乙肝病毒核酸荧光定量与乙肝免疫标志物定量检测及肝功能的相关性研究

：目的 探讨乙型肝炎病毒（Hepatitis B viral, HBV）脱氧核糖核酸（DNA）含量与HBV免疫标志物（HBVM）和肝功能损害程度的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA含量，用时间分辨荧光分析法定量检测五种HBVM（HbsAg、HbsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb），用速率法监测谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）水平，以了解乙肝患者肝功能的损害程度。结果 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性患者HBV-DNA阳性率要明显高于HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性患者（P<0.01）及HBsAg、HBcAb阳性患者（P<0.05）；HBeAg 与HBV-DNA拷贝数呈明显的正相关（r=0.474,P<0.05）；HBV-DNA载量与ALT、AST含量具有明显的正相关（前者r=0.286,P<0.05；后者r=0.296,P<0.05）。结论 血清中HBV-DNA含量与乙型肝炎免疫标志物以及肝细胞损害程度三者之间存在密切的关系，在临床工作中应对血清乙肝免疫标志物、ALT、AST和HBV-DNA含量联合检测，这样才能更准确地判断患者病情、预后及指导抗病毒药物的应用。     

乙肝血清学标志物定量检测与HBV-DNA定量检测结果的相关性分析

目的探讨乙肝血清学标志物定量结果与HBV-DNA检测结果的相关性,以及两者联合检测在乙型肝炎疾病诊断中的作用。方法收集来本院就诊的548例乙型肝炎患者的血清。采用化学发光免疫分析法定量检测乙型肝炎患者血清学标志物,用荧光定量PCR技术检测HBV-DNA的拷贝数,并分析其相关性。结果乙型肝炎患者血清学标志物（HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc）的定量检测结果与HBV-DNA拷贝数的对数值之间Spearman相关分析结果分别为r2=0．016、P=0．716;r2=0．049、P=0．251;r2=0．588、P=0．000;r2=0．487、P=0．000;r2=0．092、P=0．032。结论乙型肝炎患者血清标志物HBeAg与HBV-DNA载量存在正相关,Anti-HBe与HBV-DNA含量存在负相关。血清学标志物检测与HBV-DNA检测需联合应用才能作出更准确判断。     

乙型肝炎血清免疫学标志物与HBV DNA定量检测的相关性

目的探讨乙型肝炎病毒血清免疫学标志物(HBV-M)与HBV DNA定量的相关性。方法采用ELISA法和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术分别对245例乙型肝炎患者血清进行HBV-M的定性检测及HBV DNA的定量检测。结果 ELISA检测结果为HBsAg(+)HBsAb(-)HBeAg(+)HBeAb(-)HBcAb(+)共83例(大三阳),其中77例(92.78%)为HBVDNA阳性(HBV DNA>1.0×102copy/mL)。ELISA检测结果为HBsAg(+)HBsAb(-)HBeAg(-)HBeAb(+)HBcAb(+)共150例(小三阳),其中78例(52.00%)为HBV DNA阳性(HBV DNA>1.0×102copy/mL)。大三阳组与小三阳组HBV DNA定量检测的差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果为HBsAg(+)HBeAg(+)的患者体内HBV DNA阳性率为96.55%,且81.60%的HBV DNA在1.0×105~1.0×108copy/mL。结论 HBV DNA的含量与HBV-M检测结果具有相关性,两者联合,对临床诊断、治疗及预后有重要的意义。     

乙肝病毒与乙肝病毒标志物的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒标志物的检测与其DNA的关系。方法取乙肝患者与阴性对照组患者的血液,提取血液总RNA后进行逆转录,再用实时荧光定量PCR检测乙肝标志物,如HBsAg,HBeAg,PreS2。结果定量PCR发现乙肝患者比对照组HBsAg,HBeAg,PreS2均上调。结论可以用荧光定量PCR检测乙肝病毒标志物来鉴定乙肝患者。     

乙肝病毒外膜大蛋白与乙肝病毒标志物定量及HBV DNA检测的关系研究

目的 通过检测慢性乙肝患者乙肝病毒大蛋白(HBV-LP)、HBV DNA、前S1抗原(Pre-S1)、乙肝病毒标志物(HBVM),探讨HBV-LP与上述其他指标的关系,研究HBV-LP反映HBV复制情况的可靠性.方法 对192例慢性HBV感染者及50例健康对照血清采用ELISA法检测HBV-LP、PreS1;时间分辨法定量测定HBVM,FQ-PCR定量检测HBV DNA.结果 慢性乙肝患者HBV-LP与HBV DNA检测结果 差异无统计学意义(P<0.05),HBV-LP与PreS1阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01),不同HBVM模式的HBV-LP与HBV DNA检测结果 差异无统计学意义(P>0.05),HBV DNA拷贝数与HBV-LP A值具有相关关系(相关系数r=0.915),而与HBVM中HBsAg的定量值无相关关系.结论 HBV-LP是反映HBV复制程度的可靠指标,是对HBeAg检测的补充;血清中HBV-LP含量与HBV DNA拷贝数具有较好的相关性,可作为判断HBV复制新的血清学指标,尤其对HBeAg(-)患者意义更为显著.     

乙肝病毒DNA与乙肝病毒血清标志物的相关性

我国乙型病毒性肝炎(乙肝)患者众多，据估计约有9．5％乙肝表面抗原(HBsAg)阳性者，严重危害人民健康，如何尽早地发现乙肝病毒(HBV)感染或携带者，是广大临床检验工作者关心的问题。多聚酶链反应(PCR)法是目前检测HBV的最敏感手段之一，能够直接检测血清中的HBV-DNA，是乙肝病毒复制的最直接标志，且与传染性密切相关。因此笔者就用荧光PCR法测定308例乙肝患者HBV-DNA与用ELISA法测定其HBV标志物进行相关性及敏感性的探讨。     

定量PCR法检测HBV DNA与HBV血清标志物的相关性

目的　探讨血清HBV DNA水平与HBV血清标志物 ( HBVM)的相关性。方法　对 1 2 48例临床血清标本采用荧光定量 PCR法进行 HBV DNA检测 ,同时采用 ELISA法进行乙肝免疫学对比检测。结果　血清 HBV DNA水平与 HBV血清标志物的表现模式有关。以 HBs Ag( )、HBe Ag( )、HBc Ab( )模式患者的 HBV DNA阳性检出率最高 ,为 97.3 %( 4 99/5 1 3 ) ,DNA平均拷贝数为 8.41× 1 0 7/ml;其次为HBs Ag( )、HBe Ab( )、HBc Ab( )模式 ,HBV DNA阳性检出率为49.4% ( 1 3 3 /2 69) ,平均拷贝数为 2 .3 3× 1 0 5/ml,均显著高于其他 HBVM模式的患者。结论　 HBe Ag和 HBV DNA有明显的相关性。定量检测 HBV DNA能真实反映 HBV复制情况 ,为乙型肝炎的诊断及疗效评价提供客观依据。     

血清HBVDNAPCR检测与血清学标志物相关性研究

乙肝病毒（HBV）感染的诊断，目前普遍使用放射免疫试验或免疫酶联试验来检测血清中的标志物．自1985年美国Cetus公司造传部Mullis等发明PCR技术后，就不断地应用于HBVDNA检测．PCRat感性极高，可检测到fg水平，因此在将PCR应用于临床检测时，很有必要探讨一下HBVDNAPCR检测与血清学标志物的相关性，以其给临床预后提供有利依据．1林场和方法1．1标本来源收集近期在消化科门诊病人310例，年龄在12～70岁。1．2M清学标志物HBSAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HDeAb等均用酶联免疫法检测，ELISA试剂盒由河南医科所提供．1·3H…     

乙型肝炎病毒基因分型与临床的相关性探讨

目的探讨本地区乙肝病毒基因型的分布状况及其与临床病情的相关性。方法收集无抗病毒治疗史的慢性乙型肝炎病人、慢性重型肝炎病人、拉米夫定治疗48周末达有效者、YMDD变异阳性的慢性乙型肝炎病人以及1896位点变异阳性的慢性乙肝病人共120例,采用微板核酸杂交法(PCR ELISA)技术进行HBV-DNA基因分型,比较各组基因型分布特点和不同基因型的临床资料。结果 120例病人中B型22．5％,C型65．8％,BC混合型10．0％;慢性重型肝炎组(B 组)与慢性肝炎轻中度组(A组)相比BC混合型明显增多,以C型及BC混合型为主,并显示统计学差异;拉米夫定治疗48周末达有效人群中(C组)B型比例较高,而1896位点变异组(E组)则显示C型比例更高,但与A组相比基因型的分布并未提示统计学差异。B、C基因型间病毒载量相似,C基因型病人血清转氨酶高于B基因型,差异有统计学意义(P<0．05)。结论本地区乙肝病毒绝大多数为B型和C型,且以C型为主;C型和BC混合型可能与乙型肝炎肝组织损害加重有关;拉米夫定疗效、YMDD变异以及1896变异与HBV基因型之间未显示必然的联系。     

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV—DNA定量联合检测的意义

目的探讨乙型肝炎（下称乙肝）病毒DNA（HBV-DNA）与血清免疫标志物的关系。方法荧光定量聚合酶链反应法（FO-PCR）检测血清样本中HBV—DNA含量;酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV血清标志物。结果A组（大三阳）、B组（小三阳）、C组[乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝e抗原（HBeAg）阳性]、D组（HBsAg、抗-HBc阳性）阳性率分别为97．3％、57．8％、100％、54．3％,HBeAg阳性组和HBeAg阴性组HBV-DNA病毒载量差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HBV—DNA与乙肝血清标志物乙肝两对半（HBV-M）联合检测,能更准确地反映HBV复制情况,更有助于临床疾病的诊治。     

拔牙术中乙型、丙型肝炎病毒污染的调查及对策

目的对常规拔牙术中乙型、丙型肝炎病毒污染情况进行调查,进一步控制医源性感染。方法随机抽取500例门诊拔牙患者的术中止血棉球,分别浸入2个（A、B）盛有1ml生理盐水的无菌试管内,其浸出液分别用两种方法进行肝炎病毒检测。结果A组（HBsAg）检测到40例阳性（8．00％）,B组（IgG）检测到12例阳性（2．40％）,HBsAg和IgG检测到A组和B组同时阳性2例（0．40％）;500例门诊拔牙患者中检测到被肝炎病毒感染的有54例,占调查总人数的10．8％。结论口腔门诊乙型、丙型肝炎感染率很高,迫切要求口腔医务工作者要加强职业防护,有效防治肝炎病毒通过口腔科诊疗传播。     

乙肝病毒五项标志物检测的布板法改进及优势分析

目的通过对乙肝病毒(HBV)五项标志物检测方法的改变,可以随机快速定性或定量的检测。方法将原来的大样本单项布板改变成小样本量纵向五联法布板,进行干扰试验和携带污染试验。结果方便了实验操作,各板单列时高含量的HB sA g ,HB sA b ,HB eA g 在测试时均有一定的携带污染率。HB sA g酶标液可使HB sA b,HB eA b,HB cA b检测孔呈阳性。HB sA b酶标液可使HB sA g,HB eA b,HB cA b检测孔呈阳性。HB cA b酶标液可使HB cA b检测孔呈阳性。HB eA b,HB eA b的酶标液对各检测孔均无干扰。由于HB sA g,HB sA b的酶标液对HB sA b,HB sA g的包被孔可以相互干扰,而HB eA g的酶标液对两者均无干扰。高含量的HB sA g ,HB sA b ,HB eA g 血清在测试时均有一定的携带污染率。纵向五联排列每列为同一样本不存在携带污染问题。结论可以提高检测结果的准确性,提高抗干扰能力,提高实验方法的精密度,方便结果的报告,加强批间质量控制,可以随机快速定性或定量的检测HBV五项标志物。     

COBAS Taqman HBV DNA的方法学验证

目的 评估COBAS Taqman HBV DNA分析系统的性能及临床应用.方法 依据美国国家临床实验室标准化委更会(NCCLS)制订的临床化学方法评价方案(evaluation protocols),通过精密度、携带率、线性评价、仪器同比对、参考范围确认等试验,对COBAS Taqman HBVDNA分析系统的性能参数进行了评估.结果 COBAS Taqman分析系统批内变异6.9%～8.6%,批间变异10.5%～18.7%,总变异10.8%～20.2%,线性范围6.0～101 IU/ml,回收率98.7%～104.5%.仪器间比对相关性较好(r2=0.998).结论 COBAS Taqman HBV DNA分析系统性能指标符合要求,操作简便、快捷,动力学范围广,是目前理想的HBV DNA检测方法.通过此次验证,建立了一套简便的核酸检测方法学评价方案,有利于临床实验室标准化操作的实施.     

COBAS Taqman HBVDNA的方法学验证

目的 评估COBAS Taqman HBV DNA分析系统的性能及临床应用。方法依据美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）制订的临床化学方法评价方案（evaluation protocols），通过精密度、携带率、线性评价、仪器间比对、参考范围确认等试验，对COBAS Taqman HBV DNA分析系统的性能参数进行了评估。结果COBAS Taqman分析系统批内变异6．9％～8．6％，批间变异10．5％～18．7％，总变异10．8％～20．2％，线性范围6．0～10^7IU／ml，回收率98．7％～104．5％。仪器间比对相关性较好（r^2=0．998）。结论COBAS Taqman HBV DNA分析系统性能指标符合要求，操作简便、快捷，动力学范围广，是目前理想的HBV DNA检测方法。通过此次验证，建立了一套简便的核酸检测方法学评价方案，有利于临床实验室标准化操作的实施。     

慢性乙型肝炎患者肝穿病理与临床指标的关系

目的 分析慢性乙肝患者血清生化、血常规、血清病毒载量及乙型肝炎标志物与肝组织炎症分级、纤维化分期的相关性,以找到有较好相关性的临床指标;通过肝活检证实临床诊断与病理诊断的符合情况,探讨肝活检的重要性及价值。方法 对2007年6月—2009年8月在传染科行肝穿刺活检的359例慢性乙型肝炎患者的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TB）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）等指标,白细胞（WBC）、血小板（PLT）等指标,凝血酶原时间（PT）,血清HBV DNA定量及乙肝标志物的不同状态与肝穿病理分级、分期的相关性进行分析;统计慢性乙肝患者临床诊断与病理诊断的符合情况。结果 肝组织炎症分级及纤维化分期之间有一定相关性（P〈0.05）;血清ALT、AST、ALB、GLB、PT有助于判断肝组织炎症程度（P〈0.05）;ALB、GLB、WBC、PLT、PT对肝组织纤维化程度的评估有意义（P〈0.05）;HBV DNA复制水平与肝组织炎症及纤维化无关（P〉0.05）,但存在负相关的趋势;纤维化程度高的患者HBeAg阴性组较HBeAg阳性组更多（P〈0.05）。慢性乙型肝炎患者临床与病理诊断总符合率为56.3％。结论 动态监测慢性乙肝患者肝功能、血常规、凝血常规在一定程度上有助于判断疾病的程度,但要确诊肝组织炎症分级及纤维化分期,肝组织病理活检是必需的。     

乙型肝炎病毒感染对造血干细胞移植后肝脏功能的影响

本研究旨在分析乙型肝炎病毒（HBV）感染对造血干细胞移植（HSCT）后肝功能的影响。对我院2000年1月一2010年5月间行HSCT的患者中48例HBV感染的患者临床资料进行回顾性分析。结果袁明：在移植后6个月内,HBsAg（＋）组、HBsAb（＋）组和对照组患者谷丙转氨酶（ALT）的峰值分别为（281．6±414．6）、（95．4±79．9）和（65．1±44．2）U／L,肝功能明显异常发生率分别为61．54％,40．00％和30．23％,任2组之间比较均无统计学显著差异（P〉0．05）。HBsAg（＋）组2例患者在移植后早期出现致死性的急性肝功能衰竭,发生率为15．4％（2／13）,其中1例可能与HBV激活有关。1例移植前应用更昔洛韦抗病毒治疗的患者,移植后没有出现肝功能损害的表现。结论：HBsAg（＋）患者接受HSCT时,肝功能损害较对照组更为严重,应加强保肝治疗。移植前预防性的更昔洛韦抗病毒治疗可能对预防HBV的激活有效。     

200例乙型肝炎患者HBV基因型分布及临床意义

目的探讨200例武汉地区乙型肝炎病毒（HBV）感染者病毒基因型的分布及其与肝病严重程度的相关性。方法采用半巢式PCR对200例来自武汉地区的乙肝病毒感染者血浆HBV进行扩增后,Sanger测序法进行基因分型。结果200例HBV血浆样本的基因型分布为B型142例（71．0％）,C型55例（27．5％）,D型1例（O．5％）和B／C混合型1例（O．5％）,B／F／G混合型1例（O．5％）。在基因型B和基因型C中,无症状携带HBV患者、轻中度慢性乙肝患者、重度肝炎及肝硬化患者、肝癌患者的构成比分别为：37．32％,44．37％,14．08％,4．23％和23．64％,36．36％,21．82％,18．18％,两种基因型在肝病严重程度中的构成比差异有统计学意义（P〈O．05）。结论分离的200例HBV样本基因型以B,C为优势基因型,且基因型与HBV感染者发生肝病的严重程度有显著相关性。