毛蕊异黄酮抑制氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡研究

目的研究毛蕊异黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法将对数生长期PC12细胞随机分为4组:正常对照组(Control)、模型组(Model)、毛蕊异黄酮组(Calycosin,0.07μmol·L~(-1))和尼莫地平组(Nimodipine,5.00μmol·L~(-1),阳性对照药组)。用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡率和凋亡指数;免疫荧光染色检测细胞Bax/Bcl-2比值;Western blot检测细胞凋亡蛋白caspase-3表达。结果与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05);与Model组相比,Calycosin组和Nimodipine组细胞存活率均明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数均明显降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论毛蕊异黄酮可明显提高氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡,其作用机制与毛蕊异黄酮调控凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达有关。     

瓜子金皂苷己对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察瓜子金皂苷己(polygalasaponin F,PS-F)对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞损伤的影响,并且探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI染色流式细胞术检测PC12细胞凋亡,JC-1染色倒置显微镜检测细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Western blot检测Caspase-3蛋白的水平。结果 500μmol.L-1MPP+作用PC12细胞48 h,能明显抑制细胞生长(P<0.01),诱导细胞发生凋亡,同时降低MMP,增加活性Caspase-3的蛋白水平。同时给予不同浓度PS-F处理,PC12细胞存活率增加(P<0.01);凋亡细胞量减少;MMP增高;活性Caspase-3蛋白水平降低(P<0.01)。结论 PS-F能抑制MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,其作用机制可能与维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,降低活性Caspase-3蛋白水平有关。     

黄芪甲苷调控自噬减轻氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞氧化应激损伤研究

目的观察黄芪甲苷对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞自噬和氧化应激的影响。方法将PC12细胞分为正常组、模型组(即氧糖剥夺/复氧复糖组)、黄芪甲苷组、自噬抑制剂+黄芪甲苷组。用CCK-8法检测细胞活性;ELISA法检测MDA含量、SOD和GSH-Px活性;透射电镜和MDC荧光染色检测自噬小体;Western blot检测Beclin1蛋白表达。结果与正常组相比,模型组细胞活性降低(P<0.05),MDA含量增多、SOD和GSH-Px活性下降(P<0.05),可见自噬小体,Beclin1表达增多(P<0.05);与模型组相比,黄芪甲苷组细胞活性升高(P<0.05),MDA含量减少、SOD和GSH-Px活性升高(P<0.05),自噬小体数量增多(P<0.05),Beclin1表达增多(P<0.05);当给予自噬抑制剂处理时,自噬抑制剂在减轻自噬的同时,可明显拮抗黄芪甲苷的抗氧化作用。结论黄芪甲苷可通过上调自噬减轻氧糖剥夺/复氧复糖诱导的PC12细胞氧化应激损伤,发挥保护作用。     

丁苯酞抑制原代大鼠海马神经元氧糖剥夺/复氧诱导的凋亡

目的:观察丁苯酞对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(0.1,1,10μmol·L-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各丁苯酞给药物组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度升高而降低;Bcl-2蛋白表达不同程度地增高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高。结论:丁苯酞能抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,其可能通过增加神经元内Bcl-2凋亡抑制蛋白的表达而抑制凋亡,进而保护神经元。     

黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响

目的观察黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的PC12细胞,随机分为4组:正常对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪甲苷组和黄芪甲苷溶剂对照组进行缺氧缺糖3h后再复氧复糖12 h,并于复氧复糖的同时加入黄芪甲苷。用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活性,TUNEL染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果正常对照组PC12细胞贴壁生长,呈多角形,突起明显,突起之间交织成网状,细胞膜光滑且完整,胞体折光性较强。与正常对照组相比,缺氧缺糖/复氧复糖组细胞变圆或肿胀,突起回缩或消失,细胞膜破损,胞体折光性差,细胞活性明显下降(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05)。与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪甲苷组细胞生长状态见好转,突起较为明显,胞体折光性较好,细胞活性升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数下降(P<0.05)。黄芪甲苷溶剂对照组与缺氧缺糖/复氧复糖组相比无明显差异(P>0.05)。结论黄芪甲苷可减轻缺氧缺糖/复氧复糖引起的PC12细胞损伤,提高细胞活性,抑制细胞凋亡。     

活性多肽GRGDS对氧糖剥夺诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究活性多肽GRGDS对氧糖剥夺(OGD)损伤模型中大鼠神经细胞(PC12细胞)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分成对照组、ODG组、活性多肽GRGDS治疗组,通过氧糖剥夺模拟体外脑缺血建立损伤模型.用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测氧糖剥夺后细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验法(ELISA)...     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的:探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法:构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果:氧糖剥夺处理后,1μmol/L和10μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而100μmol/L则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论:低剂量(1、10μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

瓜子金皂苷丙对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷丙对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),荧光酶标仪检测细胞内活性氧(R0S)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24 h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞凋亡明显,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比之下降,线粒体膜电位降低,细胞内ROS显著增加。与MPP+处理组相比,瓜子金皂苷丙10μmol·L-1组,细胞存活率显著升高(P<0.01);细胞凋亡率下降(P<0.01);Bcl-2/Bax比率增加(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01),ROS含量减少。结论瓜子金皂苷丙可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除R0S有关。     

羟基红花黄色素A对糖氧剥夺/复糖复氧诱导的BV2细胞炎性反应的机制研究

目的 探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导的小胶质细胞(MG)炎性反应作用机制的研究。方法 构建BV2细胞OGD/R模型模拟脑缺血再灌注损伤,BV2细胞分为正常对照组(常规培养)、模型组(OGD/R模型)、HSYA药物干预组(OGD/R模型+25μmol·L^-1 HSYA)、TREM2激动剂组(5μmol·L^-1 Hsp60+OGD/R模型)、HSYA+TREM2激动剂组(5μmol·L^-1 Hsp60+OGD/R模型+25μmol·L^-1 HSYA)。用蛋白质印迹法(Western blot)检测髓样细胞触发受体2(TREM2)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况,用双重免疫荧光染色检测一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg1)荧光染色数量;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的表达。结果 正常对照组、模型组、HSYA药物干预组、TREM2激动剂...     

黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响

<正>TLR4受体已经被证明在脑缺血中发挥着关键的作用~([1])。黄芪甲苷可明显减轻大鼠脑缺血/再灌注损伤中的脑梗死面积,抑制神经细胞凋亡~([2])。黄芪甲苷是否通过TLR4/My D88通路来抑制细胞凋亡?本文以PC12细胞为实验对象,研究黄芪甲苷对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞TLR4通路的影响,探讨黄芪甲苷抑制细胞凋亡的作用机制。     

Stevioside enhances apoptosis induced by serum deprivation in PC12 cells

In the laboratory, using a PC12 cell system, studies have been conducted on the effects of various chemicals on apoptosis, as it is considered to be an essential part of normal development, maintenance, and defense in organisms. Stevioside is a natural sweetener extracted from the leaves of Stevia rebaudiana. Since it is widely used as a sugar replacement, it was decided to evaluate the toxicological effects of low concentrations of stevioside on apoptosis induced by serum deprivation using the PC12 cell system. It was found that based on data from DNA electrophoresis and TUNEL signal assays stevioside enhanced apoptosis induced by serum deprivation. This enhancement was caused by increased expression of Bax and of cytochrome c released into the cytosol. These findings suggest that stevioside affects the regulation of the normal apoptotic condition. Further investigation will be needed to clarify the detailed mechanism of the enhancement due to the treatment with stevioside.     

丹皮酚对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用(英文)

目的探讨丹皮酚对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法建立H2O2致PC12细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡率及细胞内活性氧含量,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内丙二醛(MDA)含量。结果PC12细胞经H2O2100μmol.L-1处理10 h可致细胞存活率下降,并能诱导细胞凋亡,LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量明显增加;丹皮酚(12,25和50μmol.L-1)预处理1 h可提高细胞存活率,减少细胞凋亡、LDH释放量及细胞内活性氧和MDA含量。结论丹皮酚对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

二氮嗪对氧糖剥夺后PC12细胞凋亡及对Bcl-2蛋白的影响

目的探讨二氮嗪对氧糖剥夺(OGD)PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法体外培养PC12细胞株,以OGD、二氮嗪、5-羟葵酸(5-HD)处理,分为A组(正常对照组),B组(氧糖剥夺组),C组(氧糖剥夺+二氮嗪组),D组(氧糖剥夺+二氮嗪组+5-HD组),采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用免疫荧光染色和Western blot检测Bcl-2蛋白表达水平,观察二氮嗪对氧糖剥夺PC12细胞凋亡的保护作用。结果氧糖剥夺后B,C,D组PC12细胞凋亡细胞数增加,C组与B、D组比较差异均有显著性(P<0.01)。B,C,D组Bcl-2蛋白表达增加,C组达到高峰。C组与A、B、D组比较差异均有显著性(P<0.01)。结论二氮嗪能抑制氧糖剥夺PC12细胞凋亡,这一作用机制可能是增加Bcl-2表达来实现其保护作用的。     

梓醇对缺糖缺氧诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨梓醇对抗缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤作用。方法梓醇预处理PCI2细胞,加入含连二亚硫酸钠的无糖Earle’s液制备损伤模型,检测细胞存活率,乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、丙二醛水平,检测细胞内游离Ca2＋浓度。结果与模型组比较,梓醇可剂量依赖性的提高细胞存活率（P〈0．01）,减少乳酸脱氢酶漏出率（P〈0．05或〈0．01）,提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,拮抗丙二醛水平升高,降低细胞内游离Ca2＋浓度（P〈0．05或〈0．01）。结论梓醇对缺糖缺氧诱导的PCI2细胞损伤具有保护作用,作用机制可能与其清除自由基和抑制钙超载有关。     

一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及人参皂苷Rg1的保护作用

目的　探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及人参皂苷Rg1保护作用的可能机制。 方法　DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况 ,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位 ,West ernblotting检测胞浆细胞色素C和活化型半胱氨酸蛋白水解酶caspase 3P2 0 水平。结果　一氧化氮供体SNAP(5 0 0μmol·L-1)可诱导PC12细胞凋亡 ,细胞线粒体跨膜电位明显下降、胞浆细胞色素C水平增加及caspase 3得到激活 ;预先经过 5 0、10和 2 0 μmol·L-1等浓度人参皂苷Rg1处理后 ,SNAP诱导的PC12细胞凋亡明显减少 ,同时明显减弱SNAP对细胞线粒体跨膜电位、胞浆细胞色素C水平及cas pase 3激活的影响。 结论　人参皂苷Rg1可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡 ,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位、减少线粒体细胞色素C向胞浆释放及抑制cas pase 3的激活有关     

人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

通过测定细胞的凋亡率 ,内源性NO的水平和iNOSmRNA的表达及半胱天冬酶 3的活性 ,探讨人参皂苷Rg1对抗多巴胺对PC12细胞凋亡诱导作用的可能机理 .结果表明多巴胺 (0 .15～ 0 .60mmol·L- 1)可诱导PC12细胞凋亡 ,预先经过 10 μmol·L- 1Rg 1处理后 ,PC12细胞的凋亡率显著下降 (P <0 .0 0 1) ,同时NO2- 水平和iNOSmRNA表达水平及半胱天冬酶 3活力较单纯多巴胺处理组明显降低(P <0 .0 0 1) .结果提示 ,Rg1减少细胞内源性NO的生成及抑制半胱天冬酶 3的活化可能是Rg1对抗多巴胺诱导PC12细胞凋亡的重要机理 .     

Mechanism of apoptosis induced by copper in PC12 cells

Copper, an essential trace element, induces apoptosis in mammalian cells. However, the precise mechanism of copper-induced apoptosis is still unclear. In this study, to determine the apoptotic pathway initiated by copper treatment, apoptotic factors such as Bax, Bad and Bcl-2, and the caspase family in PC12 cells treated with copper were measured by Western blot and RT-PCR analyses. The expression of Bax, Bad, cytochrome c and caspases 3 and 9 were increased by copper treatment. From these results, two pathways for copper-induced apoptosis were suggested. At first, an increase of Bax induces the release of cytochrome c from the mitochondria into the cytoplasm owing to binding to apoptotic activating caspase 9 leading to the activation of caspases 3. In the other pathway an increase of Bax and reactive oxygen species activates the release of AIF from the mitochondria. The AIF induces apoptosis via a caspase-independent pathway.     

Nonylphenol diethoxylate inhibits apoptosis induced in PC12 cells

Nonylphenol and short‐chain nonylphenol ethoxylates such as NP₂EO are present in aquatic environment as wastewater contaminants, and their toxic effects on aquatic species have been reported. Apoptosis has been shown to be induced by serum deprivation or copper treatment. To understand the toxicity of nonylphenol diethoxylate, we investigated the effects of NP₂EO on apoptosis induced by serum deprivation and copper by using PC12 cell system. Nonylphenol diethoxylate itself showed no toxicity and recovered cell viability from apoptosis. In addition, nonylphenol diethoxylate decreased DNA fragmentation caused by apoptosis in PC12 cells. This phenomenon was confirmed after treating apoptotic PC12 cells with nonylphenol diethoxylate, whereas the cytochrome c release into the cytosol decreased as compared to that in apoptotic cells not treated with nonylphenol diethoxylates. Furthermore, Bax contents in apoptotic cells were reduced after exposure to nonylphenol diethoxylate. Thus, nonylphenol diethoxylate has the opposite effect on apoptosis in PC12 cells compared to nonylphenol, which enhances apoptosis induced by serum deprivation. The difference in structure of the two compounds is hypothesized to be responsible for this phenomenon. These results indicated that nonylphenol diethoxylate has capability to affect cell differentiation and development and has potentially harmful effect on organisms because of its unexpected impact on apoptosis. © 2015 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 31: 1389–1398, 2016.     

乙酰葛根素对氧糖剥离诱导海马神经元凋亡的影响

目的研究新型异黄酮类化合物乙酰葛根素对氧糖剥离神经元的保护作用及其机制。方法采用氧糖剥离建立细胞模型。DAPI法观察神经元凋亡率,RT-PCR法检测NF-κBp65、HIF-1α及p53mRNA的表达,Western blot法测定Hsp70蛋白的含量及乙酰葛根素对其的影响。结果与模型组相比较,乙酰葛根素可以减少凋亡细胞数;降低NF-κBp65、HIF-1α及p53mRNA表达;乙酰葛根素(低,中和高浓度组)增加Hsp70蛋白的表达。结论乙酰葛根素降低NF-κBp65、HIF-1α、p53的表达和升高Hsp70蛋白表达。