。方法:用MTT法测定导入人IL-2基因的卵巢癌细胞对化学治疗药物顺铂、阿霉素、泰素及足叶乙甙治疗的敏感性及IC_50,以导入新霉素基因的卵巢癌细胞系及野生型卵巢癌细胞系为对照。结果:IL-2基因转移使SKOV3细胞对上述化疗药物治疗的敏感性有所提高,但仅对VP-16治疗敏感性的提高差异有显著性（P<0.05）。结论:IL-2基因导入SKOV3细胞没有降低其对实验药物治疗的敏感性。     

上皮性卵巢癌的一线化疗

化疗是上皮性卵巢癌主要的辅助治疗手段,铂类为基础的联合化疗是上皮性卵巢癌的一线化疗方案,但在药物组成、剂量强度、给药方式、腹腔化疗、新辅助化疗及维持和巩固治疗方面仍值得进一步探索。     

RNAi抑制宫颈癌HeLa细胞survivin基因及其对顺铂敏感性影响的研究

目的:利用RNA i技术抑制宫颈癌HeLa细胞株Survivin基因,观察HeLa细胞株的细胞凋亡率、survivin蛋白表达及对顺铂(DDP)药物敏感性的变化。方法:以培养的宫颈癌HeLa细胞株为体外研究模型,设脂质体组、对照组、RNA i组进行实验。(1)半定量RT-PCR,W estern blot法检测Survivin mRNA、蛋白在各组细胞中的表达;(2)用流式细胞术分析各组细胞周期及细胞凋亡率的影响;(3)用MTT法分析DDP对各组细胞存活率作用的浓度。结果:(1)RT-PCR检测结果显示,Survivin扩增条带(206bp)的亮度差异显著,RNA i组明显弱于脂质体组及对照组。RNA i组Survivin mRNA相对含量较质脂体组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);W estern blot检测各实验组Survivin蛋白的表达,脂质体组与对照组Survivin蛋白条带明显存在,且基本一致,而RNA i组同样位置的条带基本消失;(2)RNA i组细胞阻滞在G0/G1期,G/M期减少,与脂质体组和对照组分别比较,差异有统计学意义(P<0.01);(3)MTT比色法检测结果显示,不同浓度顺铂处理后脂质体组、对照组、RNA i组的IC50分别为(0.298±0.035)、(0.147±0.031)、(0.012±0.001),RNA i组HeLa细胞对顺铂的药物敏感性增高。两者相比差异有统计学意义(P=0.000)。结论:RNA i明显抑制了Survivin在转录及翻译水平的表达;RNA i抑制Survivin基因表达,能明显提高宫颈癌HeLa细胞对顺铂的药物敏感性。