四氢苯并咪唑类衍生物的合成及其环氧合酶-2抑制活性

目的 寻找新型不良反应小的环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂.方法 结合典型COX-2选择性抑制剂基本结构特征,设计并合成一系列新型四氢苯并咪唑类化合物.采用化学发光法测试化合物对环氧合酶-2的抑制活性.结果与结论 设计并合成了13个新型四氢苯并咪唑类化合物,其结构经元素分析、1H-NMR、13C-NMR和MS确证,所有化合物均未见文献报道.部分化合物对环氧合酶-2的抑制活性结果表明,化合物1、3、6对COX-2有一定的抑制作用.     

伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制研究

目的 探究伪石蒜碱抑制活化T细胞增殖与功能的机制。方法 密度梯度离心法和免疫磁珠法分离纯化T细胞,抗CD3/CD28或植物凝集素（phytohemagglutinin,PHA）活化T细胞。流式细胞术检测细胞增殖、细胞凋亡、CD25表达及细胞周期;ELISA检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌水平。结果 伪石蒜碱抑制抗CD3/CD28或PHA活化T细胞增殖,IC₅₀分别为（0.97±0.22）μmol·L^-1和（0.82±0.07）μmol·L^-1。在完全抑制活化T细胞增殖的浓度下,伪石蒜碱不诱导活化T细胞凋亡,且不对静息T细胞的细胞活力产生显著影响。伪石蒜碱不影响活化T细胞表达CD25和分泌IL-2,但阻滞细胞周期于G0/G1期。伪石蒜碱显著抑制IL-6、IL-17A、IFN-γ的分泌。结论 伪石蒜碱不影响T细胞的活化,但通过阻滞细胞周期于G0/G1期抑制活化T细胞的增殖,提示伪石蒜碱有望成为先导化合物用于开发新型免疫抑制剂。     

一种吲唑类衍生物DY386抑制人前列腺癌细胞增殖及其机制的初步研究

目的探索DY386对多种肿瘤细胞的抗肿瘤活性,探讨其抑制前列腺癌DU145细胞增殖的分子机制。方法采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)]法测定DY386对多种肿瘤细胞抑制作用;克隆形成、BrdU标记实验检测DY386抑制DU145细胞增殖的作用;流式细胞术检测DY386对DU145细胞周期的影响;Western blot检测周期相关蛋白表达。结果 DY386对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性,其中对前列腺癌DU145细胞抑制活性最高,半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值为11. 86μmol·L~(-1)。DY386化合物通过抑制Cyclin E1、Cyclin B1蛋白表达,上调周期抑制蛋白p27表达,将前列腺癌DU145的细胞周期阻滞在S期,从而抑制肿瘤细胞增殖。结论 DY386具有一定的抗前列腺癌活性,其机制可能是通过阻滞细胞周期抑制细胞增殖。     

CD4^＋CD25^＋T细胞亚群在系统性红斑狼疮患者中的检测和意义

目的:探讨CD4+CD25+T细胞亚群在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.方法:采用流式细胞仪检测35例SLE患者(其中活动组20例)及18例健康对照组的外周血CD4+CD25+T细胞亚群的百分比及其CD4+CD25highT细胞与CD4+CD25intT细胞的比率,同时评估疾病活动指数(SLEDAI),分析两者的相关性.结果:活动组和非活动组SLE患者外周血总CD4+GD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞和CD4+CD25intT细胞占CD4+T细胞的百分比与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05),且与SLEDAI无相关性.活动组SLE患者外周血CD4+CD25highT细胞与CD4+CD25intT细胞的比率与非活动组及健康对照组相比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),且与SLEDAI呈明显负相关.结论:活动性SLE患者外周血CD4+CD25highT细胞与CD4+CD25intT细胞的比率降低可能在SLE的发病中起到重要的作用.     

十二元环红霉素衍生物对T淋巴细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨十二元环红霉素衍生物(LY267108)对T淋巴细胞增殖和细胞周期的影响。方法用MTT法观察LY267108和红霉素对T淋巴细胞增殖的影响;用流式细胞仪经PI染色观察LY267108和红霉素对T淋巴细胞周期的影响。结果LY267108和红霉素抑制T淋巴细胞的增殖IC50值分别为(176.38±10.42)×10-6mol.L-1和(606.28±35.43)×10-6mol.L-1;在3.0~30.0 mg.L-1之间LY267108引起T淋巴细胞G2/M期周期阻滞;红霉素在30.0 mg.L-1和100.0 mg.L-1时出现凋亡峰。结论红霉素衍生物的抗炎活性可能与该类化合物对炎症细胞的影响有关。     

恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞CD25的测定与临床检验学研究

目的探讨恶性肿瘤患者T淋巴细胞CD25＋水平的临床意义。方法用流式细胞仪检测70名正常人和274例恶性肿瘤患者外周血CD4＋CD25＋和CD8＋CD25＋水平。结果恶性肿瘤患者外周血CD4＋CD25＋水平比正常人高,差异有统计学意义（P〈0.05）;恶性肿瘤患者外周血CD8＋CD25＋水平与正常人比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。其中,食管癌、肝癌和肺癌的CD4＋CD25＋水平与正常人比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;肠癌、胃癌和鼻咽癌的CD4＋CD25＋水平与正常人比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论恶性肿瘤患者外周血CD4＋CD25水平的增高可作为恶性肿瘤免疫诊断的参考指标。     

白细胞介素-2介导体内T细胞调节功能的研究进展

白细胞介素-2(IL-2)被认为是重要的T细胞生长因子,已经用于临床,并取得一定的疗效。体内IL-2信号缺失时,却又表现为明显的自身免疫性疾病。本文就IL-2在体内介导T细胞调节功能的研究进展简单做一综述。     

CD4~＋CD25~＋调节性T细胞在肺癌患者中的表达及临床意义

目的探讨肺癌患者外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的表达及其临床意义。方法应用流式细胞术分析45例肺癌患者与15例健康对照组外周血CD4＋CD25＋Treg细胞占CD4＋T细胞的比例。结果肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Treg细胞占CD4＋T细胞比例为（17.8±6.6）%,表达高于对照组（6.49±0.5）%（P〈0.001）。肺癌患者外周血中Treg细胞数量在不同临床分期和组织学分化程度中的差异有统计学意义（P〈0.01）,但与患者的病理类型无关（P〉0.05）。结论 Treg细胞在肺癌患者中表达明显升高,是肺癌患者免疫功能紊乱的一个证据。     

紫杉醇对小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖作用的流式细胞术分析

目的研究紫杉醇对多克隆刺激剂作用下小鼠T细胞CD69、CD25表达及增殖的影响,并探讨其机制。方法利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测多克隆刺激剂佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA)刺激下小鼠T细胞表达活化抗原CD69、CD25的百分率;以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDASE)标记技术结合流式细胞术分析PDB+Ion(Ionomycin)或ConA刺激下T细胞增殖指数。结果PTX无论对ConA或PDB刺激组T细胞CD69表达均无抑制作用(P>0.05),而对T细胞CD25表达有明显抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系;PTX无论对ConA或PDB+Ion刺激组T细胞增殖均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系。但在ConA及PDB+Ion刺激初立即或是24h后加入不同浓度的PTX,PTX抑制T细胞增殖作用无差异(P>0.05)。结论PTX可明显抑制多克隆刺激剂诱导的T细胞中后期活化及增殖,其作用机制可能与早期活化相关蛋白PTK及PKCθ无关,而与PKCθ下游活化信号相关。     

川芎嗪衍生物影响肝星状细胞增殖的作用机制研究

目的研究川芎嗪衍生物H168抑制肝星状细胞(HSC-T6)增殖的机制。方法 MTS比色法观察H168对HSC-T6细胞增殖的影响;流式细胞仪检测H168对细胞周期的影响;应用Western blot和Real time PCR方法观察H168对p21/p27蛋白及mRNA表达的影响。结果 MTS结果显示H168具有明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,呈现量效关系。流式细胞周期检测发现H168作用24 h后,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少;Western blot结果显示H168通过促进p21/p27蛋白表达抑制细胞的增殖;进一步采用Real timePCR研究发现,H168能够从mRNA水平促进p21/p27表达。结论 H168能抑制HSC-T6细胞的增殖,这主要是通过促进p21/p27蛋白和mRNA的表达而抑制HSC-T6细胞增殖。     

氮网球花定碱盐酸盐对活化T细胞增殖的抑制作用

目的 探究氮网球花定碱盐酸盐(NMHC)抑制活化T细胞增殖的作用机制.方法 Ficoll法提取分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法纯化出PBMC中的T细胞,抗人CD3/CD28抗体活化纯化后的静息T细胞.NMHC 0.125,0.5,2和8μmol·L-1与静息T细胞作用,用流式细胞术检测细胞毒性(96 ...     

BD750, a benzothiazole derivative,inhibits T cell proliferation by affecting the JAK3/STAT5 signalling pathway

Background and Purpose

A series of benzothiazole derivatives were screened for immunosuppressive activity; of these compounds BD750 was found to be the most effective immunosuppressant. The purpose of the current study was to determine the immunosuppressive activity of BD750 on T cell proliferation and its potential mode of action.

Experimental Approach

T cell proliferation, CD25 and CD69 expression and cell cycle distribution were measured in vitro by flow cytometry. Cell viability was determined by CCK-8 assay. Cytokine levels were measured by elisa. The activation of signal-regulated molecules was assessed by Western blot analysis. The effects of BD750 were evaluated in vivo in a mouse model of delayed-type hypersensitivity.

Key Results

BD750 significantly inhibited mouse and human T cell proliferation, stimulated either by anti-CD3/anti-CD28 monoclonal antibodies or by an alloantigen, in a dose-dependent manner in vitro. No obvious cytotoxic effects of BD750 were observed in our experimental conditions. Furthermore, BD750 did not inhibit CD25 and CD69 expression or IL-2 and IL-4 secretion, but induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase in activated T cells. In IL-2-stimulated CTLL-2 cells and primary activated T cells, BD750 inhibited cell proliferation and STAT5 phosphorylation, but not Akt or p70S6K phosphorylation. BD750 also reduced the T cell-mediated delayed-type hypersensitivity response in mice in a dose-dependent manner.

Conclusion and Implications

These data indicate that BD750 inhibits IL-2-induced JAK3/STAT5-dependent T cell proliferation. BD750 has the potential to be used as a lead compound for the design and development of new immunosuppressants for preventing graft rejection and treating autoimmune diseases.     

Survivin基因在鼻型NK／T细胞淋巴瘤的表达及其与肿瘤细胞增殖的关系

目的探讨Survivin基因在鼻型NK／T细胞淋巴瘤中的表达,并初步分析肿瘤组织中Survivin基因表达与肿瘤细胞增殖的关系及其在鼻型NK／T细胞淋巴瘤发生发展中的意义。方法应用免疫组化Envision System检测鼻型NK／T细胞淋巴瘤和正常淋巴结组织中Survivin和ki-67的表达情况,计算肿瘤组织ki-67增殖指数,并对Survivin表达阳性组和阴性组ki-67增殖指数的差异进行分析。结果50例肿瘤组织中Survivin阳性表达率为60％（30／50）,12例正常淋巴结组织中Survivin阳性表达率为16．7％（2／12）,且主要局限于少数生发中心细胞（χ^2=7．28,P〈0．05）。Survivin基因阳性组ki-67增殖指数明显高于Survivin基因阴性组（t=2．80,P〈0．05）。结论Survivin高表达在鼻型NK／T细胞淋巴瘤的发生发展中可能有一定的作用。Survivin与增殖指数呈正相关,Survivin可能促进肿瘤细胞的增殖。     

猪囊尾蚴病患者CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的变化

目的检测猪囊尾蚴病患者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及其FOXP3的表达情况,探讨CD4+CD25+调节性T淋巴细胞在猪囊尾蚴感染中的免疫调控作用及意义。方法采用流式细胞仪检测11例猪囊尾蚴病患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞的含量,同时观察CD4+CD25+T细胞中表达FOXP3群体的百分含量。结果囊尾蚴病患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞的百分含量为6.11%,较正常人(3.94%)明显升高(P<0.05);患者外周血中CD4+CD25+T细胞表达FOXP3的细胞百分含量为15.67%,与正常对照组(11.09%)有显著性差异(P<0.05)。结论猪囊尾蚴病患者外周血中CD4+CD25+T淋巴细胞的百分含量显著升高,表明CD4+CD25+调节性T细胞可能参与猪囊尾蚴感染的免疫抑制。     

唐古特大黄多糖促进IEC-6细胞增殖、移行作用及其可能的机制研究

目的观察唐古特大黄多糖组分之一(RTP1)对大鼠小肠隐窝上皮细胞株(IEC-6)细胞增殖、移行及其对细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)活性和ODC蛋白表达的影响,观察其对胃肠黏膜的修复作用并探讨可能的机制。方法采用MTT法和体外肠上皮细胞移行模型,观察不同剂量的RTP1(10、30、100mg·L-1)处理IEC-6细胞24h后,细胞增殖和移行情况;Western blot检测ODC蛋白表达;通过测定L-[1-14C]鸟氨酸释放14CO2的量来检测ODC活性变化。结果RTP1在10、30、100mg·L-1时均可明显促进IEC-6细胞的增殖和移行,可增加ODC蛋白表达和ODC活性,并具有剂量依赖性,与空白对照组相比差异具有显著性(P<0·05或0·01)。结论RTP1可促进肠上皮细胞的增殖和移行,提示RTP1可能对肠黏膜的损伤修复具有直接作用。其作用机制可能与鸟氨酸脱羧酶表达增加和(或)活性增大有关。     

金喜素抑制JM细胞增殖并诱导其凋亡的流式细胞术分析

金喜素(topotecan,TPT)为喜树碱类化疗药物,可以选择性地抑制拓扑异构酶I(Topoisomerase I,Topo I)[1].以往的研究表明,该药物可以用于慢性粒单细胞白血病、骨髓增生异常综合征(MDS)和实体瘤[2～4]等的治疗.T淋巴细胞白血病在临床上多见于儿童,起病急,病情重,严重危害患儿的健康.JM为急性T淋巴母细胞白血病细胞株[5].金喜素对JM细胞株作用的研究未见文献报道.本研究旨在观察金喜素对JM细胞株增殖的抑制作用及其诱导该细胞株发生凋亡的作用.     

咖啡酸苯乙酯对小鼠CD3~+T细胞体外活化和增殖的影响

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),运用荧光抗体染色技术结合流式细胞术,8h后,检测T淋巴细胞早期活化标记分子CD69的表达情况;24h后,检测T淋巴细胞中期活化标记分子CD25的表达情况;在淋巴细胞增殖试验中,运用CFDA-SE标记法检测T淋巴细胞刺激48h后的增殖情况。结果CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞活化,且呈浓度依赖性;CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞增殖,且呈浓度依赖性。结论CAPE对小鼠CD3+T淋巴细胞的体外活化和增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过同时抑制PLC-γ信号途径和MAP激酶途径,由此推理CAPE是一种潜在的有效的免疫抑制剂。     

Brazilin inhibits mitogen induced cell proliferation despite of augmentation of T cell growth factor(TCGF) production and expression of IL-2 receptors

The present work was designed to investigate the effects of brazilin on ConA-induced TCGF release, responsiveness to standard IL-2, and mitogens-induced proliferation of splenocyte when administered intraperitoneally to 8 week-old C57BL/6 mice for 2 consecutive days. Immunological tests were performed 72 hours after the treatment of brazilin. The administration of 50 mg/kg brazilin caused a noticeable increase in TCGF release and responsiveness to standard IL-2, but inhibited mitogens-induced proliferation of splenocyte. These results indicated that brazilin is able to modulate immunological functions despite of its inhibitory effect on mitogen induced cell proliferation.