聚合酶链反应诊断军团菌感染的实验研究

目的早期诊断军团菌感染。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测嗜肺军团菌（Ｌｐ）ｍｉｐ基因的特异性片段，并应用于豚鼠米克戴德军团菌（Ｌｍ）感染后的组织标本检测。结果可以扩增出ＬｐＩ型和Ｌｍ６３０ｂｐ的特异性片段，其他临床分离株不被测得，检测灵敏度为１５０ｆｇ军团菌基因组ＤＮＡ（相当于１５～３０个军团菌）。对２２份Ｌｍ感染后不同时间获取的豚鼠组织标本，应用该法与培养法检测结果比较显示，在感染后３．５天培养法阳性率为８８．９％，ＰＣＲ法１００％，在感染后７．５天培养法阳性率为０，而ＰＣＲ法仍有２２．２％的阳性率。结论本方法敏感、特异，既能检出嗜肺军团菌，又能测得Ｌｍ，大大提高了军团病的诊断率     

性病衣原体三种检测方法的比较研究

目的通过实验探讨一种简便、快速、准确而又经济的性病衣原体检测方法。方法对所选择的临床标本同时用ＭｃＣｏｙ细胞分离培养、ＭｃＡｂ荧光染色和ＰＣＲ法进行沙眼衣原体的检测，并用统计学方法分析结果。结果４４份临床标本中有３０份用３种方法检测均为阴性，７份为阳性，余７份结果不尽相同。三种方法检出率依次为２０．４５％、２５．００％、２９．５５％，用多组配对计数资料的ｘ２检验表明差别有显著意义。以培养法为标准，ＭｃＡｂ荧光法的符合率（９０．９１％）高于ＰＣＲ法（８６．３６％），而阳性率低于ＰＣＲ法。结论ＭｃＡｂ荧光法和ＰＣＲ法可为一种简便、快速而经济的判断衣原体感染的方法，但在进行临床诊断时，宜以一种以上方法同时检测，并结合临床表现进行评判为宜。     

聚合酶链反应测Vi抗原在伤寒早期诊断中的应用

为选择更为敏感、特异的伤寒早期诊断方法，从伤塞沙门菌表达Ｖｉ抗原的特异结构基因ＶｉａＢ区域选择二对引物，建立了套式－聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）。检测伤寒早期标本３６份、结果血培养阳性２５份（６９％），肥达反应阳性１７份（４７．２％），ＰＣＲ阳性２９份（８０．６％）；２５份血培养阳性标本，ＰＣＲ均为阳性，并从血培养奶性标本中检出Ｖｉ－ＤＮＡ阳性４份。研究表明，应用ｎｅｓｔ－ｅｄ－ＰＣＲ检测     

聚合酶链反应直接检测粪便中志贺氏菌和侵袭性大肠杆菌

为探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）在腹泻病快速诊断的实用性，应用ＰＣＲ和长臂光敏生物素标记福氏２ａ的特异ＤＮＡ片段作探针，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交法，检测志贺氏菌和侵袭性大肠杆菌（ＥＩＥＣ）共有的侵袭相关性基因（ｉａｌ），９株志贺氏菌和２株ＥＩＥＣ均存在特异的３２０ｂｐＤＮＡ片段。最小检测菌量为１００菌落形成单位（ｃｆｕ）。１９株非志贺氏菌均阴性。检测５８份粪标本，ＰＣＲ２３份阳性（３９．６％），粪培养１８份阳性（３１％）。全部实验，包括ＤＮＡ粗提取，仅需６～７小时。结果表明其敏感性高于粪培养，ＰＣＲ操作简便、快速、敏感、结果可靠，适用于腹泻病的快速诊断。     

聚合酶链反应试剂对检测痰结核分支杆菌的影响

目的观察聚合酶链反应（ＰＣＲ）的试剂对检测痰结核分支杆菌的敏感性和特异性的影响。方法对结核病组２０５例和非结核病组１０５例的痰标本同时进行三个厂家生产的ＰＣＲ试剂检测、普通细菌培养和抗酸染色法涂片检测。再对ＰＣＲ假阳性的痰普通细菌培养结果进行分析，试找出ＰＣＲ假阳性的其它因素。结果三种不同引物序列和扩增产物片段长度的ＰＣＲ试剂对结核性痰标本的阳性率分别为８２．４％、７１．７％和６１．０％，组间差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００５）。结论ＰＣＲ试剂的引物序列和扩增产物长度对检测痰结核分支杆菌的阳性率和假阳性率有很大的影响     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌的临床评价

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对６４例患者的１２８份胃组织和胃液标本中的幽门螺杆菌（ＨＰ）特异性的尿素酶Ａ基因进行检测，其阳性率分别为８１．３％和７８．１％。胃组织标本尿素酶水解试验、涂片染色和培养的阳性率分别为６７．２％、４５．３％和１７．２％，胃液中涂片和培养的阳性率分别为２５．０％和４．７％，表明以ＰＣＲ方法检测临床标本中的ＨＰ快速、敏感、特异，对于研究ＨＰ与上消化道疾病之间的关系及指导治疗有着重要的意义。而且胃液标本和组织标本两者ＰＣＲ阳性率无明显差异，这对于临床检测的重复性和减少活检的创伤性，有着一定的意义。     

聚合酶链反应快速诊断流行性脑脊髓膜炎

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）ＩＳ１１０６插入序列的方法诊断流行性脑脊髓膜炎（流脑）。所试２１株Ｎｍ均扩增产生预期长度５９６ｂｐ的特异性片段，１４株非Ｎｍ菌株未见此片段。扩增灵敏度为１２ｆｇ。Ｎｍ菌ＩＳ１１０６重复序列扩增产物构成特征性ＰＣＲ指纹图，Ａ群菌株图谱一致；Ｂ群菌株呈明显多态性变化。临床标本的ＰＣＲ检测结果为：２１份流脑患者脑脊液中２０份为阳性（９５．２％）；１４份流脑患者急性期血清中１２份阳性（８５．７％）；在所检标本中Ｎｍ培养阳性的８份脑脊液和４份急性期血清ＰＣＲ检查也同样阳性。作为对照的１２份恢复期血清、３份密切接触者血清和２０份正常人血清均为阴性。作者认为，ＩＳ１１０６－ＰＣＲ是诊断流脑的一种简便快速、灵敏特异的方法。     

原发性肝癌组织AFP mRNA的表达及意义

目的：研究原发性肝癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ的表达及意义。方法：采用逆转录ＰＣＲ技术对３１份原有性肝癌癌组织中ＡＦＰｍＲＮＡ的表达进行了观察。结果：３１份肝癌组织有２４份（７７．４％）检出ＡＦＰｍＲＮＡ，阳性者中有７例同时伴有癌旁肝组织ＡＦＰｍＲＮＡ的表达，此７例患者均伴有明显的肝硬化，肝癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ检出率在血清ＨＢｓＡｇ阳性组（８６．９％）伴有肝硬化组（８７．０％）和血清ＡＦＰ〉３０μｇ／Ｌ组     

EFFICACY OF POLYMERASE CHAIN REACTION IN DIFFERENTIATING PATHOGENIC AND NONPATHOGENIC STRAINS OF ENTAMOEBA HISTOLYTICA AND IN STUDYING THE EPIDEMIOLOGY OF AMOEBIASIS

用福尔马林固定粪便标本，从中抽提ＤＮＡ。采用两对可区别溶组织内阿米巴致病与非致病的引物进行ＰＣＲ扩增。３２例经镜检证实的溶组织内阿米巴带囊者均呈ＰＣＲ阳性反应，其中６例（１８．８％）仅对致病性引物、２５例（７８．１％）仅对非致病性引物显示阳性反应，１例（３．１％）则对致病及非致病引物均呈阳性反应。致病性ＰＣＲ阳性者与受试者的临床表现（腹泻或痢疾粪便）密切相关（ＯＲ＝３１．５）。所有对照者（粪便中无溶组织内阿米巴）均呈ＰＣＲ阴性反应。用ＰＣＲ，镜检及ＥＬＩＳＡ方法对一组人（４０例）进行阿米巴流行病学检测。粪检阳性率７．６％、ＰＣＲ阳性率２０％、ＥＬＩＳＡ阳性率２５％，由于ＥＬＩＳＡ阳性者尚包括既往感染，故在３种方法中ＰＣＲ是确定现症感染最敏感和特异的方法。ＰＣＲ技术也是鉴别溶组织内阿米巴致病性、诊断阿米巴病和进行流行病学研究的有效工具。     

广东地区人微小病毒B19母婴传播及异常胎儿和新生儿人微小病毒B19感染的研究

目的 为研究人微小病毒Ｂ１９在广东地区母婴及异常胎儿和新生儿中的感染状况。方法 应用ＰＣＲ方法检测７００份孕妇外周血和新生儿脐血,ＰＣＲ结合限制性内切酶分析以及原位杂交检测２４份异常胎儿和新生儿组织。结果 孕妇和胎儿血清中Ｂ１９病毒的检出率分别为１．１４％（４／３５０）和０．２８％（１／３５０）;１７例异常胎儿和７例新生儿中,分别有５份胎儿和３份新生儿组织ＰＣＲ结果阳性。ＰＣＲ产物经限制性内切酶Ｈ     

应用PCR技术检测斑点热群立克次体特异性DNA

作者对不明热患者血液,立克次体细胞培养物,疫区的微小牛蜱,野鼠脾脏等标本,应用Ｒｒ．１９０．７０ｐ和Ｒｒ．１９０．６０２ｎ引物对,进行ＰＣＲ扩增,检测斑点热群立克次体特异性ＤＮＡ。检测结果１．２０份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本,检出阳性结果的有７份（７／２０阳性）。２．２７份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本的细胞分离培养物,检出阳性结果的有１４份（１４／２７阳性）。３．７组微小牛蜱有２组检出阳性结果（２／７阳性）。４．４７组野鼠脾脏８组检出阳性（８／４７阳性）。     

核酸体外扩增技术诊断骨结核的临床研究

目的探讨核酸体外扩增（ＰＣＲ）技术在骨结核诊断中的价值。方法对６０例骨结核标本与２０例非骨结核标本分别应用ＰＣＲ、抗酸染色镜检及分离培养法进行结核分支杆菌检测。同时，分析了影响ＰＣＲ结果的有关因素与相应处理措施。结果６０例骨结核标本中三种方法的阳性检出率分别为：ＰＣＲ法８３％，镜检法３％，培养法７％。经统计学处理，Ｐ＜０．００５，ＰＣＲ法与镜检及培养法对结核分支杆菌的阳性检出率比较具有显著性差异，ＰＣＲ法明显优于镜检及培养法。２０例非骨结核标本镜检及培养法均阴性，ＰＣＲ法阳性率１０％。盲法结核分支杆菌和对照菌ＰＣＲ检测结果表明，ＰＣＲ的特异性为１００％。ＰＣＲ扩增整个过程自动化控制，可在数小时内完成。结论ＰＣＲ技术是一种快速、敏感、特异与简便的骨结核标本结核分支杆菌检测方法，对骨结核的诊断与鉴别诊断具有重要价值。     

胃癌癌旁组织中幽门螺杆菌感染及基因改变

应用ＰＣＲ、ＰＣＲ／ＲＦＬＰ对胃癌及癌旁组织中Ｈｐ感染进行了检测，并应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－ＤＮＡ测序探讨了Ｈｐ感染与ｒａｓ基因、ｐ５３基因变化的关系。研究结果发现：２４例胃癌组织Ｈｐ阳性１２例（１２／２４，５０％），２４例癌旁组织Ｈｐ阳性１１例（１１／２４，４８．５％），两者无显著差异，胃癌组基因改变者１７例（１７／２４，７０．８３％），其中Ｈｐ阳性１２例（１２／１７，７０．５９％），７例无基因改变者未发现Ｈｐ感染。癌旁组基因改变者１例，其中Ｈｐ为阴性。２４对胃癌ｐ５３Ｅｘｏｎ４的杂合缺失率为４７．３７％（９／１９）。ｐ５３Ｅｘｏｎ５、６、７、８突变在癌组织中有１１例（１１／２４；４５．８％），癌旁组仅一例，发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变者７例（７／２４，２９．１７％），癌旁组则无突变。胃癌基因改变与Ｈｐ＋相关性比较发现，Ｈｐ感染与基因改变关系密切（Ｐ＜０．０１）。各种基因改变中以ｐ５３改变似与Ｈｐ感染关系更紧密（ｒ＝０．５Ｐ＜０．０５）。结果表明，ｒａｓ基因及ｐ５３基因的协同作用在胃癌的致病机理中显示出重要作用。在癌变过程中，可能Ｈｐ的感染是基因改变进而促进组织恶变的促动因素之一。     

PCR法诊断幽门螺杆菌感染的评价

目的系统评估聚合酶链反应扩增尿素酶Ａ基因（ＰＣＲ法）对幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的诊断价值．方法采用金标准及ＰＣＲ法检测６９例患者（慢性胃炎５２例、消化性溃疡１２例、胃癌５例）胃粘膜内Ｈｐ．结果金标准诊断有Ｈｐ感染３４例，ＰＣＲ法诊断３５例Ｈｐ阳性；金标准诊断３５例无Ｈｐ感染，ＰＣＲ法诊断３４例Ｈｐ阴性．故ＰＣＲ法敏感度为１００％，特异度为９７１％，粗一致性为９８５％，调整一致性为９８６％，误诊率（假阳性率）为２９％，漏诊率（假阴性率）为０，正确诊断指数（ｒ）为１０，阳性预测值（＋ＰＶ）为９７１％，阴性预测值（ＰＶ）为１００％，阳性似然比（ＬＲ＋）为３５，阴性似然比（ＬＲ）为０．结论ＰＣＲ法对胃粘膜Ｈｐ感染的诊断价值高于细菌培养、组织病理学，尿素酶试验各单项方法．     

PCR 与 DIFA 检测沙眼衣原体的比较研究

用所建立的沙眼衣原体质粒引物聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测１１６例泌尿生殖道沙眼衣原体，并与直接免疫荧光法（ＤＩＦＡ）进行比较。结果ＰＣＲ阳性３８例，ＤＩＦＡ阳性的３２例中有３１例ＰＣＲ阳性。ＰＣＲ敏感性为９６．９％，特异性为９１．７％。ＰＣＲ阳性者于治疗结束１～２周后复诊２１例，其中４例ＰＣＲ仍然阳性。结果显示，ＰＣＲ可快速、敏感、特异地检测泌尿生殖道沙眼衣原体ＤＮＡ，然而对治疗后短期内复诊患者，似乎不宜仅以ＰＣＲ阳性结果作为重复治疗的依据。     

聚合酶链反应对脑脊液标本中结核杆菌DNA重复序列的检测

采用聚台酶链反应（ＰＣＲ）对３４例结核性脑膜炎（结脑）患者脑脊液（ＣＳＦ）进行检测，其中５份结核杆菌培养阳性的标本，ＰＣＲ检测均阳性；２９例ＣＳＦ结核杆菌培养阴性的标本，１９例ＰＣＲ检测阳性，总的阳性率为７０．５％。而作为对照的２０例非结脑患者的ＣＳＦ标本则无阳性。利用育法微量结核杆菌与对照菌测试，可以反证本方法的准确性，其符合率为１００％，提示本方法可以用于临床标本中结核杆菌ＤＮＡ的快速检测，不失为一快速，灵敏而又特异的诊断手段。关键词     

江西上高钩端螺旋体病主要传染源（耕牛）和主要流行菌群（七…

本研究分离培养了４４３份病人及疑似病人血清标本，钩端螺旋体阳性率１８．５％，其中２０６份标本ＰＣＲ产物凝胶电泳检测阳性率１４．６％，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性率２０．９％．６３头猪肾钩体培养阳性率４．８％，１２３只鼠肾钩体培养阳性率４．０％。２２５份牛尿钩体培养阳性率６．２％，ＰＣＲ产物凝胶电泳阳性经１４．０％，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性率１５．８％。     

16SrRNA基因PCR加反相杂交技术检测细菌DNA

目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）加反相杂交技术在细菌ＤＮＡ检测中的应用。方法以１６ＳｒＲＮＡ基因为靶序列，设计引物及寡核苷酸探针，采用ＰＣＲ法加反相杂交检测标准菌株及临床标本细菌ＤＮＡ。结果对２０株不同标准菌株进行ＰＣＲ扩增，均出现３７１ｂｐ长度的ＤＮＡ片段，敏感性试验可检测出１０－１２ｇ的细菌ＤＮＡ，与人基因组及病毒无交叉反应；２２份血培养阳性标本及４份脑脊液培养阳性标本均扩增出３７１ｂｐ长度ＤＮＡ条带，反相杂交区分革兰阳性／阴性细菌与培养结果相符。结论１６ＳｒＲＮＡ基因ＰＣＲ加反相杂交技术检测细菌ＤＮＡ，具有敏感、快速、准确的特点，为细菌感染的临床诊断提供了科学的依据。     

聚合酶链反应检测间日疟原虫的现场应用研究

为探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）的现场应用价值。根据Ｐ．ｖ．红内期ＳＳｕｒＲＮＡ基因序列合成１对寡核苷酸引物建立检测Ｐ．ｖ．的ＰＣＲ技术，扩增产物片段为３４１ｂｐ，同时采用ＰＣＲ法和镜检法对８份临床疑为Ｐ．ｖ．感染患者的血液标本进行检测。用ＰＣＲ法检测阳性者６９份，镜检法检测阳性者５９份，ＰＣＲ检出率（８８．５％）明显高于镜检法检出率（７５．６％），两者符合率为８７．２％。结     

不同引物对PCR检测沙眼衣原体结果的影响

为了解不同引物对ＰＣＲ检测泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的影响,作者以直接免疫荧光法（ＤＩＦＡ）为标准,选用引物不同的市售ＰＣＲ试剂盒检测了２０９例泌尿生殖道可疑ＣＴ感染标本。结果引物１ＰＣＲ阳性２９例,引物２ＰＣＲ阳性２８例;在ＤＩＦＡ阳性２５例中,引物１ＰＣＲ阳性２４例,引物２ＰＣＲ阳性２３例;引物１ＰＣＲ敏感性为９６．０％,特异性为９７．８％;引物２ＰＣＲ敏感性为９２．０％,特异性为９８．