埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

塞来昔布防治胃癌的机制及应用前景

甘肃为我国胃癌高发区,胃癌病死率居全国之首,安全有效的治疗是研究重点.近年来,随着对肿瘤分子生物学机制研究的不断深入,肿瘤的靶向治疗已成为研究的新方向.大量研究结果表明:环氧合酶(COX)的过度表达在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,非甾体类抗炎药塞来昔布是一种新型COX-2选择性抑制剂,可明显降低消化道肿瘤的发病率.它通过抑制肿瘤生长和肿瘤新生血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡,逆转多药耐药,增强化疗药的细胞毒作用和放射敏感性,与化、放疗产生协同作用,从而抑制肿瘤的发生、发展.因此,以COX-2为特异靶点的治疗策略有望为胃癌治疗提供新的思路,具有良好的临床应用前景.     

塞来昔布抑制骨肉瘤细胞黏附侵袭及其机制

目的 观察环氧合酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布对骨肉瘤MG-63和U2-OS细胞增殖、黏附和侵袭的抑制作用,探讨其分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTF)比色法、黏附实验、侵袭实验、流式细胞术和Western blot研究25、50、100 μmol/L 3种浓度塞来昔布对两种细胞株增殖、黏附、侵袭能力及CD44和基质金属酶(MMP)-9表达的影响.结果 3种浓度的塞来昔布作用48 h后MG-63细胞增殖抑制率分别为9.35%、42.68%、60.29%(P＜0.05),对U2-OS细胞的抑制率分别为2.59%、8.95%、29.36%(P＜0.05).对MG-63的黏附抑制率分别为8.6%、21. 5%、52.8%(P＜0.05);对U2-OS的黏附抑制率分别为1.6%、3.8%、19.0%(P＜0.05);对两种骨肉瘤细胞的侵袭能力、CD44和MMP-9的表达均有抑制作用,对高表达COX-2的MG-63的抑制效应更加显著.结论 塞来昔布可抑制骨肉瘤细胞的增殖、黏附和侵袭,这种作用与下调CD44和MMP-9的表达有关,此种效应具有COX-2依耐性.     

环氧合酶-2在胆管癌中的研究进展

胆管癌发生机制复杂,近几年研究发现环氧合酶2(COX2)在胆管癌细胞中高度表达,说明COX2可能在胆管癌的发生、发展中起一定的作用。     

环氧合酶-2与胆管癌治疗的相关研究及进展

环氧合酶(cyclooxygenase,cox)是前列腺素(prostaglandin,PG)合成过程中的限速酶,至少有2个亚型,即COX-l和COX-2.近年的研究发现,COX-2与肿瘤的发生、发展以及转移有密切关系,COX-2抑制剂有望成为肿瘤治疗的新靶点.本文就COX-2在胆管癌中的表达、调控和致癌机制以及COX-2抑制剂对胆管癌的治疗进展作一综述,展望COX-2抑制剂在胆管癌治疗中的前景.     

塞来昔布(celecoxib)通过前列腺素E2途径影响胆管癌细胞株生长和凋亡

目的：研究塞来昔布（celecoxib)对环氧合酶－2（COX－2）高表达人胆管癌细胞系QBC939和COX－2低表达人胆管癌细胞系SK－Cha-1生长和凋亡的影响及其作用机制。方法：采用四唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖,光镜和电镜形态学观察,末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位酶标记法（TUNEL）计数细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞周期,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测前列腺素E2（PGE2）含量。结果：塞来昔布抑制QBC939生长和诱导调亡,这种抗增殖作用能被PGE2拮抗;塞来昔布对结构性低表达COX－2胆管癌细胞SK－Cha-1无显著性作用。结论：塞来昔布通过PGE2途径抑制人胆管癌细胞生长和诱导凋亡。针对COX－2结构性高表达肿瘤塞来昔布可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。     

塞来昔布抑制脑胶质瘤细胞运动侵袭的影响

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对13251胶质瘤细胞运动侵袭能力的影响.方法 采用脑胶质瘤细胞的体外趋化运动模型和体外侵袭模型,分12、24 h的不同时间进行了Celecoxib抑制胶质瘤细胞运动侵袭的生物特性研究.结果 趋化运动实验中Celecoxib处理后12 h组、24 h组细胞较对照组细胞的趋化运动能力明显下降,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞趋化运动抑制率为52.57%、73.91%,两者差异有统计学意义(P＜0.01);侵袭实验中Celecoxib处理12、24 h后侵袭至滤膜下表面的细胞数均低于对照组的细胞数,两者差异有统计学意义(P＜0.01),12、24 h组细胞组织侵袭抑制率为55.90%、85.16%,两者差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Celecoxib能在模拟体内运动侵袭试验中有效抑制U251胶质瘤细胞的运动侵袭能力.     

靶向表皮生长因子受体和血管内皮生长因子受体-2治疗多形性胶质母细胞瘤

目的 观察靶向表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体C225和靶向血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的单克隆抗体DC101单独或联合应用后对人脑多形性胶质母细胞瘤(GBM)裸小鼠脑内移植瘤的疗效.方法 将40只荷瘤鼠随机分为磷酸盐缓冲液(PBS,0.1 ml/20 g·次)、C225(50 mg/kg·次)、DC101(40 mg/kg·次)及C225+DC1O1(50+40 ms/ks·次)等4组,10只/每组,2d1次腹腔用药或PBS,共4次.治疗后观察移植瘤微血管密度(MVD)、体积、形态、增殖和凋亡变化.结果 与对照组比较,DCl01组移植瘤MVD减少了64.O%.体积下降了59.7%,增殖指数下降了53.2%,凋亡指数增加了66.7%(P＜0.05),但肿瘤侵袭性增强;C225组肿瘤侵袭性降低,但对移植瘤MVD、体积、增殖和凋亡无影响(P＞0.05);C225+DC101组移植瘤MVD减少了68.0%,体积下降了62.9%,增殖指数下降了56.4%,凋亡指数增加了75.0%(P＜0.05),肿瘤侵袭性明显下降.结论 DC101抑制血管生成同时增加了肿瘤的侵袭性,而C225能降低肿瘤侵袭性.联合用药不仅抑制GBM移植瘤生长还降低肿瘤侵袭能力.     

塞来昔布对钛颗粒诱导破骨细胞活化的抑制作用

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂-塞来昔布(Cel)对钛颗粒(Ti)诱导破骨细胞(OC)活化的影响.方法 实验分为6组:空白组、Ti组、核因子(NF)-κB受体活化因子配体(RANKL)组、R+Ti组、Cel组和前列腺素E2(PGE2)组.采用噻唑蓝(MTT)法检测0.lg/L Ti和不同浓度Cel(10、50、100、200、500μg/L)处理小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7后12、24、48、72 h细胞增殖活性;以抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测成熟OC,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2、核因子(NF)-κB受体活化因子(RANK)、TRAP、活化T细胞核因子c1(NFATc1)和组织蛋白酶K(CPK)基因mRNA含量,Western blot分析COX-2蛋白表达变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测PGE2表达水平.结果 MTT结果表明Ti和(或)Cel(≤500 μg/L)对RAW264.7细胞增殖能力无影响.Western blot及RT-PCR结果表明COX-2表达峰值出现在RANKL和Ti作用后2h,24 h后COX-2表达量与空白组比较差异无统计学意义(P＞0.05).ELISA结果显示,RANKL和Ti加入后12h,PGE2的含量为3.912±0.231,与Cel预处理组(1.488±0.093)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).TRAP染色,RANKL组、R+Ti组、Cel后处理组和PGE2组均可见大量紫红色多核细胞;Ti组和Cel预处理组阳性细胞较少,统计分析结果表明Cel≥100 μg/L时,TRAP阳性细胞数量与RANKL组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示Cel组(100 μg/L)RANK、TRAP、NFATcl和CPK基因mRNA含量分别为4.980 ±0.180、3.128±0.143、6.166±0.223和4.922±0.163,与R +Ti组和PGE2组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 预先给予选择性COX-2抑制剂Cel能减少PGE2分泌,抑制RANK的表达,阻断Ti诱导的OC活化.     

塞来昔布对人结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤形成的影响

目的探讨塞来昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）和HCT-116（COX-2低表达）为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测塞来昔布对2种细胞的增殖抑制效应，应用流式细胞术检测2种细胞的周期分布情况；将2种细胞接种裸鼠，观察其肝转移瘤形成情况。结果①塞来昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应（P〈0．05，P〈0．01），且对HT-29细胞的作用强于HCT-116细胞（P〈0．05）。②塞来昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布，明显降低其增殖指数。③塞来昔布具有明显的抑制裸鼠肝转移瘤生长的作用。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2酶活性而抑制结肠癌细胞的分裂和增殖，诱导其凋亡，干预结肠癌的转移与复发。     

环氧合酶-2、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因在肝胆管结石合并胆管癌组织中的表达及意义

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)在肝胆管结石合并胆管癌(hepatobiliary calculus with cholangiocarcinoma,HCWC)中的表达及其意义,研究COX-2、PTEN与HCWC发生、发展的关系,为HCWC的临床防治提供依据.方法 研究分三组:正常胆管组(肝血管瘤或肝外伤切除标本)10例(A组),肝内结石所在胆管组30例(B组),HCWC组37例(C组).应用免疫组织化学SP法,通用二步法检测各组COX-2、PTEN的表达情况,并对检测结果进行分析.结果 COX-2在A、B、C三组中的表达阳性率分别为10.0%、33.3%和70.3%,癌组织中的表达阳性率明显高于对照组胆管组织(P＜0.01).PTEN在A、B和C三组中的表达阳性率分别为90.0%、80.0%和35.1%,癌组织中的表达阳性率明显低于对照组胆管组织(P＜0.01).在COX-2阳性表达的HCWC组织中,PTEN有较低表达.Kendall相关分析表明HCWC组织中COX-2与PTEN表达呈显著负相关(r=-0.323,P＜0.05).结论 COX-2高表达可能与HCWC形成有关.在HCWC中,COX-2和PTEN表达呈负相关.COX-2高表达、PTEN低表达可能提示HCWC更易发生淋巴转移或肝外转移.

Abstract：

Objective To explore the expressions of cyclooxygenase-2 (COX-2), phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten (PTEN) in hepatobiliary calculus associated with cholangiocarcinoma (HCWC) and their clinical significance. The relationship between the expressions of COX-2, PTEN and the onset and progression of HCWC was investigated to form an experimental base for the prevention and treatment of HCWC. Methods Thirty seven patients with tumor tissues of HCWC (group C), thirty patients with tissues of bile duct surrounding intrahepatic calculus (group B), and ten patients with normal tissues of bile duct from operations of hemangiomas of liver or liver trauma as the control (group A) were sampled and collected. A two-step immunohistochemistry (SP method) was employed to detect and statistically analyze the expressions of COX-2 and PTEN in each of the 3 groups. Results In groups A, B, C, the positive rate of the expression of COX-2 was 10%,33.3%, and 70.3%, respectively. The positive rates of expression of COX-2 in the carcinoma tissues of HCWC was significantly higher compared with the control group (P＜0. 01). In groups A, B, C the positive rates of the expression of PTEN was 90. 0%, 80. 0%, and 35.0%, respectively. The positive rate of expression of PTEN in the carcinoma tissues of HCWC was significantly lower than the control group (P＜0. 01). The expression of COX-2 was followed by a low expression of PTEN in the tissues of HCWC. Kendall's related analysis showed a strong negative correlation between the expression of COX-2 and PTEN in HCWC (r=-0. 323, P＜0. 05). Conclusions A high expression of COX-2 was related to HCWC. There was a negative correlation between the expressions of COX-2 and PTEN in HCWC. A high expression of COX-2 and a low expression of PTEN suggested a high chance of HCWC in extrahepatic or lymphatic metastasis.     

光动力抑制胆管癌QBC939细胞生长的实验研究

目的研究血卟啉衍生物介导的光动力（HPD-PDT）抑制胆管癌细胞生长状况及其机制。方法 MTT法用于评估人胆管癌细胞（QBC939）的生长状态;Hoechst33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡;WesternBlotting法用于探测QBC939细胞中细胞色素C的释放情况;Caspases酶活性测定用于测定caspase-3、-8、-9的活化情况。结果 HPD-PDT在体外能够抑制胆管癌QBC939细胞生长,这一效应主要是通过诱导QBC939细胞线粒体凋亡达到的,在凋亡过程中,出现了细胞色素C释放,caspase-9和-3的活化。结论 HPD-PDT体外能够抑制胆管癌细胞生长,诱导胆管癌细胞凋亡。     

表皮生长因子及其受体分布在青、老年大鼠肾切除术后留存肾代偿早期的改变

目的 观察表皮生长因子（EGF）蛋白及其受体（EGFR）表达的改变,比较青、老年大鼠留存肾代偿过程的差异。方法 雄性Wistar大鼠青年组60只,老年组32只。行左肾切除术;并分别于术后1、3、7、14d随机处死青年组各12只,老年组各8只。取右肾为代偿肾。EGF及EGFR免疫组织化学染色采用链菌素亲生物素蛋白－过氧化酶连接法。用IBSA－2000图像处理系统对EGFR含量进行半定量分析。结果 术后14d青、老年组留存肾增重分别为54．5％和14．2％。肾代偿时EGF由原局限性发布变为弥漫性分布,其表达增加程度以青年组为明显;EGFR蛋白分布量在布皮质均有增加,老年组增加较青年组迟缓。结论 EGF及EGFR在留存肾代偿早期起重要作用,肾代偿时,肾内EGF通过自分泌和旁分泌而发生作用。     

表皮生长因子受体相关蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 观察表皮生长因子受体相关蛋白(ERRP)的表达以及细胞增殖在胃癌分化和发展中的作用.方法 观察47例患者胃癌的手术标本中ERRP的表达和定位,并将其与良性胃黏膜比较,确定他们与细胞增殖和分化的关系.检测3种不同的胃癌细胞株中ERRP的表达,并用表皮生长因子(EGF)诱导EGFR磷酸化激活MKN-28胃癌细胞,检测ERRP对此效应的作用.结果 与良性胃黏膜(66％标本阳性)比较,胃癌(33％标本阳性)中ERRP的表达显著降低.正常胃黏膜的ERRP染色评分是2.9(0.3),高分化、中度分化和低分化癌的评分分别是2.6(0.6)、0.9(0.6)和1.0(0.5),ERRP表达的降低与恶性程度的组织学分级呈负相关(P＜0.05).ERRP阴性癌细胞[35.3(1.1)％;P＜0.01]中增殖程度是ERRP附性癌细胞[9.4(0.6)％]的3.5倍,ERRP在癌细胞中的表达与细胞增殖也呈负相关.与源于非转移性癌的细胞AGC比较,源于转移性胃癌细胞MKN-28和NCI-N87中ERRP的表达量分别是其的1.7倍和2倍.外源性的ERRP蛋白明显抑制了EGF诱导的胃癌细胞MKN-28中EGFR的磷酸化,抑制程度为45倍.结论 ERRP的下调可能在胃癌分化和发展中起重要的作用.ERRP对肿瘤细胞增殖具有负调控作用,其抑制作用可能部分是通过减弱EGFR的活化来实现的.     

Expression of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) and Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) is an Independent Prognostic Indicator of Worse Outcome in Gastric Cancer Patients

BACKGROUND: Unlike other human tumors, gastric cancer remains a great therapeutic challenge since no standardized postoperative treatment exists. Knowledge of molecular pathways determining the behavior of individual gastric tumors seems to be crucial for therapeutic decisions, and evaluation of vascular endothelial growth factor (VEGF) and epidermal growth factor receptor (EGFR) expression might be critical for prognosis, assessment, and identification of patients that could be treated with tailored therapies. METHODS: VEGF and EGFR determination was performed in 88 gastric cancer samples as well as 25 normal gastric mucosa specimens from non-cancer patients using a commercially available immunohistochemistry kit. In all samples, the correlation of VEGF and EGFR expression was investigated with each other, and with other prognostic indicators in all samples, and, finally, with survival rates in 69 patients undergoing potentially curative surgery. RESULTS: Forty-eight per cent (42 cases) of gastric cancers expressed VEGF, and 44% (39 cases) stained for EGFR. In curatively treated patients, VEGF and EGFR expression was demonstrated to correlate with worse survival in both univariate and multivariate analyses. Molecular profiling was shown to more accurately estimate the risk of cancer-related death than TNM stage, and, of most interest, to allow sorting out high-risk patients within the same stage. CONCLUSIONS: These findings provide evidence that contemporary evaluation of VEGF and EGFR expression may be crucial to select gastric cancer patients with poor prognosis who may benefit of tailored treatments.     

表皮生长因子受体在525例消化系统肿瘤中的表达及其临床意义

目的研究表皮生长因子受体（EGFR）在525例消化系统肿瘤中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学法检测525例消化系统肿瘤组织中EGFR的表达,分析EGFR表达与患者的性别、年龄、肿瘤的原发部位、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床TNM分期和淋巴结转移的关系。结果 525例消化系统肿瘤组织中,EGFR阳性率为17.1%,其中男性EGFR阳性率明显高于女性的（P=0.014）;EGFR表达与分化程度呈负相关（P=0.033）,其中低分化的EGFR阳性率明显高于高分化的（P=0.035）;EGFR表达与淋巴结转移呈负相关（P=0.015）;EGFR表达与消化系统肿瘤患者的年龄、肿瘤的原发部位、肿瘤大小、组织学类型和临床TNM分期均无关（P〉0.05）。结论 EGFR表达和消化系统肿瘤的恶性程度有关。     

神经生长因子对人胆管癌细胞体外侵袭力影响的研究

目的 探讨神经生长因子对人胆管癌细胞株QBC939体外侵袭力的影响。方法 构建β-NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF,经酶切鉴定后,采用脂质体Lipofectamine转染人胆管癌细胞株QBC939,Western blot检测蛋白的表达情况,Transwell小室检测转染前后细胞侵袭力的变化情况。结果 成功构建β-NGF的真核表达载体pcDNA3．0-NGF,转染QBC939细胞后,能够稳定表达β-NGF蛋白,且表达强度随转染质粒浓度增强而增强,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）,Transwell小室检测转染后胆管癌细胞侵袭力增强,与空白对照组和转染空质粒组相比,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 NGF具有增强胆管癌细胞株QBC939体外侵袭力的作用,可能导致胆管癌的神经浸润与转移。     

Prognostic Significance of the Combination of Biological Parameters in Breast Cancer

To evaluate whether the combination of biological parameters increases their prognostic value, the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR), DNA ploidy, and estrogen receptor (ER) status were analyzed on 998 patients with breast cancer. Poor findings for each biological parameter were positive for EGFR, aneuploid for DNA ploidy, and negative for ER. According to the number of poor findings in these three parameters, the groups with none (309 cases), one (377 cases), two (161 cases), and three (151 cases) poor findings were classified. A significant ( P < 0.0001) difference was found in the disease-free survival (DFS) among the four groups. A multivariate analysis indicated the combination of three biological parameters to be an independently significant factor for DFS, while the relative risk gradually increased as the number of poor findings increased. In conclusion, the present study indicated a gradual increase in the prognostic significance as the number of combined biological parameters increased.     

Epidermal growth factor receptor in adenocarcinoma of the kidney

Summary Epidermal growth factor receptor (EGF-R) was estimated in Hypernephroma by saturation analysis using 125-I EGF as ligand. Tissue levels of this oncogene related protein were increased five-fold (24 to 99 fmol/mg protein) in comparison with the surrounding tumor free tissue (3 to 18 fmoles/mg protein). There was no apparent correlation to the stage of tumor growth or tumor differentiation and there was no correlation of EGF serum levels with tumor growth. EGF serum levels in the tumor patients did not exceed levels in control patients.