补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马神经干细胞活力与迁移的影响

目的研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白诱导的海马神经干细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)活力与迁移能力的影响,探讨其对海马神经元修复和再生的作用。方法从孕14～16 d Wistar大鼠胎鼠分离培养NSPCs并鉴定,并随机分为空白组、Aβ1-42处理组、正常脑脊液对照组、安理申组及补益脾胃元气方药人参、大补元煎、洗心汤保护组,共7组。以25μmol/L Aβ1-42干预NSPCs,与抽取的终体积分数为20%的不同方药含药脑脊液作用第3代神经干细胞48 h。采用CCK-8实验检测各组NSPCs的活力,Transwell实验和划痕实验检测细胞迁移,流式法检测各组细胞内活性氧(ROS)含量。结果免疫荧光染色鉴定NSPCs特异性蛋白SOX2染色为阳性;CCK-8检测结果表明,补益脾胃元气方药各组海马NSPCs活性显著增高(P0.01);Transwell实验和划痕实验检测结果显示,补益脾胃元气方药各组NSPCs迁移能力显著增强(P0.05、0.01);流式法检测ROS含量结果表明,补益脾胃元气方药各组NSPCs内ROS水平显著降低(P0.01)。结论补益脾胃元气方药含药脑脊液对大鼠海马NSPCs活力与迁移能力具有促进作用。还可拮抗Aβ诱导的氧化应激,同时其有效成分易于透过血脑屏障,可能发挥更强的神经保护作用。     

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠海马区形态功能和皮层胆碱能系统的影响

目的研究补益脾胃元气方药人参、大补元煎、洗心汤对快速老化痴呆模型(SAMP8)小鼠空间学习记忆能力、海马区形态功能和皮层胆碱能系统的影响,探讨其治疗阿尔茨海默病的可能作用机制。方法 3月龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组、人参组、洗心汤组、大补元煎组,以雄性抗快速老化型(SAMR1)小鼠为对照组。除对照组和模型组ig蒸馏水外,其余各组ig药物(10 mL/kg),1次/d,连续3个月。实验结束后采用Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力,透射电镜观察小鼠海马CA3区突触超微结构,免疫组化法检测CA1区神经元密度、脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)水平,生物化学法检测海马胆碱乙酰基转移酶(Ch AT)和乙酰胆碱酯酶(ACh E)的活性。结果补益脾胃元气方药各组小鼠逃避潜伏期平均值明显下降,在目的象限游泳时间、穿过平台次数显著增加(P0.05、0.01);各组小鼠Aβ阳性细胞数目显著降低(P0.05、0.01),神经元特异核蛋白(Nue N)阳性细胞密度有上升趋势,但无显著差异;各组小鼠Ch AT活性升高(P0.05、0.01),人参、洗心汤组小鼠ACh E活性降低(P0.05)。结论补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠空间识别和学习记忆能力有明显改善作用,其机制可能与影响小鼠海马突触结构、促进海马神经元修复、降低小鼠脑内Aβ表达、调节海马胆碱能系统有关。     

左归丸对体外培养新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

左归丸具有滋阴补肾功效.笔者的在体实验表明左旋单钠谷氨酸模拟肾阴虚证大鼠神经干细胞(Nerve Stemceu,NSC)增殖分化和凋亡与正常组有明显差异[1,2].为探讨左归丸以及左旋单钠谷氨酸所致肾阴虚模型中有关NSC增殖分化的作用及机制,本实验从神经干细胞增殖分化方面作以下探讨.     

补益脾胃元气方药防治阿尔茨海默病的作用及相关机制研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是最常见的痴呆类型,其病因及发病机制目前尚未明确。临床单靶点用药疗效不佳,且副作用不容忽视。中医药治疗AD显示出多靶点、低毒副作用的优势,其中补益脾胃元气方药疗效肯定。国内外学者试图从现代医学角度揭示此类方药防治AD的相关机制。本文旨在总结相关研究资料,归纳补益脾胃元气方药改善AD临床症状及干预AD病理进展的作用机制,为筛选临床有效方剂及开展更深入的研究提供参考。     

养肝熄风方药对脑缺血大鼠神经干细胞增殖的影响

本研究观察中医养肝熄风方药对缺血脑损伤大鼠侧脑室下区(SVZ)细胞增殖及nestin阳性细胞表达的影响。1材料和方法12周龄SD雄性大鼠,体重250~280g,由中国科学院上海分院实验动物中心提供。行右侧大脑中动脉线栓法(MCAO)造模,方法如下:大鼠以10%水合氯醛(0.36g/kg,腹腔注射)麻醉,     

不同疗程电针干预对放射线照射小鼠海马神经干细胞增殖分化的影响

目的:观察不同疗程电针干预对放射性脑损伤小鼠海马区内源性神经干细胞增殖和分化的影响,探讨其改善放射性脑损伤的作用机制。方法:30日龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组、电针1组、电针2组和电针3组,每组10只。除对照组外,其他6组给予放射线照射(8 Gy)10 min制备放射性脑损伤模型,造模后3个电针组分别给予电针"百会""风府"和双侧"肾俞"1周、2周和3周。用新物体认知实验检测各组小鼠认知功能,免疫组织化学法检测海马区5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的阳性表达,免疫荧光法检测海马区神经元核抗原(NeuN)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的阳性表达。结果:与同时点对照组比较,各模型组小鼠在训练结束90 min和24 h时对新物体的探索时间均显著减少(P<0. 01);90 min时,模型3组小鼠的的认知指数显著下降(P<0. 05),24 h时,各模型组小鼠的认知指数均显著下降(P<0. 05);模型1组和模型2组小鼠海马区BrdU阳性细胞表达明显下降(P<0. 01);各模型组小鼠BrdU/NeuN双标阳性细胞数量均显著减少(P<0. 05),模型1组和模型3组BrdU/GFAP双标阳性细胞表达显著降低(P<0. 05)。与同时点模型组比较,各电针组在两个时间点对新物体的探索时间均明显增加(P<0. 05,P<0. 01);90 min时,电针3组的认知指数显著高于模型3组(P<0. 05),24 h时,电针2组和电针3组小鼠认知指数显著高于同时点模型组(P<0. 01);各电针组小鼠海马区BrdU阳性细胞、BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞均比同时点模型组显著增加(P<0. 05,P<0. 01,P<0. 001)。结论:不同疗程电针干预均可改善放射线照射小鼠的认知功能,可能与其促进小鼠海马区神经干细胞的增殖和分化有关。     

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠学习记忆及海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路的影响

目的观察补益脾胃元气类方药人参汤、洗心汤、大补元煎对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马区蛋白激酶A(PKA)/细胞外调节激酶(ERK)/磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)信号通路的影响,探讨其防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、安理申组、补益脾胃元气类方药组(人参汤组、大补元煎组、洗心汤组),另以3月龄SAMR1小鼠作为对照组,共6组,连续ig给药10周后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间学习记忆能力。免疫组化法检测PKA蛋白表达,免疫荧光法检测ERK、p-CREB蛋白表达。蛋白印迹法检测小鼠海马区PKA、p-CREB、ERK蛋白表达。结果与模型组比较,补益脾胃元气类方药各组小鼠逃避潜伏期缩短,在目的象限游泳时间及穿越平台次数增加(P0.05、0.01);免疫组化结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区PKA蛋白表达量增加;免疫荧光结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区ERK、p-CREB蛋白表达量增加;蛋白印迹实验结果与免疫组化、荧光结果一致(P0.05、0.01)。结论补益脾胃元气类方药对SAMP8小鼠空间学习记忆有明显的改善作用,其机制可能与改善海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路有关。     

电针对脾虚证幼鼠海马区神经干细胞增殖和分化的影响

目的:通过观察电针对脾虚证幼鼠海马齿状回区神经干细胞增殖和分化的影响,探讨电针对中枢神经细胞损伤的保护和治疗作用。方法:4周龄SD雄性大鼠,随机分为正常组、模型组、电针组,每组各24只。3组再分别随机分为7、14、28和49 d等4个亚组,每亚组6只。用利血平腹腔注射联合大黄灌胃造脾虚证模型。造模结束后,电针组取双侧"足三里"和"三阴交"穴,每次电针20 min,每日1次,直至大鼠被处死。运用双重免疫组化法检测大鼠海马齿状回区5-溴脱氧尿苷(Brdu)、Brdu/巢蛋白(Nestin)、Brdu/神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、Brdu/神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞数。结果:与正常组同时相比较,Brdu、Brdu/GFAP、Brdu/NSE阳性细胞的表达在模型组7 d组和14 d组显著降低(P<0.05);Brdu、Brdu/Nestin、Brdu/GFAP阳性细胞的表达高峰出现在电针组14 d组,而Brdu/NSE阳性细胞表达的高峰出现在电针组28 d组,与同时相模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脾虚证可导致神经干细胞增殖和分化能力降低。电针"足三里"三阴交"穴可促进脾虚证大鼠海马齿状回区神经干细胞的增殖,适当地促进增殖的神经干细胞向星形胶质细胞及神经元方向分化。     

中医药诱导缺血性脑损伤后海马神经干细胞增殖分化的研究进展

海马神经组织的干细胞具有多分化的潜能,通过采取干预措施调控相关通路可促使其分化、增殖、迁移形成神经元和神经胶质细胞,并且新生成的神经元可替代受损的神经细胞,修复神经损伤。缺血性脑损伤后神经元、胶质细胞、血管内皮细胞等组织结构会遭受损伤与破坏,因此通过激活海马神经干细胞促进其增殖、分化修复受损的神经组织成为治疗缺血性脑损伤的重要手段和方法。目前在中医药对缺血损伤后神经组织特别是神经元的修复和再生等方面进行了大量的实验研究,并在中医药诱导海马神经干细胞增殖分化,修复缺血损伤神经元的研究中取得了一定的成果。     

补益脾胃元气方药对Aβ诱导的海马神经元JNK及p38MAPK信号通路相关蛋白及其磷酸化表达的影响

目的:通过研究补益脾胃元气类方药人参、大补元煎、洗心汤对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导的海马神经元JNK(c-Jun N-terminal kinase,JNK)及p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路的影响,探讨补益脾胃元气方对Aβ诱导的海马神经元损伤的保护作用及防治阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)的可能机制。方法:通过寡聚肽Aβ_(1～42)诱导海马神经元损伤模拟AD细胞模型;分别以蒸馏水、人参、洗心汤、大补元煎颗粒剂溶液对新西兰家兔灌胃给药,14天后抽取各组脑脊液,与终浓度为25μmol/L的寡聚肽Aβ_(1～42)单独或共同作用于原代海马神经元48小时,分别检测模型组、正常脑脊液对照组、安理申组、人参组、大补元煎组、洗心汤组海马神经元JNK和磷酸化JNK(phosphorylated JNK,p-JNK)及p-38MAPK和磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38,p-p38MAPK)的表达水平。结果:对培养至7～8天的成熟原代海马神经元,进行神经元树突标志物微管相关蛋白-MAP2标记,结果显示原代海马神经元在所培养的总细胞中所占比例达到95%以上。免疫荧光实验显示,人参、大补元煎及洗心汤三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达明显降低(P0.05),蛋白印迹实验中三组补益脾胃元气方药中p-JNK、p-p38MAPK的表达同样降低(P0.05)。结论:补益脾胃元气方药可通过抑制JNK和p38MAPK信号通路中关键信号分子p-JNK、p-p38MAPK蛋白的表达,有效拮抗Aβ_(1～42)神经毒性,抑制由Aβ_(1～42)诱导的JNK和p38MAPK信号通路激活所引发的炎症信号通路活性增强及细胞损伤凋亡发生,起到神经保护作用。     

中医药对神经干细胞增殖分化作用的研究

神经干细胞的定向分化问题是神经干细胞移植治疗中的难点,目前还没有行之有效的办法。中医药在神经干细胞定向分化方面进行了一定探索,并取得一些进展,近年来的研究表明中药复方、单味中药及中药单体都有促进神经干细胞分化增殖的作用。当然这些研究多数还比较肤浅,有待进一步深化。     

补益脾胃方药对脾虚衰老大鼠生物膜磷脂构成的影响

目的 :探讨磷脂成分的变化与衰老的关系 ,从而揭示补脾益智三方延缓衰老的作用机理。方法 :塑造青年及老年大鼠脾气虚、脾阳虚及脾阴虚证模型 ,分别用补益脾气、温运脾阳和滋补脾阴方药预防治疗 ,观察红细胞膜总磷脂 (PL)、总胆固醇 (Ch)及膜磷脂组分的磷脂酰胆碱 (PC)、磷脂酰乙醇胺 (PE)、神经磷脂 (SM )含量的变化及其与脾虚衰老的关系。结果 :伴随增龄 ,细胞膜胆固醇及神经磷脂含量明显升高 ;细胞膜老化指数胆固醇与膜总磷脂的分子比、神经磷脂与磷脂酰胆碱的分子比值明显升高。而脾虚造模的因素也可使上述指标明显升高 ;补益脾胃方药可以降低不同证型脾虚证老年大鼠的胆固醇及神经磷脂含量 ,降低老化指数。结论 :细胞膜脂类构成的改变 ,是脾虚衰老的病理反应之一 ,补益脾胃方药能改善脂类的构成 ,降低老化指数 ,延缓细胞衰老进程。     

电针对阿尔茨海默病模型幼鼠海马内源性神经干细胞增殖的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型幼鼠海马内源性神经干细胞增殖的影响,探讨电针防治AD的作用机制.方法:将40只1.5月龄APP/PS1转基因雄性幼鼠随机分为电针组和模型组,每组20只;20只同月龄C57BL/6J雄性幼鼠作为正常对照组.电针组于"百会""风府""肾俞"行电针干预,断续波,频率10 Hz,电流强度...     

补益营卫方对衰老表皮干细胞增殖的影响

目的研究补益营卫方对衰老皮肤表皮干细胞增殖的影响,探讨其延缓皮肤衰老的可能机制。方法 10只3月龄SAMR1种小鼠作为年轻组,40只8月龄SAMP1种小鼠作为老年组和补益营卫方高、中、低剂量组,每组10只,药物组分别按高、中、低剂量灌胃饲养。老年组和年轻组生理盐水灌胃,连续6周。灌胃饲养结束前两周给小鼠腹腔注射BrdU,取背部皮肤冷冻切片。免疫荧光法检测各组表皮干细胞增殖标志物ki67的表达。原代C57BL/6小鼠表皮干细胞的分离及培养,MTT法选择5%加药浓度绘制生长曲线。MTT法检测表皮干细胞增殖率。结果与年轻组比较,老年组增殖标志物ki67的表达水平显著降低(P0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖标志物ki67的表达水平均升高,其中中、高剂量组表皮干细胞数目显著增多(P0.05)。与年轻常规组比较,老年常规组原代培养的干细胞增殖率显著降低(P0.05);经药物干预后,衰老表皮干细胞增殖率显著升高(P0.05)。结论补益营卫方可能通过影响增殖标志物ki67的表达与干细胞增殖率,提高表皮干细胞的活性,增加表皮干细胞数量,延缓皮肤衰老。     

中药调节神经干细胞增殖分化的研究进展

神经干细胞(neural stem cells,NSCs)指能自我更新,并具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞潜能的细胞群。目前,神经再生和NSCs移植已成为治疗神经系统疾病的新策略,但NSCs移植仍存在存活率不高、定向分化困难、易成瘤和难以穿透疤痕组织等问题。如何通过调控内源性NSCs的增殖和定向分化是成体神经再生研究的新热点问题。药物诱导内源性NSCs增殖和定向分化的技术有望应用于再生医学,修复受损的神经,治疗中枢神经系统疾病。中药作为我国的传统医药,具有多靶点、多环节、多途径的治疗特点,在促进神经再生方面具有独特优势和广阔前景。近年来药理学研究表明中药可通过调控胞外信号通路[如Notch,Wnt/β-catenin,the Sonic Hedgehog(Shh)通路等],影响胞内转录因子以及改变神经发生微环境(如神经营养因子BNDF等)等多种途径间接或直接调控NSCs的增殖和分化。对近年来中药复方、中成药、单味中药及天然产物调节NSCs增殖分化的分子机制相关研究加以归纳总结,为中药防治中枢神经系统疾病提供新的思路。     

补益脾胃法对脾阴虚证老龄大鼠海马超微结构的影响

目的:通过观察脾阴虚证大鼠海马细胞超微结构的变化,探讨脾虚衰老的病理变化及补益脾胃法延缓衰老的可能机制.方法:采用饮食不节、疲劳过度和燥热伤阴药物损伤等复合因素建立脾阴虚证青年大鼠及老年大鼠模型.用补益脾胃方药进行治疗.观察海马超微结构.结果:衰老大鼠海马细胞呈退行性变化,可见细胞凋亡.补益脾胃方药可以改善海马组织衰老性改变,尤其对青年脾虚证大鼠.结论:补益脾胃方药可以改善衰老大鼠海马组织细胞凋亡进程,可能是通过抗自由基及调节衰老基因起作用的.     

补益脾胃法对脾阴虚证老龄大鼠海马超微结构的影响

目的：通过观察脾阴虚证大鼠海马细胞超微结构的变化，探讨脾虚衰老的病理变化及补益脾胃法延缓衰老的可能机制。方法：采用饮食不节、疲劳过度和燥热伤阴药物损伤等复合因素建立脾阴虚证青年大鼠及老年大鼠模型。用补益脾胃方药进行治疗。观察海马超微结构。结果：衰老大鼠海马细胞呈退行性变化，可见细胞凋亡。补益脾胃方药可以改善海马组织衰老性改变，尤其对青年脾虚证大鼠。结论：补益脾胃方药可以改善衰老大鼠海马组织细胞凋亡进程，可能是通过抗自由基及调节衰老基因起作用的。     

中药皂苷对干细胞增殖分化的影响

干细胞的研究对基础医学研究具有极大的推动作用和广阔的临床应用前景.干细胞具有多向分化的潜能,对组织器官的损伤修复具有重要意义.如何诱导干细胞分化成为人们所期待的细胞组织,是目前干细胞研究领域的关键.文章综述通过对国内外相关文献研究分析结果表明,人参、三七、黄芪、绞股蓝等中药中的皂苷类成分对多种干细胞的增殖、分化与功能的建立均具有明显的促进作用.这些研究不但揭示了这些中药作用机制的物质基础,也为促进干细胞定向分化的组织修复开辟新的途径,对中药现代化研究与开发,以及对某些疑难疾病治疗等具有重要意义.     

黄芪多糖含药血清对神经干细胞增殖和分化的影响

目的:观察黄芪多糖及其含药血清对神经干细胞增殖和分化的影响。方法:将神经干细胞随机分为空白对照组、空白血清组、黄芪多糖组、黄芪多糖含药血清组,培养7 d后,采用间接免疫荧光法检测Nestin,β-tubulinⅢ和GFAP,通过CCK-8检测细胞增殖,Elisa检测VEGF,Western Blot法检测PI3K、P-Akt和突触素p38表达。结果:黄芪多糖含药血清与黄芪多糖均能诱导神经干细胞增殖和向NSE分化,提高VEGF含量及PI3K、P-Akt和突触素p38表达。结论:黄芪多糖含药血清通过调节VEGF含量,活化PI3K/Akt信号通路,促进Akt磷酸化,调节下游靶基因,促进神经干细胞增殖;通过VEGF影响钙离子通道,提高突触素p38表达,促进神经干细胞向神经元分化。