白眉蝮蛇毒激肽原酶对糖尿病模型大鼠血液学变化的影响

目的:从白眉蝮蛇毒中提取激肽原酶,研究白眉蝮蛇毒激肽原酶对糖尿病大鼠血液学变化的影响.方法:用疏水层析技术从白眉蝮蛇毒中提取出的一种高纯度的激肽原酶,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制造大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为三组,蛇毒激肽原酶组静脉注射白眉蝮蛇毒激肽原酶,阳性对照组不予处理,消渴丸组灌胃给予消渴丸研粉,另取正常大鼠作为阴性对照组.检测血糖、血小板聚集率、全血黏度.结果:蛇毒激肽原酶降糖作用不明显,但可显著降低实验大鼠模型的血小板聚集率及全血黏度,在改善全血黏度方面优于消渴丸.结论:蛇毒激肽原酶可通过对血液流变的改善作用达到防治糖尿病血管病变的作用.     

组织激肽释放酶家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统及其重要应用

目前已明确,人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成,都定位于19q13.3～13.4,在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本文总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶-激肽原-激肽系统的研究近况,并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。     

组织激肽释放酶家族、激肽释放酶—激肽原—激肽系统及其重要应用

目前已明确，人组织激肽释放酶基因家族至少由15个基因组成，都定位于19q13．3—13．4，在基因结构、蛋白水平及三级结构上都有明显同源性。本总结了组织激肽释放酶基因家族、激肽释放酶—激肽原—激肽系统的研究近况，并介绍了其在心血管疾病和肿瘤方面的重要应用。     

胰激肽释放酶对脑缺血沙土鼠软脑膜微血管血流量的影响

胰激肽释放酶对脑缺血沙土鼠软脑膜微血管血流量的影响薛全福１吴云清１张宏１斯勤１王耀芳２蒋建平胰激肽释放酶（ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＫａｌｉｋｒｅｉｎ，ＰＫ）是一种蛋白水解酶，在体内作用于激肽原，释放出激肽而发挥作用。在国内外已取得良好的临床效果，并已用于...     

国产蛇毒激活血浆蛋白C的研究

目的:从9种国产蛇毒中筛选具有激活血浆蛋白C作用的蛇毒。方法:运用活化部分凝血活酶时间(APTT)和发色底物实验分别观察抗凝活性和酰胺酶活性,综合抗凝活性和酰胺酶活性确定蛋白C蛇毒激活作用。结果:在9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒在1.5mg/L浓度下即使人血浆纯蛋白C产生酰胺酶活性,并使APTT显著延长。结论:9种国产蛇毒中烙铁头蛇毒及蝮蛇毒具有激活人体血浆蛋白C成为活化蛋白C(APC)的作用。     

蝮蛇毒的抗凝作用及临床应用

蝮蛇毒的抗凝作用及临床应用综述孙晓丽，邢玉兰，刘瑕审校／覃公平毒的主要成分为蛋白质，内含２０余种蛇毒酶及１０余种毒素，还有若干生物活性物质及微量元素、主要为：类凝血酶样酶、类纤溶酶、血管舒缓肽、血小板抑制酶、神经生长因子、凝血因子活性酶、出血毒素、神...     

人组织激肽释放酶

人组织激肽释放酶是一个多基因家族 ,由 15个具有高度同源性的等位基因组成。组织激肽释放酶可在许多组织中表达。在肿瘤细胞中 ,多种组织激肽释放酶受类固醇激素的调节。人类多种疾病中均有组织激肽释放酶表达的改变     

人组织激肽释放酶6的原核表达载体的构建及表达

目的：构建人组织激肽释放酶6原核表达系统。方法：采用RT-PCR技术从人乳腺癌组织中扩增出KLK6基因片段,克隆至原核表达载体pET28b中,经酶切和序列测定后,转化至E.coli BL21,IPTG进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,Ni-NTA亲和层析柱纯化,其纯化产物进行SDS-PAGE和Western-blot检测。结果：pET28b-KLK6原核表达载体构建成功,经IPTG诱导高效表达hK6蛋白,纯化后获得大量高纯度蛋白。结论：成功构建了KLK6的原核表达系统并在E.coli BL21中高效表达,获得高纯度的hK6融合蛋白。     

眼镜蛇伤大鼠多项指标动态变化与抗蛇毒血清的时效关系

目的: 观察蛇伤后大鼠生化血气分析及病理等动态变化,探讨其与抗蛇毒血清使用时效性的关系,为优化眼镜蛇伤的临床治疗方案提供实验依据。方法: SD大鼠注入2-4 LD₅₀舟山眼镜蛇毒造模,于注毒后不同时段(20-140 min)分别进行血液生化、血气分析、肌组织病理等检测及注入抗眼镜蛇毒血清(40-120 min,血清/蛇毒:125 kU/g)对上述指标的影响。结果: 大鼠注入4 LD₅₀蛇毒20 min后二氧化碳总量(TCO₂)、剩余碱(BE)及酸碱度(pH)逐渐下降;而心酶、肝酶及胆红素明显上升,于60及120 min各出现1个峰值,与0 min相比有显著差异(P<0.05);心肌、骨骼肌于40 min时点出现广泛浊肿变性、凝固性坏死及炎症细胞浸润。注入2 LD₅₀蛇毒动物的心酶、肝酶及胆红素指标变化趋势与4 LD₅₀剂量组相似,但其峰值出现时间相对延迟且峰值较低。在心酶出现第1个峰值前施予抗血清,蛇伤大鼠的保护率可达60%以上;但第2个峰值后施予抗血清的疗效不显著。结论: 眼镜蛇伤后的心酶、肝酶等相关指标呈双峰变化规律,第2个峰值前为使用抗血清的有效时段。     

一种检测A型肉毒毒素的高灵敏度酶联免疫吸附法

目的:建立检测A型肉毒毒素的酶联免疫吸附法.方法:利用重组A型肉毒毒素重链羧基端片段作为免疫原和B淋巴细胞杂交瘤技术,获得了56株高亲和力的抗A型肉毒毒素单克隆抗体(mAb),建立了检测A型肉毒毒素的双mAb夹心酶联免疫吸附法(ELISA).结果:该方法理论检测下限达到了8.34 pg/mL,检测天然A型肉毒毒素制剂时其实际检测下限可达0.78 LD50/mL,与其他型别的肉毒毒素均未见交叉反应.通过测定基质中的回收率,发现基质中的相关的蛋白对检测具有较大的影响.结论:该方法具有灵敏度高,特异性好,使用方便等优点,具有较高的的实用价值.     

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究

目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY) 的制备方法及其生物学活性，为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。 方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY；SDS-PAGE 测定各级提取物的抗体纯度；间接ELISA 法和双向免疫扩散法观察效价变化；动物体外中和实验检测其生物活性。 结果:卵黄经水稀释法及经60% 硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%；进一步经阴离子交换层析，总蛋白回收率14.86%，效价提高24倍；IgY分子量约为220 kD，由两个亚基组成；体外中和试验表明，2.28 mg/kg 特异性IgY能完全中和2 LD50 的眼镜蛇毒，保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。 结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源，经水提、盐析、层析三级提取，可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。     

对接触系统的再认识

目前人们已认识到接触系统在启动体内凝血方面所起的作用微乎其微，而接触系统蛋白的缺乏却可能是血栓形成的危险因素。研究表明活化的因子Ⅻ(FⅫa)和活化的因子Ⅺ(FⅪa)可裂解纤溶酶原；激肽释放酶能将前尿激酶活化为双链结构的尿激酶；高分子量激肽原和低分子量激肽原能选择性抑制凝血酶诱导的血小板活化；高分子量激肽原可通过置换粘附蛋白抑制细胞粘附，可通过抑制内皮细胞的迁移和增殖抑制血管新生；内毒素可激活接触系统，高分子量激肽原的下降和α2巨球蛋白．激肽释放酶复合物的上升与不可逆低血压的发生显著相关。总之，接触系统在促进纤维蛋白溶解、抗血栓、抗粘附、抑制新生血管形成、介导炎症反应等病理生理方面起着重要作用。     

降低人血白蛋白制品中PKA的方法初探

人血白蛋白临床主要用于治疗烧伤、失血引起的休克,防止低蛋白血症及肝硬化或肾病引起的水肿或腹水[1]。刘隽湘[2]认为人血白蛋白制品中存在两种毒性物质：一种是热原质,一种就是激肽释放酶原激活物（PKA）。PKA 是血浆因子 XII 被激活后释放出的β-XIIa 肽段[3]。PKA 能激活激肽释放酶原（PK）,使其转变为激肽释放酶（K）,激肽释放酶再将高分子激肽原（HMWK）水解,释放出具有生物活性的激肽（BK）[4]。激肽对人体具有一定的副作用,它可引起心血管及外周血管扩张,肺毛细血管收缩,血压下降,局部疼痛;严重时引起水泡、呼吸加速等,其中最突出的临床表现就是引起血压的下降[2]。鉴于 PKA 的危害性,本文就人血白蛋白制品生产过程中如何降低 PKA 作了一些初步的探索。     

人类组织激肽释放酶家族研究进展

人类组织激肽释放酶家族由 15个成员组成 ,它们位于同一染色体 (19q13.4 )上 ,在核苷酸及蛋白水平上具有很大的同源性 .研究发现它们与多种疾病的发病有关 ,尤其是前列腺癌等恶性肿瘤。     

双价抗蛇毒鸡卵黄抗体制备与生物活性研究

目的 通过双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(bivalent anti-snake venom immunoglobulin yolk,双价IgY)的制备及其相关特性研究,为多价抗蛇毒IgY的制备和应用奠定基础.方法 两种单一抗原(舟山眼镜蛇、圆斑蝰泰国亚种)按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价IgY;测定双价IgY效价(间接ELISA法)、交叉免疫特性(双向免疫扩散试验)及对溶膜活性(溶膜试验)、半数致死量(LD50)的中和作用.结果 初次免疫后第28-42天,以水稀释法提取的双价IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1:12 800和1:6400.双价IgY与眼镜蛇亚科、蝰业科6种蛇毒有明显的交叉免疫反应,而与蝮亚科4种蛇毒的交叉免疫反应不明显.双价IgY能显著降低眼镜蛇、蝰蛇毒对鸡卵黄膜的溶膜作用,也能显著延长眼镜蛇和蝰蛇伤小鼠的存活时间(P<0.05),同等剂量的双价lgY提高眼镜蛇伤存活率优于蝰蛇伤.结论 双价IgY能够显著中和眼镜蛇、蝰蛇毒的溶膜和致死活性,能有效保护机体免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击.     

蛇毒C型凝集素家族结构及抗原表位预测

目的:预测和设计蛇毒C型凝集素家族蛋白(CLPs)共同B细胞抗原表位肽。方法:利用expasy蛋白质数据库在线软件Align对CLPs进行序列比对。运用DNAstar和Antheprot软件对蛇毒CLP家族的二级结构和表面特性,如亲水性、表面可及性、免疫原性、柔韧性等,综合各结果预测其抗原表位。采用Swiss-model和SEPPA在线工具进行三维结构和空间表位预测。结果:蛇毒CLP家族存在多个潜在的抗原表位位点,其中46～58区和98～110区肽段为可能的B细胞表位区。结论:综合考虑以上2个肽段家族同源性和表面特征,确定N端附近的46KTWADAEKFCTEQ58为蛇毒CLP可能的共同抗原区。     

蝮蛇抗栓酶的不良反应

<正> 蝮蛇杭栓酶(下称svate)是从蛇毒中分离出的一种具有精氨酸酶活性的蛋白酶制剂。具有抗凝、溶栓、去纤、减少血小板聚集、扩血管、改善微循环等作用。临床广泛用于治疗脑血栓、冠心病、闭塞性血管性疾病、肾病综合征、高脂血症等多种疾病。疗效肯定,副作用较少。最近,有关副作用也有报告。为引起重视,现综述如下: 一、过敏反应:Svate是一种蛋白酶制剂,故可     

血清HE4、HK10与腹腔镜肿瘤细胞减灭术治疗卵巢癌预后的相关性

目的:探讨血清人附睾分泌蛋白4(Human epidydimis protein 4,HE4)、人激肽释放酶10(Human kallikrein 10,HK10)在卵巢癌患者腹腔镜肿瘤细胞减灭术治疗预后评估中的应用价值.方法:选取2017年3月至2018年9月我院收治的70例卵巢癌患者,于入院次日采用双抗夹心酶联免疫...     

双价抗蛇毒IgY灌胃对眼镜蛇、蝰蛇伤小鼠的保护作用

目的： 比较双价抗蛇毒鸡卵黄抗体(IgY) 经腹腔注射或灌胃对蝰蛇、眼镜蛇伤小鼠保护作用的差异,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法：2种单一抗原按顺序依次交替注入单只鸡体内,水稀释法制备双价抗蛇毒IgY;间接ELISA法观察双价抗蛇毒IgY在体外及其灌胃后小鼠血浆中的效价,通过胃排空试验确定灌胃给药的最佳时间,在此基础上,比较双价抗蛇毒IgY腹腔注射或灌胃对蛇伤小鼠的保护作用。结果：初次免疫后28 d至第42 d,以水稀释法提取的双价抗蛇毒IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1∶12 800和1∶6 400。不同浓度的双价抗蛇毒IgY灌胃2.5-3.5 h,小鼠的胃排空率均达68.9％以上,血浆中抗体浓度亦相应达高峰。该抗体腹腔注射或提前灌胃均能极显著延长眼镜蛇和蝰蛇毒中毒小鼠的存活时间（P<0.01）,同等剂量的双价抗蛇毒IgY提高眼镜蛇伤小鼠存活率优于蝰蛇伤,而灌胃有效剂量约为腹腔注射的10倍。结论：双价抗蛇毒IgY经2种给药途径（注射、口服）均能有效保护动物免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击。     

天花粉蛋白及其片段对激肽系统的激活作用

本研究探讨了天花粉蛋白及其裂解片段(CBTf_1,CBTf_2)对人体激肽系统的作用。结果显示:天花粉蛋白对激肽系统有激活作用,实验组激肽释放酶活力单位为190±14mμ/ml,对照组为149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf_1同样可以激活激肽系统,而CBTf_2对激肽系统无影响。天花粉蛋白引起临床过敏反应及类过敏反应可能与激肽系统的激活有关。此外,作者还初步探讨了天花粉蛋白激活激肽系统的分子基础。