基因修饰肿瘤疫苗研究进展

近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤；表达某些细胞因子（如ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α等）能诱导产生ＣＴＬ，而某些细胞因子则激发非Ｔ细胞的杀伤作用（如ＩＬ－４、Ｇ－ＣＳＦ诱导中性粒细胞的炎症反应，ＩＬ－２诱导ＮＫ细胞的杀伤作用，ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＦＮ－γ等诱导肿瘤局部Ｍφ的浸润）。     

IL-4基因转染瘤苗体内抗肿瘤转移作用及其免疫机理的初步研究

将白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转染Ｂ１６黑色素瘤细胞，筛选出高分泌克隆，体外扩增后经丝裂霉素Ｃ灭活制备成瘤苗，用以治疗实验性肺转移荷瘤小鼠，同时用低剂量白细胞介素２（ＩＬ－２）及低剂量环磷酰胺（Ｃｙ）辅助治疗。结果发现，经ＩＬ－４基因转染瘤苗治疗后荷瘤小鼠肺部转移结节明显减少，存活期明显延长，辅以ＩＬ－２治疗后效果更佳；同时辅以ＩＬ－２及Ｃｙ则治疗效果最佳。体内免疫功能研究发现，经ＩＬ－４基因转染瘤苗治疗后小鼠脾淋巴细胞诱导的ＣＴＬ及腹腔巨噬细胞杀伤活性明显升高，但脾脏ＮＫ及经诱导的ＬＡＫ活性变化不明显。脾淋巴细胞经诱导后分泌的细胞因子（包括ＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ、ＧＭ－ＣＳＦ）中，ＴＮＦ和ＧＭ－ＣＳＦ在治疗各组有所升高。本实验结果表明，ＩＬ－４基因转染瘤苗能有效地激活体内抗肿瘤免疫功能并具有显著的抗肿瘤转移效果，将其与低剂量ＩＬ－２和低剂量Ｃｙ联合应用时抗肿瘤转移效果更佳。     

重组人IL－6对大鼠急性白血病细胞体外增殖的抑制

我们已报道重组大鼠ＩＬ－３和小鼠ＧＭ－ＣｓＦ对ＬＴ１２白血病细胞的增殖有不同程度的抑制活性。本研究发现重组人ＩＬ－６在１０００～５０００Ｕ／ｍｌ呈剂量依赖性抑制ＬＴＩ２白血病祖细胞集落形成及ＤＮＡ合成。５０００Ｕ／ｍｌ对ＣＦＵ－Ｌ的抑制率达５２．９％，而对ＤＮＡ合成则为４１．３％，此外，ＩＬ－６还明显增加ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦ对ＬＴ１２细胞的抑制活性，对ＣＦＵ－Ｌ的抑制强弱依次为ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－３＋ＧＭ－ＣＳＦ、及ＩＬ－６＋ＩＬ－３，ＩＬ－６＋ＩＬ－３＋ＧＭ－ＣＳＦ三因子的结合并不能增加抑制效应；对ＤＮＡ合成的抑制作用为ＩＬ－６＋ＩＬ－３＋ＧＭ－ＣＳＦ＞ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＞ＩＬ－３＋ＧＭ－ＣＳＦ＞ＩＬ－６＋ＩＬ－３。提示上述造血因子除刺激正常造血外，在白血病的治疗中可能具有一定意义。     

白介素－3，IL－5，IL－6和GM－CSF对人嗜碱性细胞释放组胺的诱

白介素－３，ＩＬ－５，ＩＬ－６和ＧＭ－ＣＳＦ对人嗜碱性细胞释放组胺的诱导和增强作用［英］／ＭｉａｄｏｎｎａＡ…／／ＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｐａｔｈ．－１９９３，６７（３）．－２１０～２１５据报道，淋巴细胞、中性细胞、巨噬细胞和单核细胞等可合...     

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内诱导杀伤细胞活性及细胞因子产生的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后体内免疫效应细胞（包括ＣＴＬ、ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞）抗肿瘤活性及其分泌的细胞因子（包括ＩＬ－２、ＩＦＮ－ｒ、ＴＮＦ及ＧＭ－ＣＳＦ）水平的变化，荷瘤后第１５天小鼠脾细胞ＮＫ活性及经诱导后的ＬＡＫ活性有所降低，而经诱导后的ＣＴＬ杀伤活性显著升高，荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤活性及其分泌的ＩＬ－１水平也明显升高；在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰，实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制是因为ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内ＣＴＬ及巨噬细胞杀伤活性提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。     

白细胞介素10基因转移抑制肾小球系膜细胞诱生炎症细胞因子

目的：通过建立白细胞介素１０（ＩＬ－１０）的重组逆转录病毒载体基因转移系统,观察ＩＬ－１０对脂多糖（ＬＰＳ）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒｍｅｓｅｎｇｉａｌｃｅｌ,ＧＭＣ）中细胞因子的产生及其基因表达的影响。方法：通过构建的重组逆转录病毒载体ｐＬＸ（ＩＬ－１０）ＳＮ将外源基因ＩＬ－１０转移至大鼠ＧＭＣ：（１）应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－１０基因的整合和表达;（２）以ＲＴ－ＰＣＲ观察ＩＬ－１０基因转移对ＬＰＳ诱导的ＧＭＣ肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的ｍＲＮＡ表达的影响,以ＥＬＩＳＡ测定白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和ＴＮＦ－α的蛋白质表达。结果：外源性ＩＬ－１０基因已整合到靶细胞染色体ＤＮＡ并有效地表达,它能抑制ＬＰＳ诱生ＧＭＣ过度产生ＩＬ－１β,ＴＮＦ－α。结论：外源性ＩＬ－１０基因可以转移到ＧＭＣ并稳定表达,它能抑制ＧＭＣ炎症效应中细胞因子的产生及其基因表达。     

IFN—α联合GM—CSF在无血清培育条件下诱生DC的研究

本研究分别采用ＩＦＮ－α联合粒单系集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及ＩＬ－４联合ＧＭ－ＣＳＦ在无血清培育条件下从正常人及多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者外周血单个核细胞性树突状细胞（ＤＣ）,并对其形态、功能及免疫表型进行比较。结果表明ＩＦＮ－α联合ＧＭ－ＣＳＦ能与ＩＬ－４联合ＧＭ－ＣＳＦ同样有效地诱导产生ＤＣ,所得的ＤＣ在形态、免疫表型及功能上无明显差异（Ｐ〉０．０５）,正常人和ＭＭ患者的外周血单个核细胞经诱     

宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子对IL－2作用的影响

人宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）作用于人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）６ｈ，即可抑制白细胞介素２（ＩＬ－２）产生，与对照组相比，Ｐ＜０．０１。当ＴＤＳＦ存在时，经ＰＨＡ－Ｐ驯化的ＰＢＭＣ效应细胞对外源性ＩＬ－２反应显著减弱，表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２的作用。ＰＨＡ－Ｐ刺激ＰＢＭＣ增殖，但ＴＤＳＦ使其增殖抑制。表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２产生及其作用；抗癌药对ＴＤＳＦ的分泌有部分阻抑作用。     

宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子对IL－2作用的影响

人宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）作用于人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）６ｈ，即可抑制白细胞介素２（ＩＬ－２）产生，与对照组相比，Ｐ＜０．０１。当ＴＤＳＦ存在时，经ＰＨＡ－Ｐ驯化的ＰＢＭＣ效应细胞对外源性ＩＬ－２反应显著减弱，表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２的作用。ＰＨＡ－Ｐ刺激ＰＢＭＣ增殖，但ＴＤＳＦ使其增殖抑制。表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２产生及其作用；抗癌药对ＴＤＳＦ的分泌有部分阻抑作用。     

OKT3＋rhIL－2激活胎儿脾细胞的研究

观察了１８～２８周龄胎儿脾单个核细胞（ＦＳＭＣ）在体外对ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２联合刺激的反应性，结果发现：ＯＫＴ３单独能活化ＦＳＭＣ，最适浓度ＯＫＴ３与ｒｈＩＬ－２联合对ＦＳＭＣ有强协同刺激作用。ＯＫＴ３刺激ＦＳＭＣ后明显促进ＩＬ－２Ｒ表达，表明ＯＫＴ３对ＦＳＭＣ的括化作用与ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ途径相关。ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２协同诱导的ＦＳＭｃ能产生ＮＫ和ＬＡＫ活性，且ＬＭ活住较单用ｒｈＩＬ－２诱导者强，间接免疫荧光染色ＦＡＣＳ分析显示，ＯＫＴ３＋ｒｈｌＬ－２协同激活的ＦＳＭＣ主要是ＣＤ８￣＋Ｔ细胞。结果表明ＦＳＭＣ与成人ＰＢＭＣ－样能被ＯＫＴ３活化。     

人肺泡巨噬细胞促进自然杀伤细胞刺激因子（IL－12）诱导的自体血淋巴细

人肺泡巨噬细胞促进自然杀伤细胞刺激因子（ＩＬ－１２）诱导的自体血淋巴细胞的杀伤活性［英］／Ｔａｋａｓｈｉ…ＪＣａｎｃｅｒＲｅｓ，－１９９５，８６．－８１～８７ＩＬ－１２亦称作自然杀伤细胞刺激因子（ＮＫＳＦ），具有诱导人血Ｔ细胞和ＮＫ细胞的杀伤活性。本...     

哮喘豚鼠IL-5、IL-3、GM-CSF mRNA表达及雷公藤内酯醇的影响

目的研究ＩＬ－５、ＩＬ－３、ＧＭ－ＣＳＦ在哮喘发病中的作用及雷公藤的干预。方法将实验豚鼠随机分为：①哮喘组（ｎ＝８）：用卵蛋白雾化吸入诱导哮喘模型；②处理组（ｎ＝８）：用雷公藤内酯醇腹腔注射处理哮喘模型；③正常对照组（ｎ＝８）。制备ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ探针，用斑点印迹杂交法检测以上三组豚鼠支气管肺组织ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ的表达。结果哮喘豚鼠支气管肺组织ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达显著高于对照组（Ｐ＜０．０５～０．００１）；雷公藤处理组ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达低于哮喘组（Ｐ＜０．０５～０．００１），与对照组无显著差异（Ｐ＞０．０５）。结论哮喘豚鼠肺组织中有明显的ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ表达增加。雷公藤内酯醇能抑制体内ＩＬ－５、ＩＬ－３和ＧＭ－ＣＳＦｍＲＮＡ的表达，可能在哮喘抗炎中具有潜在的临床价值。     

登革病毒对人血管内皮细胞产生细胞因子的影响

目的了解登革病毒感染对人血管内皮细胞产生几种细胞因子的影响。方法用登革病毒Ⅱ型（ＤＶ－２）及ＬＰＳ单独作用或联合作用于人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ），于作用后４，２４，４８，７２和９６小时分别收集培养上清液，用ＥＬＩＳＡ法检测ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－６和ＴＮＦα的含量。实验数据采用方差分析处理。结果ＤＶ－２感染能使ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力增强。病毒感染后４小时，ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的水平开始升高，并分别于感染后７２和２４小时达高峰，然后开始下降。然而，ＤＶ－２感染并不能提高ＨＵＶＥＣ分泌ＴＮＦα的能力。ＬＰＳ单独作用或ＤＶ－２与ＬＰＳ联合作用均可提高ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力，但对分泌ＴＮＦα的能力没有明显的促进作用。结论登革病毒感染能提高ＨＵＶＥＣ分泌ＧＭ－ＣＳＦ和ＩＬ－６的能力。细胞因子在登革病毒的致病与免疫过程中可能起重要作用。     

GM－CSF对人单核细胞HLA－DR抗原表达的影响

本文采用ＥＬＩＳＡ方法，研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对体外培养的正常人外周血单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响。结果表明ＧＭ－ＣＳＦ能提高单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，并且呈剂量依赖关系，最适剂量（５００ｕ／ｍｌ）时能使ＤＲ抗原表达量提高到对照组的２．５倍。ＧＭ－ＣＳＦ对ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的ＩＦＮ－γ的作用而实现的，因为有中和活性的ＩＦＮ－γ单抗并不能阻断这种效应。ＧＭ－ＣＳＦ能够增强低剂量ＩＦＮ－γ（５ｕ／ｍｌ）对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导作用，但未观察到对高剂量ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）的ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导增强作用。     

GM－CSF对人单核细胞HLA－DR抗原表达的影响

本文采用ＥＬＩＳＡ方法，研究了重组的人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）对体外培养的正常人外周血单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响。结果表明ＧＭ－ＣＳＦ能提高单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，并且呈剂量依赖关系，最适剂量（５００ｕ／ｍｌ）时能使ＤＲ抗原表达量提高到对照组的２．５倍。ＧＭ－ＣＳＦ对ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的诱导作用并不是通过诱生的ＩＦＮ－γ的作用而实现的，因为有中和活性的ＩＦＮ－γ单抗并不能阻断这种效应。ＧＭ－ＣＳＦ能够增强低剂量ＩＦＮ－γ（５ｕ／ｍｌ）对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导作用，但未观察到对高剂量ＩＦＮ－γ（１００ｕ／ｍｌ）的ＨＬＡ－ＤＲ抗原的诱导增强作用。     

树突细胞从凋亡癌细胞获取抗原后的免疫应答

目的 观察树状细胞（ＤＣｓ）从凋亡胆管癌细胞获取原后，体外诱导抗肿瘤免疫应答及对胆管的特异性免疫杀伤效果，方法 用粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）加白介素－４（ＩＬ－４）从人外周血分化、诱导ＤＣＳ，γ－射线在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡，将ＤＣＳ、Ｔ淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞共培养，同时设计不同类型肿瘤细胞（坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞）作对照，７ｄ后，分离、富集ＤＣｓ、Ｔｉｓｓ ｃｎｈ     

六种细胞因子对登革病毒感染人血管内皮细胞的影响

用不同浓度的ＴＮＦα，ＩＦＮα，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－１β，ＩＬ－２和ＩＬ－６等六种细胞因子分别作用于登革病毒Ⅱ型（ＤＶ２）感染人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）的不同环节（病毒感染前，感染同时，感染后）。于感染后４８小时收集感染上清液，用微量蚀斑法滴定病毒产量。结果发现：ＩＬ－２、ＩＬ－６和ＧＭ－ＣＳＦ可以促进ＤＶ２在ＨＵＶＥＣ中复制，而ＩＦＮα，ＴＮＦα及ＩＬ－１β对ＤＶ２的复制则有抑制作用。并发现细胞因子对病毒复制的影响与细胞因子的浓度和作用环节有关，ＧＭ－ＣＳＦ对病毒复制的影响与浓度成反比，而其它五种细胞因子对病毒的作用则呈剂量依赖性。六种细胞因子在实验浓度范围内均不造成血管内皮细胞形态和数量的改变。     

人肿瘤浸润γδT细胞的抗肿瘤活性研究

目的 研究人直肠癌和结肠癌肿瘤浸润γδＴ淋巴细胞（γδＴＩＬＳ）体外抗肿瘤活性。方法 用固相抗体法体外扩增获得γδＴＩＬＳ，并用ＭＴＴ法和＾Ｈ－ＴｄＲ掺入实验体外观察γδＴＩＬＳ对同种异体和异种肿瘤细胞的细胞毒及增殖反应。结果 所获得γδＴＵＩＬＳ对所测定的肿瘤细胞显示出明显的细胞毒活性。该杀伤效应可为ＩＬ－２、ＩＬ－４，ＩＬ－１２，ＩＬ０１５，ＴＮＦ－γ所增强，而不受ＩＬ－１０，ＧＭ０－ＣＳＦ和     

当归多糖诱导L－细胞产生造血生长因子的实验研究

用造血祖细胞体外培养、造血生长因子检测和流式细胞术等方法,研究当归多糖（ＡＰ）诱导Ｌ－细胞（成纤维细胞株）产生造血生长因子及其对血细胞发生的调节作用。结果表明,Ｌ－细胞条件培养液（ＬｃＣＭ）对造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｅ）的体外增殖呈双向调节作用;１０％ＬｃＣＭ能促进骨髓造血细胞进入增殖活跃的Ｓ＋Ｍ／Ｇ２期;经ＡＰ诱导制备的ＬｃＣＭ在有或无外源性造血生长因子（如Ｅｐｏ,ＢＰＡ,ＧＭ－ＣＳＦ）存在时均对造血祖细胞的克隆增殖显示较高刺激活性;ＡＰ或ＩＬ－１与造血生长因子间似无协同作用。本研究提示ＡＰ可能通过诱导造血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子,从而促进造血祖细胞增殖分化,这或许是当归＂补血＂的生物学机理之一。     

IL－12增强杀伤细胞活性作用

ＩＬ－１２增强杀伤细胞活性作用［日］／叶久贵司临床免疫．－１９９５，２７（７）．－７７７～７８２ＩＬ－１２被称为自然杀伤细胞刺激因子（ＮＫＳＦ）或细胞毒淋巴细胞成熟因子（ＣＬＭＦ）。ＩＬ－１２的产生细胞是单核细胞、巨噬细胞系的粘附细胞及Ｂ细胞。所用Ｉ...